Name: an intact pericardium ischemic rodent model
Uploaded: 2021-09-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model at JoVE.com

עכברי C57BL/6J זכרים ונקבות בגילאי 8-14 שבועות שימשו לניסויים אלה. פרוטוקול זה קיבל אישור אתי מוועדת הטיפול בבעלי חיים באוניברסיטת קלגרי ועוקב אחר כל ההנחיות לטיפול בבעלי חיים.
1. הכנת עכבר וניתוח
<ol><li>לעקר כלי ניתוח (באמצעות מעקר חרוזים או אוטוקלב).</li>
	<li>שקול עכבר למשקל טרום נית?...

<ol>
	<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141, 139 (2020).</li><li>Iismaa, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+regenerative+mechanisms+across+different+mammalian+tissues.">Comparative regenerative mechanisms across different mammalian tissues.</a> NPJ Regenerative Medicine. 3 (6), (2018).</li><li>Bayat, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+heart+failure+after+myocardial+infarction+in+mice.">Progressive heart failure after myocardial infarction in mice.</a> Basic Research in Cardiology. 97 (3), 206-213 (2002).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. 52, 2581 (2011).</li><li>De Villiers, C., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+myocardial+infarction:+comparing+permanent+ligation+and+ischaemia-reperfusion.">Mouse models of myocardial infarction: comparing permanent ligation and ischaemia-reperfusion.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 13 (11), (2020).</li><li>Borlaug, B. A., Reddy, Y. N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+pericardium+in+heart+failure:+Implications+for+pathophysiology+and+treatment.">The role of the pericardium in heart failure: Implications for pathophysiology and treatment.</a> JACC Heart Failure. 7 (7), 574-585 (2019).</li><li>Pfaller, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+the+pericardium+for+cardiac+biomechanics:+from+physiology+to+computational+modeling.">The importance of the pericardium for cardiac biomechanics: from physiology to computational modeling.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 18 (2), 503-529 (2019).</li><li>Deniset, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gata6(+)+Pericardial+Cavity+Macrophages+Relocate+to+the+Injured+Heart+and+Prevent+Cardiac+Fibrosis.">Gata6(+) Pericardial Cavity Macrophages Relocate to the Injured Heart and Prevent Cardiac Fibrosis.</a> Immunity. 51 (1), 131-140 (2019).</li><li>Weber, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+targeting+of+the+pleural+space+by+intercostal+approach.">Immune targeting of the pleural space by intercostal approach.</a> BMC Pulmonary Medicine. 15, 14 (2015).</li><li>Nakatani, T., Shinohara, H., Fukuo, Y., Morisawa, S., Matsuda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericardium+of+rodents:+pores+connect+the+pericardial+and+pleural+cavities.">Pericardium of rodents: pores connect the pericardial and pleural cavities.</a> The Anatomical Record. 220, 132-137 (1988).</li><li>Tyberg, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+pericardial+pressure+and+right+atrial+pressure:+an+intraoperative+study.">The relationship between pericardial pressure and right atrial pressure: an intraoperative study.</a> Circulation. 73, 428-432 (1986).</li><li>Hamilton, D. R., Sas, R., Semlacher, R. A., Kieser Prieur, T. M., Tyberg, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+left+and+right+pericardial+pressures+in+humans:+an+intraoperative+study.">The relationship between left and right pericardial pressures in humans: an intraoperative study.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 27, 346-350 (2011).</li><li>Park, D. S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pericardial+proteoglycan+4+(lubricin):+Implications+for+postcardiotomy+intrathoracic+adhesion+formation.">Human pericardial proteoglycan 4 (lubricin): Implications for postcardiotomy intrathoracic adhesion formation.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 156 (4), 1598-1608 (2018).</li></ol>

גרימת MI בקרום לב סגור במכרסמים היא ייחודית ויכולה להיות בעלת יישומים משמעותיים פוטנציאליים. ההליך מסתמך במידה רבה על היכרותו של המנתח עם דגם המכרסם ועם אנטומיית הלב של המכרסמים. ההצלחה תלויה גם בטיפול שניתן במהלך שלושה שלבים קריטיים: חתך שריר אינטרקוסטלי ונסיגת צלעות (שלבים 1.11-1.13), יצירת א...

עד היום, מחלות לב וכלי דם (CVD) מוכרות כגורם המוות המוביל בעולם, וכתוצאה מכך נטל כלכלי משמעותי וירידה באיכות החיים של המטופלים1. מחלת עורקים כליליים (CAD) היא תת-סוג של CVD וממלאת תפקיד חיוני בהתפתחות אוטם שריר הלב (MI), התורם העיקרי לתמותה. בהגדרה, MI נובע מפגיעה בלתי הפיכה ברקמת שריר הלב עקב תנאים ממושכים של איסכמיה והיפוקסיה. רקמת שריר הלב חסרה יכולת התחדשות, ולכן הפציעות הן קבועות וגורמות להחלפת שריר הלב בצלקת פיברוטית שיכולה להגן בתחילה אך בסופו של דבר תורמת לשיפוץ לב שלילי ובסופו של דבר לאי ספיקת לב2.
למרות שהטיפול בחולים עם CAD השתפר באופן דרמטי בעשורים האחרונים, אי ספיקת לב כרונית (CHF) משנית לאיסכמיה משפיעה על חולים רבים ברחבי העולם. כדי למנוע ולנהל מגיפה זו, יש צורך להבין את המנגנונים הבסיסיים באופן נרחב יותר ולפתח גישות טיפוליות חדשות. יתר על כן, ממצאי העבר מדגישים את מגבלות הטיפול המערכתי ואת הצורך בפיתוח חלופות מדויקות. בהתחשב בכך שחקירת ההמשך המולקולרי של MI בבני אדם מושפעת מהיכולת לגשת לרקמות אוטמות, מודלים של בעלי חיים המסכמים את המאפיינים וההתפתחות של MI אנושי ו- CHF הקשורים ל- CVD הם הכרחיים.
מכיוון שמודלים אידיאליים של בעלי חיים דומים מאוד להפרעה אנושית עבור מאפיינים מבניים ותפקודיים, אטיולוגיה של מחלות צריכה להנחות את תפיסתם. ב- CAD, זוהי היצרות טרשת עורקים כרונית של עורקים כליליים או חסימה טרומבוטית חריפה. שיטות שונות פותחו ויושמו במינים שונים של חיות מעבדה כדי לגרום להיצרות או חסימה של עורקים כליליים. ניתן לסווג אסטרטגיות כאלה באופן נרחב לשתי קבוצות: (1) מניפולציה מכנית של עורק כלילי כדי לגרום ל- MI ו- (2) זירוז טרשת עורקים כדי להקל על היצרות כלילית המובילה ל- MI. האסטרטגיה הראשונה כוללת בדרך כלל קשירת עורק כלילי או מיקום של סטנט בתוך העורק. הגישה השנייה נוטה להסתמך על שינוי התזונה של בעל החיים כך שתכלול מזון עתיר שומן/כולסטרול. חלק מהמגבלות של גישה אחרונה זו כוללות את חוסר השליטה על העיתוי והאתר של חסימות כליליות.
לעומת זאת, לאינדוקציה כירורגית של MI או איסכמיה במודל של בעלי חיים יש מספר יתרונות, כגון מיקום, תזמון מדויק והיקף האירוע הכלילי, מה שמוביל לתוצאות הניתנות לשחזור יותר. השיטה הנפוצה ביותר היא קשירה כירורגית של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי (LAD). מודלים אלה משחזרים תגובות אנושיות לפגיעה איסכמית חריפה, כמו גם את ההתקדמות ל- CHF3. ניתוח LAD בבעלי חיים קטנים כמו מכרסמים, שפותח בתחילה בבעלי חיים גדולים יותר, הפך אפשרי יותר עם התקדמות הטכנולוגיה4. בהקמת מודלים כאלה, עכברים הועדפו מסיבות שונות, כולל הזמינות היחסית שלהם, הוצאות נמוכות בדיור, ויכולתם למניפולציה גנטית.
מודלים כירורגיים עכשוויים של מחלת לב איסכמית באמצעות חסימת LAD מחייבים את החוקר לפתוח את קרום הלב כדי ללקות את העורק5 באופן זמני או קבוע. אסטרטגיות כאלה גורמות לשיבוש החלל הקרדיותי, הממלא פונקציה מכנית ושימון במהותה כדי להבטיח תפקוד לב תקין. חסרון נוסף בפתיחת קרום הלב הוא אובדן הנוזל הפריקרדיאלי הטבעי של החיה על מרכיביו התאיים והחלבונים השונים 6,7. בתגובה, פותחה שיטה להשראת MI תוך שמירה על קרום הלב שלם. בנוסף למזעור ההפרעה לסביבה הומאוסטטית זו, גישה זו מאפשרת תיוג ומעקב אחר תאים ספציפיים לאחר גרימת MI. בנוסף, גישה זו מייצגת טוב יותר פגיעה איסכמית שריר הלב בסביבה האנושית.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Steri-350 Bead Sterilizer</td>
			<td>Inotech</td>
			<td>NC9449759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-949</td>
			<td>Falcon, 352340</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-952</td>
			<td>Falcon, 352350</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insyte-W Catheter Needle 24 G X 3/4&#34;</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine (10% povidone-iodine topical solution)</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>104826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNP Ophthalmic Ointment</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>17909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22625101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>SCR103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase XI</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C7657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - CV-11 taper needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>GL-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - PC-13 cutting needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>SL-1659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11009-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Mounting Medium</td>
			<td>Agilen</td>
			<td>CS70330-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 100%</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>MFCD00003568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon 8-0 Ethilon Suture - BV-130-4 taper needle</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Inc.</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber-Optic Light</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>2208502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresbrite&#174; YG Carboxylate Microspheres 1.00 &#181;m</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>15702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geiger Thermal Cautery Unit</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501293</td>
			<td>Model 150-ST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>H4272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane Vaporizer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-0951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane USP, 250 mL</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Fixator Retraction System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18200-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550D- 40 MHz probe</td>
			<td>Fujifilm- Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 Tubing</td>
			<td>Braintree Scienctific, Inc.</td>
			<td>PE10 50 FT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 14184-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ-1B Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ1-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VentElite Small Animal Ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>55-7040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetergesic (10 mL, 0.3mg/mL buprenorphine))</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>124918</td>
			<td>controlled drug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 Software</td>
			<td>Fujifilm-Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intact pericardium ischemic rodent model

פרוטוקול זה הראה כי קרום הלב ותכולתו ממלאים תפקיד אנטי-פיברוטי חיוני במודל המכרסם האיסכמי (קשירה כלילית לגרימת פגיעה בשריר הלב). רוב המודלים הפרה-קליניים של אוטם שריר הלב דורשים הפרעה של שלמות קרום הלב עם אובדן הסביבה התאית ההומיאוסטטית. עם זאת, לאחרונה פותחה על ידינו מתודולוגיה כדי לגרום לאוטם שריר הלב, אשר ממזער נזק קרום הלב ושומר על אוכלוסיית תאי החיסון של הלב. נצפתה התאוששות תפקודית לבבית משופרת בעכברים עם חלל קרום הלב שלם לאחר קשירה כלילית. שיטה זו מספקת הזדמנות לחקור תגובות דלקתיות בחלל קרום הלב לאחר אוטם שריר הלב. פיתוח נוסף של טכניקות התיוג יכול להיות משולב עם מודל זה כדי להבין את גורלם ותפקודם של תאי מערכת החיסון קרום הלב בוויסות המנגנונים הדלקתיים המניעים שיפוץ בלב, כולל פיברוזיס.

מודל קשירה כלילית שונה זה עבר אופטימיזציה כדי להשיג יכולת שכפול והישרדות בעלי חיים. עם זאת, בשל הפגיעה המשמעותית הנגרמת בלב, חלק מהתמותה התוך-ניתוחית והפוסט-ניתוחית הצפויה קשורה להליך. התמותה הסטנדרטית בדרך כלל גבוהה יותר אצל זכרים (~25-35%) מאשר אצל נקבות (~ 10-15%).
אינדוקציה מוצל...

Watch this Scientific Journal Video about An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model at JoVE.com

An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

פרוטוקול זה מתווה את השלבים לגרימת אוטם שריר הלב בעכברים תוך שמירה על קרום הלב ותכולתו.

מודל מכרסם איסכמי שלם של קרום הלב

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

שיטה זו תאפשר לנו להעריך את תפקידו של חלל קרום הלב המקיף את הלב ותכולתו בתיקון לב לאחר אוטם שריר הלב. בהשוואה לשיטות קשירה כליליות קונבנציונליות למידול אוטם שריר הלב, השיטה שלנו שומרת על חלל קרום הלב שלם, המאפשר קביעת תוכן ומעקב אחר תפקידיהם לאחר פגיעה איסכמית לבבית. הבנת התרומה של חלל קרום הלב ותגובת הפציעה של הלב תספק תובנות חשובות לגבי אסטרטגיות טיפוליות המכוונות אל קרום הלב כדי לשפר את ריפוי הלב.כדי להתחיל עם הרדמה, לרסן את כפות העכבר ולמקם אותו על שולחן הניתוחים. לאחר הכנת העכבר לניתוח כמתואר בכתב היד, אווררו את העכבר ב-2% איזופלוראן וב-100% חמצן כגז נשא באמצעות מכונת הנשמה מסחרית. לאחר מכן קבע קצב של 110 נשימות לדקה, נפח גאות של 250 מיקרוליטרים, ולחץ פקיעה חיובי של ארבעה מילימטרים של כספית.גלגלו את העכבר 30% על צדו הימני כדי למקם את צדו השמאלי של החזה לניתוח. לאחר מכן בצע חתך רוחבי של שניים עד שלושה סנטימטרים בעור החזה כדי לדמיין את שרירי החזה בצד שמאל. בצע חתך של סנטימטר אחד מקו האמצע כלפי חוץ לחיתוך החזה מז'ור ומינור.הימנע דימום מוגזם לאורך צריבה של כלי דימום. דמיינו את השרירים הבין-קוסטליים בין הצלעות השלישית והרביעית. בצע חתך של שני סנטימטרים בשריר האינטרקוסטלי השמאלי כדי להכניס אוויר לחלל החזה ולאפשר ללב ולריאות ליפול מהחתך.כדי לחדור את intercostal ללא דימום, לעצור באופן זמני את מכונת ההנשמה ולהרחיב את הפתח באמצעות מכשיר cautery. באמצעות retractors, לסגת את הצלעות כדי לחשוף את הלב. לאחר מכן התבונן בקרום הלב ובלב שמתחתיו תחת מיקרוסקופ סטריאו.הניחו בעדינות את המלקחיים על משטח קרום הלב כדי להפחית את קרום הלב ואת תנועת הלב הבסיסית. ציון דרך חזותית של העורק הכלילי LAD על ידי התחקות אחר הופעתו מתחת לתוספת השמאלית. באמצעות דרייבר microneedle, להנחות תפר מתאים דרך קרום הלב תחת LAD.שימו לב לתפר המגיח בצד השני של ה- LAD וקרום הלב. המייצגים את מודל הקשירה הקבועה, קושרים את התפר כדי להגביל את זרימת הדם דרך העורק הכלילי, מה שהופך את ההבלגה של החלק הקדמי של החדר השמאלי לגלויה. ואז לקצץ את התפר עודף בעזרת מספריים.לספק זריקות תחזוקה של משכך כאבים תת עורית כל 12 שעות במשך 72 שעות לאחר הניתוח. לאחר הפחתת האיזופלוראן ל-1% מכבים את האיזופלוראן תוך שמירה על אוורור עם חמצן. ברגע שהחיה מראה סימני נשימה, הסר את צינור קנה הנשימה בן 23 המדים מהפה והנח את העכבר בכלוב התאוששות כדי לפקח על חידוש הנשימה.אפשרו לעכבר להתאושש בכלוב כאשר חלק מהכלוב מונח על כרית חימום כדי לספק מקור חום חיצוני. עקוב אחר מצב הבריאות של העכבר מדי יום במשך שבעה ימים על ידי הערכת החתכים ואי הנוחות של בעלי החיים. במידת הצורך, לתת אנטיביוטיקה להחלמה מוצלחת לאחר הניתוח הפולשני.לאחר שמירה על העכבר תחת הרדמה כללית עם חמצן, מניחים את העכבר במצב שכיבה על פלטפורמת במה מחוממת ומחברים את הכפות למוליכי האק"ג. ואז לשפשף את החזה. רכוש תמונות א.ק.ג. באמצעות בדיקה מתמר וג'ל מגע ונתח באמצעות התוכנה המתאימה.לאחר הערכת א.ק.ג. לא פולשנית, כבו את האיזופלורן והחזירו את העכבר לכלוב. יש לקבע את הלב ב-10% פורמלין למשך 24 שעות לפחות. חותכים את הדגימה באמצעות סכין גילוח ישר דרך החדר הימני, המחיצה הבין-חדרית והחדר השמאלי, כדי להבטיח שהחתך יעבור דרך מרכז אזור האוטם.ואז פרפין להטביע את דגימות הרקמה. לאחר מכן מניחים את החלקים החתוכים בקלטת הרכבה להטמעת פרפין נוספת ולחתכים הבאים למקטעים בעובי חמישה מיקרומטרים. לאחר מיקום של מקטעי רקמות על מגלשות, deparaffinize באמצעות טולואן ואלכוהול מדורג לשטוף עם מים deionized.ואז לייבש מחדש. לאחר מכן, מכתימים את הקטע ב-0.1% סיריוס אדום בחומצה פיקרית למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לשטוף את החלק עם 0.5% חומצה אצטית במשך שלוש דקות ולאחר מכן לשטוף עם 70% אתנול במשך דקה אחת.יש לייבש את החלק באמצעות סדר הפוך של שטיפות עם ריכוזי אתנול עולים ומדורגים לפני העלייה לצורך הערכה מיקרוסקופית. השראת אוטם שריר הלב המוצלחת עם הקשירה הכלילית המתוקנת הוערכה על ידי בחינת הפרמטרים התפקודיים והתכונות המבניות של הלב. לצורך תפקוד, ירידה בשבר פליטת החדר השמאלי הוערכה על ידי אקוקרדיוגרפיה תוך שלושה עד ארבעה שבועות של אוטם לאחר שריר הלב.הכתמים ההיסטולוגיים הראו כי השינויים התפקודיים לוו בפיברוזיס משמעותי של דופן החדר השמאלי, אשר אושרו עוד יותר על ידי כימות של פיברוזיס מוכתם אדום picrosirius בחתכי הלב בארבעה שבועות לאחר אוטם עם מודלים קשירה כלילית קרום הלב משובש או שלם. שילוב שיטת תיוג החרוזים הפלואורסצנטיים עם ניתוח ציטומטריה של זרימה סיפק גישה למעקב אחר מקרופאגים פריקרדיאליים חיוביים של Gata6. חשוב לציין כי מעט מאוד תיוג זוהה בלב או בדם.לאחר אוטם שריר הלב, ניתן לעקוב אחר מיקום התאים על ידי ציטומטריה של זרימה והדמיה. כימות של חרוז פלואורסצנטי שכותרתו תאים מיאלואידים קרום הלב עם או בלי אוטם שריר הלב מוצג. יש צורך בזהירות כדי למנוע הפרעה או קרע בשוגג של קרום הלב הדק במהלך ההליך.שיטה זו יכולה להיות משולבת עם שושלת מעקב אחר מצור תאי או אפקטור, אשר יאפשר מעקב וקביעת ההשפעה של רכיב קרום הלב על תגובת הריפוי בלב האוטם. זיהינו את חלל קרום הלב מגן על הלב לאחר פציעה, אשר מתווכת בחלקה על ידי מקרופאגים קרום הלב המקומי. גישה זו פותחת תחום מחקר חדש למחלות לב וכלי דם.

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Gene Transfer לאי ספיקת לב איסכמי במודל פרה

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

In vivo מכרסמים דגם של פגיעה הנגרמת על התכווצות ולא פולשנית לניטור של התאוששות

Muscle strains are one of the most  common complaints treated by physicians. A muscle injury is typically diagnosed from the patient history and  physical ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

טכניקה פשוטה לייצור דגם פצע איסכמי

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

באמצעות PCR כמוני בזמן אמת לקביעת engraftment תא התורם במודל תחרותי Murine מח עצם השתלה

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Rat Model of Photochemically-Induced Posterior Ischemic Optic Neuropathy

מודל עכברוש של אחורי איסכמי אופטי נוירופתיה המושרית photochemically

Posterior Ischemic optic neuropathy (PION) is a sight-devastating disease in clinical practice. However, its pathogenesis and natural history ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

דגם חזרזיר של ילודים חוסר חמצן-איסכמי אנצפלופתיה

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

הפגנה של דגם פצע עור העכברוש איסכמי

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy (rNAION)

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy rNAION

המודל המכרסם של Nonarteritic Anterior Ischemic Optic נוירופתיה (rNAION)

Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) is a focal ischemic lesion of the optic nerve that affects 1/700 individuals throughout their ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

דרך יעילה Sieving כדי לבודד Glomeruli ללא פגע מן החולדה למבוגרים כליות

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...