Name: an intact pericardium ischemic rodent model
Uploaded: 2021-09-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model at JoVE.com

Mannelijke en vrouwelijke C57BL/6J muizen tussen de 8-14 weken oud werden gebruikt voor deze experimenten. Dit protocol heeft ethische goedkeuring gekregen van het Animal Care Committee van de Universiteit van Calgary en volgt alle richtlijnen voor dierverzorging.
1. Muisvoorbereiding en chirurgie
<ol><li>Steriliseer chirurgische hulpmiddelen (via kraalsterilisator of autoclaaf).</li>
	<li>Weeg de muis voor prechirurgisch gewicht en pijnstillende dosis.</li>
	<li>Plaats de muis in een induct...

<ol>
	<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141, 139 (2020).</li><li>Iismaa, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+regenerative+mechanisms+across+different+mammalian+tissues.">Comparative regenerative mechanisms across different mammalian tissues.</a> NPJ Regenerative Medicine. 3 (6), (2018).</li><li>Bayat, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+heart+failure+after+myocardial+infarction+in+mice.">Progressive heart failure after myocardial infarction in mice.</a> Basic Research in Cardiology. 97 (3), 206-213 (2002).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. 52, 2581 (2011).</li><li>De Villiers, C., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+myocardial+infarction:+comparing+permanent+ligation+and+ischaemia-reperfusion.">Mouse models of myocardial infarction: comparing permanent ligation and ischaemia-reperfusion.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 13 (11), (2020).</li><li>Borlaug, B. A., Reddy, Y. N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+pericardium+in+heart+failure:+Implications+for+pathophysiology+and+treatment.">The role of the pericardium in heart failure: Implications for pathophysiology and treatment.</a> JACC Heart Failure. 7 (7), 574-585 (2019).</li><li>Pfaller, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+the+pericardium+for+cardiac+biomechanics:+from+physiology+to+computational+modeling.">The importance of the pericardium for cardiac biomechanics: from physiology to computational modeling.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 18 (2), 503-529 (2019).</li><li>Deniset, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gata6(+)+Pericardial+Cavity+Macrophages+Relocate+to+the+Injured+Heart+and+Prevent+Cardiac+Fibrosis.">Gata6(+) Pericardial Cavity Macrophages Relocate to the Injured Heart and Prevent Cardiac Fibrosis.</a> Immunity. 51 (1), 131-140 (2019).</li><li>Weber, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+targeting+of+the+pleural+space+by+intercostal+approach.">Immune targeting of the pleural space by intercostal approach.</a> BMC Pulmonary Medicine. 15, 14 (2015).</li><li>Nakatani, T., Shinohara, H., Fukuo, Y., Morisawa, S., Matsuda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericardium+of+rodents:+pores+connect+the+pericardial+and+pleural+cavities.">Pericardium of rodents: pores connect the pericardial and pleural cavities.</a> The Anatomical Record. 220, 132-137 (1988).</li><li>Tyberg, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+pericardial+pressure+and+right+atrial+pressure:+an+intraoperative+study.">The relationship between pericardial pressure and right atrial pressure: an intraoperative study.</a> Circulation. 73, 428-432 (1986).</li><li>Hamilton, D. R., Sas, R., Semlacher, R. A., Kieser Prieur, T. M., Tyberg, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+left+and+right+pericardial+pressures+in+humans:+an+intraoperative+study.">The relationship between left and right pericardial pressures in humans: an intraoperative study.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 27, 346-350 (2011).</li><li>Park, D. S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pericardial+proteoglycan+4+(lubricin):+Implications+for+postcardiotomy+intrathoracic+adhesion+formation.">Human pericardial proteoglycan 4 (lubricin): Implications for postcardiotomy intrathoracic adhesion formation.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 156 (4), 1598-1608 (2018).</li></ol>

Het induceren van een MI in een gesloten hartzakje bij knaagdieren is uniek en kan potentieel belangrijke toepassingen hebben. De procedure is sterk afhankelijk van de bekendheid van de chirurg met het knaagdiermodel en de hartanatomie van knaagdieren. Succes is ook afhankelijk van de zorg die wordt gegeven tijdens drie kritieke stappen: intercostale spierincisie en ribterugtrekking (stappen 1.11-1.13), het creëren van het infarct (stap 1.17) en herstel van dieren (stappen 1.22-1.24).
De thor...

Tot op de dag van vandaag wordt hart- en vaatziekten (CVD) wereldwijd erkend als de belangrijkste doodsoorzaak, wat resulteert in een aanzienlijke financiële last en een vermindering van de kwaliteit van leven van de patiënt1. Coronaire hartziekte (CAD) is een subtype van CVD en speelt een essentiële rol bij de ontwikkeling van een hartinfarct (MI), dat een belangrijke bijdrage levert aan de mortaliteit. Per definitie is MI het gevolg van onomkeerbaar letsel aan het myocardiale weefsel als gevolg van langdurige aandoeningen van ischemie en hypoxie. Myocardinaal weefsel mist regeneratiecapaciteit, dus verwondingen zijn permanent en resulteren in de vervanging van de hartspier door een fibrotisch litteken dat in eerste instantie beschermend kan zijn, maar uiteindelijk bijdraagt aan nadelige hartremodellering en uiteindelijk hartfalen2.
Hoewel het beheer van patiënten met CAD de afgelopen decennia dramatisch is verbeterd, treft chronisch hartfalen (CHF) secundair aan ischemie veel patiënten wereldwijd. Om deze epidemie te voorkomen en te beheersen, is het noodzakelijk om de onderliggende mechanismen uitgebreider te begrijpen en nieuwe therapeutische benaderingen te ontwikkelen. Bovendien benadrukken bevindingen uit het verleden de beperkingen van systemische therapie en de noodzaak om precieze alternatieven te ontwikkelen. Gezien het onderzoek naar de moleculaire gevolgen van MI bij mensen wordt beïnvloed door het vermogen om toegang te krijgen tot infarcted weefsel, zijn diermodellen die de kenmerken en ontwikkeling van menselijke MI en CHF met betrekking tot HVZ samenvatten onmisbaar.
Omdat ideale diermodellen qua structurele en functionele kenmerken sterk lijken op een menselijke aandoening, zou ziekte-etiologie hun conceptie moeten leiden. In CAD is het de chronische atherosclerotische stenose van kransslagaders of acute trombotische occlusie. Verschillende methoden zijn ontwikkeld en toegepast in verschillende soorten proefdieren om kransslagadervernauwing of occlusie te induceren. Dergelijke strategieën kunnen grofweg worden ingedeeld in twee groepen: (1) mechanische manipulatie van een kransslagader om een MI te induceren en (2) het versnellen van atherosclerose om coronaire vernauwing te vergemakkelijken die leidt tot een MI. De eerste strategie omvat meestal de ligatie van een kransslagader of de plaatsing van een stent in de slagader. De tweede benadering heeft de neiging om te vertrouwen op het aanpassen van het dieet van het dier om voedsel met een hoog vetgehalte / cholesterolgehalte op te nemen. Enkele van de beperkingen van deze laatste benadering zijn het gebrek aan controle over de timing en plaats van coronaire occlusies.
Daarentegen heeft de chirurgische inductie van MI of ischemie in een diermodel verschillende voordelen, zoals locatie, precieze timing en omvang van de coronaire gebeurtenis, wat leidt tot meer reproduceerbare resultaten. De meest gebruikte methode is chirurgische ligatie van de linker anterieure dalende kransslagader (LAD). Dergelijke modellen recapituleren menselijke reacties op acuut ischemisch letsel, evenals de progressie naar CHF3. Aanvankelijk ontwikkeld bij grotere dieren, is LAD-chirurgie op kleine dieren zoals knaagdieren haalbaarder geworden met de vooruitgang in technologie4. Bij het opzetten van dergelijke modellen zijn muizen om verschillende redenen begunstigd, waaronder hun relatieve beschikbaarheid, lage kosten voor huisvesting en hun vermogen tot genetische manipulatie.
Hedendaagse chirurgische modellen van ischemische hartziekte met behulp van LAD-occlusie vereisen dat de onderzoeker het pericardium opent om de slagader tijdelijk of permanent teligateeren 5. Dergelijke strategieën resulteren in de verstoring van de pericardiale ruimte, die een in wezen mechanische en smerende functie speelt om een goede hartfunctie te garanderen. Een ander nadeel van het openen van het hartzakje is het verliezen van de inheemse pericardvloeistof van het dier met zijn verschillende cellulaire en eiwitcomponenten 6,7. Als reactie hierop werd door ons een methode ontwikkeld om MI te induceren terwijl het hartzakje intact bleef. Naast het minimaliseren van de verstoring van deze homeostatische omgeving, maakt deze aanpak het mogelijk om specifieke cellen te taggen en te traceren na het veroorzaken van een MI. Bovendien vertegenwoordigt deze aanpak beter myocardiale ischemische schade in de menselijke omgeving.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Steri-350 Bead Sterilizer</td>
			<td>Inotech</td>
			<td>NC9449759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-949</td>
			<td>Falcon, 352340</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-952</td>
			<td>Falcon, 352350</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insyte-W Catheter Needle 24 G X 3/4&#34;</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine (10% povidone-iodine topical solution)</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>104826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNP Ophthalmic Ointment</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>17909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22625101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>SCR103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase XI</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C7657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - CV-11 taper needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>GL-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - PC-13 cutting needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>SL-1659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11009-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Mounting Medium</td>
			<td>Agilen</td>
			<td>CS70330-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 100%</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>MFCD00003568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon 8-0 Ethilon Suture - BV-130-4 taper needle</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Inc.</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber-Optic Light</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>2208502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresbrite&#174; YG Carboxylate Microspheres 1.00 &#181;m</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>15702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geiger Thermal Cautery Unit</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501293</td>
			<td>Model 150-ST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>H4272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane Vaporizer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-0951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane USP, 250 mL</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Fixator Retraction System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18200-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550D- 40 MHz probe</td>
			<td>Fujifilm- Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 Tubing</td>
			<td>Braintree Scienctific, Inc.</td>
			<td>PE10 50 FT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 14184-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ-1B Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ1-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VentElite Small Animal Ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>55-7040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetergesic (10 mL, 0.3mg/mL buprenorphine))</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>124918</td>
			<td>controlled drug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 Software</td>
			<td>Fujifilm-Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intact pericardium ischemic rodent model

Dit protocol heeft aangetoond dat het pericardium en de inhoud ervan een essentiële anti-fibrotische rol spelen in het ischemische knaagdiermodel (coronaire ligatie om myocardinfarct te induceren). De meeste preklinische myocardinfarctmodellen vereisen de verstoring van de pericardiale integriteit met verlies van het homeostatische cellulaire milieu. Onlangs is er echter een methodologie door ons ontwikkeld om een hartinfarct te induceren, dat pericardiale schade minimaliseert en de inwonende immuuncelpopulatie van het hart behoudt. Een verbeterd cardiaal functioneel herstel bij muizen met een intacte pericardiale ruimte na coronaire ligatie is waargenomen. Deze methode biedt de mogelijkheid om ontstekingsreacties in de pericardiale ruimte na een hartinfarct te bestuderen. Verdere ontwikkeling van de etiketteringstechnieken kan worden gecombineerd met dit model om het lot en de functie van pericardiale immuuncellen te begrijpen bij het reguleren van de ontstekingsmechanismen die remodellering in het hart stimuleren, waaronder fibrose.

Dit gemodificeerde coronaire ligatiemodel is geoptimaliseerd om reproduceerbaarheid en overleving van dieren te bereiken. Vanwege het aanzienlijke letsel dat in het hart wordt veroorzaakt, zijn sommige verwachte intra-operatieve en postoperatieve mortaliteit echter geassocieerd met de procedure. De standaardsterfte is doorgaans hoger bij mannen (~25-35%) dan bij vrouwen (~ 10-15%).
Succesvolle inductie van een MI met de gemodificeerde coronaire ligatie moet duidelijk zijn door veranderingen in...

Watch this Scientific Journal Video about An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model at JoVE.com

An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

Dit protocol schetst de stappen voor het induceren van een hartinfarct bij muizen met behoud van het hartzakje en de inhoud ervan.

Een intact pericardium ischemisch knaagdiermodel

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

Met deze methode kunnen we de rol van de pericardholte rond het hart en de inhoud ervan evalueren bij hartherstel na een hartinfarct. In vergelijking met conventionele coronaire ligatiemethoden voor het modelleren van myocardinfarct, handhaaft onze methode een intacte pericardiale holte, waardoor de inhoud kan worden bepaald en hun rollen na cardiaal ischemisch letsel kunnen worden gevolgd. Inzicht in de bijdrage van de pericardholte en de letselrespons van het hart zal belangrijke inzichten bieden in therapeutische strategieën die zich richten op het pericardium om de hartgenezing te verbeteren.Om te beginnen met post-anesthesie, houd de poten van de muis in bedwang en plaats deze op de operatietafel. Nadat u de muis hebt voorbereid op een operatie zoals beschreven in het manuscript, ventileert u de muis met 2% isofluraan en 100% zuurstof als dragergas met behulp van een commerciële ventilator. Stel vervolgens een snelheid in van 110 ademhalingen per minuut, een getijdenvolume van 250 microliter en een positieve eindexploiratoire druk van vier millimeter kwik.Rol de muis 30% aan de rechterkant om de linkerkant van de borst te positioneren voor een operatie. Maak vervolgens een laterale incisie van twee tot drie centimeter in de borsthuid om de borstspieren aan de linkerkant te visualiseren. Maak een incisie van één centimeter vanaf de middellijn naar buiten voor het snijden van de pectoralis major en minor.Vermijd overmatig bloeden tijdens de cauterisatie van bloedende bloedvaten. Visualiseer de intercostale spieren tussen de derde en vierde rib. Maak een incisie van twee centimeter in de linker intercostale spier om lucht in de borstholte te brengen en het hart en de longen van de incisie te laten vallen.Om de intercostale in te snijden zonder bloeding, stopt u de ventilator tijdelijk en breidt u de opening uit met behulp van een cautery-apparaat. Trek met behulp van retractors de ribben in om het hart bloot te leggen. Observeer vervolgens het pericardium en het onderliggende hart onder een stereomicroscoop.Plaats de tang voorzichtig op het pericardiumoppervlak om pericardium en onderliggende hartbewegingen te verminderen. Visualiseer de LAD-kransslagader door de opkomst ervan onder het linker aanhangsel te traceren. Gebruik de micronaalddriver om een geschikte hechting door het pericardium onder de LAD te leiden.Observeer de hechting die aan de andere kant van de LAD en het pericard ontstaat. Als vertegenwoordiger van het permanente ligatiemodel, bindt u de hechting om de bloedstroom door de kransslagader te beperken, waardoor blancheren van het voorste deel van de linker ventrikel zichtbaar wordt. Knip vervolgens de overtollige hechting bij met behulp van een schaar.Zorg voor onderhoudsinjecties van pijnstillende subcutaan om de 12 uur gedurende 72 uur na de operatie. Na het verminderen van de isofluraan tot 1% schakelt u de isofluraan uit met behoud van de ventilatie met zuurstof. Zodra het dier tekenen van ademhaling vertoont, verwijdert u de 23 gauge tracheale buis uit de mond en plaatst u de muis in een herstelkooi om de hervatting van de ademhaling te controleren.Laat de muis herstellen in de kooi met een deel van de kooi op een opwarmpad om een externe warmtebron te bieden. Controleer de gezondheidsstatus van de muis dagelijks gedurende zeven dagen door de incisies en het ongemak van dieren te evalueren. Dien indien nodig antibiotica toe voor een succesvol herstel na de invasieve operatie.Nadat u de muis onder algemene anesthesie met zuurstof hebt gehouden, plaatst u de muis in rugligging op een verwarmd podiumplatform en bevestigt u de poten aan de ECG-kabels. Schuur dan de borstkas. Verkrijg ECG-beelden met behulp van transducer sonde en contactgel en analyseer met de juiste software.Schakel na niet-invasieve ECG-beoordeling de isofluraan uit en breng de muis terug naar de kooi. Fix het hart in 10% formaline gedurende ten minste 24 uur. Snijd het monster met een recht scheermesje door de rechter ventrikel, het interventriculaire septum en de linker ventrikel, zodat de incisie door het midden van de infarctzone gaat.En dan paraffine insluit de weefselmonsters. De gesneden secties worden vervolgens in montagecassette geplaatst voor verdere inbedding van paraffine en daaropvolgende sectie in vijf micrometer dikke secties. Na plaatsing van weefselsecties op dia's, deparaffineren met behulp van tolueen en gesorteerde alcoholwassingen met gedeïoniseerd water.Daarna rehydrateren. Bevlek vervolgens de sectie met 0,1% siriusrood in picrinezuur gedurende twee uur bij kamertemperatuur. Was de sectie met 0,5% azijnzuur gedurende drie minuten gevolgd door spoeling met 70% ethanol gedurende één minuut.Droog de sectie uit met behulp van de omgekeerde volgorde van wasbeurten met toenemende en gesorteerde ethanolconcentraties voorafgaand aan montage voor microscopische evaluatie. De succesvolle inductie van het myocardinfarct met de gemodificeerde coronaire ligatie werd beoordeeld door de functionele parameters en structurele kenmerken van het hart te onderzoeken. Voor de functie werd een verlaagde ejectiefractie van de linker ventrikel beoordeeld door echocardiografie binnen drie tot vier weken na een hartinfarct.De histologische kleuring toonde aan dat de functionele veranderingen gepaard gingen met significante fibrose van de linker ventrikelwand, die verder werden bevestigd door kwantificering van de picrosirius rood gekleurde fibrose in de doorsneden van het hart vier weken na het infarct met de verstoorde of intacte pericardiale coronaire ligatiemodellen. Het combineren van de fluorescerende kraaletiketteringsmethode met flowcytometrie-analyse leverde een aanpak op om de residente Gata6-positieve pericardiale macrofagen te volgen. Belangrijk is dat er weinig tot geen etikettering werd gedetecteerd in het hart of bloed.Na een hartinfarct kan de verplaatsing van de cellen worden gevolgd door flowcytometrie en beeldvorming. Kwantificering van de fluorescerende kraal gelabelde pericardiale myeloïde cellen met of zonder myocardinfarct wordt getoond. Voorzichtigheid is nodig om te voorkomen dat het dunne hartzakje tijdens de procedure per ongeluk wordt verstoord of gescheurd.Deze methode kan worden gecombineerd met afstammingstracering van cellulaire of effectorblokkade, waarmee de impact van de pericardiale component op de genezingsrespons in het geïnfarcteerde hart kan worden gevolgd en bepaald. We hebben vastgesteld dat de pericardholte het hart beschermt na letsel, dat gedeeltelijk wordt gemedieerd door residente pericardiale macrofagen. Deze aanpak opent een nieuw onderzoeksgebied voor hart- en vaatziekten.

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Gene Transfer voor ischemisch hartfalen in een preklinisch model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

Een In vivo Knaagdieren Model van krimp veroorzaakte letsel en niet-invasieve monitoring van de Recovery

Muscle strains are one of the most  common complaints treated by physicians. A muscle injury is typically diagnosed from the patient history and  physical ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

Een vereenvoudigde methode voor het produceren van een ischemische Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Met behulp van kwantitatieve real-time PCR voor donorcel Engraftment bepalen in een concurrerende Murine beenmergtransplantatie Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Rat Model of Photochemically-Induced Posterior Ischemic Optic Neuropathy

Rat model van fotochemisch geïnduceerde posterior ischemische optische neuropathie

Posterior Ischemic optic neuropathy (PION) is a sight-devastating disease in clinical practice. However, its pathogenesis and natural history ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Een Knorretje Model van Neonatale hypoxisch-ischemische encefalopathie

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

Demonstratie van de Rat ischemische Skin wondmodel

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy (rNAION)

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy rNAION

Het knaagdier Model van nonarteritic anterior ischemische optische neuropathie (rNAION)

Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) is a focal ischemic lesion of the optic nerve that affects 1/700 individuals throughout their ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrische Contractility meting van de muis mesenterische slagader met behulp van draad Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

Een efficiënte zeven methode te isoleren Intact Glomeruli van de nier van volwassen ratten

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...