Name: manual blot-and-plunge freezing of biological specimens for single-particle cryogenic electron microscopy
Uploaded: 2022-02-07T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy at JoVE.com

Vi tackar Herzik-labbmedlemmarna för kritiskt tänkande och feedback på detta manuskript och videoinnehållet. M.A.H.Jr. stöds av NIH R35 GM138206 och som Searle Scholar. H.P.M.N stöds av Molecular Biophysics Training Grant (NIH T32 GM008326). Vi vill också tacka Bill Anderson, Charles Bowman och Dr. Gabriel Lander vid Scripps Research Institute för hjälp med att designa, montera och testa den manuella kolven som visas i videon.

1. Förbered den manuella plungningsmiljön
OBS: Beräknad driftstid: 5-30 minuter
<ol><li>Placera den manuella kolven i ett 4 °C kylrum där en luftfuktare kan samplaceras för att hålla rummet nära 100% relativ luftfuktighet (RH) (figur 1A). VARNING: Rådgör med institutionens riktlinjer för miljöhälsa och miljösäkerhet för säker placering av den manuella kolven och rekommenderad drift.</li>
	<li>Innan gallerberedningen, slå på luftfuktaren i k...

Vitrifikation av biologiska exemplar för avbildning av en partikel kryogen elektronmikroskopi (cryoEM) är fortfarande ett kritiskt viktigt steg för framgångsrik strukturbestämning. Den manuella blot-and-plunge-metoden som beskrivs i detta protokoll representerar en kostnadseffektiv, tillförlitlig och robust metod för att snabbt frysa biologiska prover i tunna filmer av glaskroppsis för cryoEM-avbildning. Med hjälp av de metoder som beskrivs i manuskriptet kommer forskare att kunna montera och använda den manuel...

Enpartikel kryogen elektronmikroskopi (cryoEM) är en kraftfull strukturell teknik som kan användas för att lösa strukturer av dynamiska biologiska exemplar till nära atomupplösning1,2,3,4. De senaste framstegen inom direkt elektrondetektorteknik4,5,6,7,8,9,10, förbättringar av elektronkällor4,11,12,13,14 och elektromagnetisk linsstabilitet15, i kombination med den fortsatta utvecklingen av datainsamling 16,17 och analysprogrampaket18,19, har gjort det möjligt för forskare att nu rutinmässigt bestämma strukturer av väluppfostrade exemplar till 3 Å-upplösning eller bättre4,11,13,14,20,21,22 23 . Trots dessa förbättrade bild- och databehandlingsfunktioner är kryoEM-nätberedning fortfarande det största hindret för framgångsrik högupplöst strukturbestämning och fungerar ofta som en betydande flaskhals i EM-arbetsflödet24,25,26,27.
CryoEM förlitar sig på avbildning av biologiska prover i vattenlösningar som fryses för att bilda en tunn film av "glasliknande" is - en process som kallas vitrifikation - som bevarar det inhemska biokemiska tillståndet. Vitrifikation av biologiska prover för cryoEM går tillbaka över 40 år28,29,30 och många tekniker och utrustning som har utvecklats för denna process förlitar sig på den ursprungligen detaljerade blot-and-plunge-metoden31,32,33,34,35 , varigenom en liten mängd prov (t.ex. 1-5 μL) appliceras på ett specialiserat EM-nät innan överskottslösningen avlägsnas med hjälp av fysisk interaktion mellan gallret och blottingpapper. Tidpunkten för denna process bestäms vanligtvis empiriskt för varje prov eftersom en kritisk komponent i frysprover är tjockleken på glaskroppens isfilm - om isen är för tjock försämras bildkvaliteten dramatiskt på grund av ökad spridning av elektronstrålen medan is som är för tunn kan begränsa proteinorienteringen och / eller utesluta partiklar från mitten av rutnätsfoliehålen36 . Detta beroende av den perfekta istjockleken för enpartikel cryoEM har lett till ett brett utbud av tekniker och utrustning som kan frysa prover, inklusive robotteknik37,38, mikrofluidik42 och ultraljuds- eller sprutanordningar27,39,40,41,42,43,44 . Under de senaste åren förlitar sig några av de mest populära provberedningsenheterna på användningen av robotteknik för automatiserad frysning av prover med hjälp av blot-and-plunge-tekniken45. Även om dessa enheter är utformade för att reproducerbart skapa korrekt istjocklek för avbildning, förblir de ofta för dyra för enskilda laboratorier att köpa och använda och finns i allmänhet i kryoEM-anläggningar till timpriser för användning. Under de senaste åren har den ursprungliga manuella blot-and-plunge-tekniken kommit tillbaka till ökad användning3,47,48,49,50,51,52. Faktum är att en manuellt manövrerad blot-and-plunge-enhet kan uppnå högkvalitativa kryoEM-nät till en bråkdel av kostnaden för robotmotsvarigheter. Dessutom erbjuder manuell blotting också fler användare kontroll över blotting eftersom forskare kan justera typen av blotting (dvs. back-blotting av gallret, front-blotting av nätet etc.) och blottingtid baserat på varje enskilt prov och forskningsfrågor.
I den här artikeln ger vi information om hur du effektivt fryser biologiska prover med hjälp av en traditionell manuell blot-and-plunge vitrification-enhet i kombination med en specialdesignad dewarplattform53. Bästa praxis, inklusive förberedelse av kryogen, näthantering, provapplikation och blotting, samt vanliga fallgropar och rekommendationer om hur man kan övervinna dessa hinder tillhandahålls. Råd om hur man kan öka istjocklekens reproducerbarhet mellan gallerberedningar och hur man modifierar provutplåning baserat på biologisk provtyp diskuteras. Med tanke på den låga kostnaden i samband med inköp och drift av den manuella kolven som beskrivs i detta manuskript, kan laboratorier över hela världen förbereda biologiska exemplar för cryoEM på ett kostnadseffektivt och reproducerbart sätt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4 slot grid storage box</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>160-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 gauge flat metal dispensing tip</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07M7YWWLT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22x22 mm square glass coverslip</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9802-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm glass Petri dish to store grids</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-747A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm glass Petri dish to store Whatman paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-747D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>150 mm glass Petri dish to store Whatman paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-747F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 mL beaker</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-555-25B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue styrofoam dewar</td>
			<td>Spear Lab</td>
			<td>FD-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brass ethane vessel</td>
			<td>Lasco</td>
			<td>17-4075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamping tweezers</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>38825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate task wipes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-stage regulator with control valve</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>Y12N245D580-AG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dewer grid base</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane platform</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane propane tank</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>ET PR50ZU-G</td>
			<td>ethane (50%) : propane (50%) in a high-pressure tank</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane tank</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>UN1035</td>
			<td>ethane (100%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexible arm task light</td>
			<td>Amscope</td>
			<td>LED-11CR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grids (UltrAufoil R 1.2/1.3 300 mesh)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Q325AR1.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidifier</td>
			<td>Target</td>
			<td>719438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hygrometer</td>
			<td>ThermoPro</td>
			<td>B01H1R0K68</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab coat</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen dewar</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LD4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen gloves</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>19-059-925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual plunger stand (black stand + foot pedal)</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mark 5 (plunging platform)</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82026-424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P20 pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>13-690-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>E0030124286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips</td>
			<td>ibis scientific</td>
			<td>63300005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring lamp</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07HMR4H8G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safety glasses</td>
			<td>UCSD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>Fiskars 01-004761J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw driver</td>
			<td>Ironside</td>
			<td>354711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-901-10R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer to transfer grid box</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>LTS-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon tubing</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-171-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman blotting paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1001-090</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

manual blot-and-plunge freezing of biological specimens for single-particle cryogenic electron microscopy

Att avbilda biologiska prover med elektroner för högupplöst strukturbestämning av enstaka kryogen elektronmikroskopi (cryoEM) kräver ett tunt lager glasaktig is som innehåller de biomolekyler av intresse. Trots många tekniska framsteg under de senaste åren som har drivit enpartikel cryoEM till framkanten av strukturell biologi, är de metoder genom vilka exemplar vitrifieras för högupplöst avbildning ofta det hastighetsbegränsande steget. Även om många nya ansträngningar har gett medel för att övervinna hinder som ofta påträffas under provvitrifiering, inklusive utvecklingen av nya provstöd och innovativ vitrifikation instrumentering, är den traditionella manuellt drivna kolven fortfarande en häftklammer i cryoEM-samhället på grund av den låga kostnaden för inköp och användarvänlighet. Här tillhandahåller vi detaljerade metoder för att använda en standard, giljotin-stil manuellt manövrerad blot-and-plunge enhet för vitrifikation av biologiska exemplar för högupplöst avbildning av en partikel cryoEM. Dessutom beskrivs ofta påträffade problem och felsökningsrekommendationer för när en standardpreparat inte ger ett lämpligt prov också.

Ett framgångsrikt genomförande av det blot-and-plunge-protokoll som beskrivs här kommer att resultera i ett tunt, enhetligt lager av glasaktig is som är fritt från sexkantig is, föroreningar och stora gradienter av oanvändbar is som kan observeras under elektronmikroskopet (figur 3). Inkonsekvent kontakt mellan blottingpapperet med gallerytan, tidig borttagning av blottningspapperet eller förflyttning av blottningspapperet vid nätkontakt kan minska glaskroppens kvalitet och leda til...

Watch this Scientific Journal Video about Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy at JoVE.com

Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy

Detta manuskript beskriver blot-and-plunge-metoden för att manuellt frysa biologiska exemplar för enpartikel kryogen elektronmikroskopi.

Manuell Blot-and-Plunge frysning av biologiska exemplar för enpartikel kryogen elektronmikroskopi

Imaging biological specimens with electrons for high-resolution structure determination by single-particle cryogenic electron microscopy (cryoEM) requires ...

Den manuella plungningsmetoden som beskrivs här är en kostnadseffektiv, tillförlitlig metod för att förbereda prover för transmissionselektronmikroskopi. I den här videon kommer vi att visa hur du ställer in den manuella kolven, förbereder kryogen och utför manuell blotting och plungning av EM-galler. Förbered den manuella plungingmiljön.Denna procedur bör utföras i ett kallt rum som hålls vid 40 grader Celsius med en fuktighet på mer än 95%Vi rekommenderar att du använder materialen som visas här och enligt beskrivningen i onlineprotokollet för manuell blottning och plungning. Förbered kryoogenen Dewar och Manuell kolv. För att montera kryogenen Dewar, installera först plattformsbasen längst ner på den blå frigoliten Dewar, se till att den är platt och jämn.Placera sedan etankärlshållaren ovanpå plattformsbasen och sätt in etankärlet i mässing. Slutligen placera den snurrande rutnätslagringsplattformen. Leta sedan reda på den fallande Dewar till basen av den manuella kolven.Centrera etankärlet under den fallande armen och säkra den störtande Dewar till basen. För att ställa in den manuella fallande höjden, fäst först färsk tejp på basen av den fallande armen. Fäst sedan ett par kläm pincett genom att ordentligt linda tejpen runt den fallande armen och pincettbasen.Se till att pincetterna sitter fast ordentligt genom att knacka lätt på dem. Håll den fallande armen och sänk långsamt pincetterna i mässingens etankärl genom att trycka ner fotpedalen. Justera platsen för den störtande Dewar så att pincetterna lokaliserar till mitten av mässingens etankärl.Pincettspetsarna bör inte kontakta storleken eller botten av forsens etankärl för att undvika skador på pincetterna och den manuella kolven. När positionen är inställd återställer du den manuella fallande armen. Förbered Kryogenen.Kryogenpreparation bör utföras i ett väl ventilerat rum och korrekt personlig skyddsutrustning bör alltid bäras. Till att börja med, dåligt flytande kväve direkt in i den fallande Dewar, stoppa när den flytande kvävenivån når toppen av mässingens etankärl. Systemet ska vara tillräckligt kallt för att fortsätta efter att det flytande kvävet slutar bubbla våldsamt.Detta tar ungefär fem minuter. Ethane kommer som en komprimerad gas och måste kondenseras. För att ställa in gasflödet för optimal etankondensering, för in spetsen på etangasledningen i en 250 mil bägare vatten och observera bubblan.Gasflödet bör producera en stadig ström av bubblor som inte stör vattenytan våldsamt. För att börja kondensera etan, placera spetsen på etangasledningen längst ner på mässingsettankärlet. Rör långsamt om metallspetsen och börja kondensera etan.Så fort etan börjar svalna, kommer det att göra ett hörbart ljud. Fyll etankärlet i mässing till tre fjärdedelar fullt av flytande etan. Toppa den fallande Dewar med flytande kväve, se till att den vidrör det mässingsettankärlet men inte spiller in i det.Tillsats av flytande kväve är nödvändigt för enhetlig etanfrysning. Placera skumlocket på den blå dunkande Dewar och låt etan stelna helt. Starta om etangasflödet och placera försiktigt gasledningens spets i den fasta etanen.Det är viktigt att placera spetsen vertikalt i kärlet och dispensera etan i botten. Rör långsamt om metallspetsen för att smälta etan och för upp nivån av flytande etan till toppen av kärlet. Stäng locket i ungefär en minut och låt etan stelna runt kanterna på mässingskärlet tills två till tre millimeter fast etan är synlig.Etan har nu en temperatur som är idealisk för frysning av biologiska prover. Fäst den fallande Dewar försiktigt på basen av den manuella kolven. Fäst ett par kläm pincett genom att ordentligt linda tejpen runt den fallande armen och pincettbasen.Håll ned den fallande armen och sänk långsamt pincetterna i den flytande etanen genom att trycka ned fotpedalen. Justera placeringen av den fallande Dewar så att pincetterna lokaliseras till mitten av den flytande etanen och undvik kontakt med den fasta etanringen. Förbered plungmaterial och tillbehör.Förbered blottingspapperet genom att skära varje cirkulärt filterpapper i cirka en centimeter breda remsor. Undvik att vidröra mitten av blottingpapperet och kassera de mindre ändstyckena. Det är viktigt att se till att blottingpappersremsorna är torra, rena och fria från föroreningar.Innan du kastar, placera rutnätslådorna i den störtande Dewar i rätt slitsar. Se till att gallret täcker vår fria att rotera. Förbered CryoEM-exemplar genom att doppfrysa.På grund av mångfalden av nät- och nätpreparat, följ rekommenderade protokoll för att göra gallren hydrofila. För att hantera gallret på rätt sätt, använd rena, torra kläm pincett för att plocka upp de hydrofila gallren vid den yttre ringen. Skjut plastklämman för att säkra gallret och knacka försiktigt på pincetterna för att säkerställa att gallret är ordentligt fastspänt.Applicera tre mikroliter prov på framsidan av gallret som hålls i klämpläskarna. Fäst pincetterna ordentligt på den manuella fallande armen genom att linda tejpen runt pincettbasen. Provet är nu klart att blottas och kastas fryst.Håll varje ände av en ren remsa av blottingpapper mellan pekfingrarna och tummarna. Vila händerna på kanten av den störtande Dewar för att etablera en stabil position. Blottingpapperet ska vara ungefär en centimeter från rutnätets yta.Böj blottingpapperet tills mitten kommer i kontakt med gallret. Det är viktigt att blottingpapperet är parallellt med gallerytan för att möjliggöra jämn kontakt och för att förhindra nätskador. När den mobila vätskefronten slutar sprida sig, börja räkna.Förstör rutnätet i fem sekunder. Snäpp isär fingrarna, spänna av blottingpapperet och ta snabbt bort det från gallrets yta. Tryck samtidigt på fotpedalen för att frigöra den manuella fallande armen och kasta pincetterna som håller gallret i den flytande etanen.Håll det nyfrysta gallret i den flytande etan, ta försiktigt bort pincetterna från den manuella plungarmen. Lossa försiktigt pincetterna så att gallret är avtagbart. Flytta gallret till den flytande kvävebehållaren under mässingsettankärlet med en snabb rörelse från etan till det flytande kvävet.Placera rutnätet i rutnätsrutan. Representativa resultat. Från denna video bör forskare kunna förbereda CryoEM-galler, som detta, med många rutor som innehåller tunna filmer av glaskroppsis för högupplöst avbildning.Provkoncentrationen och blottingtiden kan justeras för att optimera partikeldensiteten. Här kommer vi att demonstrera hela arbetsflödet för frysning av CryoEM-prover med hjälp av blot- och dykmetoden. Använd en ren klämpläspett för att plocka upp ett nytt galler och säkra gallret på plats.Applicera tre mikroliter prov på den hydrofila sidan av gallret och fäst pincetterna på den manuella plungarmen genom att linda tejpen runt pincetthandtaget. Placera blottingpapperet parallellt med gallerytan och böj försiktigt blottingpapperet mot gallret för att initiera blotting. Efter önskad tid, flytta blottingpapperet i en snappande rörelse bort från rutnätsytan medan du deprimerar fotpedalen för att släppa den fallande armen och kasta gallret i den flytande etan.Varva försiktigt ner tejpen från runt pincetterna och den manuella fallande armen. Med en snabb rörelse överför du snabbt gallret från etankärlet till den flytande kvävebehållaren. Placera gallret i rutnätets förvaringslåda och linda pincetterna i en Kim Wipe för att torka;upprepa.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

High-resolution Single Particle Analysis from Electron Cryo-microscopy Images Using SPHIRE

Högupplösande enkelpartikelanalys från elektronkryo-mikroskopi bilder med hjälp av SPHIRE

SPHIRE (SPARX for High-Resolution Electron Microscopy) is a novel open-source, user-friendly software suite for the semi-automated processing of single ...

Analysis of &#946;-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analysis of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analys av β-Amyloid-inducerad avvikelser på Fibrin Clot struktur av spektroskopi och svepelektronmikroskopi

This article presents methods for generating in vitro fibrin clots and analyzing the effect of beta-amyloid (A&#946;) protein on clot formation and ...

Expression and Purification of the Human Lipid-sensitive Cation Channel TRPC3 for Structural Determination by Single-particle Cryo-electron Microscopy

Uttryck och rening av den mänskliga Lipid-känsliga ering kanal TRPC3 för strukturella bestämning genom Single-particle kryo-elektronmikroskopi

Transient receptor potential channels (TRPCs) of the canonical TRP subfamily are nonselective cation channels that play an essential role in calcium ...

Production of Dynein and Kinesin Motor Ensembles on DNA Origami Nanostructures for Single Molecule Observation

Produktion av dynein och Kinesin motor ensembler på DNA origami nanostrukturer för enkel molekyl observation

Cytoskeletal motors are responsible for a wide variety of functions in eukaryotic cells, including mitosis, cargo transport, cellular motility, and ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Snabb gallerförberedelse för tidsupp lös Cryo-Electron mikroskopi

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Preparing Lamellae from Vitreous Biological Samples Using a Dual-Beam Scanning Electron Microscope for Cryo-Electron Tomography

Förbereda lameller från glaskroppsbiologiska prover med hjälp av ett dubbelstråleskanningselektronmikroskop för kryoelektrontomografi

Presented here is a protocol for preparing cryo-lamellae from plunge-frozen grids of Plasmodium falciparum-infected&#160;human erythrocytes, which could ...

Single Particle Cryo-Electron Microscopy: From Sample to Structure

Single Particle Cryo-Electron Mikroskopi: Från prov till struktur

Cryo-electron microscopy (cryoEM) is a powerful technique for structure determination of macromolecular complexes, via single particle analysis (SPA). The ...

Micropatterning Transmission Electron Microscopy Grids to Direct Cell Positioning within Whole-Cell Cryo-Electron Tomography Workflows

Mikropapper transmission elektronmikroskopinät till direkt cellpositionering inom arbetsflöden för hela cell cryo-elektrontomografi

Whole-cell cryo-electron tomography (cryo-ET) is a powerful technology that is used to produce nanometer-level resolution structures of macromolecules ...

Quantification of Subcellular Glycogen Distribution in Skeletal Muscle Fibers using Transmission Electron Microscopy

Kvantifiering av subcellulär glykogenfördelning i skelettmuskelfibrer med hjälp av transmissionselektronmikroskopi

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This ...

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy (cryo-EM) Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

A Robust Single-Particle Cryo-Electron Microscopy cryo-EM Processing Workflow with cryoSPARC, RELION, and Scipion

Ett robust arbetsflöde för bearbetning av kryo-elektronmikroskopi med en partikel (kryo-EM) med kryoSPARC, RELION och Scipion

Recent advances in both instrumentation and image processing software have made single-particle cryo-electron microscopy (cryo-EM) the preferred method ...