Name: manual blot-and-plunge freezing of biological specimens for single-particle cryogenic electron microscopy
Uploaded: 2022-02-07T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy at JoVE.com

Vi takker Herzik-laboratoriemedlemmene for kritisk tenkning og tilbakemelding på dette manuskriptet og videoinnholdet. M.A.H.Jr. støttes av NIH R35 GM138206 og som Searle Scholar. H.P.M.N støttes av Molecular Biophysics Training Grant (NIH T32 GM008326). Vi vil også takke Bill Anderson, Charles Bowman og Dr. Gabriel Lander ved Scripps Research Institute for hjelp til å designe, montere og teste det manuelle stempelet som vises i videoen.

1. Forbered det manuelle stupemiljøet
MERK: Beregnet driftstid: 5-30 minutter
<ol><li>Finn det manuelle stempelet i et kaldtrom på 4 °C der en luftfukter kan plasseres samtidig for å opprettholde rommet nær 100 % relativ fuktighet (RH) (figur 1A). FORSIKTIG: Ta kontakt med institusjonens retningslinjer for miljøhelse og sikkerhet for sikker plassering av det manuelle stempelet og anbefalte operasjoner.</li>
	<li>Før nettforberedelse, slå på luftfukte...

Vitrifisering av biologiske prøver for avbildning ved enpartikkel kryogene elektronmikroskopi (cryoEM) er fortsatt et kritisk viktig skritt for vellykket strukturbestemmelse. Den manuelle blot-and-plunge-metoden som er beskrevet i denne protokollen representerer en kostnadseffektiv, pålitelig og robust metode for rask frysing av biologiske prøver i tynne filmer av glassaktig is for kryoEM-avbildning. Ved hjelp av metodene som er skissert i manuskriptet, vil forskerne kunne montere og betjene det manuelle stempelet, fo...

Enpartikkel kryogene elektronmikroskopi (cryoEM) er en kraftig strukturell teknikk som kan brukes til å løse strukturer av dynamiske biologiske prøver til nesten atomoppløsning1,2,3,4. Faktisk, nylige fremskritt innen direkte elektrondetektorteknologier4,5,6,7,8,9,10, forbedringer i elektronkilder4,11,12,13,14, og elektromagnetisk linsestabilitet15, kombinert med fortsatt utvikling av datainnsamling 16,17 og analyseprogramvarepakker18,19, har gjort det mulig for forskere å nå rutinemessig bestemme strukturer av veloppdragne prøver til 3 Å-oppløsning eller bedre4,11,13,14,20,21,22,23 . Til tross for disse forbedrede bilde- og databehandlingsfunksjonene, er cryoEM-nettforberedelse fortsatt det største hinderet for vellykket strukturbestemmelse med høy oppløsning og fungerer ofte som en betydelig flaskehals i EM-arbeidsflyten24,25,26,27.
CryoEM er avhengig av avbildning av biologiske prøver i vandige løsninger som er frosset for å danne en tynn film av "glasslignende" is - en prosess kjent som vitrifisering - som bevarer den innfødte biokjemiske tilstanden. Vitrifisering av biologiske prøver for kryoEM går tilbake over 40 år28,29,30 og mange teknikker og utstyr som er utviklet for denne prosessen, er avhengig av den opprinnelig detaljerte blot-and-plunge-metoden31,32,33,34,35 , der et lite utvalgsvolum (f.eks. 1-5 μL) påføres et spesialisert EM-rutenett før den overskytende løsningen fjernes ved hjelp av fysisk interaksjon av rutenettet med blotting papir. Tidspunktet for denne prosessen er vanligvis empirisk bestemt for hver prøve som en kritisk komponent i fryseprøver er tykkelsen på glasslegemet isfilm - hvis isen er for tykk, forverres bildekvaliteten dramatisk på grunn av økt spredning av elektronstrålen, mens is som er for tynn kan begrense proteinretninger og / eller utelukke partikler fra midten av rutenettfoliehullene36 . Denne avhengigheten av den perfekte istykkelsen for enpartikkelkryoEM har ført til et bredt spekter av teknikker og utstyr som kan fryse prøver, inkludert robotikk37,38, mikrofluidikk42 og ultralyd- eller sprøyteenheter27,39,40,41,42,43,44 . I de senere år er noen av de mest populære prøveforberedelsesenhetene avhengige av bruk av robotikk for automatisert frysing av prøver ved hjelp av blot-and-plunge-teknikken45. Selv om disse enhetene er designet for å reprodusere riktig istykkelse for avbildning, forblir de ofte for dyre for individuelle laboratorier å kjøpe og betjene og finnes vanligvis i cryoEM-anlegg til timepriser for bruk. De siste årene har den opprinnelige manuelle blot-and-plunge-teknikken kommet tilbake til økt bruk3,47,48,49,50,51,52. Faktisk kan en manuelt betjent blot-and-plunge-enhet oppnå høykvalitets cryoEM-rutenett til en brøkdel av kostnaden for robotiske kolleger. Videre gir manuell blotting også flere brukere kontroll over blotting som forskere kan justere typen blotting (dvs. back-blotting av rutenettet, front-blotting av rutenettet, etc.), og blotting tid basert på hver enkelt prøve og forskningsspørsmål.
I denne artikkelen gir vi detaljer om hvordan du effektivt fryser biologiske prøver ved hjelp av en tradisjonell manuell blot-and-plunge vitrification-enhet kombinert med en spesialdesignet dewar-plattform53. Beste praksis, inkludert forberedelse av kryogen, rutenetthåndtering, prøveapplikasjon og blotting, samt vanlige fallgruver og anbefalinger om hvordan du kan overvinne disse hindringene, er gitt. Råd om hvordan du øker istykkelsen reproduserbarhet mellom nettpreparater og hvordan du modifiserer prøveblussing basert på biologisk prøvetype diskuteres. Gitt de lave kostnadene forbundet med kjøp og drift av det manuelle stempelet som er beskrevet i dette manuskriptet, kan laboratorier over hele kloden forberede biologiske prøver for kryoEM på en kostnadseffektiv og reproduserbar måte.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4 slot grid storage box</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>160-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 gauge flat metal dispensing tip</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07M7YWWLT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22x22 mm square glass coverslip</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9802-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm glass Petri dish to store grids</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-747A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm glass Petri dish to store Whatman paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-747D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>150 mm glass Petri dish to store Whatman paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-747F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 mL beaker</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-555-25B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue styrofoam dewar</td>
			<td>Spear Lab</td>
			<td>FD-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brass ethane vessel</td>
			<td>Lasco</td>
			<td>17-4075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamping tweezers</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>38825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate task wipes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-stage regulator with control valve</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>Y12N245D580-AG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dewer grid base</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane platform</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane propane tank</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>ET PR50ZU-G</td>
			<td>ethane (50%) : propane (50%) in a high-pressure tank</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane tank</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>UN1035</td>
			<td>ethane (100%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexible arm task light</td>
			<td>Amscope</td>
			<td>LED-11CR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grids (UltrAufoil R 1.2/1.3 300 mesh)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Q325AR1.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidifier</td>
			<td>Target</td>
			<td>719438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hygrometer</td>
			<td>ThermoPro</td>
			<td>B01H1R0K68</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab coat</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen dewar</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LD4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen gloves</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>19-059-925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual plunger stand (black stand + foot pedal)</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mark 5 (plunging platform)</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82026-424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P20 pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>13-690-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>E0030124286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips</td>
			<td>ibis scientific</td>
			<td>63300005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07HMR4H8G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safety glasses</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>Fiskars 01-004761J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw driver</td>
			<td>Ironside</td>
			<td>354711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-901-10R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer to transfer grid box</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>LTS-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon tubing</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-171-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman blotting paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1001-090</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

manual blot-and-plunge freezing of biological specimens for single-particle cryogenic electron microscopy

Avbildning av biologiske prøver med elektroner for høyoppløselig strukturbestemmelse ved enpartikkel kryogene elektronmikroskopi (cryoEM) krever et tynt lag med glassaktig is som inneholder biomolekylene av interesse. Til tross for mange teknologiske fremskritt de siste årene som har drevet single-partikkel cryoEM i forkant av strukturell biologi, forblir metodene som prøver er vitrifisert for høyoppløselig avbildning ofte det hastighetsbegrensende trinnet. Selv om mange nylige anstrengelser har gitt midler til å overvinne hindringer som ofte oppstår under prøve vitrifisering, inkludert utvikling av nye prøvestøtter og innovativ vitrifiseringsinstrumentering, forblir det tradisjonelle manuelt opererte stempelet en stift i cryoEM-samfunnet på grunn av de lave kostnadene ved kjøp og enkel betjening. Her tilbyr vi detaljerte metoder for bruk av en standard, giljotin-stil manuelt betjent blot-and-plunge-enhet for vitrifisering av biologiske prøver for høyoppløselig avbildning ved enpartikkelkryoEM. I tillegg er det også beskrevet vanlige problemer og feilsøkingsanbefalinger for når et standardpreparat ikke gir et passende eksemplar.

Vellykket utførelse av blot-and-plunge-protokollen som er beskrevet her, vil resultere i et tynt, ensartet lag med glassaktig is som er fri for sekskantet is, forurensninger og store gradienter av ubrukelig is som kan observeres under elektronmikroskopet (figur 3). Inkonsekvent kontakt med blottingspapiret med rutenettoverflaten, for tidlig fjerning av blottingspapiret eller flytting av blottingspapiret under rutenettkontakt kan redusere kvaliteten på glassisen og føre til inkonsekvent is...

Watch this Scientific Journal Video about Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy at JoVE.com

Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy

Dette manuskriptet skisserer blot-and-plunge-metoden for å fryse biologiske prøver manuelt for enpartikkelkryogen elektronmikroskopi.

Manuell flekk-og-dypfrysing av biologiske prøver for kryogen elektronmikroskopi med én partikkel

Imaging biological specimens with electrons for high-resolution structure determination by single-particle cryogenic electron microscopy (cryoEM) requires ...

Den manuelle stupemetoden som er beskrevet her, er en kostnadseffektiv, pålitelig metode for å forberede prøver for transmisjonselektronmikroskopi. I denne videoen vil vi demonstrere hvordan du setter opp det manuelle stempelet, forbereder kryogen og utfører manuell oppblåsthet og dypping av EM-gitter. Klargjør det manuelle stempelmiljøet.Denne prosedyren bør utføres i et kaldt rom opprettholdt ved 40 grader Celsius med fuktighet på mer enn 95%Vi anbefaler å bruke materialene som vises her og som beskrevet i online-protokollen for manuell blotting og stuping. Forbered kryoogen dewar og manuell stempel. For å montere cryogen Dewar, installer først plattformbasen på bunnen av den blå styrofoam Dewar, og sørg for at den er flat og jevn.Plasser deretter etanbeholderen på toppen av plattformbasen og sett inn messingetanbeholderen. Til slutt plasserer du den roterende rutenettlagringsplattformen. Deretter lokaliserer du den stupende Dewar til bunnen av det manuelle stempelet.Sentrer etanfartøyet under den stupende armen og fest den stupende Dewar til basen. For å stille inn den manuelle stupehøyden, fest først fersk tape til bunnen av stupearmen. Deretter fester du et par klemme pinsett ved å pakke tapen sikkert rundt den dype armen og pinsettbasen.Sørg for at pinsettene er godt festet ved å tappe dem lett. Hold den stupende armen og senk pinsettene langsomt ned i messingetanfartøyet ved å trykke ned fotpedalen. Juster plasseringen av den stupende Dewar slik at pinsettene ligger midt på messingetanfartøyet.Tweezers spisser bør ikke kontakte størrelsen eller bunnen av messing etanfartøyet for å unngå skade på pinsett og manuell stempel. Når posisjonen er stilt inn, tilbakestiller du den manuelle stempelarmen. Forbered kryogenet.Kryogenpreparat bør utføres i et godt ventilert rom, og riktig personlig verneutstyr bør brukes til enhver tid. Til å begynne med stopper dårlig flytende nitrogen direkte inn i den dype Dewar, når det flytende nitrogennivået når toppen av messingetanfartøyet. Systemet skal være kaldt nok til å fortsette etter at det flytende nitrogenet slutter å boble voldsomt.Dette vil ta omtrent fem minutter. Etan kommer som en komprimert gass og må kondenseres. For å stille inn gassstrømmen for optimal etankondensering, sett spissen av etangassledningen inn i et 250 mils vannbeholder og observer boblen.Gassstrømmen skal produsere en jevn strøm av bobler som ikke forstyrrer overflaten av vannet voldsomt. For å begynne å kondensere etan, plasser spissen av etangasslinjen på bunnen av messing etanfartøyet. Rør metallspissen langsomt og begynn å flytende etanet.Så snart etanet begynner å avkjøles, vil det lage en hørbar lyd. Fyll messing etanfartøyet til tre fjerdedeler fullt av flytende etan. Topp av den dype Dewar med flytende nitrogen, og sørg for at den berører messing etanfartøyet, men ikke søler inn i det.Tilsetning av flytende nitrogen er nødvendig for jevn etanfrysing. Plasser skumlokket på den blå stupende Dewar, og la etanet størkne fullt ut. Start etangassstrømmen på nytt og plasser forsiktig spissen av gassledningen i det faste etanet.Det er viktig å plassere spissen vertikalt i fartøyet og dispensere etan i bunnen. Rør sakte metallspissen for å smelte etanet og bringe nivået av flytende etan opp til toppen av fartøyet. Lukk lokket i omtrent ett minutt og la etanet størkne rundt kantene på messingbeholderen til to til tre millimeter fast etan er synlige.Etanet er nå ved en temperatur som er ideell for frysing av biologiske prøver. Fest den stupte Dewar forsiktig til bunnen av det manuelle stempelet. Fest et par klemme pinsett ved å pakke tapen sikkert rundt den dype armen og pinsettbasen.Hold den dype armen og senk pinsettene langsomt ned i det flytende etanet ved å trykke på fotpedalen. Juster plasseringen av den stupende Dewar slik at pinsettene ligger midt i væskeet etan, og unngå kontakt med den faste etanringen. Forbered utstempning av materialer og tilbehør.Forbered blottingspapiret ved å kutte hvert sirkulært filterpapir i omtrent en centimeter brede strimler. Unngå å berøre midten av blottingspapiret og kast de mindre endestykkene. Det er viktig å sikre at blotting papirstrimler er tørre, rene og fri for forurensninger.Før du stuper, plasser gitterboksene i den stupende Dewar i de riktige sporene. Forsikre deg om at rutenettet dekker våre gratis å rotere. Forbered CryoEM-prøver ved å stupe frysing.På grunn av mangfoldet av nett- og nettforberedelser, følg anbefalte protokoller for å gjøre nettene hydrofile. For å håndtere gitteret riktig, bruk rene, tørre klemme pinsett for å plukke opp de hydrofile gitterene i den ytre ringen. Skyv plastklemmen for å feste gitteret og trykk forsiktig på pinsettene for å sikre at gitteret er ordentlig klemt.Påfør tre mikroliter prøve på forsiden av gitteret som holdes i klemme pinsettene. Fest pinsettene godt fast til den manuelle stupearmen ved å vikle tapen rundt pinsettbasen. Prøven er nå klar til å bli blottet og stupt frosset.Hold i hver ende av en ren stripe med blottingspapir mellom pekefingrene og tommelen. Hvil hendene på kanten av den stupende Dewar for å etablere en stabil posisjon. Blotting papiret skal være omtrent en centimeter fra overflaten av rutenettet.Bøy blottingspapiret til midten kommer i kontakt med rutenettet. Det er viktig at blottingspapiret er parallelt med rutenettoverflaten for å gi jevn kontakt og for å forhindre nettskade. Når den mobile væskefronten slutter å spre seg, begynner du å telle.Flekk rutenettet i fem sekunder. Knekk fingrene fra hverandre, spenne blotting papiret og raskt fjerne det fra overflaten av rutenettet. Trykk samtidig på fotpedalen for å frigjøre den manuelle stupearmen, og dypp pinsettene som holder gitteret inn i det flytende etanet.Hold det nyfroste rutenettet i det flytende etanet, løsne pinsettene forsiktig fra den manuelle stupearmen. Fjern forsiktig pinsettene slik at rutenettet er avtagbart. Flytt gitteret inn i det flytende nitrogenbeholderen under messingetanbeholderen med en rask bevegelse fra etan til flytende nitrogen.Plasser rutenettet i rutenettboksen. Representative resultater. Fra denne videoen skal forskere kunne forberede CryoEM-rutenett, som dette, med mange firkanter som inneholder tynne filmer av glassaktig is for høyoppløselig bildebehandling.Prøvekonsentrasjonen og blottingstiden kan justeres for å optimalisere partikkeltettheten. Her vil vi demonstrere hele arbeidsflyten for frysing av CryoEM-prøver ved hjelp av blot og stupemetode. Bruk en ren klemme pinsett for å plukke opp et nytt rutenett og sikre gitteret på plass.Påfør tre mikroliter prøve på den hydrofile siden av rutenettet og fest pinsettene på den manuelle stupearmen ved å pakke båndet rundt pinsetthåndtaket. Plasser blottingspapiret parallelt med gitteroverflaten, og bøy forsiktig blottingspapiret mot rutenettet for å starte oppblåsthet. Etter ønsket tid flytter du blottingspapiret i en snappingbevegelse bort fra rutenettoverflaten mens du deprimerer fotpedalen for å frigjøre den dype armen, og kaster rutenettet inn i det flytende etanet.Vikle forsiktig av tapen fra rundt pinsettene og den manuelle stupearmen. Med en rask bevegelse, overfør raskt rutenettet fra etanbeholderen til det flytende nitrogenreservoaret. Plasser rutenettet i oppbevaringsboksen for rutenettet, og pakk pinsettene inn i en Kim Wipe for å tørke;gjenta.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

Høyoppløselig enkeltpartikkelanalyse fra elektronkryomikroskopi bilder ved hjelp av SPHIRE

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Analysis of &#946;-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analysis of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analyse av β-Amyloid-indusert unormalt Fibrin Clot struktur av spektroskopi og skanning elektronmikroskop

This article presents methods for generating in vitro fibrin clots and analyzing the effect of beta-amyloid (A&#946;) protein on clot formation and ...

Expression and Purification of the Human Lipid-sensitive Cation Channel TRPC3 for Structural Determination by Single-particle Cryo-electron Microscopy

Uttrykk og rensing av menneskelige Lipid-sensitive kasjon kanal-TRPC3 for strukturelle vilje av Single-partikkel Cryo-elektronmikroskop

Transient receptor potential channels (TRPCs) of the canonical TRP subfamily are nonselective cation channels that play an essential role in calcium ...

Production of Dynein and Kinesin Motor Ensembles on DNA Origami Nanostructures for Single Molecule Observation

Produksjon av Dynein og Kinesin motor ensembler på DNA Origami nanostrukturer for single molekyl observasjon

Cytoskeletal motors are responsible for a wide variety of functions in eukaryotic cells, including mitosis, cargo transport, cellular motility, and ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Rask nettforberedelse for tidsavklart kryo-elektronmikroskopi

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Preparing Lamellae from Vitreous Biological Samples Using a Dual-Beam Scanning Electron Microscope for Cryo-Electron Tomography

Forbereder lameller fra glassaktige biologiske prøver ved hjelp av et dual-beam skanning elektronmikroskop for kryo-elektrontomografi

Presented here is a protocol for preparing cryo-lamellae from plunge-frozen grids of Plasmodium falciparum-infected&#160;human erythrocytes, which could ...

Single Particle Cryo-Electron Microscopy: From Sample to Structure

Single Particle Cryo-Electron Microscopy: Fra prøve til struktur

Cryo-electron microscopy (cryoEM) is a powerful technique for structure determination of macromolecular complexes, via single particle analysis (SPA). The ...

Micropatterning Transmission Electron Microscopy Grids to Direct Cell Positioning within Whole-Cell Cryo-Electron Tomography Workflows

Mikropattering overføring elektronmikroskopinett til direkte celleposisjonering i hele celler Cryo-Electron Tomography Arbeidsflyter

Whole-cell cryo-electron tomography (cryo-ET) is a powerful technology that is used to produce nanometer-level resolution structures of macromolecules ...

Quantification of Subcellular Glycogen Distribution in Skeletal Muscle Fibers using Transmission Electron Microscopy

Kvantifisering av subcellulær glykogenfordeling i skjelettmuskulaturfibre ved hjelp av transmisjonselektronmikroskopi

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This ...

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy (cryo-EM) Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy cryo-EM Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

En robust kryo-elektronmikroskopi (cryo-EM) prosesseringsarbeidsflyt med kryoSPARC, RELION og scipion

Recent advances in both instrumentation and image processing software have made single-particle cryo-electron microscopy (cryo-EM) the preferred method ...