Name: light-induced gfp expression in zebrafish embryos using the optogenetic tael/c120 system
Uploaded: 2021-08-19T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System at JoVE.com

Vi takker Stefan Materna og medlemmer av Woo- og Materna-laboratoriene for nyttige forslag og kommentarer til denne protokollen. Vi takker Anna Reade, Kevin Gardner og Laura Motta-Mena for verdifull diskusjon og innsikt mens vi utvikler denne protokollen. Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra National Institutes of Health (NIH; R03 DK106358) og University of California Cancer Research Coordinating Committee (CRN-20-636896) til S.W.

Denne studien ble utført med godkjenning fra Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved University of California Merced.
1. Sebrafiskkryssing og embryosamling
<ol><li>Oppretthold separate transgene sebrafisklinjer som inneholder enten TAEL-transkripsjonsaktivatoren eller det C120-kontrollerte reportergenet for å minimere falsk aktivering.</li>
	<li>Kryss 6-8 voksne sebrafisk fra hver linje ved hjelp av standardmetode9 for å produsere doble transgene em...

<ol>
	<li>Knopf, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dually+inducible+TetON+systems+for+tissue-specific+conditional+gene+expression+in+zebrafish.">Dually inducible TetON systems for tissue-specific conditional gene expression in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (46), 19933-19938 (2010).</li><li>Halloran, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-induced+gene+expression+in+specific+cells+of+transgenic+zebrafish.">Laser-induced gene expression in specific cells of transgenic zebrafish.</a> Development. 127 (9), 1953-1960 (2000).</li><li>Hesselson, D., Anderson, R. M., Beinat, M., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+populations+of+quiescent+and+proliferative+pancreatic+beta-cells+identified+by+HOTcre+mediated+labeling.">Distinct populations of quiescent and proliferative pancreatic beta-cells identified by HOTcre mediated labeling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (35), 14896-14901 (2009).</li><li>Tischer, D., Weiner, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cell+signalling+with+optogenetic+tools.">Illuminating cell signalling with optogenetic tools.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 15 (8), 551-558 (2014).</li><li>Reade, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAEL:+a+zebrafish-optimized+optogenetic+gene+expression+system+with+fine+spatial+and+temporal+control.">TAEL: a zebrafish-optimized optogenetic gene expression system with fine spatial and temporal control.</a> Development. 144 (2), 345-355 (2017).</li><li>LaBelle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAEL+2.0:+An+improved+optogenetic+expression+system+for+zebrafish.">TAEL 2.0: An improved optogenetic expression system for zebrafish.</a> Zebrafish. 18 (1), 20-28 (2021).</li><li>Rivera-Cancel, G., Motta-Mena, L. B., Gardner, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+natural+and+artificial+DNA+substrates+for+light-activated+LOV-HTH+transcription+factor+EL222.">Identification of natural and artificial DNA substrates for light-activated LOV-HTH transcription factor EL222.</a> Biochemistry. 51 (50), 10024-10034 (2012).</li><li>Motta-Mena, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optogenetic+gene+expression+system+with+rapid+activation+and+deactivation+kinetics.">An optogenetic gene expression system with rapid activation and deactivation kinetics.</a> Nature Chemical Biology. 10 (3), 196-202 (2014).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (69), e4196 (2012).</li><li>Holder, N., Xu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+DNA,+RNA,+and+Protein+into+the+Fertilized+Zebrafish+Egg+for+Analysis+of+Gene+Function.">Microinjection of DNA, RNA, and Protein into the Fertilized Zebrafish Egg for Analysis of Gene Function.</a> Molecular Embryology. , 487-490 (1999).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+Method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li><li>Wang, X., Chen, X., Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+control+of+gene+expression+by+a+light-switchable+transgene+system.">Spatiotemporal control of gene expression by a light-switchable transgene system.</a> Nature Methods. 9 (3), 266-269 (2012).</li><li>Mruk, K., Ciepla, P., Piza, P. A., Alnaqib, M. A., Chen, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+cell+ablation+in+zebrafish+using+optogenetic+transcriptional+control.">Targeted cell ablation in zebrafish using optogenetic transcriptional control.</a> Development. 147 (12), (2020).</li><li>Liu, H., Gomez, G., Lin, S., Lin, S., Lin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+control+of+transcription+in+zebrafish.">Optogenetic control of transcription in zebrafish.</a> PloS One. 7 (11), 50738 (2012).</li><li>Shimizu-Sato, S., Huq, E., Tepperman, J. M., Quail, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+light-switchable+gene+promoter+system.">A light-switchable gene promoter system.</a> Nature Biotechnology. 20 (10), 1041-1044 (2002).</li><li>Krueger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+applications+of+optogenetics+in+developmental+biology.">Principles and applications of optogenetics in developmental biology.</a> Development. 146 (20), (2019).</li></ol>

Denne protokollen beskriver bruken av optogenetisk TAEL/C120-system for å oppnå blått lys-induserbart genuttrykk. Dette systemet består av en transkripsjonsaktivator, TAEL, som dimmerer ved belysning med blått lys og aktiverer transkripsjon av et gen av interesse nedstrøms for et C120 regulatorisk element. Indusert uttrykk for en GFP-reporter kan oppdages etter så lite som 30 min lyseksponering, noe som tyder på at denne tilnærmingen har relativt rask og responsiv kinetikk.
Flere fakt...

Inducible genuttrykkssystemer bidrar til å kontrollere mengden, timingen og plasseringen av genuttrykk. Det har imidlertid vært utfordrende å oppnå nøyaktig romlig og tidsmessig kontroll i multicellulære organismer. Temporal kontroll oppnås oftest ved å legge til småmolekylforbindelser1 eller aktivering av varmesjokkpromotorer2. Likevel er begge tilnærmingene sårbare for spørsmål om timing, induksjonsstyrke og stressrespons utenfor målet. Romlig kontroll oppnås hovedsakelig ved bruk av vevsspesifikke promotorer3, men denne tilnærmingen krever en passende promotor eller regulatorisk element, som ikke alltid er tilgjengelige, og det bidrar ikke til sub-vevsnivå induksjon.
I motsetning til slike konvensjonelle tilnærminger har lysaktiverte optogenetiske transkripsjonsaktivatorer potensialet for finere romlig og tidsmessig kontroll av genuttrykk4. Det blå lysresponsive TAEL/C120-systemet ble utviklet og optimalisert for bruk i sebrafiskembryoer5,6. Dette systemet er basert på en endogene lysaktivert transkripsjonsfaktor fra bakterien E. litoralis7,8. TAEL/C120-systemet består av en transkripsjonsaktivator kalt TAEL som inneholder et Kal-TA4-transaktiveringsdomene, et blått lysresponsivt LOV-domene (lys-oksygenspenningssensor) og et helix-turn-helix (HTH) DNA-bindende domene5. Når de belyses, gjennomgår LOV-domenene en konformasjonsendring som gjør at to TAEL-molekyler kan dimme, binde seg til en TAEL-responsiv C120-promotor og initiere transkripsjon av et nedstrøms gen av interesse5,8. TAEL/C120-systemet har rask og robust induksjon med minimal toksisitet, og det kan aktiveres av flere forskjellige lysleveringsmodaliteter. Nylig ble forbedringer av TAEL/C120-systemet gjort ved å legge til et kjernefysisk lokaliseringssignal til TAEL (TAEL-N) og ved å koble C120-forskriftselementet til en cFos basalpromotor (C120F) (figur 1A). Disse endringene forbedret induksjonsnivåene med mer enn 15 ganger6.
I denne protokollen brukes et enkelt LED-panel til å aktivere TAEL / C120-systemet og indusere det allestedsnærværende uttrykket til et reportergen, GFP. Uttrykksinduksjon kan overvåkes kvalitativt ved å observere fluorescensintensitet eller kvantitativt ved å måle transkripsjonsnivåer ved hjelp av kvantitativ sanntids-PCR (qRT-PCR). Denne protokollen vil demonstrere TAEL/C120-systemet som et allsidig, brukervennlig verktøy som muliggjør robust regulering av genuttrykk in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BioRender web-based science illustration tool</td>
			<td>BioRender</td>
			<td></td>
			<td>https://biorender.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Color CCD digital camera</td>
			<td>Lumenara</td>
			<td>755-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Power and Energy Meter Console, Digital 4&#34; LCD</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>PM100D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excitation filter, 545 nm</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>ET545/25x</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>illustra RNAspin Mini kit</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>95017-491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instsant Ocean Sea Salt</td>
			<td>Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS AQUA Dimmable 165 W LED Aquarium light (blue and white)</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B017GWDF7E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylcellulose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEARPOW Programmable digital timer switch</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01G6O28NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerfeCTa SYBR green fast mix</td>
			<td>Quantabio</td>
			<td>101414-286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop image procesing software</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism graphing and statistics software</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>qScript XLT cDNA SuperMix</td>
			<td>Quantabio</td>
			<td>10142-786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantStudio 3 Real-Time PCR System</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>A28137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Cite 120 Fluorescence LED light source</td>
			<td>Excelitas</td>
			<td>010-00326R</td>
			<td>Discontinued. It has been replaced with the X-Cite mini+</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light-induced gfp expression in zebrafish embryos using the optogenetic tael/c120 system

Inducible genuttrykkssystemer er et uvurderlig verktøy for å studere biologiske prosesser. Optogenetiske uttrykkssystemer kan gi presis kontroll over genuttrykkstid, plassering og amplitude ved hjelp av lys som induserende middel. I denne protokollen brukes et optogenetisk uttrykkssystem for å oppnå lys-inducible genuttrykk i sebrafiskembryoer. Dette systemet er avhengig av en konstruert transkripsjonsfaktor kalt TAEL basert på en naturlig forekommende lysaktivert transkripsjonsfaktor fra bakterien E. litoralis. Når den belyses med blått lys, dimmerer TAEL, binder seg til sitt konjakkregulatoriske element kalt C120, og aktiverer transkripsjon. Denne protokollen bruker transgene sebrafiskembryoer som uttrykker TAEL-transkripsjonsfaktoren under kontroll av den allestedsnærværende ubb-promotoren. Samtidig driver C120 regulatorisk element uttrykket av et fluorescerende reportergen (GFP). Ved hjelp av et enkelt LED-panel for å levere aktiverende blått lys, kan induksjon av GFP-uttrykk først oppdages etter 30 min belysning og når en topp på mer enn 130 ganger induksjon etter 3 timers lysbehandling. Uttrykksinduksjon kan vurderes ved kvantitativ sanntids PCR (qRT-PCR) og ved fluorescensmikroskopi. Denne metoden er en allsidig og brukervennlig tilnærming for optogenetisk genuttrykk.

For denne demonstrasjonen ble en C120-responsiv GFP-reporterlinje (Tg(C120F:GFP)ucm107)krysset med en transgen linje som uttrykker TAEL-N allestedsnærværende fra allestedsnærværende b (ubb) promotor (Tg(ubb:TAEL-N)ucm113)) for å produsere doble transgene embryoer som inneholder begge elementene. 24 timer etter befruktning ble embryoene utsatt for å aktivere det blå lyset, pulsert med en frekvens på 1 t på / 1 time av. Induksjon av GFP-uttrykk ble kvantifi...

Watch this Scientific Journal Video about Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System at JoVE.com

Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System

Optogenetikk er et kraftig verktøy med omfattende applikasjoner. Denne protokollen viser hvordan man oppnår lys-induserbart genuttrykk i sebrafiskembryoer ved hjelp av det blå lysresponsive TAEL/C120-systemet.

Lysindusert GFP-uttrykk i sebrafiskembryoer ved hjelp av Optogenetic TAEL/C120-systemet

Inducible gene expression systems are an invaluable tool for studying biological processes. Optogenetic expression systems can provide precise control ...

Denne protokollen er betydelig fordi den er en optogenetisk, eller lysaktivert metode, for å indusere genuttrykk, i en intakt organisme. I vårt tilfelle, et sebrafiskembryo. Fordelen med denne teknikken er at den bruker lys, som et induserende middel, noe som gir svært presis, spacial og temporal kontroll av induksjon.Denne protokollen vil være nyttig for enhver situasjon der inducible genuttrykk ville være nyttig. Dette inkluderer ting som linjesporing, gain-of-function analyser eller redningseksperimenter. Til å begynne med plasser LED-panelet i forhold til Petri-rettene som inneholder embryoer for å levere 1,5 milliwatt per kvadratcentimeter lys til flere embryoer samtidig.For å redusere risikoen for fotoskade på tail transcriptional Activator, legg inn lyset i intervaller på en times av-på ved hjelp av et timerrelé, hvis du lyser i mer enn tre timer. Fjern Petri-parabolenlokkene for å minimere lett spredning fra kondens. Plasser Petri-retter som inneholder kontrollembryoer og en lyssikker boks for mørke kontroller.Fjern embryoer fra belysning, etter ønsket aktiveringsvarighet. For total RNA-ekstraksjon, bruk et RNA-ekstraksjonssett. Overfør embryoene til et 1,5 milliliter mikro sentrifugerrør og fjern overflødig eggvann.Etter å ha lagt til lysisbuffer, homogeniser embryoene med plastskadet. Overfør lysatet til et sett medfølgende kolonne og følg produsentens instruksjoner for å rense RNA. Oppbevar den rensede RNA, ved minus 20 til minus 80 grader Celsius, til bruk eller umiddelbart syntetiserer cDNA fra ett mikrogram, total RNA ved hjelp av cDNA-syntesesettet, ved å følge produsentens instruksjon.Tilsett ett mikrogram RNA i en tynn vegg 0,2 milliliter, PCR-rør, som inneholder fire mikroliter, av fem ganger cDNA reaksjon master mix, etterfulgt av tilsetning av en mikroliter, av 20 ganger omvendt transkripsjonase enzym løsning. Deretter utgjør et endelig volum på 20 mikroliter, med nukleasefritt vann. Plasser røret i en programmert termosyklus for cDNA-syntese.Oppbevar den syntetiserte cDNA ved minus 20 grader celsius til bruk eller umiddelbart bruk for kvantitativ vurdering. Sett opp de kvantitative PCR-reaksjonene som inneholder cybergrønn enzymmesterblanding. Fem ganger fortynnede cDNA- og GFP-primere ved 325 nanomolarkonsentrasjon i triplikater og utfører reaksjonen i en programmert PCR-maskin i sanntid.Etter ferdigstillelse av reaksjonen, analyser smeltekurven for å bestemme reaksjonssp spesifisiteten. Beregn lysaktivert induksjon som foldeendring i forhold til kontrollembryoene ved hjelp av den doble Delta CT-metoden. Og bruk statistisk programvare for å bestemme betydningen.Etter å ha fjernet embryoene fra belysning, immobiliser embryoer for avbildning i 3% metylcellulose som inneholder 0,01% Trikain i glassdepresjonsskred. Skaff deg fluorescens- og brightfield-bilder på et fluorescerende stereomikroskop koblet til et digitalt kamera ved hjelp av standard GFP-filterinnstillinger. Slå sammen brightfield- og fluorescensbilder etter oppkjøpet med bildebehandlingsprogramvare.Kvantifisering av GFP-uttrykk indikerte induksjon av uttrykk så snart som 30 minutter etter eksponeringen for blått lys. Nivåene av GFP-uttrykk fortsatte deretter å øke opptil seks timer, etter aktivering jevnt og trutt. GFP-induksjon ble også kvalitativt vurdert ved å undersøke fluorescensintensiteten samtidig som den ble aktivert etter aktivering.GFP fluorescens over bakgrunnsnivåer ble først observert på tre timer etter aktivering og ble merkbart lysere på seks timer Etter aktivering. I kontrastkontroll embryoer for alle tidspunkter, holdt i mørket, viste ikke, noen merkbar GFP fluorescens. Aktiveringslyset må være i det blå området til det synlige lysspekteret.Både romlys og sollys inneholder noe blått lys. Så pass på å beskytte de negative kontrollene dine mot eventuelle omgivelseslyskilder. TAEL C120-systemet er genetisk kodet og modulært og kan drive uttrykk for ethvert gen av interesse.Så, kombinert med andre teknikker, kan den brukes til å svare på en rekke biologiske spørsmål.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging av medfødte immun og preneoplastiske Cell Interaksjoner Bruke en induserbar Gal4 / UAS Expression System i Larvesebrafisk Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Måling Protein Stabilitet på Living Sebrafisk embryo med fluoresens Decay Etter Photoconversion (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

En optogenetic Approach for Assessing Dannelse av nevronkoblinger i en Co-kultur System

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

Funksjonell Cloning Ved hjelp av en<em&gt; Xenopus</em&gt; Oocyte Expression System

Identification of genes responsible for embryonic induction poses a number of challenges; to name a few, secreted molecules of interest may be low in ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Sporing celler i GFP-transgene Sebrafisk Bruke Photoconvertible PSmOrange System

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Multi-target Chromogenic Whole-mount In Situ Hybridization for Comparing Gene Expression Domains in Drosophila Embryos

Multi-target Chromogenic Whole-mount In Situ Hybridization for Comparing Gene Expression Domains in Drosophila Embryos

Multi-target Chromogenic Whole-mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering for Sammenligning av genekspresjon domener i<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryoet

To analyze gene regulatory networks active during embryonic development and organogenesis it is essential to precisely define how the different genes are ...

Biosensing Motor Neuron Membrane Potential in Live Zebrafish Embryos

Biosensing Motor Neuron Membran Potensial i Live Zebrafish Embryoer

The protocols described here are designed to allow researchers to study cell communication without altering the integrity of the environment in which the ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In vivo avbildning av transgene genuttrykk i Individuell Netthinnestamfedre i kimære Sebrafisk embryoer å studere Cell Nonautonomous Influences

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

Fast and Efficient Expression of Multiple Proteins in Avian Embryos Using mRNA Electroporation

Rask og effektiv uttrykk for flere proteiner i avian embryo bruke mRNA electroporation

We report that mRNA electroporation permits fluorescent proteins to label cells in living quail embryos more quickly and broadly than DNA electroporation. ...

Quantification of Ethanol Levels in Zebrafish Embryos Using Head Space Gas Chromatography

Kvantifisering av etanolnivåer i sebrafiskembryoer ved hjelp av hodeplassgasskromatografi

Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASD) describe a highly variable continuum of ethanol-induced developmental defects, including facial dysmorphologies ...