Name: quality-controlled sputum analysis by flow cytometry
Uploaded: 2021-08-09T13:00:00
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Wir danken David Rodriguez für seine Unterstützung bei der Figurenvorbereitung. Sputum-Proben wurden auf dem BD LSR II in der UT Health San Antonio Flow Cytometry Shared Resource Facility durchgeführt, unterstützt von UT Health, NIH-NCI P30 CA054174-20 (CTRC bei UT Health) und UL1 TR001120 (CTSA-Zuschuss).

Alle Schritte der Sputumaufbereitung werden in einer biologischen Sicherheitswerkbank mit entsprechender persönlicher Schutzausrüstung durchgeführt.
1. Reagenzienvorbereitung vor Beginn der Sputumdissoziation
<ol><li>1% Paraformaldehyd (PFA), 25 ml pro Probe auf Eis auftauen und bis zum Gebrauch kalt aufbewahren. VORSICHT: PFA ist giftig durch Einatmen und Hautkontakt. Bereiten Sie das Fixiermittel gemäß den Anweisungen des Herstellers vor und frieren Sie es bei -20 °C in 25 ml Aliq...

Der zelluläre Gehalt des Sputums umfasst eine Vielzahl von weit reichenden Zellen, oft begleitet von vielen Trümmern37. Darüber hinaus erfordert die Sputumanalyse eine Qualitätskontrolle, die bestätigt, dass die Probe aus der Lunge und nicht aus der Mundhöhle entnommen wird38. Daher ist es nicht so einfach, Sputum mittels Durchflusszytometrie zu analysieren, wie es beispielsweise bei Blut der Fall ist, das eine viel sauberere und homogenere Zellsuspension freisetzt. D...

Technische Fortschritte in der Hard- und Software von Durchflusszytometern haben es ermöglicht, viele verschiedene Zellpopulationen gleichzeitig zu identifizieren1,2,3,4. Der Einsatz des Durchflusszytometers in der hämatopoetischen Zellforschung hat beispielsweise zu einem viel besseren Verständnis des Immunsystems2 und der zellulären Hierarchie des hämatopoetischen Systems5 sowie zur diagnostischen Unterscheidung einer Vielzahl verschiedener Blutkrebsarten geführt6,7,8. Obwohl die meisten Sputumzellen hämatopoetischen Ursprungs sind9,10,11, wurde die Durchflusszytometrie nicht weit verbreitet für die Sputumanalyse zu diagnostischen Zwecken eingesetzt. Mehrere Studien deuten jedoch darauf hin, dass die Bewertung von Immunzellpopulationen im Sputum (der bedeutendsten Untergruppe von Zellen) eine große Hilfe bei der Diagnose und / oder Überwachung von Krankheiten wie Asthma und chronisch obstruktiver Lungenerkrankung (COPD) sein kann 12,13,14,15. Darüber hinaus ermöglicht die Existenz von epithelspezifischen Markern, die in der Durchflusszytometrie verwendet werden können, die Abfrage der folgenden signifikantesten Untergruppe von Zellen im Sputum, Lungenepithelzellen.
Neben der Fähigkeit, viele verschiedene Zellpopulationen unterschiedlicher Gewebeherkunft zu analysieren, kann ein Durchflusszytometer eine große Anzahl von Zellen in relativ kurzer Zeit auswerten. Im Vergleich dazu erfordern folienbasierte, zytologische Analysen oft hochspezialisiertes Personal und/oder Equipment. Diese Analysen können arbeitsintensiv sein, was dazu führt, dass nur ein Teil der Sputumprobe analysiert wird16.
Drei kritische Punkte begrenzen die weit verbreitete Verwendung von Sputum in der Durchflusszytometrie. Die erste Frage bezieht sich auf die Sammlung von Sputum. Sputum wird durch einen Huff-Husten gesammelt, der Schleim aus der Lunge in die Mundhöhle ausstößt und anschließend in einen Sammelbecher spuckt. Da der Schleim durch die Mundhöhle wandert, besteht eine hohe Wahrscheinlichkeit einer SEC-Kontamination. Diese Kontamination erschwert die Probenanalyse, aber das Problem kann leicht auf einer durchflusszytometrischen Plattform behoben werden, wie in dieser Studie gezeigt.
Nicht jeder kann spontan Sputum produzieren; Daher wurden mehrere Geräte entwickelt, um die Sputumsammlung auf nicht-invasive Weise zu unterstützen17. Der Vernebler ist ein solches Gerät und produziert nachweislich zuverlässige Auswurfproben18,19,20. Obwohl der Vernebler eine sehr effektive Möglichkeit ist, Sputum nicht-invasiv zu sammeln, erfordert seine Verwendung immer noch eine Einstellung in einer medizinischen Einrichtung mit spezialisiertem Personal21. Im Gegensatz dazu können Handheld-Geräte wie die Lungenflöte22,23,24 und die acapella16,25 zu Hause verwendet werden, da sie sehr benutzerfreundlich sind. Diese Assistenzgeräte sind sowohl sicher als auch kostengünstig.
Für uns lieferte die Acapella durchweg bessere Ergebnisse als die Lungenflöte16, und daher wurde das Acapella-Gerät für Sputumsammlungen ausgewählt. Eine 3-tägige Entnahmeprobe wurde beschlossen, da der Hauptzweck für die Verwendung von Sputum darin besteht, einen Lungenkrebserkennungstest zu entwickeln16. Es hat sich gezeigt, dass eine 3-Tage-Probe die Wahrscheinlichkeit der Lungenkrebserkennung im Vergleich zu einer 1- oder 2-Tage-Probe erhöht26,27,28. Andere Methoden der Sputumsammlung können jedoch für verschiedene Zwecke vorzuziehen sein. Wenn eine andere Sputumsammelmethode als die hier beschriebene verwendet wird, wird empfohlen, jeden Antikörper oder Farbstoff, der für die durchflusszytometrische Analyse verwendet wird, sorgfältig zu titrieren. Es liegen nur sehr wenige Daten darüber vor, wie sich verschiedene Sputumsammelmethoden auf die Zielproteine für die Durchflusszytometrie auswirken.
Das zweite Thema, das die Begeisterung für die Verwendung von Sputum für die Diagnostik dämpft, vor allem im Zusammenhang mit der Durchflusszytometrie, ist die Zellzahl. Das Problem ist die Sammlung von ausreichend lebensfähigen Zellen für eine zuverlässige Analyse. Zwei Studien zeigten, dass Sputumproben, die mit hilfe eines Hilfsgeräts mit nicht-invasiven Methoden entnommen wurden, genügend lebensfähige Zellen enthalten, die in klinischen Diagnose- oder Forschungsstudien verwendet werden können16,24. Keine dieser Studien befasste sich jedoch mit der Frage der Zellzahlen in Bezug auf die Durchflusszytometrie.
Für die Studien, die die Grundlage für dieses Protokoll bilden, wurden Sputumproben von Teilnehmern mit hohem Risiko für die Entwicklung von Lungenkrebs nach genehmigten institutionellen Richtlinien für jeden Studienstandort gesammelt. Hochrisikoteilnehmer wurden als zwischen 55 und 75 Jahren definiert, nachdem sie 30 Packungsjahre geraucht und in den letzten 15 Jahren nicht mit dem Rauchen aufgehört hatten. Den Patienten wurde gezeigt, wie sie das Acapella-Gerät gemäß den Anweisungen des Herstellers29 verwenden und Sputum an drei aufeinanderfolgenden Tagen zu Hause sammelten. Die Probe wurde bis zur letzten Entnahme im Kühlschrank aufbewahrt. Am letzten Abholtag wurde die Probe über Nacht mit einer gefrorenen Kühlpackung ins Labor geschickt. Die Proben wurden am Tag ihres Eingangs zu einer einzelnen Zellsuspension verarbeitet. Mit dieser Methode der Sputumgewinnung werden mehr als genug lebensfähige Zellen für eine zuverlässige durchflusszytometrische Analyse gewonnen.
Schließlich, und im Zusammenhang mit dem vorherigen Problem der Zellzahl, stellt sich die Frage, wie die Sputumzellen aus ihrer muzinösen Umgebung freigesetzt werden können. Wie können die Zellen lebensfähig gehalten werden und eine einzelne Zellsuspension erzeugen, die das Durchflusszytometer nicht verstopft? Basierend auf ersten Arbeiten von Pizzichini et al.30 und Miller et al.31 beschreibt dieses Protokoll eine einfache und zuverlässige Methode zur Sputumverarbeitung zu einer Einzelzellsuspension, die für die durchflusszytometrische Analyse geeignet ist. Diese Methode hat etablierte Richtlinien in der Durchflusszytometrie32,33,34 verwendet, um eine effiziente Antikörpermarkierungsstrategie zu entwickeln, um hämatopoetische und epitheliale Zellen im Sputum zu identifizieren und Instrumenteneinstellungen, Qualitätskontrollmaßnahmen und Analyserichtlinien bereitzustellen, die die Sputumanalyse auf einer durchflusszytometrischen Plattform standardisieren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Paraformaldehyde Flow-Fix</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>25037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;M nylon cell strainers, Falcon #352360</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-771-19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 M NaOH</td>
			<td>EMD</td>
			<td>SX0593-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical falcon tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa488 anti-human CD19</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>302219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa488 anti-human CD3</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>300415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa488 anti-human cytokeratin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>628608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa488 PanCK, CD3, and CD19 Isotype</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV510 anti-human CD45</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD66b FITC isotype</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CompBead Plus Compensation Beads</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560497</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Polystyrene dispoable sterile bottle 250 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-761-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Polystyrene dispoable sterile bottle 500 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-761-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CS&#38;T beads</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>655051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP172-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD66b</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX75907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixable Viability Stain</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>564406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowCheck</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A69183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowSet</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A69184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-175-095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAC</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIST Beads, 05 &#956;M</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>64080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIST Beads, 20 &#956;M</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>64160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIST Beads, 30 &#956;M</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>64170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD45</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-CF594 anti-human EpCAM</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>565399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-CF594 CD206/EpCAM Isotype</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>562292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-CR594 anti-human CD206</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>564063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate dihydrate</td>
			<td>EMD</td>
			<td>SX0445-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue solution, 0.4%</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quality-controlled sputum analysis by flow cytometry

Sputum, weit verbreitet, um den zellulären Inhalt und andere mikroumweltliche Merkmale zu untersuchen, um die Gesundheit der Lunge zu verstehen, wird traditionell mit zytologischen Methoden analysiert. Sein Nutzen ist begrenzt, da das Lesen der Folien zeitaufwendig ist und hochspezialisiertes Personal erfordert. Darüber hinaus machen ausgedehnte Trümmer und das Vorhandensein von zu vielen Plattenepithelzellen (SECs) oder Wangenzellen eine Probe oft für die Diagnose ungeeignet. Im Gegensatz dazu ermöglicht die Durchflusszytometrie eine Hochdurchsatz-Phänotypisierung zellulärer Populationen bei gleichzeitigem Ausschluss von Trümmern und SECs.
Das hier vorgestellte Protokoll beschreibt eine effiziente Methode, um Sputum in eine einzelne Zellsuspension zu dissoziieren, Antikörper zu färben und zelluläre Populationen zu fixieren und Proben auf einer durchflusszytometrischen Plattform zu entnehmen. Eine Gating-Strategie, die den Ausschluss von Trümmern, toten Zellen (einschließlich SECs) und Zelldouletten beschreibt, wird hier vorgestellt. Darüber hinaus erklärt diese Arbeit auch, wie lebensfähige, einzelne Sputumzellen basierend auf einem Cluster von Differenzierungspopulationen (CD) 45 positiven und negativen Populationen analysiert werden können, um hämatopoetische und epitheliale Abstammungsuntergruppen zu charakterisieren. Eine Qualitätskontrollmaßnahme wird auch durch die Identifizierung lungenspezifischer Makrophagen als Beweis dafür bereitgestellt, dass eine Probe aus der Lunge stammt und kein Speichel ist. Schließlich wurde gezeigt, dass diese Methode auf verschiedene zytometrische Plattformen angewendet werden kann, indem Sputumprofile desselben Patienten bereitgestellt werden, die auf drei Durchflusszytometern analysiert wurden. Navios EX, LSR II und Lyric. Darüber hinaus kann dieses Protokoll modifiziert werden, um zusätzliche zelluläre Marker von Interesse aufzunehmen. Hier wird eine Methode zur Analyse einer gesamten Sputumprobe auf einer durchflusszytometrischen Plattform vorgestellt, die Sputum für die Entwicklung einer Hochdurchsatzdiagnostik von Lungenerkrankungen geeignet macht.

Dieses Protokoll wurde mit Blick auf ein klinisches Labor entwickelt. Der Fokus bei der Entwicklung des Protokolls lag auf Einfachheit, Effizienz und Reproduzierbarkeit. Es wurde festgestellt, dass der zeitaufwendigste Schritt bei der Verarbeitung von Sputum das Zählen der Zellen war. Daher ist das Protokoll so aufgebaut, dass die Sputumverarbeitung und Zellmarkierung unabhängig von der Zellzählung ohne Zeitverlust durchgeführt werden kann. Eine genaue Zellzahl, die immer noch notwendig ist, um die Probe für einen u...

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Quality-Controlled Sputum Analysis by Flow Cytometry

Dieses Protokoll beschreibt eine effiziente Methode zur Dissoziation von Sputum in eine einzelne Zellsuspension und die anschließende Charakterisierung zellulärer Untergruppen auf Standard-Durchflusszytometrieplattformen.

Qualitätskontrollierte Sputumanalyse mittels Durchflusszytometrie

Sputum, widely used to study the cellular content and other microenvironmental features to understand the health of the lung, is traditionally analyzed ...

Dieses Protokoll löst häufige Herausforderungen bei der Sputumverarbeitung, die es in der Vergangenheit schwierig gemacht haben, mit der Durchflusszytometrie für klinische Hochdurchsatz-Diagnosezwecke verwendet zu werden. Dieses Protokoll wurde entwickelt, um Zeit zu sparen, indem das Sputumgewicht zur Bestimmung des Antikörper- und Farbstofffärbungsvolumens verwendet wird. Während der Färbeinkubation kann die Zellzählung für die nachgeschalteten Schritte durchgeführt werden.Es ist wichtig, eine genaue Zellzahl zu erreichen, um das richtige Resuspensionsvolumen zu bestimmen, um Probleme beim Betrieb auf dem Durchflusszytometer zu vermeiden. Dieses Protokoll kann Einblicke in Forschungsbereiche geben, die die Lungengesundheit untersuchen. So könnten beispielsweise Krankheiten wie COPD, Asthma, Lungenkrebs oder die Auswirkungen von COVID untersucht werden.Das Verfahren wird dr. Michael Lai, ein Forschungs- und Entwicklungswissenschaftler aus meinem Labor, demonstrieren. Wiegen Sie zunächst die Sputumprobe, um das Volumen der Dissoziationsreagenzien zu bestimmen. Die Probe wird in das entsprechend große Gefäß auf der Grundlage des Auswurfgewichts überführt und dann ein Milliliter pro Gramm 0,5 % NAC und vier Milliliter pro Gramm 0,1 % DVB-T zugegeben.Wirbeln Sie die Proben mit maximaler Geschwindigkeit für 15 Sekunden und rocken Sie mit maximaler Geschwindigkeit für 15 Minuten bei Raumtemperatur. Verdünnen Sie diese Probe mit 4X Hanks Balanced Salt Solution oder HBSS, um NAC und DTT zu neutralisieren. Und nach schnellem Wirbeln die Probe fünf Minuten lang bei Raumtemperatur schaukeln.Filtern Sie die Zellsuspension durch ein 100 Mikrometer langes Nylon-Mesh-Zellsieb in ein oder mehrere konische Zentrifugenröhrchen mit 50 Millilitern, um eine Einzelzellsuspension zu erzeugen. Pelletieren Sie die Zellen. Nach dem Absaugen des Überstandes die Pellets in einem konischen 15-Milliliter-Rohr kombinieren und unter den gleichen Bedingungen mit HBSS waschen.Resuspendieren Sie das Zellpellet in einem Puffervolumen, das durch das Anfangsgewicht der Sputumprobe bestimmt wird. Nehmen Sie ein Aliquot aus der Zellsuspension und mischen Sie 10 Mikroliter der Sputumverdünnung mit 30 Mikrolitern 0,4% Trypanblau und laden Sie dann in die Zählkammern eines Hämozytometers für eine lebende / tote Zellzahl. Sputum in Kompensationsröhrchen beschriften.Fügen Sie HBSS-Antikörper und Farbstoff zu jedem Sputumzellröhrchen und Kompensationsröhrchen hinzu, wie im Text angegeben. Fügen Sie die Sputumzellen zu den Assay-Röhrchen hinzu und fügen Sie den Kompensationsröhrchen Kompensationskügelchen hinzu, wie im Text erwähnt. Inkubieren Sie alle Röhren 35 Minuten lang auf lichtgeschütztem Eis.Dann, nachdem Sie die Röhrchen mit eiskaltem HBSS gefüllt haben, zentrifugieren Sie bei vier Grad Celsius für 10 Minuten bei 800 mal G.Für Kompensationsröhrchen den Überstand so nah wie möglich an den Pellets absaugen und die Pellets zum Lösen bewegen. Als nächstes fügen Sie 0,5 Milliliter kaltes HBSS zu den Kompensationsröhrchen hinzu und lagern Sie die Röhrchen auf dem Eis in einem lichtgeschützten Bereich, bis sie für die Durchflusszytometrie-Analyse benötigt werden. Dann aspirieren Sie den Überstand aus dem Sputum ungefärbt, Isotyp, Blut und Epithelröhren.Lösen Sie die Pellets, indem Sie die Röhrchen streichen. Fügen Sie zwei Milliliter von 1% PFA zu den ungefärbten und Isotyp-Röhrchen und 10 Milliliter zu den Blut- und Epithelröhren hinzu. Inkubieren Sie die Röhren auf Eis lichtgeschützt für 30 Minuten, dann schnell mit maximaler Geschwindigkeit wirbeln und erneut für weitere 30 Minuten inkubieren.Füllen Sie dann die Röhrchen mit eiskaltem HBSS. Als nächstes zentrifugieren Sie die Röhrchen bei vier Grad Celsius für 10 Minuten bei 1.600 mal G.Aspiratieren Sie so viel Überstand wie möglich, ohne das Zellpellet zu stören, und streichen Sie das Röhrchen mit den Fingern, um die Zellen zu lösen, und fügen Sie dann 200 Mikroliter kaltes HBSS zu den ungefärbten und Isotyp-Röhren hinzu. Berechnen und addieren Sie das erforderliche HbSS-Volumen für die Resuspension des Blutes und des Epithelschlauchs entsprechend der Gesamtzellzahl.Lagern Sie alle Proben in Kompensationsröhrchen, die bei vier Grad Celsius vor Licht auf dem Eis geschützt sind, bis eine durchflusszytometrische Analyse durchgeführt wird. Wenden Sie geeignete Startverfahren für das verwendete Durchflusszytometer an. Verwenden Sie die Mischung aus National Institute of Standards and Technology oder NIST-Perlen, um sicherzustellen, dass Vorwärtsstreu- und Seitenstreuspannungen so eingestellt sind, dass die NIST-Perlen so platziert werden, dass sie das Diagramm überspannen, ohne die Perlen zu nahe an den Achsen zu platzieren.Stellen Sie die Durchflussrate für LSRII auf mittel oder für Navios EX auf hoch ein. Passen Sie die Spannungen für jeden Parameter an, der für die Streu- und Fluoreszenzparameter verwendet wird, um die Zellpopulationen in großem Maßstab zu platzieren. Verwenden Sie die Zahlen mit der Gating-Strategie als Orientierung, um die Spannungen entsprechend anzupassen. Erfassen Sie zuerst Daten für die ungefärbte Sputumprobe, gefolgt von der isotypgefärbten Probe und dann für das Blutröhrchen und das Epithelrohr.Das Sputumgewicht wurde verwendet, um das Antikörper- oder Farbstoffvolumen für die Färbung zu bestimmen. Die Korrelation zwischen Sputumgewicht und Zellausbeute war nicht stark. Sputumproben wurden in vier Gewichtsklassen eingeteilt, die sich in der Verteilung der Zellausbeute gruppierten.Jeder verwendete Antikörper wurde in einer Konzentration auf der Plateauphase titriert, wobei der höchste Färbeindex als Arbeitskonzentration gewählt wurde. In allen Gewichtsklassen betrug die durchschnittliche SEC-Kontamination weniger als 20%, wobei der Prozentsatz der lebensfähigen Zellen gezeigt wurde. Vorgestellt wird die für die Analyse verwendete Gating-Strategie.NIST-Perlen wurden verwendet, um ein Tor zu setzen, das auf die Sputumprobe aufgebracht wurde, um Ablagerungen zu beseitigen. Kleine Trümmer wurden durch das breite Tor weiter beseitigt. Lebensfähigkeitsfarbstoff wurde verwendet, um tote Zellen zu eliminieren, während das Singulett-Tor Dubletten entfernte.Die Anti-CD45-Antikörpermarkierung ermöglichte die Trennung von lebenden einzelnen Sputumzellen in eine Blutzelle und ein Nicht-Blutzellkompartiment. Die von Navios EX, LSRII und Lyric erhaltenen Profile wurden verglichen. Die Gating-Strategie zur Beseitigung von Trümmern, toten Zellen, Dubletten und zum Vergleich von Blut- und Nicht-Blutprofilen wird gezeigt.Diese Technik ermöglichte es uns, diese Methoden anzuwenden, um das Lungenkrebsrisiko für die Verwendung als nicht-invasiver klinischer Test zu erkennen.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Hochdurchsatz-Durchflusszytometrie zellbasierten Assay auf Antikörper gegen N-Methyl-D-Aspartat-Rezeptor oder Dopamin-2-Rezeptor im menschlichen Serum Detect

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Forschung

Medizin

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell (CTC) Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

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The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Sammlung, Isolierung, und Durchflusszytometrische Analyse der Menschen Endozervikale Proben

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