Name: an intact pericardium ischemic rodent model
Uploaded: 2021-09-02T14:00:00
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Per questi esperimenti sono stati utilizzati topi maschi e femmine C57BL / 6J tra 8-14 settimane di età. Questo protocollo ha ricevuto l'approvazione etica dal Comitato per la cura degli animali dell'Università di Calgary e segue tutte le linee guida sulla cura degli animali.
1. Preparazione e chirurgia del topo
<ol><li>Sterilizzare gli strumenti chirurgici (tramite sterilizzatore di perline o autoclave).</li>
	<li>Pesare il topo per il peso prechirurgico e la dose analgesica.</li>
	<li>Po...

<ol>
	<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141, 139 (2020).</li><li>Iismaa, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+regenerative+mechanisms+across+different+mammalian+tissues.">Comparative regenerative mechanisms across different mammalian tissues.</a> NPJ Regenerative Medicine. 3 (6), (2018).</li><li>Bayat, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+heart+failure+after+myocardial+infarction+in+mice.">Progressive heart failure after myocardial infarction in mice.</a> Basic Research in Cardiology. 97 (3), 206-213 (2002).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. 52, 2581 (2011).</li><li>De Villiers, C., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+myocardial+infarction:+comparing+permanent+ligation+and+ischaemia-reperfusion.">Mouse models of myocardial infarction: comparing permanent ligation and ischaemia-reperfusion.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 13 (11), (2020).</li><li>Borlaug, B. A., Reddy, Y. N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+pericardium+in+heart+failure:+Implications+for+pathophysiology+and+treatment.">The role of the pericardium in heart failure: Implications for pathophysiology and treatment.</a> JACC Heart Failure. 7 (7), 574-585 (2019).</li><li>Pfaller, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+the+pericardium+for+cardiac+biomechanics:+from+physiology+to+computational+modeling.">The importance of the pericardium for cardiac biomechanics: from physiology to computational modeling.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 18 (2), 503-529 (2019).</li><li>Deniset, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gata6(+)+Pericardial+Cavity+Macrophages+Relocate+to+the+Injured+Heart+and+Prevent+Cardiac+Fibrosis.">Gata6(+) Pericardial Cavity Macrophages Relocate to the Injured Heart and Prevent Cardiac Fibrosis.</a> Immunity. 51 (1), 131-140 (2019).</li><li>Weber, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+targeting+of+the+pleural+space+by+intercostal+approach.">Immune targeting of the pleural space by intercostal approach.</a> BMC Pulmonary Medicine. 15, 14 (2015).</li><li>Nakatani, T., Shinohara, H., Fukuo, Y., Morisawa, S., Matsuda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericardium+of+rodents:+pores+connect+the+pericardial+and+pleural+cavities.">Pericardium of rodents: pores connect the pericardial and pleural cavities.</a> The Anatomical Record. 220, 132-137 (1988).</li><li>Tyberg, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+pericardial+pressure+and+right+atrial+pressure:+an+intraoperative+study.">The relationship between pericardial pressure and right atrial pressure: an intraoperative study.</a> Circulation. 73, 428-432 (1986).</li><li>Hamilton, D. R., Sas, R., Semlacher, R. A., Kieser Prieur, T. M., Tyberg, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+left+and+right+pericardial+pressures+in+humans:+an+intraoperative+study.">The relationship between left and right pericardial pressures in humans: an intraoperative study.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 27, 346-350 (2011).</li><li>Park, D. S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pericardial+proteoglycan+4+(lubricin):+Implications+for+postcardiotomy+intrathoracic+adhesion+formation.">Human pericardial proteoglycan 4 (lubricin): Implications for postcardiotomy intrathoracic adhesion formation.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 156 (4), 1598-1608 (2018).</li></ol>

L'induzione di un infarto miocardico in un pericardio chiuso nei roditori è unica e può avere applicazioni potenzialmente significative. La procedura si basa fortemente sulla familiarità del chirurgo con il modello di roditore e l'anatomia cardiaca del roditore. Il successo dipende anche dalla cura prestata durante tre fasi critiche: incisione muscolare intercostale e retrazione delle costole (fasi 1.11-1.13), creazione dell'infarto (fase 1.17) e recupero degli animali (fasi 1.22-1.24).
La ...

Ad oggi, le malattie cardiovascolari (CVD) sono riconosciute come la principale causa di morte a livello globale, con conseguente significativo onere finanziario e riduzione della qualità della vita dei pazienti1. La malattia coronarica (CAD) è un sottotipo di CVD e svolge un ruolo essenziale nello sviluppo dell'infarto miocardico (IM), che è uno dei principali contributori alla mortalità. Per definizione, l'infarto miocardico deriva da lesioni irreversibili al tessuto miocardico dovute a condizioni prolungate di ischemia e ipossia. Il tessuto miocardico manca di capacità di rigenerazione, quindi le lesioni sono permanenti e comportano la sostituzione del muscolo cardiaco con una cicatrice fibrotica che può essere inizialmente protettiva, ma alla fine contribuisce al rimodellamento cardiaco avverso e all'eventuale insufficienza cardiaca2.
Sebbene la gestione dei pazienti con CAD sia notevolmente migliorata negli ultimi decenni, l'insufficienza cardiaca cronica (CHF) secondaria a ischemia colpisce molti pazienti in tutto il mondo. Per prevenire e gestire questa epidemia, è necessario comprendere più ampiamente i meccanismi sottostanti e sviluppare nuovi approcci terapeutici. Inoltre, i risultati precedenti evidenziano i limiti della terapia sistemica e la necessità di sviluppare alternative precise. Dato che lo studio delle sequele molecolari dell'infarto miocardico nell'uomo è influenzato dalla capacità di accedere al tessuto infartuato, sono indispensabili modelli animali che ricapitolino le caratteristiche e lo sviluppo dell'infarto miocardico umano e della CHF correlati alla CVD.
Poiché i modelli animali ideali assomigliano molto a un disturbo umano per caratteristiche strutturali e funzionali, l'eziologia della malattia dovrebbe guidare il loro concepimento. Nella CAD, è la stenosi aterosclerotica cronica delle arterie coronarie o occlusione trombotica acuta. Diversi metodi sono stati sviluppati e applicati in varie specie di animali da laboratorio per indurre il restringimento o l'occlusione dell'arteria coronaria. Tali strategie possono essere ampiamente classificate in due gruppi: (1) manipolazione meccanica di un'arteria coronaria per indurre un MI e (2) accelerazione dell'aterosclerosi per facilitare il restringimento coronarico che porta a un IM. La prima strategia di solito comporta la legatura di un'arteria coronaria o il posizionamento di uno stent all'interno dell'arteria. Il secondo approccio tende a basarsi sulla modifica della dieta dell'animale per includere alimenti ricchi di grassi / colesterolo. Alcuni dei limiti di quest'ultimo approccio includono la mancanza di controllo sui tempi e sul sito delle occlusioni coronariche.
Al contrario, l'induzione chirurgica di infarto miocardico o ischemia in un modello animale ha diversi vantaggi, come la posizione, i tempi precisi e l'estensione dell'evento coronarico, portando a risultati più riproducibili. Il metodo più utilizzato è la legatura chirurgica dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (LAD). Tali modelli riassumono le risposte umane al danno ischemico acuto, nonché la progressione a CHF3. Inizialmente sviluppata in animali più grandi, la chirurgia LAD su piccoli animali come i roditori è diventata più fattibile con i progressi della tecnologia4. Nello stabilire tali modelli, i topi sono stati favoriti per vari motivi, tra cui la loro relativa disponibilità, la bassa spesa per l'alloggio e la loro capacità di manipolazione genetica.
I modelli chirurgici contemporanei di cardiopatia ischemica che utilizzano l'occlusione LAD richiedono al ricercatore di aprire il pericardio per legare temporaneamente o permanentemente l'arteria5. Tali strategie comportano l'interruzione dello spazio pericardico, che svolge una funzione essenzialmente meccanica e lubrificante per garantire una corretta funzione cardiaca. Un altro svantaggio dell'apertura del pericardio è la perdita del liquido pericardico nativo dell'animale con i suoi vari componenti cellulari e proteici 6,7. In risposta, abbiamo sviluppato un metodo per indurre l'infarto miocardico mantenendo intatto il pericardio. Oltre a ridurre al minimo la perturbazione di questo ambiente omeostatico, questo approccio consente di etichettare e tracciare cellule specifiche dopo aver causato un MI. Inoltre, questo approccio rappresenta meglio la lesione ischemica miocardica in ambito umano.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Steri-350 Bead Sterilizer</td>
			<td>Inotech</td>
			<td>NC9449759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-949</td>
			<td>Falcon, 352340</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-952</td>
			<td>Falcon, 352350</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insyte-W Catheter Needle 24 G X 3/4&#34;</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine (10% povidone-iodine topical solution)</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>104826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNP Ophthalmic Ointment</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>17909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22625101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>SCR103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase XI</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C7657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - CV-11 taper needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>GL-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - PC-13 cutting needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>SL-1659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11009-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Mounting Medium</td>
			<td>Agilen</td>
			<td>CS70330-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 100%</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>MFCD00003568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon 8-0 Ethilon Suture - BV-130-4 taper needle</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Inc.</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber-Optic Light</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>2208502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresbrite&#174; YG Carboxylate Microspheres 1.00 &#181;m</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>15702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geiger Thermal Cautery Unit</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501293</td>
			<td>Model 150-ST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>H4272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane Vaporizer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-0951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane USP, 250 mL</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Fixator Retraction System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18200-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550D- 40 MHz probe</td>
			<td>Fujifilm- Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 Tubing</td>
			<td>Braintree Scienctific, Inc.</td>
			<td>PE10 50 FT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 14184-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ-1B Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ1-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VentElite Small Animal Ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>55-7040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetergesic (10 mL, 0.3mg/mL buprenorphine))</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>124918</td>
			<td>controlled drug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 Software</td>
			<td>Fujifilm-Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intact pericardium ischemic rodent model

Questo protocollo ha dimostrato che il pericardio e il suo contenuto svolgono un ruolo antifibrotico essenziale nel modello ischemico di roditore (legatura coronarica per indurre lesioni miocardiche). La maggior parte dei modelli preclinici di infarto miocardico richiedono l'interruzione dell'integrità pericardica con perdita dell'ambiente cellulare omeostatico. Tuttavia, recentemente abbiamo sviluppato una metodologia per indurre l'infarto miocardico, che riduce al minimo il danno pericardico e mantiene la popolazione di cellule immunitarie residenti nel cuore. È stato osservato un miglioramento del recupero funzionale cardiaco nei topi con uno spazio pericardico intatto dopo la legatura coronarica. Questo metodo offre l'opportunità di studiare le risposte infiammatorie nello spazio pericardico dopo infarto miocardico. L'ulteriore sviluppo delle tecniche di etichettatura può essere combinato con questo modello per comprendere il destino e la funzione delle cellule immunitarie pericardiche nella regolazione dei meccanismi infiammatori che guidano il rimodellamento nel cuore, compresa la fibrosi.

Questo modello di legatura coronarica modificato è stato ottimizzato per ottenere la riproducibilità e la sopravvivenza degli animali. Tuttavia, a causa della significativa lesione indotta nel cuore, alcune attese mortalità intraoperatoria e post-operatoria sono associate alla procedura. La mortalità standard è tipicamente più alta nei maschi (~25-35%) rispetto alle femmine (~ 10-15%).
L'induzione riuscita di un infarto miocardico con la legatura coronarica modificata dovrebbe essere evi...

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An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

Questo protocollo delinea i passaggi per indurre l'infarto miocardico nei topi preservando il pericardio e il suo contenuto.

Un modello di roditore ischemico del pericardio intatto

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

Questo metodo ci permetterà di valutare il ruolo della cavità pericardica che circonda il cuore e il suo contenuto nella riparazione cardiaca dopo infarto miocardico. Rispetto ai metodi convenzionali di legatura coronarica per la modellazione dell'infarto miocardico, il nostro metodo mantiene intatta la cavità pericardica, consentendo la determinazione del contenuto e tiene traccia dei loro ruoli a seguito di lesioni ischemiche cardiache. Comprendere il contributo della cavità pericardica e la risposta alle lesioni cardiache fornirà importanti informazioni sulle strategie terapeutiche che mirano al pericardio per migliorare la guarigione del cuore.Per iniziare con post anestesia, trattenere le zampe del topo e posizionarlo sul tavolo chirurgico. Dopo aver preparato il topo per l'intervento chirurgico come descritto nel manoscritto, ventilare il topo con il 2% di isoflurano e il 100% di ossigeno come gas di trasporto utilizzando un ventilatore commerciale. Quindi impostare una velocità di 110 respiri al minuto, un volume corrente di 250 microlitri e una pressione espiratoria positiva di quattro millimetri di mercurio.Ruotare il mouse del 30% sul lato destro per posizionare il lato sinistro del torace per la chirurgia. Quindi fare un'incisione laterale di due o tre centimetri nella pelle del torace per visualizzare i muscoli pettorali sul lato sinistro. Fai un'incisione di un centimetro dalla linea mediana verso l'esterno per tagliare le pettorali maggiori e minori.Evitare un eccessivo sanguinamento durante la cauterizzazione dei vasi sanguinanti. Visualizza i muscoli intercostali tra la terza e la quarta costola. Fare un'incisione di due centimetri nel muscolo intercostale sinistro per introdurre aria nella cavità toracica e consentire al cuore e ai polmoni di allontanarsi dall'incisione.Per incidere l'intercostale senza sanguinamento, fermare temporaneamente il ventilatore ed espandere l'apertura utilizzando un dispositivo di cauterizzazione. Usando i divaricatori, ritrarre le costole per esporre il cuore. Quindi osservare il pericardio e il cuore sottostante sotto uno stereomicroscopio.Posizionare delicatamente la pinza sulla superficie del pericardio per ridurre il pericardio e il movimento cardiaco sottostante. Punto di riferimento visivo dell'arteria coronaria LAD tracciando la sua comparsa sotto l'appendice sinistra. Utilizzando il driver a microago, guidare una sutura appropriata attraverso il pericardio sotto il LAD.Osservare la sutura che emerge dall'altra parte del LAD e del pericardio. Rappresentando il modello di legatura permanente, legare la sutura per limitare il flusso sanguigno attraverso l'arteria coronaria, rendendo visibile lo sbiancamento della porzione anteriore del ventricolo sinistro. Quindi tagliare la sutura in eccesso con l'aiuto delle forbici.Fornire iniezioni di mantenimento di analgesico per via sottocutanea ogni 12 ore per 72 ore dopo l'intervento chirurgico. Dopo aver ridotto l'isoflurano all'1%, spegnere l'isoflurano mantenendo la ventilazione con ossigeno. Una volta che l'animale mostra segni di respirazione, rimuovere il tubo tracheale calibro 23 dalla bocca e posizionare il topo in una gabbia di recupero per monitorare la ripresa della respirazione.Consentire al mouse di recuperare nella gabbia con una parte della gabbia posizionata su un pad riscaldante per fornire una fonte di calore esterna. Monitorare lo stato di salute del topo ogni giorno per sette giorni valutando le incisioni e il disagio dell'animale. Se necessario, somministrare antibiotici per un recupero di successo dopo l'intervento chirurgico invasivo.Dopo aver mantenuto il topo in anestesia generale con ossigeno, posizionare il topo in posizione supina su una piattaforma riscaldata e attaccare le zampe agli elettrocateteri ECG. Quindi sfregare il petto. Acquisire immagini ECG utilizzando la sonda del trasduttore e il gel di contatto e analizzarle con il software appropriato.Dopo la valutazione ECG non invasiva, spegnere l'isoflurano e riportare il topo nella gabbia. Fissare il cuore in formalina al 10% per almeno 24 ore. Tagliare il campione usando una lama di rasoio dritta attraverso il ventricolo destro, il setto interventricolare e il ventricolo sinistro, assicurandosi che l'incisione attraversi il centro della zona dell'infarto.E poi la paraffina incorpora i campioni di tessuto. Le sezioni tagliate vengono quindi posizionate in una cassetta di montaggio per un'ulteriore incorporazione della paraffina e il successivo sezionamento in sezioni spesse cinque micrometri. Dopo il posizionamento di sezioni di tessuto su vetrini, deparaffinizzare utilizzando toluene e lavaggi con alcool graduato con acqua deionizzata.Quindi reidratare. Quindi, colorare la sezione con 0,1% di rosso sirio nell'acido picrico per due ore a temperatura ambiente. Lavare la sezione con acido acetico allo 0,5% per tre minuti, quindi risciacquare con etanolo al 70% per un minuto.Disidratare la sezione utilizzando l'ordine inverso dei lavaggi con concentrazioni di etanolo crescenti e graduate prima del montaggio per la valutazione microscopica. L'induzione di infarto miocardico di successo con la legatura coronarica modificata è stata valutata esaminando i parametri funzionali e le caratteristiche strutturali del cuore. Per la funzione, la diminuzione della frazione di eiezione del ventricolo sinistro è stata valutata mediante ecocardiografia entro tre o quattro settimane dall'infarto post-miocardico.La colorazione istologica ha dimostrato che i cambiamenti funzionali erano accompagnati da una significativa fibrosi della parete del ventricolo sinistro, che sono stati ulteriormente confermati dalla quantificazione della fibrosi colorata di rosso picrosirio nelle sezioni trasversali del cuore a quattro settimane dopo l'infarto con i modelli di legatura coronarica pericardica interrotta o intatta. La combinazione del metodo di etichettatura a sfere fluorescenti con l'analisi della citometria a flusso ha fornito un approccio per tracciare i macrofagi pericardici Gata6 positivi residenti. È importante sottolineare che è stata rilevata poca o nessuna etichettatura nel cuore o nel sangue.Dopo l'infarto miocardico, il trasferimento delle cellule può essere monitorato mediante citometria a flusso e imaging. Viene mostrata la quantificazione delle cellule mieloidi pericardiche marcate con o senza perline fluorescenti con o senza infarto miocardico. È necessario prestare attenzione per evitare di interrompere o strappare inavvertitamente il pericardio sottile durante la procedura.Questo metodo può essere combinato con il tracciamento del lignaggio del blocco cellulare o effettore, che consentirà di tracciare e determinare l'impatto della componente pericardica sulla risposta di guarigione nel cuore infartuato. Abbiamo identificato la cavità pericardica che protegge il cuore dopo l'infortunio, che è in parte mediato dai macrofagi pericardici residenti. Questo approccio apre una nuova area di ricerca per le malattie cardiovascolari.

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