Name: an intact pericardium ischemic rodent model
Uploaded: 2021-09-02T14:00:00
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Für diese Experimente wurden männliche und weibliche C57BL/6J-Mäuse im Alter zwischen 8 und 14 Wochen verwendet. Dieses Protokoll wurde vom Animal Care Committee der University of Calgary ethisch genehmigt und entspricht allen Tierpflegerichtlinien.
1. Vorbereitung und Operation der Maus
<ol><li>Sterilisieren Sie chirurgische Instrumente (über Perlensterilisator oder Autoklav).</li>
	<li>Wiegen Sie die Maus für das präoperative Gewicht und die analgetische Dosis.</li>
	<li>Legen Sie di...

<ol>
	<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141, 139 (2020).</li><li>Iismaa, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+regenerative+mechanisms+across+different+mammalian+tissues.">Comparative regenerative mechanisms across different mammalian tissues.</a> NPJ Regenerative Medicine. 3 (6), (2018).</li><li>Bayat, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+heart+failure+after+myocardial+infarction+in+mice.">Progressive heart failure after myocardial infarction in mice.</a> Basic Research in Cardiology. 97 (3), 206-213 (2002).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. 52, 2581 (2011).</li><li>De Villiers, C., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+myocardial+infarction:+comparing+permanent+ligation+and+ischaemia-reperfusion.">Mouse models of myocardial infarction: comparing permanent ligation and ischaemia-reperfusion.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 13 (11), (2020).</li><li>Borlaug, B. A., Reddy, Y. N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+pericardium+in+heart+failure:+Implications+for+pathophysiology+and+treatment.">The role of the pericardium in heart failure: Implications for pathophysiology and treatment.</a> JACC Heart Failure. 7 (7), 574-585 (2019).</li><li>Pfaller, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+the+pericardium+for+cardiac+biomechanics:+from+physiology+to+computational+modeling.">The importance of the pericardium for cardiac biomechanics: from physiology to computational modeling.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 18 (2), 503-529 (2019).</li><li>Deniset, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gata6(+)+Pericardial+Cavity+Macrophages+Relocate+to+the+Injured+Heart+and+Prevent+Cardiac+Fibrosis.">Gata6(+) Pericardial Cavity Macrophages Relocate to the Injured Heart and Prevent Cardiac Fibrosis.</a> Immunity. 51 (1), 131-140 (2019).</li><li>Weber, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+targeting+of+the+pleural+space+by+intercostal+approach.">Immune targeting of the pleural space by intercostal approach.</a> BMC Pulmonary Medicine. 15, 14 (2015).</li><li>Nakatani, T., Shinohara, H., Fukuo, Y., Morisawa, S., Matsuda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericardium+of+rodents:+pores+connect+the+pericardial+and+pleural+cavities.">Pericardium of rodents: pores connect the pericardial and pleural cavities.</a> The Anatomical Record. 220, 132-137 (1988).</li><li>Tyberg, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+pericardial+pressure+and+right+atrial+pressure:+an+intraoperative+study.">The relationship between pericardial pressure and right atrial pressure: an intraoperative study.</a> Circulation. 73, 428-432 (1986).</li><li>Hamilton, D. R., Sas, R., Semlacher, R. A., Kieser Prieur, T. M., Tyberg, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+left+and+right+pericardial+pressures+in+humans:+an+intraoperative+study.">The relationship between left and right pericardial pressures in humans: an intraoperative study.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 27, 346-350 (2011).</li><li>Park, D. S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pericardial+proteoglycan+4+(lubricin):+Implications+for+postcardiotomy+intrathoracic+adhesion+formation.">Human pericardial proteoglycan 4 (lubricin): Implications for postcardiotomy intrathoracic adhesion formation.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 156 (4), 1598-1608 (2018).</li></ol>

Die Induktion eines MI in einem geschlossenen Perikard bei Nagetieren ist einzigartig und kann potenziell bedeutende Anwendungen haben. Das Verfahren hängt stark von der Vertrautheit des Chirurgen mit dem Nagetiermodell und der Herzanatomie der Nagetiere ab. Der Erfolg hängt auch von der Pflege ab, die in drei kritischen Schritten angewendet wird: Interkostalmuskelschnitt und Rippenretraktion (Schritte 1.11-1.13), Entstehung des Infarkts (Schritt 1.17) und Genesung des Tieres (Schritte 1.22-1.24).
<p class="jove_co...

Bis heute gelten Herz-Kreislauf-Erkrankungen weltweit als die häufigste Todesursache, was zu einer erheblichen finanziellen Belastung und einer Verringerungder Lebensqualität der Patienten führt1. Die koronare Herzkrankheit (KHK) ist ein Subtyp der Herz-Kreislauf-Erkrankung und spielt eine wesentliche Rolle bei der Entwicklung des Myokardinfarkts (MI), der einen Hauptfaktor für die Mortalität darstellt. Definitionsgemäß resultiert MI aus einer irreversiblen Verletzung des Myokardgewebes aufgrund längerer Ischämie und Hypoxie. Dem Myokardgewebe fehlt die Regenerationsfähigkeit, so dass Verletzungen dauerhaft sind und zum Ersatz des Herzmuskels durch eine fibrotische Narbe führen, die zunächst schützend sein kann, aber letztendlich zu einem ungünstigen Herzumbau und schließlich zu einer Herzinsuffizienz beiträgt2.
Obwohl sich die Behandlung von Patienten mit KHK in den letzten Jahrzehnten dramatisch verbessert hat, sind viele Patienten weltweit von chronischer Herzinsuffizienz (CHF) infolge von Ischämie betroffen. Um dieser Epidemie vorzubeugen und sie zu bewältigen, ist es notwendig, die zugrunde liegenden Mechanismen besser zu verstehen und neue Therapieansätze zu entwickeln. Darüber hinaus zeigen die bisherigen Befunde die Grenzen der systemischen Therapie und die Notwendigkeit, präzise Alternativen zu entwickeln. Angesichts der Tatsache, dass die Untersuchung der molekularen Folgen von MI beim Menschen von der Fähigkeit beeinflusst wird, Zugang zu infarktiertem Gewebe zu erhalten, sind Tiermodelle, die die Eigenschaften und die Entwicklung von humanem MI und CHF im Zusammenhang mit CVD rekapitulieren, unerlässlich.
Da ideale Tiermodelle in Bezug auf strukturelle und funktionelle Merkmale einer menschlichen Störung sehr ähnlich sind, sollte die Ätiologie der Krankheit ihre Konzeption leiten. Bei der KHK handelt es sich um die chronische atherosklerotische Stenose der Koronararterien oder einen akuten thrombotischen Verschluss. Verschiedene Methoden wurden entwickelt und bei verschiedenen Arten von Labortieren angewendet, um eine Verengung oder Okklusion der Koronararterien zu induzieren. Solche Strategien können grob in zwei Gruppen eingeteilt werden: (1) mechanische Manipulation einer Koronararterie, um einen MI zu induzieren, und (2) Beschleunigung der Atherosklerose, um die Koronarverengung zu erleichtern, die zu einem MI führt. Die erste Strategie beinhaltet in der Regel entweder die Ligatur einer Koronararterie oder die Platzierung eines Stents innerhalb der Arterie. Der zweite Ansatz neigt dazu, die Ernährung des Tieres zu ändern, um fettreiche / cholesterinreiche Nahrung aufzunehmen. Zu den Einschränkungen dieses letzteren Ansatzes gehört die mangelnde Kontrolle über den Zeitpunkt und den Ort der Koronarverschlüsse.
Im Gegensatz dazu hat die chirurgische Induktion von MI oder Ischämie in einem Tiermodell mehrere Vorteile, wie z. B. Ort, präzises Timing und Ausmaß des koronaren Ereignisses, was zu reproduzierbaren Ergebnissen führt. Die am weitesten verbreitete Methode ist die chirurgische Ligatur der linken vorderen absteigenden Koronararterie (LAD). Solche Modelle rekapitulieren die menschlichen Reaktionen auf akute ischämische Verletzungen sowie die Progression aufCHF 3. Ursprünglich bei größeren Tieren entwickelt, ist die LAD-Chirurgie an Kleintieren wie Nagetieren mit Fortschritten in der Technologie praktikabler geworden4. Bei der Etablierung solcher Modelle wurden Mäuse aus verschiedenen Gründen bevorzugt, darunter ihre relative Verfügbarkeit, geringe Kosten für die Unterbringung und ihre Fähigkeit zur genetischen Manipulation.
Zeitgenössische chirurgische Modelle der ischämischen Herzkrankheit mit LAD-Verschluss erfordern, dass der Forscher das Perikard öffnet, um die Arterie5 vorübergehend oder dauerhaft zu ligieren. Solche Strategien führen zu einer Störung des Perikardraums, der im Wesentlichen eine mechanische und schmierende Funktion hat, um eine ordnungsgemäße Herzfunktion zu gewährleisten. Ein weiterer Nachteil der Öffnung des Herzbeutels ist der Verlust der nativen Herzbeutelflüssigkeit des Tieres mit seinen verschiedenen Zell- und Proteinbestandteilen 6,7. Als Reaktion darauf wurde von uns eine Methode entwickelt, um MI zu induzieren und gleichzeitig das Perikard intakt zu halten. Neben der Minimierung der Störung dieser homöostatischen Umgebung ermöglicht dieser Ansatz das Markieren und Verfolgen bestimmter Zellen nach dem Verursachen eines MI. Darüber hinaus stellt dieser Ansatz die myokardiale ischämische Schädigung im menschlichen Umfeld besser dar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Steri-350 Bead Sterilizer</td>
			<td>Inotech</td>
			<td>NC9449759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-949</td>
			<td>Falcon, 352340</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-952</td>
			<td>Falcon, 352350</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insyte-W Catheter Needle 24 G X 3/4&#34;</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine (10% povidone-iodine topical solution)</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>104826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNP Ophthalmic Ointment</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>17909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22625101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>SCR103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase XI</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C7657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - CV-11 taper needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>GL-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - PC-13 cutting needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>SL-1659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11009-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Mounting Medium</td>
			<td>Agilen</td>
			<td>CS70330-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 100%</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>MFCD00003568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon 8-0 Ethilon Suture - BV-130-4 taper needle</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Inc.</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber-Optic Light</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>2208502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresbrite&#174; YG Carboxylate Microspheres 1.00 &#181;m</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>15702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geiger Thermal Cautery Unit</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501293</td>
			<td>Model 150-ST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>H4272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane Vaporizer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-0951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane USP, 250 mL</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Fixator Retraction System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18200-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550D- 40 MHz probe</td>
			<td>Fujifilm- Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 Tubing</td>
			<td>Braintree Scienctific, Inc.</td>
			<td>PE10 50 FT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 14184-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ-1B Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ1-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VentElite Small Animal Ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>55-7040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetergesic (10 mL, 0.3mg/mL buprenorphine))</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>124918</td>
			<td>controlled drug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 Software</td>
			<td>Fujifilm-Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intact pericardium ischemic rodent model

Dieses Protokoll hat gezeigt, dass das Perikard und sein Inhalt eine wesentliche antifibrotische Rolle im ischämischen Nagetiermodell spielen (koronare Ligatur zur Induktion von Myokardverletzungen). Die Mehrzahl der präklinischen Myokardinfarktmodelle erfordert die Störung der Perikardintegrität mit Verlust des homöostatischen zellulären Milieus. In jüngster Zeit wurde jedoch von uns eine Methode entwickelt, um einen Myokardinfarkt zu induzieren, der den Perikardschaden minimiert und die im Herzen ansässige Immunzellpopulation erhält. Bei Mäusen mit intaktem Perikardraum nach koronarer Ligatur wurde eine verbesserte kardiale Funktionserholung beobachtet. Diese Methode bietet die Möglichkeit, Entzündungsreaktionen im Perikardraum nach einem Myokardinfarkt zu untersuchen. Die Weiterentwicklung der Markierungstechniken kann mit diesem Modell kombiniert werden, um das Schicksal und die Funktion von perikardialen Immunzellen bei der Regulierung der Entzündungsmechanismen zu verstehen, die den Umbau im Herzen, einschließlich der Fibrose, vorantreiben.

Dieses modifizierte Koronarligaturmodell wurde optimiert, um Reproduzierbarkeit und Überleben der Tiere zu erreichen. Aufgrund der erheblichen Verletzung, die im Herzen induziert wird, sind jedoch einige erwartete intraoperative und postoperative Mortalitäten mit dem Eingriff verbunden. Die Standardsterblichkeit ist typischerweise bei Männern höher (~ 25-35%) als bei Frauen (~ 10-15%).
Die erfolgreiche Induktion eines MI mit der modifizierten koronaren Ligatur sollte durch Veränderungen d...

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An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte zur Induktion eines Myokardinfarkts bei Mäusen unter Beibehaltung des Perikards und seines Inhalts.

Ein intaktes ischämisches Nagetiermodell des Perikards

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

Diese Methode wird es uns ermöglichen, die Rolle der Perikardhöhle, die das Herz und seinen Inhalt umgibt, bei der Herzreparatur nach einem Myokardinfarkt zu bewerten. Im Vergleich zu herkömmlichen Koronarligaturmethoden zur Modellierung von Myokardinfarkt erhält unsere Methode eine intakte Perikardhöhle, die die Bestimmung von Inhaltsstoffen ermöglicht und deren Rolle nach einer ischämischen Herzverletzung verfolgt. Das Verständnis des Beitrags der Perikardhöhle und der Reaktion des Herzens auf Verletzungen wird wichtige Einblicke in therapeutische Strategien liefern, die auf das Perikard abzielen, um die Herzheilung zu verbessern.Um mit der Postanästhesie zu beginnen, halten Sie die Pfoten der Maus zurück und positionieren Sie sie auf dem OP-Tisch. Nachdem Sie die Maus auf die Operation vorbereitet haben, wie im Manuskript beschrieben, belüften Sie die Maus mit 2 % Isofluran und 100 % Sauerstoff als Trägergas mit einem handelsüblichen Beatmungsgerät. Stellen Sie dann eine Rate von 110 Atemzügen pro Minute, ein Tidalvolumen von 250 Mikrolitern und einen positiven exspiratorischen Enddruck von vier Millimetern Quecksilbersäule ein.Rollen Sie die Maus um 30% auf der rechten Seite, um die linke Seite des Brustkorbs für die Operation zu positionieren. Dann machen Sie einen zwei bis drei Zentimeter großen seitlichen Schnitt in die Brusthaut, um die Brustmuskeln auf der linken Seite sichtbar zu machen. Machen Sie einen Schnitt von einem Zentimeter von der Mittellinie nach außen, um den Pectoralis major und minor zu schneiden.Vermeiden Sie übermäßige Blutungen während der Kauterisation blutender Gefäße. Visualisieren Sie die Interkostalmuskulatur zwischen der dritten und vierten Rippe. Machen Sie einen zwei Zentimeter langen Schnitt in den linken Interkostalmuskel, um Luft in die Brusthöhle einzuführen und das Herz und die Lunge von der Inzision abfallen zu lassen.Um die Interkostale ohne Blutung zu schneiden, stoppen Sie vorübergehend das Beatmungsgerät und erweitern Sie die Öffnung mit einem Kauterisationsgerät. Ziehen Sie die Rippen mit Retraktoren zurück, um das Herz freizulegen. Beobachten Sie dann den Perikard und das darunter liegende Herz unter einem Stereomikroskop.Legen Sie die Pinzette vorsichtig auf die Perikardoberfläche, um den Perikard und die darunter liegende Herzbewegung zu reduzieren. Visuelle Markierung der LAD-Koronararterie, indem sie ihre Entstehung unter dem linken Anhängsel verfolgt. Führen Sie mit dem Mikronadeltreiber eine geeignete Naht durch den Perikard unter dem LAD.Beobachten Sie die Naht, die auf der anderen Seite des LAD und des Perikards entsteht. Um das permanente Ligaturmodell darzustellen, binden Sie die Naht, um den Blutfluss durch die Koronararterie einzuschränken und das Blanchieren des vorderen Teils des linken Ventrikels sichtbar zu machen. Schneiden Sie dann die überschüssige Naht mit Hilfe einer Schere ab.Erhaltungsinjektionen von Analgetika subkutan alle 12 Stunden für 72 Stunden nach der Operation. Nachdem Sie das Isofluran auf 1% reduziert haben, schalten Sie das Isofluran aus, während die Belüftung mit Sauerstoff aufrechterhalten wird. Sobald das Tier Anzeichen einer Atmung zeigt, entfernen Sie den 23-Gauge-Trachealschlauch aus dem Maul und legen Sie die Maus in einen Aufwachkäfig, um die Wiederaufnahme der Atmung zu überwachen.Warten Sie, bis sich die Maus im Käfig erholt hat, wobei ein Teil des Käfigs auf ein Wärmekissen gelegt wird, um eine externe Wärmequelle bereitzustellen. Überwachen Sie den Gesundheitszustand der Maus täglich für sieben Tage, indem Sie die Schnitte und das Unbehagen der Tiere auswerten. Falls erforderlich, Verabreichen Sie Antibiotika für eine erfolgreiche Genesung nach der invasiven Operation.Nachdem Sie die Maus unter Vollnarkose mit Sauerstoff gehalten haben, legen Sie die Maus in Rückenlage auf eine beheizte Bühnenplattform und befestigen Sie die Pfoten an den EKG-Elektroden. Dann scheuern Sie die Brust. Erfassen Sie EKG-Bilder mit Schallkopfsonde und Kontaktgel und analysieren Sie sie mit der entsprechenden Software.Schalten Sie nach der nichtinvasiven EKG-Beurteilung das Isofluran aus und bringen Sie die Maus in den Käfig zurück. Fixieren Sie das Herz in 10% Formalin für mindestens 24 Stunden. Schneiden Sie die Probe mit einer geraden Rasierklinge durch den rechten Ventrikel, das interventrikuläre Septum und den linken Ventrikel und stellen Sie sicher, dass der Schnitt durch die Mitte der Infarktzone verläuft.Und dann bettet Paraffin die Gewebeproben ein. Die geschnittenen Abschnitte werden dann in eine Montagekassette gelegt, um sie weiter in Paraffin einzubetten und anschließend in fünf Mikrometer dicke Abschnitte zu zerlegen. Nach dem Platzieren der Gewebeschnitte auf Objektträgern wird mit Toluol entparaffiniert und Alkohol mit entionisiertem Wasser gewaschen.Dann rehydrieren. Als nächstes färben Sie den Abschnitt mit 0,1% Siriusrot in Pikrinsäure für zwei Stunden bei Raumtemperatur. Waschen Sie den Abschnitt drei Minuten lang mit 0,5% Essigsäure, gefolgt von einer Minute lang mit 70% Ethanol.Entwässern Sie den Abschnitt in umgekehrter Reihenfolge der Wäschen mit steigenden und abgestuften Ethanolkonzentrationen vor der Montage für die mikroskopische Auswertung. Die erfolgreiche Myokardinfarktinduktion mit der modifizierten Koronarligatur wurde durch die Untersuchung der funktionellen Parameter und strukturellen Merkmale des Herzens beurteilt. In Bezug auf die Funktion wurde die verminderte Ejektionsfraktion des linken Ventrikels innerhalb von drei bis vier Wochen nach dem Myokardinfarkt durch Echokardiographie beurteilt.Die histologische Färbung zeigte, dass die funktionellen Veränderungen mit einer signifikanten Fibrose der linken Ventrikelwand einhergingen, die durch die Quantifizierung der picrosiriusrot gefärbten Fibrose in den Querschnitten des Herzens vier Wochen nach dem Infarkt mit den gestörten oder intakten perikardialen Koronarligaturmodellen bestätigt wurden. Die Kombination der Fluoreszenzperlenmarkierungsmethode mit der Durchflusszytometrie lieferte einen Ansatz, um die residenten Gata6-positiven Perikardmakrophagen zu verfolgen. Wichtig ist, dass wenig bis gar keine Markierung im Herzen oder Blut nachgewiesen wurde.Nach einem Myokardinfarkt kann die Verlagerung der Zellen durch Durchflusszytometrie und Bildgebung verfolgt werden. Die Quantifizierung der fluoreszierenden perlenmarkierten perikardialen myeloischen Zellen mit oder ohne Myokardinfarkt wird gezeigt. Es ist darauf zu achten, dass das dünne Perikard während des Eingriffs nicht versehentlich gestört oder gerissen wird.Diese Methode kann mit einer Zell- oder Effektorblockade kombiniert werden, die es ermöglicht, den Einfluss der Perikardkomponente auf die Heilungsreaktion im infarktierten Herzen zu verfolgen und zu bestimmen. Wir haben festgestellt, dass die Perikardhöhle das Herz nach einer Verletzung schützt, die teilweise durch residente Perikardmakrophagen vermittelt wird. Dieser Ansatz eröffnet ein neues Forschungsgebiet für Herz-Kreislauf-Erkrankungen.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Forschung

Medizin

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

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Ein In vivo Nager-Modell der Kontraktion-induzierte Verletzung und nicht-invasive Überwachung von Recovery

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