Name: manual blot-and-plunge freezing of biological specimens for single-particle cryogenic electron microscopy
Uploaded: 2022-02-07T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy at JoVE.com

Vi takker Herzik lab medlemmer for kritisk tænkning og give feedback på dette manuskript og videoindhold. M.A.H.Jr. er støttet af NIH R35 GM138206 og som Searle Scholar. H.P.M.N er støttet af Molecular Biophysics Training Grant (NIH T32 GM008326). Vi vil også gerne takke Bill Anderson, Charles Bowman, og Dr. Gabriel Lander på Scripps Research Institute for hjælp til at designe, samle, og teste den manuelle stemplet vist i videoen.

1. Forbered det manuelle kastemiljø
BEMÆRK: Anslået driftstid: 5-30 minutter
<ol><li>Find det manuelle stempel i et 4 °C koldt rum, hvor en luftfugter kan placeres sammen for at opretholde rummet tæt på 100% relativ luftfugtighed (RH) (figur 1A). FORSIGTIG: Kontakt institutionens retningslinjer for miljøsundhed og sikkerhed for sikker placering af det manuelle stempel og de anbefalede operationer.</li>
	<li>Før gitterforberedelse skal du tænde for lu...

Vitrificeringen af biologiske prøver til billeddannelse ved enkeltpartikel kryogen elektronmikroskopi (cryoEM) er fortsat et kritisk vigtigt skridt for vellykket strukturbestemmelse. Den manuelle blot-and-plunge metode, der er beskrevet i denne protokol repræsenterer en omkostningseffektiv, pålidelig og robust metode til hurtigt at fryse biologiske prøver i tynde film af glasagtig is til kryoEM billeddannelse. Ved hjælp af de metoder, der er skitseret i manuskriptet, vil forskerne være i stand til at samle og betje...

Enkelt-partikel kryogen elektronmikroskopi (cryoEM) er en kraftfuld strukturel teknik, der kan bruges til at løse strukturer af dynamiske biologiske prøver til næsten atomare opløsning1,2,3,4. Faktisk er de seneste fremskridt inden for direkte elektrondetektorteknologier4,5,6,7,8,9,10, forbedringer i elektronkilder4,11,12,13,14 og elektromagnetisk linsestabilitet15 kombineret med den fortsatte udvikling af dataindsamling 16,17 og analyse softwarepakker18,19, har gjort det muligt for forskere til nu rutinemæssigt at bestemme strukturer af velopdragne prøver til 3 Å opløsning eller bedre4,11,13,14,20,21,22,23 . På trods af disse forbedrede billed- og databehandlingsfunktioner er kryoEM-gitterforberedelse fortsat den største hindring for vellykket strukturbestemmelse med høj opløsning og fungerer ofte som en betydelig flaskehals i EM-arbejdsgangen24,25,26,27.
CryoEM er afhængig af billeddannelse af biologiske prøver i vandige opløsninger, der er frosset til at danne en tynd film af "glaslignende" is - en proces kendt som vitrificering - der bevarer den indfødte biokemiske tilstand. Vitrifikation af biologiske prøver til cryoEM går tilbage over 40 år28,29,30 og mange teknikker og udstyr, der er udviklet til denne proces stole på den oprindeligt detaljerede blot-and-plunge metode31,32,33,34,35 , hvorved der påføres en lille prøvevolumen (f.eks. 1-5 μL) på et specialiseret EM-gitter, før den overskydende opløsning fjernes ved hjælp af nettets fysiske interaktion med blottingpapir. Timingen af denne proces er normalt empirisk bestemt for hver prøve som en kritisk komponent i frysning prøver er tykkelsen af glaslegeme is film - hvis isen er for tyk derefter billeddannelse kvalitet forringes dramatisk på grund af øget spredning af elektronstrålen, mens is, der er for tynd kan begrænse protein orienteringer og / eller udelukke partikler fra midten af gitteret folie huller36 . Denne afhængighed af den perfekte istykkelse til enkeltpartikel kryoEM har ført til en bred vifte af teknikker og udstyr, der kan fryse prøver, herunder robotteknologi37,38, mikrofluidics42, og ultralyd eller sprøjtning enheder27,39,40,41,42,43,44 . I de senere år er nogle af de mest populære prøveforberedelsesenheder afhængige af brugen af robotteknologi til automatiseret frysning af prøver ved hjælp af blot-and-plunge-teknikken45. Mens disse enheder er designet til at reproducer korrekt istykkelse til billeddannelse, forbliver de ofte for dyre for individuelle laboratorier at købe og betjene og findes generelt inden for cryoEM-faciliteter til timepriser for brug. I de senere år er den oprindelige manuelle blot-and-plunge teknik kommet tilbage i øget brug3,47,48,49,50,51,52. Faktisk kan en manuelt betjent blot-and-plunge enhed opnå høj kvalitet cryoEM gitre til en brøkdel af omkostningerne ved robot kolleger. Desuden giver manuel blotting også flere brugere kontrol over blotting, da forskere kan justere typen af blotting (dvs. back-blotting af nettet, front-blotting af nettet osv.) og blotting tid baseret på hver enkelt prøve og forskningsspørgsmål.
I denne artikel giver vi detaljer om, hvordan man effektivt fryser biologiske prøver ved hjælp af en traditionel manuel blot-and-plunge vitrifikationsenhed kombineret med en specialdesignet dewar platform53. Bedste praksis, herunder forberedelse af cryogen, nethåndtering, prøveanvendelse og blotting samt almindelige faldgruber og anbefalinger til, hvordan man overvinder disse forhindringer, leveres. Der diskuteres råd om, hvordan man øger reproducerbarheden af istykkelse mellem gitterpræparater, og hvordan prøvepletter ændres baseret på biologisk prøvetype. I betragtning af de lave omkostninger forbundet med køb og drift af den manuelle stempel beskrevet i dette manuskript, laboratorier over hele kloden kan forberede biologiske prøver til cryoEM i en omkostningseffektiv og reproducerbar måde.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4 slot grid storage box</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>160-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 gauge flat metal dispensing tip</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07M7YWWLT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22x22 mm square glass coverslip</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9802-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm glass Petri dish to store grids</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-747A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm glass Petri dish to store Whatman paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-747D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>150 mm glass Petri dish to store Whatman paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-747F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 mL beaker</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-555-25B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue styrofoam dewar</td>
			<td>Spear Lab</td>
			<td>FD-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brass ethane vessel</td>
			<td>Lasco</td>
			<td>17-4075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamping tweezers</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>38825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate task wipes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-stage regulator with control valve</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>Y12N245D580-AG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dewer grid base</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane platform</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane propane tank</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>ET PR50ZU-G</td>
			<td>ethane (50%) : propane (50%) in a high-pressure tank</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane tank</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>UN1035</td>
			<td>ethane (100%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexible arm task light</td>
			<td>Amscope</td>
			<td>LED-11CR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grids (UltrAufoil R 1.2/1.3 300 mesh)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Q325AR1.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidifier</td>
			<td>Target</td>
			<td>719438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hygrometer</td>
			<td>ThermoPro</td>
			<td>B01H1R0K68</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab coat</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen dewar</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LD4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen gloves</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>19-059-925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual plunger stand (black stand + foot pedal)</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mark 5 (plunging platform)</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82026-424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P20 pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>13-690-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>E0030124286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips</td>
			<td>ibis scientific</td>
			<td>63300005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07HMR4H8G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safety glasses</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>Fiskars 01-004761J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw driver</td>
			<td>Ironside</td>
			<td>354711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-901-10R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer to transfer grid box</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>LTS-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon tubing</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-171-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman blotting paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1001-090</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

manual blot-and-plunge freezing of biological specimens for single-particle cryogenic electron microscopy

Imaging biologiske prøver med elektroner til høj opløsning struktur bestemmelse af enkelt-partikel kryogen elektronmikroskopi (cryoEM) kræver et tyndt lag af glasagtig is, der indeholder biomolekyler af interesse. På trods af talrige teknologiske fremskridt i de seneste år, der har drevet enkelt-partikel cryoEM på forkant med strukturel biologi, de metoder, hvormed prøver er vitrified for høj opløsning billeddannelse ofte forbliver den sats-begrænsende skridt. Selv om talrige nylige bestræbelser har givet midler til at overvinde forhindringer, der ofte opstår under prøve vitrificering, herunder udvikling af nye prøvestøtter og innovativ vitrifikationsinstrumentering, forbliver det traditionelle manuelt betjente stempel et dagligt syn i kryoEM-samfundet på grund af de lave omkostninger til køb og brugervenlighed. Her giver vi detaljerede metoder til brug af en standard, guillotine-stil manuelt betjent blot-and-plunge enhed til vitrificering af biologiske prøver til høj opløsning billeddannelse af enkelt-partikel cryoEM. Derudover beskrives ofte stødte problemer og fejlfindingsanbefalinger til, hvornår et standardpræparat ikke giver en passende prøve.

Vellykket udførelse af blot-and-plunge protokol beskrevet her vil resultere i et tyndt, ensartet lag af glasagtig is, der er fri for enhver sekskantet is, forurenende stoffer, og store gradienter af ubrugelig is, som kan observeres under elektronmikroskop (Figur 3). Inkonsekvent kontakt af blotting papir med gitteret overfladen, for tidligt at fjerne blotting papir, eller flytte blotting papir under gitter kontakt kan forringe kvaliteten af glaslegemet is og føre til inkonsekvent is tykkel...

Watch this Scientific Journal Video about Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy at JoVE.com

Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy

Dette manuskript skitserer blot-and-plunge metode til manuelt at fryse biologiske prøver til enkelt-partikel kryogen elektronmikroskopi.

Manuel blot-og-plunge frysning af biologiske prøver til enkelt-partikel kryogen elektronmikroskopi

Imaging biological specimens with electrons for high-resolution structure determination by single-particle cryogenic electron microscopy (cryoEM) requires ...

Den manuelle kastemetode, der er beskrevet her, er en omkostningseffektiv og pålidelig metode til fremstilling af prøver til transmissionselektronmikroskopi. I denne video vil vi demonstrere, hvordan du opsætter det manuelle stempel, forbereder cryogen og udfører manuel blotting og kaste af EM-gitre. Forbered det manuelle kastemiljø.Denne procedure skal udføres i et koldt rum, der opretholdes ved 40 grader Celsius med fugtighed på mere end 95%Vi anbefaler at bruge de materialer, der vises her og som beskrevet i onlineprotokollen til manuel blotting og kaste. Forbered cryogen Dewar og Manuel Stemplet. For at samle cryogen Dewar skal du først installere platformbasen i bunden af den blå styrofoam Dewar, hvilket sikrer, at den er flad og jævn.Placer derefter ethanbeholderholderen oven på perronbasen, og sæt messingethanbeholderen. Endelig placere spinning gitter opbevaring platform. Find derefter den kastede Dewar til bunden af det manuelle stempel.Centrer ethanbeholderen under den faldende arm og fastgør den kastende Dewar til basen. For at indstille den manuelle kastehøjde skal du først fastgøre nyt tape til bunden af den faldende arm. Derefter fastgøres et par fastspændings pincet ved sikkert at vikle båndet rundt om den faldende arm og pincetbasen.Sørg for, at pincet er fast fastgjort ved at trykke på dem let. Hold den faldende arm og sænk langsomt pincet ind i messing ethanbeholderen ved at trykke fodpedalen. Juster placeringen af den kastede Dewar, så pincet lokalisere til midten af messing ethan fartøj.Pincetens spidser må ikke komme i kontakt med størrelsen eller bunden af messingethanbeholderen for at undgå skader på pincet og manuelt stempel. Når positionen er indstillet, skal du nulstille den manuelle kastearm. Gør Cryogen klar.Cryogen-forberedelse skal udføres i et godt ventileret rum, og der skal til enhver tid bæres ordentlige personlige værnemidler. Til at begynde med, dårlig flydende nitrogen direkte ind i den kasteDe Dewar, stopper, når det flydende nitrogen niveau når toppen af messing ethan fartøj. Systemet skal være koldt nok til at fortsætte, efter at det flydende nitrogen holder op med at boble voldsomt.Det tager cirka fem minutter. Ethan kommer som en komprimeret gas og skal kondenseres. For at indstille gasstrømmen til optimal ethankondensering skal spidsen af ethangasledningen indsættes i et 250 mil bægervand og observere boblen.Gasstrømmen skal producere en lind strøm af bobler, der ikke voldsomt forstyrrer vandets overflade. For at begynde at kondensere ethan skal du placere spidsen af ethangasledningen i bunden af messingethanbeholderen. Rør langsomt metalspidsen og begynd at flydende ethanen.Så snart ethanen begynder at køle af, vil den lave en hørbar lyd. Fyld messing ethanbeholderen til tre fjerdedele fulde af flydende ethan. Top off den kasteDejerne med flydende nitrogen, så den rører messingethanbeholderen, men ikke spilder ind i den.Tilsætning af flydende nitrogen er nødvendig for ensartet ethanfrysning. Placer skumlåget på den blå kaste Dewar, og lad ethanen til fuldt størkne. Genstart ethangasstrømmen, og placer forsigtigt spidsen af gasledningen i den faste ethan.Det er vigtigt at placere spidsen lodret ind i beholderen og dispensere ethan i bunden. Rør langsomt metalspidsen for at smelte ethanen og bringe niveauet af flydende ethan op til toppen af beholderen. Luk låget i ca. et minut og lad ethanen størkne rundt om messingbeholderens kanter, indtil to til tre millimeter fast ethan er synlige.Ethanen er nu ved en temperatur, der er ideel til frysning af biologiske prøver. Fastgør den kastende Dewar forsigtigt til bunden af det manuelle stempel. Fastgør et par fastspænding pincet ved sikkert indpakning båndet omkring kaste arm og pincet base.Hold den faldende arm og sænk langsomt pincet ind i den flydende ethan ved at trykke fodpedalen. Juster placeringen af den kastede Dewar, så pincet lokaliserer til midten af den flydende ethan, så du undgår kontakt med den faste ethanring. Forbered kastematerialer og tilbehør.Forbered blotting papir ved at skære hver cirkulære filter papir i ca en centimeter brede strimler. Undgå at røre midten af blotting papir og kassere de mindre ende stykker. Det er vigtigt at sikre, at blotting papirstrimlerne er tørre, rene og fri for forurenende stoffer.Før du kaster, placere gitter kasser i kaste Dewar i de rette slots. Sørg for, at gitteret dækker vores frie til at rotere. Forbered CryoEM-prøver ved frysning af dyk.På grund af mangfoldigheden af gitter- og gitterpræparater skal du følge anbefalede protokoller for at gøre gitrene hydrofile. For at håndtere gitrene korrekt skal du bruge rene, tørre fastspændings pincet til at afhente de hydrofile gitre ved den ydre ring. Skub plastikklemmen for at fastgøre gitteret, og tryk forsigtigt på pincet for at sikre, at gitteret er korrekt fastspændt.Påfør tre mikroliter af prøve på forsiden af gitteret, der holdes i spændet pincet. Fastgør pincet fast på den manuelle kastearm ved at vikle båndet rundt om pincetbasen. Prøven er nu klar til at blive renset og kastet frosset.Hold hver ende af en ren strimmel blotting papir mellem dine pegefingre og tommelfingre. Hvil hænderne på kanten af den kastede Dewar for at etablere en stabil position. Blottingpapiret skal være ca. en centimeter fra gitterets overflade.Bøj blottingpapiret, indtil midten kontakter gitteret. Det er vigtigt, at blottingpapiret er parallelt med gitteroverfladen for at give mulighed for jævn kontakt og for at forhindre gitterskader. Når den mobile væskefront holder op med at sprede sig, skal du begynde at tælle.Blot nettet i fem sekunder. Knips fingrene fra hinanden, spænd blottingpapiret og fjern det hurtigt fra gitterets overflade. Tryk samtidig på fodpedalen for at slippe den manuelle kastearm og kaster pincet, der holder gitteret ind i den flydende ethan.Hold det friskfrosne gitter i den flydende ethan, tag forsigtigt pincet fra den manuelle kastearm. Forsigtigt un-klemme pin pincet så gitteret er aftageligt. Flyt gitteret ind i det flydende nitrogenbeholder under messingethanbeholderen med en hurtig bevægelse fra ethanen til det flydende nitrogen.Placer gitteret i gitterboksen. repræsentative resultater. Fra denne video, bør forskerne være i stand til at forberede CryoEM gitre, som denne, med mange kvadrater, der indeholder tynde film af glasagtig is til høj opløsning billeddannelse.Prøvekoncentrationen og blottingtiden kan justeres for at optimere partikeltætheden. Her vil vi demonstrere den fulde arbejdsgang for frysning af CryoEM-prøver ved hjælp af blot- og plunge-metoden. Brug en ren fastspænding pincet til at afhente et nyt gitter og sikre nettet på plads.Påfør tre mikroliter af prøven på den hydrofile side af nettet og fastgør pincet på den manuelle kastearm ved at vikle båndet rundt om pincethåndtaget. Placer blottingpapiret parallelt med gitteroverfladen, og bøj forsigtigt blottingpapiret mod gitteret for at starte blotting. Efter den ønskede tid, flytte blotting papir i en snapping bevægelse væk fra gitteret overfladen, mens deprimerende fodpedalen til at frigive den faldende arm, kaster gitteret ind i den flydende ethan.Slap forsigtigt af båndet fra omkring pincet og den manuelle kastearm. Med en hurtig bevægelse overføres gitteret hurtigt fra ethanbeholderen til det flydende nitrogenbeholder. Placer gitteret i gitterets opbevaringsboks, og pak pincet ind i en Kim Wipe til tør;gentag.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

High-resolution single particle analyse fra elektronkryo-mikroskopi billeder ved hjælp af SPHIRE

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Analysis of &#946;-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analysis of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analyse af β-Amyloid-induceret afvigelser Fibrin blodprop strukturen af spektroskopi og Scanning elektronmikroskopi

This article presents methods for generating in vitro fibrin clots and analyzing the effect of beta-amyloid (A&#946;) protein on clot formation and ...

Expression and Purification of the Human Lipid-sensitive Cation Channel TRPC3 for Structural Determination by Single-particle Cryo-electron Microscopy

Proteinekspression og -oprensning af menneskelige Lipid-følsomme kation kanal TRPC3 for Strukturbestemmelse af enkelt-partikel kryo-elektronmikroskopi

Transient receptor potential channels (TRPCs) of the canonical TRP subfamily are nonselective cation channels that play an essential role in calcium ...

Production of Dynein and Kinesin Motor Ensembles on DNA Origami Nanostructures for Single Molecule Observation

Produktion af dynein og Kinesin motor ensembler på DNA origami nanostrukturer til observation af et enkelt molekyle

Cytoskeletal motors are responsible for a wide variety of functions in eukaryotic cells, including mitosis, cargo transport, cellular motility, and ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Hurtig gitterforberedelse til tidstilslutt kryo-elektronmikroskopi

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Preparing Lamellae from Vitreous Biological Samples Using a Dual-Beam Scanning Electron Microscope for Cryo-Electron Tomography

Forberedelse af lameller fra glasagtige biologiske prøver ved hjælp af et dobbeltstrålescanningselektronmikroskop til kryo-elektrontomografi

Presented here is a protocol for preparing cryo-lamellae from plunge-frozen grids of Plasmodium falciparum-infected&#160;human erythrocytes, which could ...

Single Particle Cryo-Electron Microscopy: From Sample to Structure

Enkelt partikel kryo-elektronmikroskopi: Fra prøve til struktur

Cryo-electron microscopy (cryoEM) is a powerful technique for structure determination of macromolecular complexes, via single particle analysis (SPA). The ...

Micropatterning Transmission Electron Microscopy Grids to Direct Cell Positioning within Whole-Cell Cryo-Electron Tomography Workflows

Micropatterning Transmission ElektronMikroskopiGitre til direkte cellepositionering i hele celle kryo-elektrontomografi arbejdsprocesser

Whole-cell cryo-electron tomography (cryo-ET) is a powerful technology that is used to produce nanometer-level resolution structures of macromolecules ...

Quantification of Subcellular Glycogen Distribution in Skeletal Muscle Fibers using Transmission Electron Microscopy

Kvantificering af subcellulær glykogenfordeling i skeletmuskelfibre ved hjælp af transmissionselektronmikroskopi

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This ...

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy (cryo-EM) Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy cryo-EM Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

En robust arbejdsgang for behandling af kryo-elektronmikroskopi (cryo-EM) med cryoSPARC, RELION og Scipion

Recent advances in both instrumentation and image processing software have made single-particle cryo-electron microscopy (cryo-EM) the preferred method ...