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08:59 min
July 16th, 2021
DOI :
10.3791/62813-v
Chapters
0:04
Introduction
0:52
Microscope and Perfusion System Setup
2:33
Styryl Dye Imaging of Synaptic Vesicle Release
4:30
Fluorescence Imaging of Gcamp6m Calcium Transients
5:36
Image Analysis
6:23
Results: Real-Time Monitoring of the Dynamics of Presynaptic Calcium Influx and Synaptic Vesicle Membrane Fusion in In Vitro Cultured Neurons
8:15
Conclusion
Transcript
这些方法可以快速评估实验操作,致病蛋白或RNA是否可以影响突触过程,以及治疗化合物是否可以恢复功能。与电生理学相比,这些技术在相对较短的时间内提供了一组神经元突触功能的可靠读数。该协议可应用于任何神经元发育或变性疾病。
这适用于原代啮齿动物神经元培养物,以及来自诱导多能干细胞的神经元。首先,使用共聚焦成像采集软件优化图像采集设置。在所有样品中保持激励功率曝光时间、检测器增益和帧速率恒定。
对于延时成像,请选择 512 x 512 的纵横比和每秒两张图像的帧速率,以最
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Summary
描述了两种相关方法,以可视化突触传递所需的亚细胞事件。这些方案能够使用 体外 培养神经元的活细胞成像实时监测突触前钙流入和突触囊泡膜融合的动态。
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