Name: a scalable model to study the effects of blunt-force injury in adult zebrafish
Uploaded: 2021-05-31T15:00:00
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Os autores gostariam de agradecer aos membros do laboratório Hyde por suas discussões pensativas, os técnicos do Freimann Life Sciences Center para cuidados e criação de zebrafish, e o Núcleo de Microscopia Óptica da Universidade de Notre Dame/NDIIF pelo uso de instrumentos e seus serviços. Este trabalho foi apoiado pelo Centro de Pesquisa de Zebrafish da Universidade de Notre Dame, pelo Centro de Células-Tronco e Medicina Regenerativa da Universidade de Notre Dame, e bolsas do National Eye Institute of NIH R01-EY018417 (DRH), do National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program (JTH), LTC Neil Hyland Fellowship of Notre Dame (JTH), Sentinelas da Sociedade da Liberdade (JTH) e a Bolsa Pat Tillman (JTH).

Os zebrafish foram criados e mantidos na instalação de zebrafish de Notre Dame no Centro de Ciências da Vida de Freimann. Os métodos descritos neste manuscrito foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso de Animais da Universidade de Notre Dame.
1. Paradigma de lesão cerebral traumática
<ol><li>Adicione 1 mL de 2-phenoxyetanol a 1 L de água do sistema (60 mg de Oceano Instantâneo em 1 L de água de RO desionizada).</li>
	<li>Prepare um tanque de recuperação aerado contendo 2 L de...

<ol>
	<li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+Report+of+Traumatic+Brain+Injury-related+Emergency+Department+Visits,+Hospitalizations,+and+Deaths-United+States,+2014.">Surveillance Report of Traumatic Brain Injury-related Emergency Department Visits, Hospitalizations, and Deaths-United States, 2014.</a> Centers for Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services. , (2019).</li><li>Galgano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+brain+injury:+current+treatment+strategies+and+future+endeavors.">Traumatic brain injury: current treatment strategies and future endeavors.</a> Cell transplantation. 26 (7), 1118-1130 (2017).</li><li>Santiago, L. A., Oh, B. C., Dash, P. K., Holcomb, J. B., Wade, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+comparison+of+penetrating+and+blunt+traumatic+brain+injuries.">A clinical comparison of penetrating and blunt traumatic brain injuries.</a> Brain injury. 26 (2), 107-125 (2012).</li><li>Korley, F. K., Kelen, G. D., Jones, C. M., Diaz-Arrastia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergency+department+evaluation+of+traumatic+brain+injury+in+the+United+States,+2009-2010.">Emergency department evaluation of traumatic brain injury in the United States, 2009-2010.</a> The Journal of Head Trauma Rehabilitation. 31 (6), 379-387 (2016).</li><li>Faul, M., Xu, L., Wald, M., Coronado, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Traumatic Brain Injury in the United States: Emergency Department Visits, Hospitalizations and Deaths. , (2010).</li><li>Campbell, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch3+and+DeltaB+maintain+M&#252;ller+glia+quiescence+and+act+as+negative+regulators+of+regeneration+in+the+light-damaged+zebrafish+retina.">Notch3 and DeltaB maintain M&#252;ller glia quiescence and act as negative regulators of regeneration in the light-damaged zebrafish retina.</a> Glia. 69 (3), 546-566 (2021).</li><li>Green, L. A., Nebiolo, J. C., Smith, C. 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Part I: Pathophysiology and biomechanics.</a> Journal of Neurosurgery. 80 (2), 291-300 (1994).</li><li>Mussulini, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures+induced+by+pentylenetetrazole+in+the+adult+zebrafish:+a+detailed+behavioral+characterization.">Seizures induced by pentylenetetrazole in the adult zebrafish: a detailed behavioral characterization.</a> PloS One. 8 (1), 54515 (2013).</li><li>Kalueff, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+comprehensive+catalog+of+zebrafish+behavior+1.0+and+beyond.">Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond.</a> Zebrafish. 10 (1), 70-86 (2013).</li><li>Xiong, Y., Mahmood, A., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+traumatic+brain+injuries.">Animal models of traumatic brain injuries.</a> Nature Reviews Neuroscience. 14, 128-142 (2013).</li><li>Amamoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+axolotls+can+regenerate+original+neuronal+diversity+in+response+to+brain+injury.">Adult axolotls can regenerate original neuronal diversity in response to brain injury.</a> eLife. 5, 13998 (2016).</li><li>Yamamoto, S., Levin, H., Prough, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild,+moderate+and+severe:+terminology+implications+for+clinical+and+experimental+traumatic+brain+injury.">Mild, moderate and severe: terminology implications for clinical and experimental traumatic brain injury.</a> Current Opinion in Neurology. 31 (6), 672-680 (2008).</li><li>Lund, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+traumatic+brain+injury,+acute+phase+course+and+deviations+in+physiological+variables:+an+observational+study.">Moderate traumatic brain injury, acute phase course and deviations in physiological variables: an observational study.</a> Scandinavian Journal of Trauma Resuscitation and Emergency Medicine. 24, 77 (2016).</li><li>Levin, H., Arrastia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis,+prognosis,+and+clinical+management+of+mild+traumatic+brain+injury.">Diagnosis, prognosis, and clinical management of mild traumatic brain injury.</a> The Lancet Neurology. 14 (5), 506-517 (2015).</li><li>Ruff, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+diagnosing+a+mild+traumatic+brain+injury:+a+National+Academy+of+Neuropsychology+education+paper.">Recommendations for diagnosing a mild traumatic brain injury: a National Academy of Neuropsychology education paper.</a> Archives of Clinical Neuropsychology: The Official Journal of the National Academy of Neuropsychologists. 24 (1), 3-10 (2009).</li><li>Ganz, J., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+neurogenesis+in+fish.">Adult neurogenesis in fish.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 8 (7), 019018 (2016).</li><li>Grandel, H., Kaslin, J., Ganz, J., Wenzel, I., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurogenesis+in+the+adult+zebrafish+brain:+origin,+proliferation+dynamics,+migration+and+cell+fate.">Neural stem cells and neurogenesis in the adult zebrafish brain: origin, proliferation dynamics, migration and cell fate.</a> Developmental Biology. 295, 263-277 (2006).</li><li>Lahne, M., Nagashima, M., Hyde, D. R., Hitchcock, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+Muller+glia+to+regenerate+retinal+neurons.">Reprogramming Muller glia to regenerate retinal neurons.</a> Annual Review of Visual Science. 6, 171-193 (2020).</li></ol>

As investigações de neurotrauma e sequelas associadas têm sido centradas em modelos tradicionais de roedores não regenerativos20. Somente recentemente, estudos aplicaram várias formas de dano de CNS aos modelos regenerativos9,11,13,14,21. Embora perspicazes, esses modelos são limitados pelo uso de um método de lesão pouco visto ...

Lesões cerebrais traumáticas (TBIs) são uma crise de saúde global e uma das principais causas de morte e incapacidade. Nos Estados Unidos, cerca de 2,9 milhões de pessoas experimentam um TCE a cada ano, e entre 2006-2014 a mortalidade por sequelas de TCE ou TCE aumentou mais de 50% 1. No entanto, os TBIs variam em sua etiologia, patologia e apresentação clínica devido, em grande parte, ao mecanismo de lesão (MOI), que também influencia as estratégias de tratamento e previu o prognóstico2. Embora os TBIs possam resultar de vários MOI, eles são predominantemente o resultado de um trauma penetrante ou contundente. Traumas penetrantes representam uma pequena porcentagem de TBIs e geram uma lesão grave e focal localizada nas regiões cerebrais próximas e circundantes3. Em contraste, as TBIs de força bruta são mais comuns na população geral, abrangem uma série de gravidades (leves, moderadas e graves) e produzem uma lesão difusa, heterogênea e global que afeta múltiplas regiões cerebrais1,4,5.
Os zebrafish (Danio rerio) têm sido utilizados para examinar uma ampla gama de insultos neurológicos que abrangem o sistema nervoso central (CNS)6,7,8,9. Os zebrafish também possuem, ao contrário dos mamíferos, uma resposta regenerativa inata e robusta para reparar danos do CNS10. Os modelos atuais de trauma de zebrafish utilizam vários métodos de lesão, incluindo penetração, excisão, insulto químico ou ondas de pressão11,12,13,14,15,16. No entanto, cada um desses métodos utiliza um MOI que raramente é experimentado pela população humana, não é escalável em uma série de gravidades de lesões, e não aborda a heterogeneidade ou sequência de TCE dependente da gravidade relatada após tbi de força bruta. Esses fatores limitam o uso do modelo de zebrafish para compreender os mecanismos subjacentes das patologias associadas à forma mais comum de TCE na população humana (lesões leves por força bruta).
Nosso objetivo foi desenvolver um modelo rápido e escalável de zebrafish TBI de força bruta que fornece caminhos para investigar a patologia da lesão, a progressão das sequelas do TCE e a resposta regenerativa inata. Modificamos a queda de peso do roedor Marmarou17 comumente usado e aplicamos-no a zebrafish adulto. Este modelo produz uma gama reprodutível de gravidades que variam de leve, moderada, a grave. Este modelo também recapitula múltiplas facetas da patologia do TCE humano, de forma dependente da gravidade, incluindo convulsões, edema, hematomas subdurais e intracerebrais, morte celular neuronal e déficits cognitivos, como aprendizado e prejuízo de memória. Dias após lesões, patologias e déficits se dissipam, retornando a níveis semelhantes a controles não danificados. Além disso, este modelo de zebrafish exibe uma resposta robusta de proliferação e regeneração neuronal através da neuroaxis em relação à gravidade da lesão.
Aqui, fornecemos detalhes para a configuração e indução de trauma por força bruta, pontuação de convulsões pós-traumáticas, avaliação de lesões vasculares, instruções sobre a preparação de seções cerebrais, abordagens para quantificar edema, e insights sobre a resposta proliferativa após lesão.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-phenoxyethanol</td>
			<td>Sigma Alderich</td>
			<td>77699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#00 buckshot</td>
			<td>Remington</td>
			<td>RMS23770</td>
			<td>3.3g weight for sTBI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#3 buckshot</td>
			<td>Remington</td>
			<td>RMS23776</td>
			<td>1.5g weight for miTBI/moTBI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#5 Dumont forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-ethynyl-2&#8217;-deoxyuridine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A10044</td>
			<td>EdU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml glass vial</td>
			<td>VWR</td>
			<td>66011-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Click-iT EdU Cell Proliferation Kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>C10340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoOne 12-well plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>CC7682-7512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant Ocean</td>
			<td>Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super frost postiviely charged slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super PAP Pen Liquid Blocker</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>22309</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue freezing medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15148-031</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a scalable model to study the effects of blunt-force injury in adult zebrafish

Lesões cerebrais traumáticas por força bruta (TCE) são a forma mais comum de traumatismo craniano, que abrange uma série de gravidades e resulta em efeitos secundários complexos e heterogênios. Embora não haja mecanismo para substituir ou regenerar os neurônios perdidos após um TBI em humanos, os zebrafish possuem a capacidade de regenerar neurônios em todo o seu corpo, incluindo o cérebro. Para examinar a amplitude das patologias exibidas em zebrafish após um TBI de força bruta e estudar os mecanismos subjacentes à resposta regenerativa neuronal subsequente, modificamos a queda de peso comumente utilizada de roedor Marmarou para o uso em zebrafish adulto. Nosso modelo de TCE de força bruta simples é escalável, induzindo um TBI leve, moderado ou grave, e recapitula muitos dos fenótipos observados após o TCE humano, como convulsões de contato e pós-traumático, edema, hematomas subdural e intracerebral, e prejuízos cognitivos, cada um exibido de forma dependente de lesões. As sequelas do TCE, que começam a aparecer poucos minutos após a lesão, diminuem e retornam a níveis de controle quase intactos dentro de 7 dias após a lesão. O processo regenerativo começa já em 48 horas após a lesão (hpi), com a proliferação de células máximas observada por 60 hpi. Assim, nosso modelo de TBI de força bruta de zebrafish produz patologias tbi primárias e secundárias características semelhantes às TBI humanas, o que permite investigar o início e a progressão da doença, juntamente com os mecanismos de regeneração neuronal que é exclusivo do zebrafish.

A preparação da plataforma de indução de lesões permite um meio rápido e simplista de fornecer um TBI escalável de força bruta aos zebrafish adultos. A gravidade classificada do modelo de lesão fornece várias métricas facilmente identificáveis de lesões bem sucedidas, embora a lesão vascular seja uma das patologias mais fáceis e proeminentes (Figura 3). A variedade de peixes utilizada durante a lesão pode tornar este indicador mais fácil ou mais difícil de identificar. Ao u...

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A Scalable Model to Study the Effects of Blunt-Force Injury in Adult Zebrafish

Modificamos o modelo de queda de peso de Marmarou para o zebrafish adulto para examinar uma amplitude de patologias após lesão cerebral traumática por força bruta (TCE) e os mecanismos subjacentes à regeneração neuronal subsequente. Este modelo de TBI de força bruta é escalável, induz um TCE leve, moderado ou grave, e recapitula a heterogeneidade da lesão observada no TBI humano.

Um modelo escalável para estudar os efeitos da lesão por força bruta em zebrafish adulto

Blunt-force traumatic brain injuries (TBI) are the most common form of head trauma, which spans a range of severities and results in complex and ...

Este protocolo fornece um método simples, rápido e reprodutível para induzir uma lesão cerebral traumática escalável em zebrafish adulto. Os zebrafish adultos que sofrem essa lesão cerebral traumática por força bruta apresentam muitas das características observadas em humanos que sofrem de uma TBI de força bruta. Demonstrando o procedimento estarão o Sr. James Hentig e a Sra. Kaylee Cloghessy, dois doutorandos do meu laboratório.Comece preenchendo uma placa de Petri com argila modeladora. Em seguida, use os dedos ou a parte de trás de um par de fórceps para criar uma plataforma elevada com argila de modelagem adicional. Divida a plataforma elevada longitudinalmente em duas metades aproximadamente iguais usando uma lâmina de barbear.Forme as duas metades em um canal, de tal forma que acomode o comprimento de um peixe adulto. Use argila adicional para construir paredes para proteger 2/3 do corpo de peixe com a cabeça exposta. Molde um pequeno suporte na região da cabeça exposta perpendicular às paredes para evitar rotação ou recuo da cabeça após o ferimento.Certifique-se de que os lados do canal não impeçam o peso caído. Use um mini furo para criar um disco de aço de 3 milímetros a partir de um pisca-pisca de aço de calibre 22. Coloque um peixe anestesiado sem resposta para a pinça de cauda no molde de argila dentro do canal com seu lado dorsal para cima para que seu corpo seja fixado nas laterais.Coloque o disco de aço de calibre 3 mm 22 na cabeça, centrado sobre o ponto de impacto desejado. Alinhe o peixe perpendicularmente para evitar que sua cabeça se incline para um lado, o que poderia causar um impacto desigual. Use um suporte de anel padrão e um grampo de braço para fixar o tubo de aço ou plástico, garantindo que ele seja reto, de modo que a parte inferior do tubo está 1,5 centímetros acima da cabeça do zebrafish.Olhe para baixo a tubulação para garantir que ela esteja alinhada acima da placa de aço. Escolha o rolamento adequado do esfera com base na gravidade desejada da lesão. Solte o rolamento da esfera de uma altura predeterminada para baixo da tubulação sobre a placa de aço.Em seguida, coloque os peixes feridos no tanque de recuperação para serem monitorados. Encha uma placa de Petri com argila modeladora e crie uma pequena cavidade para apoiar o corpo durante a dissecação. Coloque o peixe no molde de argila com o lado dorsal para cima.Coloque dois pinos de dissecção, um através da linha média no meio do corpo e outro cerca de 5 milímetros atrás da base da cabeça. Use um par de 5 fórceps Dumont para cortar sem rodeios o nervo óptico e remover os olhos. Coloque uma extremidade dos 5 fórceps sob a placa parietal direita.Faça uma ação deliberada de tesoura movendo-se em direção à extremidade rostral e remova a placa frontal direita. Em seguida, gire o peixe 90 graus no sentido horário. Coloque uma extremidade dos 5 fórceps sob a placa parietal esquerda e use o mesmo movimento da tesoura para remover as placas parietal e frontal esquerda, expondo todo o aspecto dorsal do cérebro.Use os 5 fórceps para transcessão direta da maxila de tal forma que as lâmpadas olfativas sejam preservadas e não danificadas. Usando os mesmos fórceps, remova o operáculo direito, o preopercle, o interopercle e o subóculo. Em seguida, ressecção direta da musculatura na extremidade caudal do calvério para expor a medula espinhal.Usando os fórceps, transcessão sem rodeios da medula espinhal. Coloque as fórceps cuidadosamente sob o cérebro e remova suavemente o cérebro do calvarium. Disseque todo o cérebro ou região de interesse usando as instruções do manuscrito do texto, e coloque o cérebro imediatamente em um pequeno barco de pesagem usando fórceps finos, tomando cuidado para não esfaquear ou raspar o cérebro.Transfira o cérebro para o barco de pesagem de secagem e regisse o peso úmido do cérebro. Oriente os cérebros para colocá-los no barco de pesagem com o lado dorsal virado para cima. Em seguida, coloque o cérebro e o barco de pesagem de secagem em um forno de hibridização definido a 60 graus Celsius por oito horas.Para transferir o cérebro para um novo pequeno barco de pesagem, uma vez que esteja seco, aperte os fórceps finos juntos e, começando pelo lado ventral do cérebro, colher em um movimento ascendente. Faça uma incisão parcial em uma esponja molhada. Coloque um peixe de cada vez na abertura com o lado ventral para cima e use uma agulha de calibre 30 para injetar aproximadamente 40 microliters de 10 milimôlares EdU no corpo do peixe.Em seguida, devolva o peixe para o tanque de retenção cheio de água do sistema. Colete os cérebros como mencionado anteriormente, e coloque-os como um grupo em um frasco de vidro de 9 mililitros contendo 2 mililitros de nove partes 100% etanol para uma parte 37% formaldeído. Conserte os cérebros a 4 graus Celsius em uma plataforma de roqueiro.Use um mandril criostat para incorporar os cérebros em TFM na orientação desejada sobre gelo seco. A lesão vascular foi considerada uma das patologias mais fáceis e proeminentes para identificar lesões bem sucedidas através deste modelo. A capacidade de identificar o indicador mudou com a cepa de peixes utilizada durante a lesão.A identificação de lesões vasculares no tipo AB selvagem foi difícil de distinguir entre TBI leve ou moderada e peixe de controle não danificado devido à pigmentação. Após a lesão, o peixe TBI leve apresentou escoriações mínimas da superfície, enquanto os peixes TBI moderados apresentaram hemorragia cerebral limitada. A extensão da lesão foi aparente em peixes TBI graves.Em contraste, a lesão vascular pode ser facilmente identificada ao usar peixe albino ou casper. O inchaço do cerebrum devido à lesão foi avaliado por edema. Em contraste, tanto o TCE moderado quanto o TCE grave apresentaram edema significativo, 1 dpi e 3 dpi, mas o teor fluido tanto de TBI moderado quanto de TCE grave retornou a níveis semelhantes a controles não danificados por 5 dpi.Esta lesão por força bruta resultou em uma resposta robusta de proliferação celular abrangendo a neuroaxis. O aumento da rotulagem edu foi observado nas zonas ventricular e subventricular do cérebro em comparação com controles não danificados. Os cérebros feridos apresentaram aumento da rotulagem edu na zona cinza periventricular, os lobos tectal ópticos, e aspectos do hipotálamo anterior em comparação com o cérebro de peixe não danificado.Após tce-TBI grave, regiões neurogênicas no cérebro traseiro apresentaram aumento da proliferação celular em comparação com o cérebro não danificado. Para a indução adequada da lesão, certifique-se de que os peixes estejam protegidos e estáveis no molde, e que a tubulação seja reta para evitar o impacto fora do centro ou alterar a trajetória de queda de peso. Este procedimento fornece um método de indução de lesão por força bruta rápida e econômica aplicado a um modelo regenerativo que seria especialmente aplicável para repetidos traumatismo craniano ou estudos regenerativos induzidos por lesões.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

Nervo Óptico um modelo murino de lesão por esmagamento Estudo de Sobrevivência de células da retina Gânglio

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Neurociência

Micromanipulation of Gene Expression in the Adult Zebrafish Brain Using Cerebroventricular Microinjection of Morpholino Oligonucleotides

Micromanipulação de expressão gênica no cérebro adulto Zebrafish Usando microinjeção Cerebroventricular de Morpholino Oligonucleotides

Manipulation of gene expression in tissues is  required to perform functional studies. In this paper, we demonstrate the  cerebroventricular ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

Gravação eletrofisiológica no cérebro de Intacta Zebrafish Adulto

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration

Stab ferida ferimento do peixe-zebra adulto Telencéfalo: Um método para investigar Vertebrados Cérebro Neurogênese e Regeneração

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

O Sistema Olfativo como um modelo para estudar os padrões de crescimento axonal e Morfologia<em&gt; In Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Efeitos de Neurotrauma induzida por explosão em roedores pressurizado artérias cerebrais de médio

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

Cirurgia do nervo facial no modelo de rato para estudar inibição e regeneração axonal

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...

Using Zebrafish Larvae to Study the Pathological Consequences of Hemorrhagic Stroke

Usando larvas de zebrafish para estudar as conseqüências patológicas do curso hemorrágico

Despite being the most severe subtype of stroke with high global mortality, there is no specific treatment for patients with intracerebral hemorrhage ...

Combining Behavior and EEG to Study the Effects of Mindfulness Meditation on Episodic Memory

Combinando Comportamento e EEG para Estudar os Efeitos da Meditação Mindfulness na Memória Episódica

Although there has been recent interest in how mindfulness meditation can affect episodic memory as well as brain structure and function, no study has ...

A Metric Test for Assessing Spatial Working Memory in Adult Rats Following Traumatic Brain Injury

Um teste métrico para avaliar a memória espacial de trabalho em ratos adultos após lesão cerebral traumática

Impairments to sensory, short-term, and long-term memory are common side effects after traumatic brain injury (TBI). Due to the ethical limitations of ...