Name: an intact pericardium ischemic rodent model
Uploaded: 2021-09-02T14:00:00
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8-14주령의 수컷 및 암컷 C57BL/6J 마우스를 이들 실험에 사용하였다. 이 프로토콜은 캘거리 대학의 동물 관리위원회로부터 윤리적 승인을 받았으며 모든 동물 관리 지침을 따릅니다.
1. 마우스 준비 및 수술
<ol><li>수술 도구를 소독합니다(비드 멸균기 또는 오토클레이브를 통해).</li>
	<li>수술 전 체중과 진통제 용량에 대해 마우스의 무게를 잰다.</li>
	<li>마우스를 4% 이소플루란?...

<ol>
	<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141, 139 (2020).</li><li>Iismaa, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+regenerative+mechanisms+across+different+mammalian+tissues.">Comparative regenerative mechanisms across different mammalian tissues.</a> NPJ Regenerative Medicine. 3 (6), (2018).</li><li>Bayat, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+heart+failure+after+myocardial+infarction+in+mice.">Progressive heart failure after myocardial infarction in mice.</a> Basic Research in Cardiology. 97 (3), 206-213 (2002).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. 52, 2581 (2011).</li><li>De Villiers, C., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+myocardial+infarction:+comparing+permanent+ligation+and+ischaemia-reperfusion.">Mouse models of myocardial infarction: comparing permanent ligation and ischaemia-reperfusion.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 13 (11), (2020).</li><li>Borlaug, B. A., Reddy, Y. N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+pericardium+in+heart+failure:+Implications+for+pathophysiology+and+treatment.">The role of the pericardium in heart failure: Implications for pathophysiology and treatment.</a> JACC Heart Failure. 7 (7), 574-585 (2019).</li><li>Pfaller, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+the+pericardium+for+cardiac+biomechanics:+from+physiology+to+computational+modeling.">The importance of the pericardium for cardiac biomechanics: from physiology to computational modeling.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 18 (2), 503-529 (2019).</li><li>Deniset, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gata6(+)+Pericardial+Cavity+Macrophages+Relocate+to+the+Injured+Heart+and+Prevent+Cardiac+Fibrosis.">Gata6(+) Pericardial Cavity Macrophages Relocate to the Injured Heart and Prevent Cardiac Fibrosis.</a> Immunity. 51 (1), 131-140 (2019).</li><li>Weber, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+targeting+of+the+pleural+space+by+intercostal+approach.">Immune targeting of the pleural space by intercostal approach.</a> BMC Pulmonary Medicine. 15, 14 (2015).</li><li>Nakatani, T., Shinohara, H., Fukuo, Y., Morisawa, S., Matsuda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericardium+of+rodents:+pores+connect+the+pericardial+and+pleural+cavities.">Pericardium of rodents: pores connect the pericardial and pleural cavities.</a> The Anatomical Record. 220, 132-137 (1988).</li><li>Tyberg, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+pericardial+pressure+and+right+atrial+pressure:+an+intraoperative+study.">The relationship between pericardial pressure and right atrial pressure: an intraoperative study.</a> Circulation. 73, 428-432 (1986).</li><li>Hamilton, D. R., Sas, R., Semlacher, R. A., Kieser Prieur, T. M., Tyberg, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+left+and+right+pericardial+pressures+in+humans:+an+intraoperative+study.">The relationship between left and right pericardial pressures in humans: an intraoperative study.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 27, 346-350 (2011).</li><li>Park, D. S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pericardial+proteoglycan+4+(lubricin):+Implications+for+postcardiotomy+intrathoracic+adhesion+formation.">Human pericardial proteoglycan 4 (lubricin): Implications for postcardiotomy intrathoracic adhesion formation.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 156 (4), 1598-1608 (2018).</li></ol>

설치류의 닫힌 심낭에서 MI를 유도하는 것은 독특하며 잠재적으로 중요한 응용 프로그램을 가질 수 있습니다. 이 절차는 설치류 모델과 설치류 심장 해부학에 대한 외과 의사의 친숙함에 크게 의존합니다. 성공은 또한 늑간 근육 절개 및 갈비뼈 수축 (1.11-1.13 단계), 경색 생성 (1.17 단계) 및 동물 회복 (1.22-1.24 단계)의 세 가지 중요한 단계에서 제공되는 치료에 달려 있습니다.
?...

오늘날까지 심혈관 질환(CVD)은 전 세계적으로 주요 사망 원인으로 인식되어 상당한 재정적 부담과환자의 삶의 질 저하를 초래합니다1. 관상 동맥 질환 (CAD)은 CVD의 하위 유형이며 사망률의 주요 원인 인 심근 경색 (MI)의 발병에 필수적인 역할을합니다. 정의에 따르면, MI는 허혈 및 저산소증의 장기간의 상태로 인한 심근 조직의 돌이킬 수없는 손상으로 인해 발생합니다. 심근 조직은 재생 능력이 부족하므로 부상은 영구적이며 처음에는 보호 할 수 있지만 궁극적으로 불리한 심장 리모델링 및 궁극적 인 심부전2에 기여하는 섬유 성 흉터로 심장 근육을 대체합니다.
CAD 환자의 관리가 지난 수십 년 동안 극적으로 개선되었지만 허혈에 이차적인 만성 심부전(CHF)은 전 세계적으로 많은 환자에게 영향을 미칩니다. 이 전염병을 예방하고 관리하기 위해서는 기본 메커니즘을보다 광범위하게 이해하고 새로운 치료법을 개발해야합니다. 또한 과거의 연구 결과는 전신 요법의 한계와 정확한 대안 개발의 필요성을 강조합니다. 인간에서 MI의 분자 후유증을 조사하는 것은 경색 조직에 접근하는 능력에 의해 영향을 받는다는 점을 감안할 때, CVD와 관련된 인간 MI 및 CHF의 특성 및 발달을 요약하는 동물 모델은 필수 불가결합니다.
이상적인 동물 모델은 구조적 및 기능적 특성에 대해 인간 장애와 매우 유사하므로 질병 병인학이 개념을 안내해야 합니다. CAD에서는 관상 동맥의 만성 죽상 경화성 협착증 또는 급성 혈전 성 폐색입니다. 관상 동맥 협착 또는 폐색을 유도하기 위해 다양한 종의 실험실 동물에서 다양한 방법이 개발되고 적용되었습니다. 이러한 전략은 크게 두 그룹으로 분류 할 수 있습니다 : (1) MI를 유도하기위한 관상 동맥의 기계적 조작 및 (2) MI로 이어지는 관상 동맥 협착을 촉진하기위한 죽상 동맥 경화증을 촉진합니다. 첫 번째 전략은 일반적으로 관상 동맥의 결찰 또는 동맥 내 스텐트 배치를 포함합니다. 두 번째 접근법은 고지방 / 콜레스테롤 식품을 포함하도록 동물의 식단을 수정하는 데 의존하는 경향이 있습니다. 이 후자의 접근법의 한계 중 일부는 관상 동맥 폐색의시기와 부위에 대한 통제력 부족을 포함합니다.
대조적으로, 동물 모델에서 MI 또는 허혈의 외과적 유도는 위치, 정확한 타이밍 및 관상동맥 사건의 범위와 같은 몇 가지 이점을 가지고 있어 보다 재현 가능한 결과를 유도합니다. 가장 널리 사용되는 방법은 왼쪽 전방 하행 관상 동맥 (LAD)의 외과 적 결찰입니다. 이러한 모델은 급성 허혈성 손상에 대한 인간의 반응과 CHF3로의 진행을 요약합니다. 처음에는 더 큰 동물에서 개발되었지만 설치류와 같은 작은 동물에 대한 LAD 수술은 기술의 발전으로 더욱 실현 가능해졌습니다4. 이러한 모델을 확립 할 때, 마우스는 상대적 가용성, 낮은 주택 비용 및 유전자 조작 능력을 포함하여 다양한 이유로 선호되었습니다.
LAD 폐색을 이용한 허혈성 심장 질환의 현대 수술 모델은 연구자가 동맥을 일시적 또는 영구적으로 결찰하기 위해 심낭을 열도록 요구합니다5. 이러한 전략은 적절한 심장 기능을 보장하기 위해 본질적으로 기계적 및 윤활 기능을 수행하는 심낭 공간의 파괴를 초래합니다. 심낭을 여는 또 다른 단점은 다양한 세포 및 단백질 성분 6,7과 함께 동물의 고유 심낭액을 잃는 것입니다. 이에 대응하여 심낭을 온전하게 유지하면서 MI를 유도하는 방법이 우리에 의해 개발되었습니다. 이러한 항상성 환경의 섭동을 최소화하는 것 외에도, 이 접근법은 MI를 유발한 후 특정 세포에 태깅하고 추적할 수 있게 한다. 또한, 이 접근법은 인간 환경에서 심근 허혈성 손상을 더 잘 나타낸다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Steri-350 Bead Sterilizer</td>
			<td>Inotech</td>
			<td>NC9449759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-949</td>
			<td>Falcon, 352340</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-952</td>
			<td>Falcon, 352350</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insyte-W Catheter Needle 24 G X 3/4&#34;</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine (10% povidone-iodine topical solution)</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>104826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNP Ophthalmic Ointment</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>17909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22625101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>SCR103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase XI</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C7657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - CV-11 taper needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>GL-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - PC-13 cutting needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>SL-1659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11009-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Mounting Medium</td>
			<td>Agilen</td>
			<td>CS70330-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 100%</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>MFCD00003568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon 8-0 Ethilon Suture - BV-130-4 taper needle</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Inc.</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber-Optic Light</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>2208502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresbrite&#174; YG Carboxylate Microspheres 1.00 &#181;m</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>15702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geiger Thermal Cautery Unit</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501293</td>
			<td>Model 150-ST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>H4272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane Vaporizer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-0951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane USP, 250 mL</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Fixator Retraction System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18200-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550D- 40 MHz probe</td>
			<td>Fujifilm- Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 Tubing</td>
			<td>Braintree Scienctific, Inc.</td>
			<td>PE10 50 FT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 14184-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ-1B Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ1-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VentElite Small Animal Ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>55-7040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetergesic (10 mL, 0.3mg/mL buprenorphine))</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>124918</td>
			<td>controlled drug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 Software</td>
			<td>Fujifilm-Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intact pericardium ischemic rodent model

이 프로토콜은 심낭과 그 내용물이 허혈성 설치류 모델 (심근 손상을 유도하는 관상 동맥 결찰)에서 필수적인 항 섬유화 역할을한다는 것을 보여주었습니다. 전임상 심근 경색 모델의 대부분은 항상성 세포 환경의 손실과 함께 심낭 완전성의 파괴를 필요로합니다. 그러나 최근에는 심낭 손상을 최소화하고 심장의 상주 면역 세포 집단을 유지하는 심근 경색을 유도하는 방법론이 개발되었습니다. 관상 동맥 결찰 후 손상되지 않은 심낭 공간을 가진 마우스에서 개선 된 심장 기능 회복이 관찰되었습니다. 이 방법은 심근 경색 후 심낭 공간에서 염증 반응을 연구 할 수있는 기회를 제공합니다. 라벨링 기술의 추가 개발은이 모델과 결합하여 섬유증을 포함하여 심장에서 리모델링을 유도하는 염증 메커니즘을 조절하는 심낭 면역 세포의 운명과 기능을 이해할 수 있습니다.

이 수정된 관상동맥 결찰 모델은 재현성과 동물 생존을 달성하도록 최적화되었습니다. 그러나 심장에 유발 된 심각한 손상으로 인해 일부 예상 수술 중 및 수술 후 사망률이 절차와 관련이 있습니다. 표준 사망률은 일반적으로 여성 (~ 10-15 %)보다 남성 (~ 25-35 %)에서 더 높습니다.
수정 된 관상 동맥 결찰로 MI를 성공적으로 유도하는 것은 심장의 기능적 매개 변수 및 구조적 특?...

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An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

이 프로토콜은 심낭과 그 내용물을 보존하면서 마우스에서 심근 경색을 유도하는 단계를 설명합니다.

온전한 심낭 허혈성 설치류 모델

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

이 방법을 사용하면 심근 경색 후 심장 복구에서 심장과 그 내용물을 둘러싸고있는 심낭의 역할을 평가할 수 있습니다. 심근 경색을 모델링하기위한 기존의 관상 동맥 결찰 방법과 비교할 때, 우리의 방법은 손상되지 않은 심낭을 유지하여 내용물을 결정하고 심장 허혈성 손상 후 역할을 추적 할 수 있습니다. 심낭의 기여와 심장의 손상 반응을 이해하면 심장 치유를 개선하기 위해 심낭을 표적으로 하는 치료 전략에 대한 중요한 통찰력을 얻을 수 있습니다.마취 후 시작하려면 마우스의 발을 제지하고 수술대 위에 놓습니다. 원고에 설명된 대로 수술을 위해 마우스를 준비한 후 상업용 인공호흡기를 사용하여 운반 가스로서 2%이소플루란과 100% 산소로 마우스를 환기시킵니다. 그런 다음 분당 110 회 호흡, 250 마이크로 리터의 일회 호흡량, 4 밀리미터의 수은 양의 최종 호기 압력을 설정하십시오.마우스를 오른쪽으로 30% 굴려 수술을 위해 가슴의 왼쪽을 배치합니다. 그런 다음 가슴 피부에 2-3 센티미터의 측면 절개를하여 왼쪽의 가슴 근육을 시각화합니다. 대흉근과 소흉부를 절단하기 위해 정중선에서 바깥쪽으로 1cm 절개하십시오.출혈 혈관의 소작 전반에 걸쳐 과도한 출혈을 피하십시오. 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이의 늑간근을 시각화하십시오. 왼쪽 늑간근을 2cm 절개하여 흉강에 공기를 주입하고 심장과 폐가 절개에서 떨어지도록합니다.출혈없이 늑간을 절개하려면 인공 호흡기를 일시적으로 멈추고 소작 장치를 사용하여 개구부를 확장하십시오. 견인기를 사용하여 갈비뼈를 수축시켜 심장을 노출시킵니다. 그런 다음 실체 현미경으로 심낭과 밑에있는 심장을 관찰하십시오.심낭 표면에 집게를 부드럽게 놓아 심낭과 근본적인 심장 움직임을 줄입니다. LAD 관상 동맥의 왼쪽 부속기 아래에서 출현을 추적하여 시각적으로 랜드 마크합니다. 마이크로니들 드라이버를 사용하여 LAD 아래의 심낭을 통해 적절한 봉합사를 안내합니다.LAD와 심낭의 반대편에서 나오는 봉합사를 관찰하십시오. 영구 결찰 모델을 대표하여 봉합사를 묶어 관상 동맥을 통한 혈류를 제한하여 좌심실 앞쪽 부분의 희게하는 것을 볼 수 있도록합니다. 그런 다음 가위를 사용하여 과도한 봉합사를 다듬습니다.수술 후 72 시간 동안 12 시간마다 진통제를 피하 주사합니다. 이소 플루 란을 1 %로 줄인 후 산소로 환기를 유지하면서 이소 플루 란을 끄십시오. 동물이 호흡 징후를 보이면 입에서 23 게이지 기관 튜브를 제거하고 마우스를 회복 케이지에 넣어 호흡 재개를 모니터링합니다.케이지의 일부를 온난화 패드에 올려 외부 열원을 제공하여 마우스가 케이지에서 회복되도록합니다. 절개 부위와 동물의 불편함을 평가하여 7일 동안 매일 마우스의 건강 상태를 모니터링합니다. 필요한 경우 침습적 수술 후 성공적인 회복을 위해 항생제를 투여하십시오.산소로 전신 마취하에 마우스를 유지 한 후, 마우스를 가열 된 무대 플랫폼에서 앙와위 자세로 놓고 발을 ECG 리드에 부착하십시오. 그런 다음 가슴을 긁습니다. 트랜스듀서 프로브와 접촉 젤을 사용하여 ECG 이미지를 수집하고 적절한 소프트웨어로 분석합니다.비 침습적 ECG 평가 후 이소 플루 란을 끄고 마우스를 케이지로 되돌립니다. 적어도 24 시간 동안 10 % 포르말린으로 심장을 고정하십시오. 우심실, 심실 중격 및 좌심실을 통해 직선 면도날을 사용하여 샘플을 절단하여 절개가 경색 영역의 중심을 통과하도록합니다.그런 다음 파라핀이 조직 샘플을 내장합니다. 그런 다음 절단된 섹션을 장착 카세트에 넣어 추가 파라핀 임베딩을 수행하고 후속 섹션을 5마이크로미터 두께의 섹션으로 절단합니다. 슬라이드에 조직 섹션을 배치한 후 톨루엔을 사용하여 탈파라핀화하고 탈이온수로 등급이 매겨진 알코올을 세척합니다.그런 다음 수분을 보충하십시오. 다음으로, 실온에서 2 시간 동안 피크린산에서 0.1 % 시리우스 레드로 섹션을 염색합니다. 섹션을 0.5 % 아세트산으로 3 분 동안 씻은 다음 70 % 에탄올로 1 분 동안 헹굽니다.현미경 평가를 위해 장착하기 전에 에탄올 농도가 증가하고 등급이 매겨진 세척의 역순을 사용하여 섹션을 탈수하십시오. 수정 된 관상 동맥 결찰을 통한 성공적인 심근 경색 유도는 심장의 기능적 매개 변수와 구조적 특징을 검사하여 평가되었습니다. 기능에 대해, 감소된 좌심실 박출률은 심근 경색 후 3-4주 이내에 심초음파로 평가되었습니다.조직 학적 염색은 기능적 변화가 좌심실 벽의 현저한 섬유증을 동반한다는 것을 입증했으며, 이는 경색 후 4 주에 심장 단면에서 picrosirius 적색 염색 섬유증을 정량화하여 추가로 확인되었다. 형광 비드 표지 방법과 유세포 분석을 결합하면 상주하는 Gata6 양성 심낭 대 식세포를 추적하는 접근법이 제공되었습니다. 중요한 것은 심장이나 혈액에서 표지가 거의 또는 전혀 검출되지 않았다는 것입니다.심근 경색 후, 세포의 재배치는 유세포 분석 및 영상에 의해 추적 될 수있다. 심근 경색이 있거나 없는 형광 비드 표지된 심낭 골수 세포의 정량화가 도시된다. 시술 중에 실수로 얇은 심낭을 방해하거나 찢어지지 않도록주의해야합니다.이 방법은 혈통 추적 세포 또는 이펙터 차단과 결합 될 수 있으며, 이를 통해 경색 된 심장의 치유 반응에 대한 심낭 구성 요소의 영향을 추적하고 결정할 수 있습니다. 우리는 심낭이 손상 후 심장을 보호한다는 것을 확인했으며, 이는 부분적으로 상주 심낭 대 식세포에 의해 매개됩니다. 이 접근법은 심혈관 질환에 대한 새로운 연구 영역을 열어줍니다.

Research

JoVE Journal

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Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

그대로 Glomeruli 성인 쥐 신장에서 분리 하는 효율적인 체질 하 방법

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...