Name: light-induced gfp expression in zebrafish embryos using the optogenetic tael/c120 system
Uploaded: 2021-08-19T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System at JoVE.com

Vi takker Stefan Materna og medlemmer af Woo og Materna labs for nyttige forslag og kommentarer til denne protokol. Vi takker Anna Reade, Kevin Gardner og Laura Motta-Mena for værdifuld diskussion og indsigt, mens de udvikler denne protokol. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Institutes of Health (NIH; R03 DK106358) og University of California Cancer Research Coordination Committee (CRN-20-636896) til S.W.

Denne undersøgelse blev udført med godkendelse fra Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) fra University of California Merced.
1. Zebrafisk passage og embryo indsamling
<ol><li>Bevar separate transgene zebrafisklinjer, der indeholder enten TAEL-transskriptionsaktivatoren eller det C120-kontrollerede reportergen for at minimere falsk aktivering.</li>
	<li>Kryds 6-8 voksne zebrafisk fra hver linje ved hjælp af standardmetoder9 til fremstilling af dobbelt...

<ol>
	<li>Knopf, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dually+inducible+TetON+systems+for+tissue-specific+conditional+gene+expression+in+zebrafish.">Dually inducible TetON systems for tissue-specific conditional gene expression in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (46), 19933-19938 (2010).</li><li>Halloran, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-induced+gene+expression+in+specific+cells+of+transgenic+zebrafish.">Laser-induced gene expression in specific cells of transgenic zebrafish.</a> Development. 127 (9), 1953-1960 (2000).</li><li>Hesselson, D., Anderson, R. M., Beinat, M., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+populations+of+quiescent+and+proliferative+pancreatic+beta-cells+identified+by+HOTcre+mediated+labeling.">Distinct populations of quiescent and proliferative pancreatic beta-cells identified by HOTcre mediated labeling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (35), 14896-14901 (2009).</li><li>Tischer, D., Weiner, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cell+signalling+with+optogenetic+tools.">Illuminating cell signalling with optogenetic tools.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 15 (8), 551-558 (2014).</li><li>Reade, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAEL:+a+zebrafish-optimized+optogenetic+gene+expression+system+with+fine+spatial+and+temporal+control.">TAEL: a zebrafish-optimized optogenetic gene expression system with fine spatial and temporal control.</a> Development. 144 (2), 345-355 (2017).</li><li>LaBelle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAEL+2.0:+An+improved+optogenetic+expression+system+for+zebrafish.">TAEL 2.0: An improved optogenetic expression system for zebrafish.</a> Zebrafish. 18 (1), 20-28 (2021).</li><li>Rivera-Cancel, G., Motta-Mena, L. B., Gardner, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+natural+and+artificial+DNA+substrates+for+light-activated+LOV-HTH+transcription+factor+EL222.">Identification of natural and artificial DNA substrates for light-activated LOV-HTH transcription factor EL222.</a> Biochemistry. 51 (50), 10024-10034 (2012).</li><li>Motta-Mena, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optogenetic+gene+expression+system+with+rapid+activation+and+deactivation+kinetics.">An optogenetic gene expression system with rapid activation and deactivation kinetics.</a> Nature Chemical Biology. 10 (3), 196-202 (2014).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (69), e4196 (2012).</li><li>Holder, N., Xu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+DNA,+RNA,+and+Protein+into+the+Fertilized+Zebrafish+Egg+for+Analysis+of+Gene+Function.">Microinjection of DNA, RNA, and Protein into the Fertilized Zebrafish Egg for Analysis of Gene Function.</a> Molecular Embryology. , 487-490 (1999).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+Method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li><li>Wang, X., Chen, X., Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+control+of+gene+expression+by+a+light-switchable+transgene+system.">Spatiotemporal control of gene expression by a light-switchable transgene system.</a> Nature Methods. 9 (3), 266-269 (2012).</li><li>Mruk, K., Ciepla, P., Piza, P. A., Alnaqib, M. A., Chen, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+cell+ablation+in+zebrafish+using+optogenetic+transcriptional+control.">Targeted cell ablation in zebrafish using optogenetic transcriptional control.</a> Development. 147 (12), (2020).</li><li>Liu, H., Gomez, G., Lin, S., Lin, S., Lin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+control+of+transcription+in+zebrafish.">Optogenetic control of transcription in zebrafish.</a> PloS One. 7 (11), 50738 (2012).</li><li>Shimizu-Sato, S., Huq, E., Tepperman, J. M., Quail, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+light-switchable+gene+promoter+system.">A light-switchable gene promoter system.</a> Nature Biotechnology. 20 (10), 1041-1044 (2002).</li><li>Krueger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+applications+of+optogenetics+in+developmental+biology.">Principles and applications of optogenetics in developmental biology.</a> Development. 146 (20), (2019).</li></ol>

Denne protokol beskriver brugen af det optogenetiske TAEL/C120-system til at opnå blåt lysinducerbart genekspression. Dette system består af en transskriptionsaktivator, TAEL, der dimerizes ved belysning med blåt lys og aktiverer transskription af et gen af interesse nedstrøms af et C120-reguleringselement. Induceret udtryk for en GFP reporter kan påvises efter så lidt som 30 min af lys eksponering, tyder på, at denne tilgang besidder relativt hurtig og lydhør kinetikere.
Flere faktor...

Inucible genekspressionssystemer hjælper med at kontrollere mængden, timingen og placeringen af genekspression. Det har imidlertid været en udfordring at opnå nøjagtig rumlig og tidsmæssig kontrol i flercellede organismer. Tidsmæssig kontrol opnås oftest ved at tilføje småmolekyleforbindelser1 eller aktivering af varmechok promotorer2. Stadig, begge tilgange er sårbare over for spørgsmål om timing, induktion styrke, og off-target stress svar. Rumlig kontrol opnås hovedsageligt ved brug af vævsspecifikke initiativtagere3, men denne tilgang kræver et passende promotor- eller reguleringselement, som ikke altid er tilgængeligt, og det er ikke befordrende for induktion på subvævsniveau.
I modsætning til sådanne konventionelle tilgange har lysaktiverede optogenetiske transskriptoratorer potentiale for finere rumlig og tidsmæssig kontrol af genekspression4. Det blå lysfølsomme TAEL/C120-system er udviklet og optimeret til brug i zebrafiskembryoner5,6. Dette system er baseret på en endogen lysaktiveret transskription faktor fra bakterien E. litoralis7,8. TAEL/C120-systemet består af en transskriptionsaktivator kaldet TAEL, der indeholder et Kal-TA4 transaktiveringsdomæne, et blåt lysfølsomt LOV-domæne (lys-ilt-spændingssensor) domæne og et helix-turn-helix (HTH) DNA-bindende domæne5. Når de belyses, gennemgår LOV-domænerne en kropsbygningsændring, der gør det muligt for to TAEL-molekyler at dimerisere, binde sig til en TAEL-lydhør C120-promotor og indlede transskription af et downstream-gen af interesse5,8. TAEL/C120-systemet udviser hurtig og robust induktion med minimal toksicitet, og det kan aktiveres af flere forskellige lette leveringsmetoder. For nylig blev der foretaget forbedringer af TAEL/C120-systemet ved at tilføje et nukleart lokaliseringssignal til TAEL (TAEL-N) og ved at koble C120-reguleringselementet til en cFos basal promotor (C120F) (figur 1A). Disse ændringer forbedrede induktionsniveauet med mere end 15 gange6.
I denne protokol bruges et simpelt LED-panel til at aktivere TAEL/C120-systemet og fremkalde allestedsnærværende udtryk for et reportergen, GFP. Udtryk induktion kan overvåges kvalitativt ved at observere fluorescens intensitet eller kvantitativt ved at måle udskrift niveauer ved hjælp af kvantitative real-time PCR (qRT-PCR). Denne protokol vil demonstrere TAEL/C120-systemet som et alsidigt, brugervenligt værktøj, der muliggør robust regulering af genekspression in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BioRender web-based science illustration tool</td>
			<td>BioRender</td>
			<td></td>
			<td>https://biorender.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Color CCD digital camera</td>
			<td>Lumenara</td>
			<td>755-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Power and Energy Meter Console, Digital 4&#34; LCD</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>PM100D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excitation filter, 545 nm</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>ET545/25x</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>illustra RNAspin Mini kit</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>95017-491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instsant Ocean Sea Salt</td>
			<td>Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS AQUA Dimmable 165 W LED Aquarium light (blue and white)</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B017GWDF7E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylcellulose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEARPOW Programmable digital timer switch</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01G6O28NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerfeCTa SYBR green fast mix</td>
			<td>Quantabio</td>
			<td>101414-286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop image procesing software</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism graphing and statistics software</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>qScript XLT cDNA SuperMix</td>
			<td>Quantabio</td>
			<td>10142-786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantStudio 3 Real-Time PCR System</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>A28137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Cite 120 Fluorescence LED light source</td>
			<td>Excelitas</td>
			<td>010-00326R</td>
			<td>Discontinued. It has been replaced with the X-Cite mini+</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light-induced gfp expression in zebrafish embryos using the optogenetic tael/c120 system

Inucible genekspressionssystemer er et uvurderligt værktøj til at studere biologiske processer. Optogenetiske ekspressionssystemer kan give præcis kontrol over genekspression timing, placering og amplitud ved hjælp af lys som inducerende middel. I denne protokol bruges et optogenetisk ekspressionssystem til at opnå let induktivt genekspression i zebrafiskembryoner. Dette system er afhængig af en manipuleret transskription faktor kaldet TAEL baseret på en naturligt forekommende lys-aktiveret transskription faktor fra bakterien E. litoralis. Når TAEL lyser med blåt lys, dimerizes, binder sig til sit cognate regulatoriske element kaldet C120 og aktiverer transskription. Denne protokol bruger transgene zebrafisk embryoner, der udtrykker TAEL transskription faktor under kontrol af den allestedsnærværende ubb promotor. Samtidig driver C120-reguleringselementet udtrykket af et fluorescerende reportergen (GFP). Ved hjælp af et simpelt LED-panel til at levere aktiverende blåt lys kan induktion af GFP-udtryk først detekteres efter 30 minutters belysning og når et højdepunkt på mere end 130 gange induktion efter 3 timers lysbehandling. Udtrykinduktion kan vurderes ved kvantitativ realtids-PCR (qRT-PCR) og ved fluorescensmikroskopi. Denne metode er en alsidig og brugervenlig tilgang til optogenetisk genekspression.

Til denne demonstration blev en C120-responsiv GFP-reporterlinje (Tg(C120F:GFP)ucm107)) krydset med en transgen linje, der udtrykker TAEL-N allestedsnærværende fra den allestedsnærværende b (ubb) promotor (Tg(ubb:TAEL-N)ucm113)) for at producere dobbelt transgene embryoner, der indeholder begge elementer. 24 timer efter befrugtningen blev embryonerne udsat for aktivering af det blå lys, pulseret med en frekvens på 1 time på/1 time off. Induktion af GFP-udtr...

Watch this Scientific Journal Video about Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System at JoVE.com

Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System

Optogenetik er et kraftfuldt værktøj med vidtrækkende applikationer. Denne protokol viser, hvordan man opnår let induktible genekspression i zebrafisk embryoner ved hjælp af det blå lys-lydhør TAEL/C120 system.

Lysfremkaldt GFP-udtryk i zebrafiskembryoner ved hjælp af det optogenetiske TAEL/C120-system

Inducible gene expression systems are an invaluable tool for studying biological processes. Optogenetic expression systems can provide precise control ...

Denne protokol er vigtig, fordi den er en optogenetisk eller lysaktiveret metode til at fremkalde genekspression i en intakt organisme. I vores tilfælde et zebrafiskembryo. Fordelen ved denne teknik er, at den bruger lys som et inducerende middel, hvilket giver mulighed for meget præcis, spacial og tidsmæssig kontrol af induktion.Denne protokol ville være nyttig i enhver situation, hvor induktible genekspression ville være nyttige. Dette omfatter ting som afstamning sporing, gain-of-function assays eller redningsforsøg. Til at begynde med placere LED-panelet i forhold til petriskåle, der indeholder embryoner til levering af 1,5 milliwatt pr kvadratcentimeter effekt af lys til flere embryoner på én gang.For at reducere risikoen for fotoskader på Tail Transcriptional Activator skal du sende lyset med intervaller på en times on-off ved hjælp af et timerrelæ, hvis det lyser i mere end tre timer. Fjern Petriskål låg for at minimere lysspredning fra kondens. Placer petriskåle, der indeholder kontrolfostre og en lyssikker kasse til mørk kontrol.Fjern embryoner fra belysning efter den ønskede aktiveringsvarighed. For total RNA-udvinding skal du bruge et RNA-ekstraktionssæt. Overfør embryonerne til et 1,5 milliliter mikrocentrifugerør og fjern det overskydende æggevand.Efter tilsætning af lysisbuffer homogeniseres embryonerne med plastklage. Overfør lysatet til en kit medfølgende kolonne, og følg producentens anvisninger for at rense RNA. Opbevar den rensede RNA, på minus 20 til minus 80 grader Celsius, indtil brug eller straks syntetisere cDNA fra et mikrogram, samlede RNA ved hjælp af cDNA syntese kit, ved at følge producentens instruktion.Tilføj et mikrogram RNA i en tynd væg 0,2 milliliter, PCR rør, der indeholder fire mikroliter, af fem gange cDNA reaktion master mix, efterfulgt af tilsætning af en mikroliter, af 20 gange omvendt transskriptase enzymopløsning. Dernæst udgør et sidste volumen på 20 mikroliter, med nucleasefrit vand. Placer røret i en programmeret Thermo cycler til cDNA syntese.Opbevar det syntetiserede cDNA ved minus 20 grader celsius, indtil det bruges eller straks bruges til kvantitativ vurdering. Opsætning af kvantitative PCR-reaktioner, der indeholder cybergrønne enzymmasterblanding. Fem gange fortyndede cDNA- og GFP-primere ved 325 nanomolarkoncentration i triplikater og udfører reaktionen i en programmeret PCR-maskine i realtid.Når reaktionen er afsluttet, skal du analysere smeltekurven for at bestemme reaktionsspecifikiteten. Beregn lysaktiveret induktion som fold ændring i forhold til kontrol embryoner ved hjælp af dobbelt Delta CT metode. Og bruge statistisk software til at bestemme betydningen.Efter fjernelse af embryoner fra belysning, immobilisere embryoner til billeddannelse i 3% methylcellulose indeholder 0,01% Tricain i glas depression dias. Få fluorescens og brightfield-billeder på et fluorescerende stereomikroskop, der er tilsluttet et digitalt kamera ved hjælp af standard GFP-filterindstillinger. Flet brightfield og fluorescens billeder efter erhvervelsen med billedbehandling software.Kvantificering af GFP-udtryk indikerede induktion af udtryk så hurtigt som 30 minutter efter eksponeringen af blåt lys. Niveauet af GFP udtryk derefter fortsatte med at stige op til seks timer, efter aktivering støt. GFP-induktionen blev også kvalitativt vurderet ved at undersøge fluorescensintensiteten samtidig med, at der var tidspunkter efter aktiveringen.GFP fluorescens over baggrundsniveauer blev først observeret ved tre timer efter aktivering og blev mærkbart lysere på seks timer efter aktivering. I modsætning kontrol embryoner for alle tidspunkter, holdes i mørke, ikke udvise, nogen mærkbar GFP fluorescens. Det aktiverende lys skal være i det synlige lysspektrums blå rækkevidde.Både rumlys og sollys indeholder noget blåt lys. Så pas på at beskytte dine negative kontroller mod eventuelle omgivende lyskilder. TAEL C120-systemet er genetisk kodet og modulært og kan drive udtryk for ethvert gen af interesse.Så kombineret med andre teknikker kan det bruges til at besvare en række biologiske spørgsmål.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging af medfødte immunsystem og præneoplastiske celleinteraktioner Brug en inducerbar Gal4 / UAS Expression System i Larve Zebrafisk Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Måling Protein Stabilitet i Living zebrafisk embryoner anvendelse af fluorescens Decay Efter fotoomdannelse (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

En optogenetic fremgangsmåde for vurdering af Dannelse af neuronal forbindelser i en co-kultur System

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

Funktionel kloning ved anvendelse af en<em&gt; Xenopus</em&gt; Oocyt Expression System

Identification of genes responsible for embryonic induction poses a number of challenges; to name a few, secreted molecules of interest may be low in ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Sporing Celler i GFP-transgene zebrafisk Brug af Photoconvertible PSmOrange System

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Multi-target Chromogenic Whole-mount In Situ Hybridization for Comparing Gene Expression Domains in Drosophila Embryos

Multi-target Chromogenic Whole-mount In Situ Hybridization for Comparing Gene Expression Domains in Drosophila Embryos

Multi-target Chromogenic Whole-mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering til sammenligning genekspression domæner i<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryoner

To analyze gene regulatory networks active during embryonic development and organogenesis it is essential to precisely define how the different genes are ...

Biosensing Motor Neuron Membrane Potential in Live Zebrafish Embryos

Biosensing Motor Neuron Membran Potential i Live Zebrafish Embryoer

The protocols described here are designed to allow researchers to study cell communication without altering the integrity of the environment in which the ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging af transgene genekspression i Individuel Retinal progenitorer i kimære zebrafisk embryoner til Studieinformationen Cell Nonautonomous påvirkninger

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

Fast and Efficient Expression of Multiple Proteins in Avian Embryos Using mRNA Electroporation

Hurtig og effektiv ekspression af flere proteiner i aviær embryoner ved hjælp af mRNA-elektroporation

We report that mRNA electroporation permits fluorescent proteins to label cells in living quail embryos more quickly and broadly than DNA electroporation. ...

Quantification of Ethanol Levels in Zebrafish Embryos Using Head Space Gas Chromatography

Kvantificering af ethanolniveauer i zebrafiskembryoner ved hjælp af head space gaskromatografi

Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASD) describe a highly variable continuum of ethanol-induced developmental defects, including facial dysmorphologies ...