Name: high-pressure nmr experiments for detecting protein low-lying conformational states
Uploaded: 2021-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-Pressure NMR Experiments for Detecting Protein Low-Lying Conformational States at JoVE.com

Эта работа была поддержана средствами благотворительного фонда Роя Карвера Жюльена Роша. Мы благодарим J. D. Levengood и B. S. Tolbert за любезное предоставление образца RRM2.

ПРИМЕЧАНИЕ: Протокол, описанный здесь, требует (i) насоса высокого давления и ячейки с алюминиевой закаленной циркониевой трубкой 2,5 кбар18,(ii) программного обеспечения SPARKY19 для анализа спектров ЯМР и (iii) программного обеспечения для установки кривых.
<p class="jove_t...

<ol>
	<li>Alderson, R. T., Kay, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unveiling+invisible+protein+states+with+NMR+spectroscopy.">Unveiling invisible protein states with NMR spectroscopy.</a> Current Opinion in Structural Biology. 60, 39-49 (2020).</li><li>Korzhnev, D. M., Kay, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=probing+invisible,+low-populated+states+of+protein+molecules+by+relaxation+dispersion+NMR+spectroscopy:+An+application+to+protein+folding.">probing invisible, low-populated states of protein molecules by relaxation dispersion NMR spectroscopy: An application to protein folding.</a> Accounts of Chemical Research. 41, 442-451 (2008).</li><li>Loria, P. J., Berlow, R. B., Watt, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+enzyme+motions+by+solution+NMR+relaxation+dispersion.">Characterization of enzyme motions by solution NMR relaxation dispersion.</a> Accounts of Chemical Research. 41, 214-221 (2008).</li><li>Ishima, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CPMG+relaxation+dispersion.">CPMG relaxation dispersion.</a> Methods in Molecular Biology. 1084, 29-49 (2014).</li><li>Longo, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+exchange+saturation+transfer+(CEST):+an+efficient+tool+for+detecting+molecular+information+on+proteins'+behaviour.">Chemical exchange saturation transfer (CEST): an efficient tool for detecting molecular information on proteins' behaviour.</a> Analyst. 39, 2687-2690 (2014).</li><li>Fawzi, N. L., Ying, J., Torchia, D. A., Clore, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+exchange+kinetics+and+atomic+resolution+dynamics+in+high-molecular-weight+complexes+using+dark-state+exchange+saturation+transfer+NMR+spectroscopy.">Probing exchange kinetics and atomic resolution dynamics in high-molecular-weight complexes using dark-state exchange saturation transfer NMR spectroscopy.</a> Nature Protocols. 7, 1523-1533 (2012).</li><li>Anthis, N. J., Clore, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+transient+dark+states+by+NMR+spectroscopy.">Visualizing transient dark states by NMR spectroscopy.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 48, 35-116 (2015).</li><li>Roche, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavities+determine+the+pressure+unfolding+of+proteins.">Cavities determine the pressure unfolding of proteins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 6945-6950 (2012).</li><li>Chen, C. R., Makhatadze, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+determinant+of+the+effects+of+hydrostatic+pressure+on+protein+folding+stability.">Molecular determinant of the effects of hydrostatic pressure on protein folding stability.</a> Nature Communications. 8, 14561 (2017).</li><li>Roche, J., Royer, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+pressure+denaturation+of+proteins.">Lessons from pressure denaturation of proteins.</a> Journal of the Royal Society Interface. 15, 20180244 (2018).</li><li>Xu, X., Gagn&#233;, D., Aramini, J. M., Gardner, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volume+and+compressibility+differences+between+protein+conformations+revealed+by+high-pressure+NMR.">Volume and compressibility differences between protein conformations revealed by high-pressure NMR.</a> Biophysical Journal. 120, 924-935 (2021).</li><li>Akasaka, K., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-lying+excited+states+of+proteins+revealed+from+non-linear+pressure+shifts+in+1H+and+15N+NMR.">Low-lying excited states of proteins revealed from non-linear pressure shifts in 1H and 15N NMR.</a> Biochemistry. 40, 8665-8671 (2001).</li><li>Akasaka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+conformational+fluctuation+of+proteins+by+pressure+perturbation.">Probing conformational fluctuation of proteins by pressure perturbation.</a> Chemical Reviews. 106, 1814-1835 (2006).</li><li>Kitahara, R., Yokoyama, S., Akasaka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMR+snapshots+of+a+fluctuating+protein+structure:+ubiquitin+at+30+bar-3+kbar.">NMR snapshots of a fluctuating protein structure: ubiquitin at 30 bar-3 kbar.</a> Journal of Molecular Biology. 347, 277-285 (2005).</li><li>Roche, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=remodeling+of+the+folding+free+energy+landscape+of+Staphylococcal+nuclease+by+cavity-creating+mutations.">remodeling of the folding free energy landscape of Staphylococcal nuclease by cavity-creating mutations.</a> Biochemistry. 51, 9535-9546 (2012).</li><li>Nucci, N. V., Fuglestad, B., Athanasoula, E. A., Wand, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cavities+and+hydration+in+the+pressure+unfolding+of+T4+lysozyme.">Role of cavities and hydration in the pressure unfolding of T4 lysozyme.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111, 13846-13851 (2014).</li><li>Maeno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cavity+as+a+source+of+conformational+fluctuation+and+high-energy+state:+High-pressure+NMR+study+of+a+cavity-enlarged+mutant+of+T4+lysozyme.">Cavity as a source of conformational fluctuation and high-energy state: High-pressure NMR study of a cavity-enlarged mutant of T4 lysozyme.</a> Biophysical Journal. 108, 133-145 (2015).</li><li>Peterson, R. W., Wand, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-contained+high-pressure+cell,+apparatus,+and+procedure+for+the+preparation+of+encapsulated+proteins+dissolved+in+low+viscosity+fluids+for+nuclear+magnetic+resonance+spectroscopy.">Self-contained high-pressure cell, apparatus, and procedure for the preparation of encapsulated proteins dissolved in low viscosity fluids for nuclear magnetic resonance spectroscopy.</a> Review of Scientific Instruments. 76, 094101 (2005).</li><li>Goddard, T. D., Kneller, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Sparky 3. , (2010).</li><li>Caro, J. A., Wand, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+aspects+of+high-pressure+NMR+spectroscopy+and+its+applications+in+protein+biophysics+and+structural+biology.">Practical aspects of high-pressure NMR spectroscopy and its applications in protein biophysics and structural biology.</a> Methods. 148, 67-80 (2018).</li><li>Kitamura, T., Itoh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+volume+of+protonic+ionization+for+buffering+agents.+Prediction+of+pressure+dependence+of+pH+and+pOH.">Reaction volume of protonic ionization for buffering agents. Prediction of pressure dependence of pH and pOH.</a> Journal of Solution Chemistry. 16, 715-725 (1987).</li><li>Royer, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+volume+changes+in+pressure-induced+protein+unfolding.">Revisiting volume changes in pressure-induced protein unfolding.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1595, 201-209 (2002).</li><li>Erlach, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+nonliner+pressure-induced+chemical+shift+changes+and+thermodynamic+parameters.">Relationship between nonliner pressure-induced chemical shift changes and thermodynamic parameters.</a> Journal of Physical Chemistry B. 118, 5681-5690 (2014).</li><li>de Oliveira, G. A. P., Silva, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hypothesis+to+reconcile+the+physical+and+chemical+unfolding+of+proteins.">A hypothesis to reconcile the physical and chemical unfolding of proteins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of The United States of America. 112, 2775-2784 (2015).</li><li>Nguyen, L. M., Roche, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-pressure+NMR+techniques+for+the+study+of+protein+dynamics,+folding+and+aggregation.">High-pressure NMR techniques for the study of protein dynamics, folding and aggregation.</a> Journal of Magnetic Resonance. 277, 179-185 (2017).</li></ol>

В этом исследовании подробно описывается протокол, реализованный для исследования структурных и термодинамических реакций белка на возмущение давления. Эксперименты с высоким давлением, записанные здесь на RRM2, демонстрируют, что большие вариации значений ΔVU, свидетельствующие...

Давно признано, что высокоэнергетические, малонаселенные конформационные состояния белков и белковых комплексов играют ключевую роль во многих биологических путях1,2,3. Благодаря экспериментам, основанным на последовательностях импульсов Карра-Перселла-Мейбума-Гилла (CPMG)4,переноса насыщения химического обмена (CEST)5и переносанасыщения обмена в темном состоянии (DEST) 6 (среди прочих), раствор ЯМР-спектроскопии появился в качестве метода выбора для характеристики переходных конформационных состояний7. Наряду с этими экспериментами могут быть введены возмущения, такие как температура, рН или химические денатуранты, чтобы увеличить относительную популяцию конформационных субсостояний с более высокой энергией. Аналогичным образом, белковые равновесия также могут быть возмущены применением высокого гидростатического давления. В зависимости от величины изменения объема, связанного с соответствующими конформационными изменениями, увеличение давления на несколько сотен до нескольких тысяч бар может значительно стабилизировать более высокое энергетическое состояние или привести к полному раскрытию белкана 8,9,10. Спектры ЯМР белка обычно отображают два типа изменений с гидростатическим давлением: (i) изменения химического сдвига и (ii) изменения пиковой интенсивности. Изменения химического сдвига отражают изменения на границе раздела белка с поверхностью воды и/или локальное сжатие структуры белка в быстрой шкале времени (относительно шкалы времени ЯМР)11. Поперечные спицы, демонстрирующие большие нелинейные химические сдвиги зависимости давления, могут указывать на наличие более высоких энергетических конформационных состояний12,13. С другой стороны, изменения пиковой интенсивности указывают на крупные конформационные переходы в медленной шкале времени, такие как изменения в сложенных / развернутых популяциях состояний. Наличие складчатых промежуточных продуктов или более высоких энергетических состояний может быть обнаружено по большим вариациям величины изменения объема при развертывании, измеренному для различных остатков данного белка14,15,16,17. Основываясь на нашем опыте, даже небольшие белки, которые обычно классифицируются как папки с двумя состояниями, демонстрируют неоднородные реакции на давление, что дает полезную информацию об их локальной стабильности сворачивания. Здесь описан протокол получения и анализа зависимости от амидных пиковых и химических сдвигов 1H, использующих в качестве модели белка изолированный мотив распознавания РНК 2 (RRM2) гетерогенного ядерного рибонуклеопротеина A1 (hnRNPA1).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bruker Nmr Cell 2.5 Kbar</td>
			<td>Daedalus Innovations LLC</td>
			<td>NMRCELL-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sparky3</td>
			<td>University of California San Francisco, CA</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xtreme-60 Syringe pump</td>
			<td>Daedalus Innovations LLC</td>
			<td>XTREME-60</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-pressure nmr experiments for detecting protein low-lying conformational states

Высокое давление является хорошо известным методом возмущения, который может быть использован для дестабилизации глобулярных белков и диссоциации белковых комплексов обратимым образом. Гидростатическое давление приводит термодинамическое равновесие к состоянию (состояниям) с меньшим молярным объемом. Таким образом, повышение давления дает возможность точно настроить стабильность глобулярных белков и равновесия олигомеризации белковых комплексов. Эксперименты с ЯМР высокого давления позволяют детально охарактеризовать факторы, управляющие стабильностью глобулярных белков, механизмы их сворачивания и механизмы олигомеризации, сочетая способность тонкой настройки стабильности возмущения давлением и разрешение сайта, предлагаемое растворной ЯМР-спектроскопией. Здесь мы представляем протокол для исследования локальной стабильности сворачивания белка с помощью набора экспериментов 2D 1H-15N, записанных от 1 бар до 2,5 кбар. Шаги, необходимые для получения и анализа таких экспериментов, иллюстрируются данными, полученными по домену RRM2 hnRNPA1.

Описанный здесь протокол был использован для исследования зависимости давления RRM2, второго мотива распознавания РНК hnRNPA1 (остатки 95-106), который почти полностью развернут в диапазоне 2,5 кбар (>90%). 1 1 СпектрыH-15N были собраны при 1 бар, 500 бар, 750 бар, 1 кбар, 1,5 кбар, 2 кбар и 2,5 кбар<stron...

Watch this Scientific Journal Video about High-Pressure NMR Experiments for Detecting Protein Low-Lying Conformational States at JoVE.com

High-Pressure NMR Experiments for Detecting Protein Low-Lying Conformational States

Мы предоставляем подробное описание этапов, необходимых для сборки ячейки высокого давления, настройки и записи экспериментов с ЯМР высокого давления и, наконец, анализа как пиковой интенсивности, так и изменений химического сдвига под давлением. Эти эксперименты могут дать ценную информацию о путях сворачивания и структурной стабильности белков.

Эксперименты ямР высокого давления для обнаружения белковых низколежащих конформационных состояний

High-pressure is a well-known perturbation method that can be used to destabilize globular proteins and dissociate protein complexes in a reversible ...

Высокое давление — это метод выбора для изменения относительной популяции белкового конформационного образца. Он чрезвычайно полезен для выделения и характеристики высокоэнергетических конформационных состояний. По сравнению со всеми методами возмущения, такими как pH или температура, возмущение давления легко применяется и полностью обратимо.Это также локальное возмущение, в первую очередь поражающее области со стеклянными полостями или объемами пустоты. Для начала введите образец с маркировкой азота-15 в циркониевую трубку с помощью стеклянной пипетки и убедитесь, что образцы сидят в нижней части трубки. Чтобы предотвратить смешивание образца с трансмиссионной жидкостью, наложите на образец 200 микролитров минерального масла, а затем заполните остальную часть трубки трансмиссионной жидкостью.Положите одноразовое уплотнительное кольцо поверх циркониевой трубки и сдвиньте трубку в основание. Затем подключите трубку к линии троса высокого давления и вручную затяните основание к ячейке. Затем примените крутящий момент 14,7 ньютон-метров для предотвращения утечек при более низком давлении.Чтобы проверить целостность ячейки давления в сборе, нажмите трубку до 300 бар вне спектрометра с помощью ячейки поддержки и защитного сосуда. Через 15 минут сбросьте давление до одного бара и проверьте наличие утечек с помощью чистой безворсовой салфетки. Вставьте трубку без давления в спектрометр, осторожно направляя линию троса.Вставьте трубку в спектрометр до тех пор, пока трубка не достигнет положения образца сидя. Запирайте, прокладывайте, сопоставляйте и настраивайте протоевые и азотные каналы и сохраняйте оптимизированные прокладки для будущего. Настройте поперечную релаксационную оптимизированную спектроскопию с гетеро-одноквантовой когерентной спектроскопией и приступайте к записи эталонного эксперимента в атмосферных условиях.Запишите серию 2D-экспериментов от одного бара до 2,5 килобар на каждые 500 баров. Если известны точные скорости складывания или разворачивания, после каждого 500-барного приращения пусть образец уравновешивается в течение 15-20 минут. Когда точка перегиба складного или разворачивающегося перехода достигает, запишите дополнительные эксперименты, чтобы повысить точность подгонки.Этот протокол был использован для исследования зависимости давления RRM2, второго мотива распознавания РНК гетерогенного ядерного рибонуклеопротеина A1. Поперечная релаксационная оптимизированная спектроскопия с гетеро-одноквантовой когерентной спектроскопией была собрана при одном баре, 1,5 килобарах, двух килобарах и 2,5 килобарах. RRM2 почти полностью развернут в диапазоне 2,5 килобар. Отдельные профили интенсивности давления были установлены в соответствии с уравнением, показанным здесь, для получения соответствующих изменений в стандартной свободной энергии и объеме Гиббса, связанных с разворачивающейся реакцией.При нанесении на карту доменной структуры остатки с наибольшей величиной изменения объема были обнаружены в структурном ядре домена, в то время как остатки с наименьшей величиной изменения объема были в основном расположены в соединительных петлях между бета-нитями и бета-нитями к концевой спирали C. Для исследования степени сжимаемости и конформационной неоднородности ансамбля складчатого состояния были проанализированы химические сдвиги протия. Отдельные профили химических сдвигов протия в зависимости от давления были установлены с использованием показанного уравнения для извлечения линейных и нелинейных коэффициентов для конкретного участка.Остатки с наибольшими нелинейными коэффициентами были в основном обнаружены в структурном ядре домена, в то время как остатки с наименьшими нелинейными коэффициентами были в основном расположены внутри петель, соединяющих различные структурные мотивы. Важно правильно настроить трубку как напорную установку, чтобы предотвратить утечки. Если произойдет утечка, зонд, вероятно, придется удалить, чтобы очистить любые следы минерального масла.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Используя строительные леса, липосом Развести липидами проксимальный белок-белковых взаимодействий<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Contrast-Matching Detergent in Small-Angle Neutron Scattering Experiments for Membrane Protein Structural Analysis and Ab Initio Modeling

Contrast-Matching Detergent in Small-Angle Neutron Scattering Experiments for Membrane Protein Structural Analysis and Ab Initio Modeling

Контраст соответствия моющего средства в малых угол нейтронного рассеяния экспериментов мембраной протеина структурного анализа и моделирования Ab Initio

The biological small-angle neutron scattering instrument at the High-Flux Isotope Reactor of Oak Ridge National Laboratory is dedicated to the ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Флуоресценции колебания спектроскопии Assay белок белковых взаимодействий в ячейке контакты

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

Высокая чувствительность измерение транскрипции фактор ДНК привязки родство по конкурентоспособным титрования, с помощью микроскопии флуоресцирования

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Identification of Functional Protein Regions Through Chimeric Protein Construction

Определение функциональных белков регионов путем строительства химерных белка

The goal of this protocol encompasses the design of chimeric proteins in which distinct regions of a protein are replaced by their corresponding sequences ...

Single-Molecule Tracking Microscopy - A Tool for Determining the Diffusive States of Cytosolic Molecules

Одномолекулярная слежение за микроскопией - инструмент для определения диффузивных состояний цитосолильных молекул

Single-molecule localization microscopy probes the position and motions of individual molecules in living cells with tens of nanometer spatial and ...

Creating Highly Specific Chemically Induced Protein Dimerization Systems by Stepwise Phage Selection of a Combinatorial Single-Domain Antibody Library

Создание высокоспецифических химически индуцированных систем димеризации белка по шагу Phage Выбор комбинаторных однодоменных антител библиотеки

Protein dimerization events that occur only in the presence of a small-molecule ligand enable the development of small-molecule biosensors for the ...

Native Cell Membrane Nanoparticles System for Membrane Protein-Protein Interaction Analysis

Родная клеточная мембрана наночастицы системы membrane белка-белкового взаимодействия анализа

Protein-protein interactions in cell membrane systems play crucial roles in a wide range of biological processes- from cell-to-cell interactions to signal ...

Optimizing the Growth of Endothiapepsin Crystals for Serial Crystallography Experiments

Оптимизация роста кристаллов эндотиапепсина для серийных кристаллографических экспериментов

Here, a protocol is presented to facilitate the creation of large volumes (&#62; 100 &#181;L) of micro-crystalline slurries suitable for serial ...

NMR-Based Fragment Screening in a Minimum Sample but Maximum Automation Mode

Скрининг фрагментов на основе ЯМР в режиме минимальной выборки, но максимальной автоматизации

Fragment-based screening (FBS) is a well-validated and accepted concept within the drug discovery process both in academia and industry. The greatest ...