Name: in vivo assessment of microtubule dynamics and orientation in caenorhabditis elegans neurons
Uploaded: 2021-11-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Assessment of Microtubule Dynamics and Orientation in Caenorhabditis elegans Neurons at JoVE.com

We bedanken Yishi Jin en Andrew Chisholm voor de eerste ondersteuning en de soort die in de studie is gebruikt. De bacteriestam OP50 werd commercieel gebruikt door Caenorhabditis Genetics Center (CGC) gefinancierd door NIH Office of Research Infrastructure Programs (P40 OD010440). We danken ook Dharmendra Puri voor de standaardisatie van de experimentele procedures. De studie wordt gefinancierd door de kernsubsidie van het National Brain Research Centre (ondersteund door het Department of Biotechnology, Govt. of India), DBT / Wellcome Trust India Alliance Early Career Grant (Grant # IA / E / 18/1 / 504331) aan S.D., Wellcome Trust-DBT India Alliance Intermediate Grant (Grant # IA / I / 13/1 / 500874) aan A.G.-R en een subsidie van Science and Engineering Research Board (SERB: CRG/2019/002194) naar A.G.-R.

1. Reporter strain: Cultuur en onderhoud
OPMERKING: Om de microtubule-dynamiek en oriëntatie in de PLM-neuronen te meten, gebruikten we de wormstam die EBP-2::GFP tot expressie brengen onder de aanraking neuron specifieke promotor mec-4 (juIs338 allel)18,25,26. We gebruiken standaard wormkweek- en onderhoudsmethoden voor deze stam<sup clas...

Het begrijpen van de microtubule-dynamiek is door de jaren heen een belangrijk aandachtspunt geweest op het gebied van cytoskeletonderzoek. Microtubuli ondergaan nucleatie en catastrofe samen met een continu proces van dynamische instabiliteit44,45,46,47. Veel van deze informatie is verkregen door in vitro assays zoals lichtverstrooiingsuitlezingen van vrije versus ...

Neuronen hebben een uitgebreide architectuur met gespecialiseerde compartimenten zoals dendrieten, cellichamen, axonen en synapsen. Het neuronale cytoskelet bestaat uit de microtubuli, microfilamenten en neurofilamenten en hun afzonderlijke organisatie ondersteunt de neuronale compartimenten structureel en functioneel1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 . In de loop der jaren is microtubule-organisatie geïdentificeerd als een belangrijke determinant van neuronale polariteit en functie. Terwijl neuronen structurele remodellering ondergaan tijdens ontwikkeling of regeneratie, bepalen de microtubule-dynamiek en oriëntatie de identiteit, gepolariseerd transport, groei en ontwikkeling van verschillende neuronalecompartimenten 7. Het is daarom noodzakelijk om de microtubulidynamica en oriëntatie in vivo te beoordelen om te correleren met het neuronale remodelleringsproces.
Microtubuli zijn samengesteld uit protofilamenten van α en β Tubuline heterodimeren met dynamische plus uiteinden en relatief stabiele min uiteinden11,12. De ontdekking van het plus tip-complex en bijbehorende eindbindende eiwitten hebben een platform in staat gesteld om de microtubule-organisatie te beoordelen13. Eindbindende eiwitten (EBP) associëren zich tijdelijk met de groeiende pluspunten van de microtubuli en hun associatiedynamiek is gecorreleerd met de groei van de microtubuli protofilamenten14,15. Vanwege frequente associatie en dissociatie van pluspuntcomplex met de microtubule, verschijnt de puntspreidingsfunctie van GFP-gelabelde EBP als een "komeet" in een timelapse-film15,16. Sinds de baanbrekende observatie in zoogdierneuronen16, zijn eindbindende eiwitten gelabeld met fluorescerende eiwitten gebruikt om de dynamiek van microtubuli te bepalen in verschillende modelsystemen en neurontypen17,18,19,20,21,22,23.
Vanwege zijn eenvoudige zenuwstelsel en transparante lichaam heeft C. elegans bewezen een uitstekend modelsysteem te zijn om neuronale remodellering tijdens ontwikkeling en regeneratie in vivo te bestuderen. Hier beschrijven we methoden om de microtubule-dynamiek en -groei te labelen, in beeld te brengen en te analyseren tijdens de ontwikkeling en regeneratie van aanraakneuronen in C. elegans. Met behulp van genetisch gecodeerde EBP-2::GFP hebben we de microtubuli in het PLM-neuron in beeld gesteld, waardoor we de polariteit van de microtubuli in twee verschillende neurieten van dit neuron konden bepalen24. Deze methode maakt observatie en kwantificering van de EBP-kometen mogelijk als een maat voor microtubule-dynamiek in verschillende cellulaire contexten, bijvoorbeeld de lokale veranderingen in microtubulegedrag die axonregeneratie na axotomie initiëren, kunnen worden beoordeeld met behulp van ons protocol. Deze test kan worden aangepast om de regulatie van microtubule-dynamica in verschillende cellulaire processen in verschillende celtypen en genetische achtergronden te onderzoeken.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CZ18975 worm strain</td>
			<td>Yishi Jin lab</td>
			<td>CZ18975</td>
			<td>Generated by Anindya Ghosh-Roy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9539</td>
			<td>Mounting worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip (18 mm x 18 mm)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>474030-9010-000</td>
			<td>Mounting worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry bath with heating block</td>
			<td>Neolab</td>
			<td></td>
			<td>Mounting worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides (35 mm x 25 mm)</td>
			<td>Blue Star</td>
			<td></td>
			<td>Mounting worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene bead solution (4.55 x 10^13 particles/ml in aqueous medium with minimal surfactant)</td>
			<td>Polysciences Inc.</td>
			<td>00876</td>
			<td>Mounting worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tubes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Mounting worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP50 bacterial strain</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td>OP50</td>
			<td>Worm handling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm petri plates</td>
			<td>Praveen Scientific</td>
			<td>20440</td>
			<td>Worm handling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator/Capillary</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53432-921</td>
			<td>Worm handling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MIR554E</td>
			<td>Worm handling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum wire</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Worm handling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope with fluorescence attachment</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M165FC</td>
			<td>Worm handling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.3% Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>71376</td>
			<td>Nematode Growth Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% Peptone</td>
			<td>T M Media</td>
			<td>1506</td>
			<td>Nematode Growth Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mg/mL Cholesterol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8667</td>
			<td>Nematode Growth Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mM Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>223506</td>
			<td>Nematode Growth Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mM Magnesium sulphate heptahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2773</td>
			<td>Nematode Growth Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2% Agar</td>
			<td>T M Media</td>
			<td>1202</td>
			<td>Nematode Growth Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25mM Monobasic Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9791</td>
			<td>Nematode Growth Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1M Monobasic Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9791</td>
			<td>1X M9 buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.04M Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>71376</td>
			<td>1X M9 buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1M Ammonium chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>21405</td>
			<td>1X M9 buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2M Dibasic Disodium hydrogen phosphate heptahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9390</td>
			<td>1X M9 buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottles</td>
			<td>Borosil</td>
			<td></td>
			<td>Buffer storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488 nm laser</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5X objective</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>63X objective</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Photometrics</td>
			<td>Evolve 512 Delta</td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer system for Spinning Disk unit</td>
			<td>HP</td>
			<td>Intel &#174; Xeon CPU E5-2623 3.00GHz</td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Observer.Z1</td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halogen lamp</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercury Arc Lamp</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning Disk Unit</td>
			<td>Yokogawa</td>
			<td>CSU-X1</td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN2 software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J (Fiji Version)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Image analysis and processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Creative Cloud</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis and processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer system for Image Analysis</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Intel &#174; Core &#8482; i7-9700 CPU 3.00GHz</td>
			<td>Image processing/Representation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo assessment of microtubule dynamics and orientation in caenorhabditis elegans neurons

In neuronen is microtubule-oriëntatie een belangrijke beoordelaar geweest om axonen te identificeren die plus-end microtubuli en dendrieten hebben die over het algemeen een gemengde oriëntatie hebben. Hier beschrijven we methoden om de microtubule-dynamiek en -groei te labelen, in beeld te brengen en te analyseren tijdens de ontwikkeling en regeneratie van aanraakneuronen in C. elegans. Met behulp van genetisch gecodeerde fluorescerende verslaggevers van microtubule-tips hebben we de axonale microtubuli in beeld. De lokale veranderingen in microtubulegedrag die axonregeneratie na axotomie initiëren, kunnen met behulp van dit protocol worden gekwantificeerd. Deze test is aanpasbaar aan andere neuronen en genetische achtergronden om de regulatie van microtubulidynamica in verschillende cellulaire processen te onderzoeken.

Als representatief voorbeeld hebben we in vivo observatie van de EBP-kometen in de steady-state en regenererende axonen van de PLM-neuronen beschreven. PLM-neuronen bevinden zich in het staartgebied van de worm met een lang voorste proces dat een synaps en een kort posterieur proces vormt. PLM-neuronen groeien in de voorste-achterste richting dicht bij de opperhuid en zijn verantwoordelijk voor het zachte aanrakingsgevoel in de wormen. Vanwege hun vereenvoudigde structuur en vatbaarheid voor beeldvorming en microchirurgi...

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Assessment of Microtubule Dynamics and Orientation in Caenorhabditis elegans Neurons at JoVE.com

In vivo Assessment of Microtubule Dynamics and Orientation in Caenorhabditis elegans Neurons

Een protocol voor het in beeld brengen van de dynamische microtubuli in vivo met behulp van fluorescerend gelabeld Eindbindend eiwit is gepresenteerd. We beschreven de methoden om de dynamische microtubuli in het posterieure laterale microtubuli (PLM) neuron van C. elegans te labelen,in beeld te geven en te analyseren .

In vivo Beoordeling van microtubule dynamica en oriëntatie in Caenorhabditis elegans neuronen

In neurons, microtubule orientation has been a key assessor to identify axons that have plus-end out microtubules and dendrites that generally have mixed ...

Het doel van deze procedure is om de organisatie en dynamiek van de microtubuli in vivo te beoordelen. Neuronen zijn gepolariseerde cellen met verschillende axonale, dendritische en synaptische compartimenten, onderhouden door hun onderliggende cytoskelet. Microtubuli vormen de meerderheid van het neuronale cytoskelet en de dynamiek en oriëntatie bepalen belangrijke gebeurtenissen tijdens neuronale ontwikkeling en rijping.Microtubuli bestaan uit alfa- en bèta-tubuline-heterodimeren en zijn inherent gepolariseerd met zeer dynamische plus-uiteinden en stabiele min-uiteinden. Tijdens polymerisatie aan de plus-uiteinden associeert een multimoleculaire complex van eindbindende eiwitten zich tijdelijk met de protofilamenten en bevordert de assemblage van tubulinedimeren. Deze techniek zal ons helpen om neurale microtubuli in vivo te visualiseren.Met behulp van deze techniek kan men de oriëntatie en andere parameters van dynamische microtubuli bepalen tijdens de ontwikkeling en regeneratie van C.elegans neuron. We gebruiken deze reporter meestal om microtubulidynamica in sensorische neuronen te visualiseren. Men kan deze reporter echter uitdrukken in andere celtypen zoals spieren en huid om dynamische microtubuli in deze cellen te visualiseren.Fluorescerend gelabelde eindbindende eiwitten zoals EBP tot GFP verschijnen hier als kometen. De dynamiek van deze kometen is gecorreleerd met gelijktijdige groei van de microtubuli en een belangrijke indicator om de dynamiek en oriëntatie van microtubuli te meten. Om deze kometen in een specifiek celtype te observeren, worden transgenen met DNA van EBP-2 en GFP uitgedrukt onder een specifieke promotor.Voor expressie in de PLM-neuronen wordt dit transgen tot expressie gebracht onder de make for promoter. Deze transgene wormen kunnen worden bekeken onder een stereomicroscoop, waarbij fluorescentie wordt ingesteld voordat ze worden gesorteerd of gemonteerd. Voor het monteren van de wormen voor het afbeelden van EBP-kometen maken we een 10% Argos in M9-buffer.en plaats een druppel op een glazen dia. Een andere dia wordt gebruikt om de druppel in een film te drukken die stolt tot een pad. We gebruiken 0,1 micron, polystyreen kralen als montagemedium, een paar wormen worden geplukt en opnieuw opgehangen in de kraaloplossing.Een afdekslip wordt gestroopt om de wormen te immobiliseren en meegenomen voor beeldvorming. De gemonteerde exemplaren kunnen op elke fluorescentiemicroscoop worden afgebeeld met een camera voor beeldvorming met hoge resolutie. De opstelling is uitgerust met een draaiende schijfeenheid voor een snellere acquisitie en verminderde fotobleking en fototoxiciteit.De dia wordt op het podium gehouden en het veld van wormen wordt gefocust en gecentreerd met behulp van de heldere veldverlichting. Hiervoor kan een lage vergrotingsdoelstelling zoals 5X of 10X worden gebruikt. De wormen kunnen opnieuw worden scherpgesteld met een hoge vergrotingsdoelstelling zoals 63X met dezelfde verlichting.Dit objectief zorgt voor een optimale ruimtelijke resolutie voor de beeldvorming van de kometen. Een vaste centrering van het PLM-neuron wordt gedaan onder de fluorescentieverlichting om overmatige blootstelling aan licht en fotobleking van de prum te voorkomen. Voor de beeldacquisitie maken we gebruik van send software off sites.Met behulp van live imaging-configuratie in het brightfield-kanaal, richten we het staartgebied van de worm en centreren we deze in het weergaveveld. Dit wordt gevolgd door het scherpstellen van het PNM-neuron met behulp van lichtbeeldvormingsconfiguratie met 488 nanometer excitatielicht. Voor een time-lapse acquisitie wordt een experimentele setting gecreëerd waarbij belichtingstijd, duur van het tijdsverloop en het interval tussen de frames de temporele vaardigheden van beeldvorming bepalen.Voor kwantitatieve metingen moeten sommige films van EBP-kometen worden geanalyseerd op Image J, een open source-software. De verworven time-lapse wordt geopend als een multi-image streng, die kan worden bekeken als een film. In deze specifieke time-lapse zijn kometen te zien in het cellichaam, het voorste en achterste proces van het PLM-neuron.De kometen die zich van het cellichaam af bewegen, worden geclassificeerd als plus-end-out en die naar het cellichaam bewegen, worden geclassificeerd als minus-end-out. Om de analyse te beginnen, wordt een gesegmenteerde lijn getrokken over het gebied van belang, in dit geval het inwendige proces van het PLM-neuron. Dit lijnsegment wordt omgezet in een kymograaf met behulp van de reslice-functie van afbeeldingen.Een kymograaf is een afstandstijdbeeld met diagonale vouwen die de bewegende kometen voorstellen. Op deze sporen kunnen rechte lijnsegmenten worden getekend en met behulp van het analysemenu kunnen meetparameters worden ingesteld. Deze parameters kunnen worden geconverteerd naar standaard meetbare grootheden en eenheden in het data-analyseprogramma zoals Excel.De breedte van het spoor komt overeen met de groeilengte. De hoogte vertegenwoordigt de groeiduur en de hoek van de plooi geeft de richting van de kometen. Deze kometen kunnen verder worden ingedeeld in plus-end-out en minus-end-out, om de relatieve oriëntatie van microtubuli te vinden.Transgene expressie van EBTA GFP kan worden aangepast om microtubulidynamica in verschillende cellulaire contexten te observeren, zoals nieuwe regeneratie. Om de microtubule-dynamiek in de gebiedsclassificatie axonen te observeren, wordt het axon verwond met behulp van een femtoseconde laser, die het axon precies kan doorsnijden zonder enorme nevenschade te veroorzaken. Na de verwonding kunnen de wormen worden teruggevonden op gezaaide motorplaten voor latere waarnemingen.PLM-neuronen vertonen robuuste exoneree-regeneratie, die al zes uur na het letsel kan worden waargenomen. Om te voorkomen dat fototoxiciteit nieuwe rechten regenereert, wordt live beeldvorming uitgevoerd in een draaiende schijfmicroscoop. Time-lapse acquisities van de regenererende axonen kunnen later worden omgezet in kymografen voor de analyse van kometen.De afstandsduur en richting van de kometen kan dan worden geïnterpreteerd in termen van microtubule oriëntatie en dynamiek. Mijn kritische oriëntatie en dynamiek zijn belangrijke bepalende voor civiele cellulaire processen zoals celdeling, migratie en onderhoud van cellulaire architectuur. Hoewel er veel hulpmiddelen beschikbaar zijn voor het meten van microtubulidynamica, kan in vivo meting een uitdaging zijn.Autoflorescentie, fototoxiciteit, overexpressie-artefact en variabele gerapporteerde intensiteiten zijn enkele van de moeilijkheden die worden ondervonden tijdens live observatie van eindbindende eiwitten, om de microtubulidynamica te beoordelen. Door gebruik te maken van een geïntegreerd transgeen met lage concentratie gedeporteerd DNA en beeldvorming met lage verlichting, heeft deze studie methoden aangepakt om enkele van deze uitdagingen te verminderen. De hier beschreven beeldvormings- en analysemodules kunnen worden uitgebreid naar andere op microtubuli gebaseerde reporters en eiwittransport.Dit is niet alleen van toepassing op C.elegance neuronen, maar kan ook worden toegepast op andere celtypen en modelsystemen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Assessment of Microtubule Dynamics and Orientation in Caenorhabditis elegans Neurons

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissectie en Cultuur van Commissural neuronen van het ruggenmerg Embryonic

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

In vivo Laser axotomy in C. elegans

Neurons communicate with other cells via axons and dendrites, slender membrane extensions that contain pre- or post-synaptic specializations. If a neuron ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescerende Labeling Maakt Gerichte Extracellulair Single-unit Opnemen van geïdentificeerde neuronen<em&gt; In vivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Functionele neuroimaging Met behulp van ultrasone bloed-hersen barrière verstoring en mangaan-enhanced MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

In vivo neuronale calcium Imaging in C. elegans

The nematode worm C. elegans is an ideal model organism  for relatively simple, low cost neuronal imaging in vivo. Its small transparent body and simple, ...

Brain Slice Biotinylation: An Ex Vivo Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

Brain Slice Biotinylation: An Ex Vivo Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

Brain Slice Biotinylatie: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Aanpak Regiospecifieke van plasma membraaneiwit Trafficking Meet in Adult Neuronen

Regulated endocytic trafficking is the central mechanism facilitating a variety of neuromodulatory events, by dynamically controlling receptor, ion ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaan<em&gt; Ex vivo</em&gt; Functioneel testen van Two netvliezen door<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

Ratiometric Calcium beeldvorming van individuele neuronen in gedragen Caenorhabditis Elegans

It has become increasingly clear that neural circuit activity in behaving animals differs substantially from that seen in anesthetized or immobilized ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparaten en protocollen voor de hele cel Patch klem opname van Xenopus laevis Tectal neuronen

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...

Ballistic Labeling of Pyramidal Neurons in Brain Slices and in Primary Cell Culture

Ballistische etikettering van piramidale neuronen in hersenschijfjes en in de primaire celcultuur

It has been reported that the size and shape of dendritic spines is related to their structural plasticity. To identify the morphological structure of ...