Name: an intact pericardium ischemic rodent model
Uploaded: 2021-09-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model at JoVE.com

Bu deneyler için 8-14 haftalık erkek ve dişi C57BL/6J fareler kullanıldı. Bu protokol, Calgary Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi'nden etik onay almıştır ve tüm hayvan bakım kurallarına uymaktadır.
1. Fare hazırlığı ve ameliyatı
<ol><li>Cerrahi aletleri sterilize edin (boncuk sterilizatörü veya otoklav yoluyla).</li>
	<li>Ameliyat öncesi ağırlık ve analjezik doz için fareyi tartın.</li>
	<li>Fareyi% 4 izofluran ve 800 mL / dak oksijen içeren bir indüksiyon kutusu...

<ol>
	<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141, 139 (2020).</li><li>Iismaa, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+regenerative+mechanisms+across+different+mammalian+tissues.">Comparative regenerative mechanisms across different mammalian tissues.</a> NPJ Regenerative Medicine. 3 (6), (2018).</li><li>Bayat, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+heart+failure+after+myocardial+infarction+in+mice.">Progressive heart failure after myocardial infarction in mice.</a> Basic Research in Cardiology. 97 (3), 206-213 (2002).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. 52, 2581 (2011).</li><li>De Villiers, C., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+myocardial+infarction:+comparing+permanent+ligation+and+ischaemia-reperfusion.">Mouse models of myocardial infarction: comparing permanent ligation and ischaemia-reperfusion.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 13 (11), (2020).</li><li>Borlaug, B. A., Reddy, Y. N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+pericardium+in+heart+failure:+Implications+for+pathophysiology+and+treatment.">The role of the pericardium in heart failure: Implications for pathophysiology and treatment.</a> JACC Heart Failure. 7 (7), 574-585 (2019).</li><li>Pfaller, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+the+pericardium+for+cardiac+biomechanics:+from+physiology+to+computational+modeling.">The importance of the pericardium for cardiac biomechanics: from physiology to computational modeling.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 18 (2), 503-529 (2019).</li><li>Deniset, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gata6(+)+Pericardial+Cavity+Macrophages+Relocate+to+the+Injured+Heart+and+Prevent+Cardiac+Fibrosis.">Gata6(+) Pericardial Cavity Macrophages Relocate to the Injured Heart and Prevent Cardiac Fibrosis.</a> Immunity. 51 (1), 131-140 (2019).</li><li>Weber, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+targeting+of+the+pleural+space+by+intercostal+approach.">Immune targeting of the pleural space by intercostal approach.</a> BMC Pulmonary Medicine. 15, 14 (2015).</li><li>Nakatani, T., Shinohara, H., Fukuo, Y., Morisawa, S., Matsuda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericardium+of+rodents:+pores+connect+the+pericardial+and+pleural+cavities.">Pericardium of rodents: pores connect the pericardial and pleural cavities.</a> The Anatomical Record. 220, 132-137 (1988).</li><li>Tyberg, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+pericardial+pressure+and+right+atrial+pressure:+an+intraoperative+study.">The relationship between pericardial pressure and right atrial pressure: an intraoperative study.</a> Circulation. 73, 428-432 (1986).</li><li>Hamilton, D. R., Sas, R., Semlacher, R. A., Kieser Prieur, T. M., Tyberg, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+left+and+right+pericardial+pressures+in+humans:+an+intraoperative+study.">The relationship between left and right pericardial pressures in humans: an intraoperative study.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 27, 346-350 (2011).</li><li>Park, D. S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pericardial+proteoglycan+4+(lubricin):+Implications+for+postcardiotomy+intrathoracic+adhesion+formation.">Human pericardial proteoglycan 4 (lubricin): Implications for postcardiotomy intrathoracic adhesion formation.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 156 (4), 1598-1608 (2018).</li></ol>

Kemirgenlerde kapalı bir perikardda bir MI'yi indüklemek benzersizdir ve potansiyel olarak önemli uygulamalara sahip olabilir. Prosedür, cerrahın kemirgen modeline ve kemirgen kalp anatomisine aşinalığına büyük ölçüde dayanır. Başarı aynı zamanda üç kritik adımda verilen bakıma da bağlıdır: interkostal kas insizyonu ve kaburga retraksiyonu (Adım 1.11-1.13), enfarktüsün oluşturulması (Adım 1.17) ve hayvan iyileşmesi (Adım 1.22-1.24).
Torakotomi, perikardın deli...

Bugüne kadar, kardiyovasküler hastalık (KVH) dünya çapında önde gelen ölüm nedeni olarak kabul edilmekte ve bu da önemli bir mali yüke ve hastanın yaşam kalitesinde azalmaya neden olmaktadır1. Koroner arter hastalığı (KAH), KVH'nin bir alt tipidir ve mortaliteye başlıca katkıda bulunan miyokard enfarktüsünün (MI) gelişiminde önemli bir rol oynar. Tanım olarak, MI, uzun süreli iskemi ve hipoksi koşullarına bağlı olarak miyokard dokusunda geri dönüşümsüz yaralanmadan kaynaklanır. Miyokard dokusu rejenerasyon kapasitesinden yoksundur, bu nedenle yaralanmalar kalıcıdır ve kalp kasının başlangıçta koruyucu olabilen fibrotik bir yara izi ile değiştirilmesine neden olur, ancak sonuçta olumsuz kardiyak yeniden yapılanmaya ve nihai kalp yetmezliğine katkıda bulunur2.
KAH hastalarının yönetimi son birkaç on yılda dramatik bir şekilde iyileşmiş olsa da, iskemiye sekonder kronik kalp yetmezliği (CHF) dünya çapında birçok hastayı etkilemektedir. Bu salgının önlenmesi ve yönetilmesi için altta yatan mekanizmaların daha kapsamlı anlaşılması ve yeni tedavi yaklaşımlarının geliştirilmesi gerekmektedir. Ayrıca, geçmiş bulgular sistemik tedavinin sınırlılıklarını ve kesin alternatiflerin geliştirilmesinin gerekliliğini vurgulamaktadır. İnsanlarda MI'nin moleküler sekellerinin araştırılmasının enfarktüs dokusuna erişme yeteneğinden etkilendiği göz önüne alındığında, insan MI ve CHF'nin KVH ile ilgili özelliklerini ve gelişimini özetleyen hayvan modelleri vazgeçilmezdir.
İdeal hayvan modelleri, yapısal ve fonksiyonel özellikler açısından bir insan bozukluğuna çok benzediğinden, hastalık etiyolojisi anlayışlarına rehberlik etmelidir. KAH'da koroner arterlerin kronik aterosklerotik darlığı veya akut trombotik tıkanıklıktır. Koroner arter daralması veya tıkanmasını indüklemek için çeşitli laboratuvar hayvanı türlerinde farklı yöntemler geliştirilmiş ve uygulanmıştır. Bu tür stratejiler genel olarak iki gruba ayrılabilir: (1) bir MI'yi indüklemek için bir koroner arterin mekanik manipülasyonu ve (2) bir MI'ye yol açan koroner daralmayı kolaylaştırmak için aterosklerozun hızlandırılması. İlk strateji genellikle bir koroner arterin bağlanmasını veya arter içine bir stent yerleştirilmesini içerir. İkinci yaklaşım, hayvanın diyetini yüksek yağlı / kolesterollü yiyecekleri içerecek şekilde değiştirmeye dayanma eğilimindedir. Bu ikinci yaklaşımın sınırlamalarından bazıları, koroner oklüzyonların zamanlaması ve yeri üzerinde kontrol eksikliğini içerir.
Buna karşılık, bir hayvan modelinde MI veya iskeminin cerrahi indüksiyonu, daha tekrarlanabilir sonuçlara yol açan konum, kesin zamanlama ve koroner olayın kapsamı gibi çeşitli avantajlara sahiptir. En sık kullanılan yöntem sol ön inen koroner arterin (LAD) cerrahi ligasyonudur. Bu tür modeller, akut iskemik hasara karşı insan tepkilerini ve CHF3'e ilerlemeyi özetlemektedir. Başlangıçta daha büyük hayvanlarda geliştirilen LAD ameliyatı, kemirgenler gibi küçük hayvanlar üzerinde teknolojideki ilerlemelerle daha uygulanabilir hale gelmiştir4. Bu tür modellerin oluşturulmasında, fareler göreceli mevcudiyetleri, konuttaki düşük masrafları ve genetik manipülasyon kapasiteleri de dahil olmak üzere çeşitli nedenlerle tercih edilmiştir.
LAD oklüzyonu kullanan iskemik kalp hastalığının çağdaş cerrahi modelleri, araştırmacının arteri geçici veya kalıcı olarak bağlamak için perikardın açılmasını gerektirir5. Bu tür stratejiler, uygun kalp fonksiyonunu sağlamak için esasen mekanik ve yağlama fonksiyonu oynayan perikardiyal boşluğun bozulmasına neden olur. Perikardın açılmasının bir diğer dezavantajı, hayvanın doğal perikardiyal sıvısını çeşitli hücresel ve protein bileşenleri ile kaybetmektir 6,7. Buna cevaben, perikardı sağlam tutarken MI'yi indüklemek için bir yöntem tarafımızdan geliştirilmiştir. Bu homeostatik ortamın bozulmasını en aza indirmenin yanı sıra, bu yaklaşım bir MI'ye neden olduktan sonra belirli hücrelerin etiketlenmesine ve izlenmesine izin verir. Ek olarak, bu yaklaşım insan ortamında miyokard iskemik hasarını daha iyi temsil eder.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Steri-350 Bead Sterilizer</td>
			<td>Inotech</td>
			<td>NC9449759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-949</td>
			<td>Falcon, 352340</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m Cell strainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA21008-952</td>
			<td>Falcon, 352350</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insyte-W Catheter Needle 24 G X 3/4&#34;</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine (10% povidone-iodine topical solution)</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>104826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNP Ophthalmic Ointment</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>17909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22625101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>SCR103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase XI</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C7657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - CV-11 taper needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>GL-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 5-0 Polysorb Suture - PC-13 cutting needle</td>
			<td>Medtronic Canada</td>
			<td>SL-1659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Blunt Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11009-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako Mounting Medium</td>
			<td>Agilen</td>
			<td>CS70330-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 100%</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>MFCD00003568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon 8-0 Ethilon Suture - BV-130-4 taper needle</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Inc.</td>
			<td>2815G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber-Optic Light</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>2208502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresbrite&#174; YG Carboxylate Microspheres 1.00 &#181;m</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>15702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geiger Thermal Cautery Unit</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501293</td>
			<td>Model 150-ST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>H4272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane Vaporizer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-0951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane USP, 250 mL</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>108737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Fixator Retraction System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18200-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550D- 40 MHz probe</td>
			<td>Fujifilm- Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 Tubing</td>
			<td>Braintree Scienctific, Inc.</td>
			<td>PE10 50 FT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>FST 14184-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ-1B Stereo Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ1-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VentElite Small Animal Ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>55-7040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetergesic (10 mL, 0.3mg/mL buprenorphine))</td>
			<td>CDMV Inc</td>
			<td>124918</td>
			<td>controlled drug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 Software</td>
			<td>Fujifilm-Visual Sonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intact pericardium ischemic rodent model

Bu protokol, perikardın ve içeriğinin iskemik kemirgen modelinde (miyokard hasarını indüklemek için koroner ligasyon) önemli bir anti-fibrotik rol oynadığını göstermiştir. Klinik öncesi miyokard enfarktüsü modellerinin çoğu, homeostatik hücresel ortamın kaybıyla perikardiyal bütünlüğün bozulmasını gerektirir. Bununla birlikte, son zamanlarda, perikardiyal hasarı en aza indiren ve kalbin yerleşik bağışıklık hücresi popülasyonunu koruyan miyokard enfarktüsünü indüklemek için tarafımızdan bir metodoloji geliştirilmiştir. Koroner ligasyonu takiben sağlam bir perikardiyal boşluğa sahip farelerde iyileşmiş bir kardiyak fonksiyonel iyileşme gözlenmiştir. Bu yöntem, miyokard enfarktüsünü takiben perikardiyal boşluktaki enflamatuar yanıtları incelemek için bir fırsat sağlar. Etiketleme tekniklerinin daha da geliştirilmesi, fibroz da dahil olmak üzere kalpte yeniden şekillenmeyi sağlayan enflamatuar mekanizmaların düzenlenmesinde perikardiyal bağışıklık hücrelerinin kaderini ve işlevini anlamak için bu modelle birleştirilebilir.

Bu modifiye koroner ligasyon modeli, tekrarlanabilirlik ve hayvan hayatta kalma sağlamak için optimize edilmiştir. Bununla birlikte, kalpte indüklenen önemli yaralanma nedeniyle, beklenen bazı intraoperatif ve postoperatif mortalite prosedürle ilişkilidir. Standart mortalite tipik olarak erkeklerde (~% 25-35) kadınlardan (~% 10-15) daha yüksektir.
Bir MI'nin modifiye koroner ligasyon ile başarılı bir şekilde indüklenmesi, kalbin fonksiyonel parametrelerindeki ve yapısal özelli...

Watch this Scientific Journal Video about An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model at JoVE.com

An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

Bu protokol, perikard ve içeriğini korurken farelerde miyokard enfarktüsünü indükleme adımlarını özetlemektedir.

Bozulmamış Bir Perikard İskemik Kemirgen Modeli

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

Bu yöntem, miyokard enfarktüsünü takiben kalbi çevreleyen perikardiyal boşluğun ve içeriğinin kardiyak onarımdaki rolünü değerlendirmemizi sağlayacaktır. Miyokard enfarktüsünün modellenmesi için geleneksel koroner ligasyon yöntemleriyle karşılaştırıldığında, yöntemimiz sağlam bir perikardiyal boşluğu koruyarak içeriğin belirlenmesine izin verir ve kardiyak iskemik hasarı takiben rollerini izler. Perikard boşluğunun ve kalbin yaralanma yanıtının katkısını anlamak, kalp iyileşmesini iyileştirmek için perikardı hedef alan terapötik stratejiler hakkında önemli bilgiler sağlayacaktır.Anestezi sonrası başlamak için, farenin pençelerini kısıtlayın ve ameliyat masasına yerleştirin. Fareyi makalede açıklandığı gibi ameliyat için hazırladıktan sonra, ticari bir ventilatör kullanarak fareyi% 2 izofluran ve% 100 oksijen taşıyıcı gaz olarak havalandırın. Daha sonra dakikada 110 nefeslik bir hız, 250 mikrolitrelik bir gelgit hacmi ve dört milimetre cıva pozitif bir ekspiratuar basınç ayarlayın.Ameliyat için göğsün sol tarafını konumlandırmak için fareyi sağ tarafında% 30 yuvarlayın. Daha sonra sol taraftaki pektoralis kaslarını görselleştirmek için göğüs derisinde iki ila üç santimetrelik bir yanal kesi yapın. Pektoralis majör ve minör kesmek için orta hattan dışa doğru bir santimetre kesi yapın.Kanayan damarların koterizasyonu boyunca aşırı kanamadan kaçının. Üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki interkostal kasları görselleştirin. Göğüs boşluğuna hava vermek ve kalbin ve akciğerlerin insizyondan düşmesine izin vermek için sol interkostal kasta iki santimetrelik bir kesi yapın.İnterkostalı kanamadan kesmek için, ventilatörü geçici olarak durdurun ve bir koter cihazı kullanarak açıklığı genişletin. Retraktörleri kullanarak, kalbi açığa çıkarmak için kaburgaları geri çekin. Daha sonra perikardi ve altta yatan kalbi stereo mikroskop altında gözlemleyin.Perikardın ve altta yatan kalp hareketini azaltmak için forsepsleri perikard yüzeyine yavaşça yerleştirin. Sol uzantının altındaki ortaya çıkışını izleyerek LAD koroner arterini görsel olarak işaretleyin. Mikroiğne sürücüsünü kullanarak, LAD altındaki perikarddan uygun bir sütür geçirin.LAD ve perikardın diğer tarafında ortaya çıkan dikişi gözlemleyin. Kalıcı ligasyon modelini temsil ederek, koroner arterden kan akışını kısıtlamak için dikişi bağlayın ve sol ventrikülün ön kısmının beyazlatılmasını görünür hale getirin. Daha sonra fazla sütürü makas yardımıyla kesin.Ameliyat sonrası 72 saat boyunca her 12 saatte bir deri altından analjezik bakım enjeksiyonları sağlayın. İzofluranı% 1'e indirgedikten sonra, havalandırmayı oksijenle korurken izofluranı kapatın. Hayvan nefes alma belirtileri gösterdiğinde, 23 gauge trakea tüpünü ağızdan çıkarın ve solunumun yeniden başlamasını izlemek için fareyi bir kurtarma kafesine yerleştirin.Harici bir ısı kaynağı sağlamak için kafesin bir kısmı bir ısıtma pedine yerleştirilerek farenin kafeste iyileşmesine izin verin. Kesiler ve hayvan rahatsızlıklarını değerlendirerek farenin sağlık durumunu yedi gün boyunca günlük olarak izleyin. Gerekirse, invaziv cerrahiyi takiben başarılı bir iyileşme için antibiyotik uygulayın.Fareyi genel anestezi altında oksijenle tuttuktan sonra, fareyi ısıtılmış bir sahne platformunda sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve pençeleri EKG uçlarına takın. Sonra göğsü kovalayın. Transdüser probu ve temas jeli kullanarak EKG görüntüleri elde edin ve uygun yazılımla analiz edin.Noninvaziv EKG değerlendirmesinden sonra, izofluranı kapatın ve fareyi kafese geri getirin. Kalbi en az 24 saat boyunca% 10 formalin içinde sabitleyin. Numuneyi sağ ventrikül, interventriküler septum ve sol ventrikülden düz bir tıraş bıçağı kullanarak kesin ve insizyonun enfarktüs bölgesinin merkezinden geçmesini sağlayın.Ve sonra parafin doku örneklerini gömer. Kesilen bölümler daha sonra daha fazla parafin gömmek ve daha sonra beş mikrometre kalınlığında bölümlere ayırmak için montaj kasetine yerleştirilir. Doku kesitlerinin slaytlara yerleştirilmesini takiben, toluen ve derecelendirilmiş alkol kullanarak deparafinize deiyonize su ile yıkanır.Sonra rehidratlayın. Daha sonra, bölümü oda sıcaklığında iki saat boyunca pikrik asitte% 0.1sirius kırmızısı ile lekeleyin. Bölümü üç dakika boyunca% 0.5 asetik asit ile yıkayın, ardından bir dakika boyunca% 70 etanol ile durulayın.Mikroskobik değerlendirme için monte edilmeden önce artan ve derecelendirilmiş etanol konsantrasyonlarına sahip yıkamaların ters sırasını kullanarak bölümü kurutun. Modifiye koroner ligasyon ile başarılı miyokard infarktüsü indüksiyonu, kalbin fonksiyonel parametreleri ve yapısal özellikleri incelenerek değerlendirildi. Fonksiyon açısından, azalmış sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonu, miyokard enfarktüsünden sonraki üç ila dört hafta içinde ekokardiyografi ile değerlendirildi.Histolojik boyama, fonksiyonel değişikliklere sol ventrikül duvarının belirgin fibrozisinin eşlik ettiğini gösterdi; bunlar, enfarktüsten dört hafta sonra kalbin enine kesitlerindeki pikrosirius kırmızı boyalı fibrozisin bozulmuş veya bozulmamış perikardiyal koroner ligasyon modelleriyle nicelleştirilmesiyle daha da doğrulandı. Floresan boncuk etiketleme yönteminin akış sitometrisi analizi ile birleştirilmesi, yerleşik Gata6 pozitif perikardiyal makrofajların izlenmesi için bir yaklaşım sağlamıştır. Daha da önemlisi, kalpte veya kanda çok az veya hiç etiketleme tespit edilmedi.Miyokard enfarktüsünü takiben, hücrelerin yer değiştirmesi akım sitometrisi ve görüntüleme ile izlenebilir. Miyokard enfarktüsü olan veya olmayan perikardiyal miyeloid hücrelerin floresan boncuk etiketli miktarının belirlenmesi gösterilmiştir. İşlem sırasında ince perikardın yanlışlıkla bozulmasını veya yırtılmasını önlemek için özen gösterilmelidir.Bu yöntem, perikardiyal bileşenin enfarktüslü kalpteki iyileşme yanıtı üzerindeki etkisinin izlenmesine ve belirlenmesine izin verecek olan hücresel veya efektör blokajı izleyen soy izleme ile birleştirilebilir. Perikard boşluğunun, kısmen yerleşik perikardiyal makrofajların aracılık ettiği yaralanma sonrası kalbi koruduğunu belirledik. Bu yaklaşım, kardiyovasküler hastalıklar için yeni bir araştırma alanı açmaktadır.

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Klinik öncesi Model İskemik Kalp Yetmezliği Gen Transferi

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

Bir In vivo</emDaralma indüklenen Sakatlık ve Kurtarma Non-invaziv İzleme> Kemirgen Model

Muscle strains are one of the most  common complaints treated by physicians. A muscle injury is typically diagnosed from the patient history and  physical ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

Bir İskemik Yara Model üretmek için Basitleştirilmiş Tekniği

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Rekabetçi bir mürin Kemik İliği Transplantasyon Modelinde Donör Hücre Aşı belirleme Kantitatif Gerçek-zamanlı PCR kullanarak

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Rat Model of Photochemically-Induced Posterior Ischemic Optic Neuropathy

Fotokimyasal Bağlı Posterior İskemik Optik Nöropati Rat Modeli

Posterior Ischemic optic neuropathy (PION) is a sight-devastating disease in clinical practice. However, its pathogenesis and natural history ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Yenidoğan Hipoksik-İskemik Ensefalopati A Piglet Modeli

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

Sıçan İskemik Cilt Yara Modeli Gösteri

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy (rNAION)

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy rNAION

Nonarteritik Anterior İskemik Optik Nöropati Kemirgen Modeli (rNAION)

Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) is a focal ischemic lesion of the optic nerve that affects 1/700 individuals throughout their ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

Yetişkin sıçan böbrek üzerinden olduğu gibi Glomeruli yalıtmak için verimli bir eleme yöntemi

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...