Name: light-induced gfp expression in zebrafish embryos using the optogenetic tael/c120 system
Uploaded: 2021-08-19T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System at JoVE.com

Vi tackar Stefan Materna och medlemmar i Woo och Materna labs för hjälpsamma förslag och kommentarer om detta protokoll. Vi tackar Anna Reade, Kevin Gardner och Laura Motta-Mena för värdefulla diskussioner och insikter samtidigt som vi utvecklar detta protokoll. Detta arbete stöddes av bidrag från National Institutes of Health (NIH; R03 DK106358) och University of California Cancer Research Coordinating Committee (CRN-20-636896) till S.W.

Denna studie utfördes med godkännande av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) vid University of California Merced.
1. Zebrafiskövergång och embryosamling
<ol><li>Underhåll separata transgena zebrafisklinjer som innehåller antingen TAEL-transkriptionsaktivatorn eller den C120-kontrollerade reportergenen för att minimera falsk aktivering.</li>
	<li>Korsa 6-8 vuxna zebrafiskar från varje rad medstandardmetoderna 9 för att producera dubbla transgen...

<ol>
	<li>Knopf, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dually+inducible+TetON+systems+for+tissue-specific+conditional+gene+expression+in+zebrafish.">Dually inducible TetON systems for tissue-specific conditional gene expression in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (46), 19933-19938 (2010).</li><li>Halloran, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-induced+gene+expression+in+specific+cells+of+transgenic+zebrafish.">Laser-induced gene expression in specific cells of transgenic zebrafish.</a> Development. 127 (9), 1953-1960 (2000).</li><li>Hesselson, D., Anderson, R. M., Beinat, M., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+populations+of+quiescent+and+proliferative+pancreatic+beta-cells+identified+by+HOTcre+mediated+labeling.">Distinct populations of quiescent and proliferative pancreatic beta-cells identified by HOTcre mediated labeling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (35), 14896-14901 (2009).</li><li>Tischer, D., Weiner, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cell+signalling+with+optogenetic+tools.">Illuminating cell signalling with optogenetic tools.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 15 (8), 551-558 (2014).</li><li>Reade, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAEL:+a+zebrafish-optimized+optogenetic+gene+expression+system+with+fine+spatial+and+temporal+control.">TAEL: a zebrafish-optimized optogenetic gene expression system with fine spatial and temporal control.</a> Development. 144 (2), 345-355 (2017).</li><li>LaBelle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAEL+2.0:+An+improved+optogenetic+expression+system+for+zebrafish.">TAEL 2.0: An improved optogenetic expression system for zebrafish.</a> Zebrafish. 18 (1), 20-28 (2021).</li><li>Rivera-Cancel, G., Motta-Mena, L. B., Gardner, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+natural+and+artificial+DNA+substrates+for+light-activated+LOV-HTH+transcription+factor+EL222.">Identification of natural and artificial DNA substrates for light-activated LOV-HTH transcription factor EL222.</a> Biochemistry. 51 (50), 10024-10034 (2012).</li><li>Motta-Mena, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optogenetic+gene+expression+system+with+rapid+activation+and+deactivation+kinetics.">An optogenetic gene expression system with rapid activation and deactivation kinetics.</a> Nature Chemical Biology. 10 (3), 196-202 (2014).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (69), e4196 (2012).</li><li>Holder, N., Xu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+DNA,+RNA,+and+Protein+into+the+Fertilized+Zebrafish+Egg+for+Analysis+of+Gene+Function.">Microinjection of DNA, RNA, and Protein into the Fertilized Zebrafish Egg for Analysis of Gene Function.</a> Molecular Embryology. , 487-490 (1999).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+Method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li><li>Wang, X., Chen, X., Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+control+of+gene+expression+by+a+light-switchable+transgene+system.">Spatiotemporal control of gene expression by a light-switchable transgene system.</a> Nature Methods. 9 (3), 266-269 (2012).</li><li>Mruk, K., Ciepla, P., Piza, P. A., Alnaqib, M. A., Chen, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+cell+ablation+in+zebrafish+using+optogenetic+transcriptional+control.">Targeted cell ablation in zebrafish using optogenetic transcriptional control.</a> Development. 147 (12), (2020).</li><li>Liu, H., Gomez, G., Lin, S., Lin, S., Lin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+control+of+transcription+in+zebrafish.">Optogenetic control of transcription in zebrafish.</a> PloS One. 7 (11), 50738 (2012).</li><li>Shimizu-Sato, S., Huq, E., Tepperman, J. M., Quail, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+light-switchable+gene+promoter+system.">A light-switchable gene promoter system.</a> Nature Biotechnology. 20 (10), 1041-1044 (2002).</li><li>Krueger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+applications+of+optogenetics+in+developmental+biology.">Principles and applications of optogenetics in developmental biology.</a> Development. 146 (20), (2019).</li></ol>

Detta protokoll beskriver användningen av det optogenetiska TAEL/C120-systemet för att uppnå blå ljusinducerbara genuttryck. Detta system består av en transkriptionell aktivator, TAEL, som dimerizes vid belysning med blått ljus och aktiverar transkription av en gen av intresse nedströms ett C120-regleringselement. Inducerad uttryck av en GFP-reporter kan upptäckas efter så lite som 30 minuters ljusexponering, vilket tyder på att detta tillvägagångssätt har relativt snabb och lyhörd kinetik.
<p class="jo...

Inducerbara genuttryckssystem hjälper till att kontrollera mängden, tidpunkten och platsen för genuttrycket. Att uppnå exakt rumslig och tidsmässig kontroll i multicellulära organismer har dock varit utmanande. Temporal kontroll uppnås oftast genom att tillsätta småmolekylföreningar1 eller aktivering av värmechockpromotors2. Ändå är båda metoderna sårbara för frågor om timing, induktionsstyrka och stressrespons utanför målet. Rumslig kontroll uppnås främst genom användning av vävnadsspecifikapromotors 3, men detta tillvägagångssätt kräver en lämplig promotor eller regleringselement, som inte alltid är tillgängliga, och det bidrar inte till induktion på subvävnadsnivå.
I motsats till sådana konventionella metoder har ljusaktiverade optogenetiska transkriptionsaktivatorer potential för finare rumslig och tidsmässig kontroll av genuttryck4. Det blå ljuskänsliga TAEL/C120-systemet utvecklades och optimerades för användning i zebrafiskembryon5,6. Detta system är baserat på en endogen ljusaktiverad transkriptionsfaktor från bakterien E. litoralis7,8. TAEL/C120-systemet består av en transkriptionsaktivator som kallas TAEL som innehåller en Kal-TA4-transaktiveringsdomän, en blå ljusresponsiv LOV-domän (ljus-syrespänningsavkänning) och en helix-turn-helix (HTH) DNA-bindande domän5. När LOV-domänerna belyses genomgår de en konformationsförändring som gör det möjligt för två TAEL-molekyler att dimrisera, binda till en TAEL-responsiv C120-promotor och initiera transkription av en nedströmsgen av intresse5,8. TAEL/C120-systemet uppvisar snabb och robust induktion med minimal toxicitet, och det kan aktiveras av flera olika ljustillförselsätt. Nyligen gjordes förbättringar av TAEL/C120-systemet genom att lägga till en kärnlokaliseringssignal till TAEL (TAEL-N) och genom att koppla C120-regleringselementet till en cFos basalpromotor (C120F) (figur 1A). Dessa modifieringar förbättrade induktionsnivåerna med mer än 15 gånger6.
I det här protokollet används en enkel LED-panel för att aktivera TAEL/C120-systemet och inducera det allestädes närvarande uttrycket av en reportergen, GFP. Uttrycksinduktion kan övervakas kvalitativt genom att observera fluorescensintensitet eller kvantitativt genom att mäta transkriptionsnivåer med kvantitativ PCR i realtid (qRT-PCR). Detta protokoll kommer att visa TAEL/ C120-systemet som ett mångsidigt, lättanämt verktyg som möjliggör robust reglering av genuttryck in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BioRender web-based science illustration tool</td>
			<td>BioRender</td>
			<td></td>
			<td>https://biorender.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Color CCD digital camera</td>
			<td>Lumenara</td>
			<td>755-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Power and Energy Meter Console, Digital 4&#34; LCD</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>PM100D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excitation filter, 545 nm</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>ET545/25x</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>illustra RNAspin Mini kit</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>95017-491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instsant Ocean Sea Salt</td>
			<td>Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS AQUA Dimmable 165 W LED Aquarium light (blue and white)</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B017GWDF7E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylcellulose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEARPOW Programmable digital timer switch</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01G6O28NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerfeCTa SYBR green fast mix</td>
			<td>Quantabio</td>
			<td>101414-286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop image procesing software</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism graphing and statistics software</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>qScript XLT cDNA SuperMix</td>
			<td>Quantabio</td>
			<td>10142-786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantStudio 3 Real-Time PCR System</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>A28137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Cite 120 Fluorescence LED light source</td>
			<td>Excelitas</td>
			<td>010-00326R</td>
			<td>Discontinued. It has been replaced with the X-Cite mini+</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light-induced gfp expression in zebrafish embryos using the optogenetic tael/c120 system

Inducerbara genuttryckssystem är ett ovärderligt verktyg för att studera biologiska processer. Optogenetiska uttryckssystem kan ge exakt kontroll över genuttryck timing, plats och amplitud med hjälp av ljus som inducerande medel. I detta protokoll används ett optogenetiskt uttryckssystem för att uppnå ljusinducerbara genuttryck i zebrafiskembryon. Detta system förlitar sig på en konstruerad transkriptionsfaktor som kallas TAEL baserat på en naturligt förekommande ljusaktiverad transkriptionsfaktor från bakterien E. litoralis. När TAEL belyses med blått ljus dimerizes, binder till dess cognate reglerande element som kallas C120 och aktiverar transkription. Detta protokoll använder transgena zebrafiskembryon som uttrycker TAEL-transkriptionsfaktorn under kontroll av den allestädes närvarande ubbpromotorn. Samtidigt driver C120-regleringselementet uttrycket av en fluorescerande reportergen (GFP). Med hjälp av en enkel LED-panel för att leverera aktiverande blått ljus kan induktion av GFP-uttryck först detekteras efter 30 minuters belysning och når en topp på mer än 130-faldig induktion efter 3 h ljusbehandling. Uttryck induktion kan bedömas genom kvantitativ realtid PCR (qRT-PCR) och genom fluorescensmikroskopi. Denna metod är en mångsidig och lättanvänd metod för optogenetiska genuttryck.

För denna demonstration korsades en C120-lyhörd GFP-reporterlinje (Tg (C120F:GFP)ucm107) )) med en transgen linje som uttrycker TAEL-N allestädes närvarande från ubiquitin b (ubb) promotorn (Tg (ubb:TAEL-N)ucm113)) för att producera dubbla transgena embryon som innehåller båda elementen. 24 h efter befruktning utsattes embryona för aktivering av det blå ljuset, pulserade med en frekvens av 1 h på/1 h av. Induktion av GFP-uttryck kvantifierades av qRT-PC...

Watch this Scientific Journal Video about Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System at JoVE.com

Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System

Optogenetik är ett kraftfullt verktyg med omfattande applikationer. Detta protokoll visar hur man uppnår ljus-inducerbara genuttryck i zebrafiskembryon med hjälp av det blå ljuskänsliga TAEL/C120-systemet.

Ljusinducerat GFP-uttryck i zebrafiskembryon med optogenetisk TAEL/C120-system

Inducible gene expression systems are an invaluable tool for studying biological processes. Optogenetic expression systems can provide precise control ...

Detta protokoll är betydelsefullt eftersom det är en optogenetisk, eller ljusaktiverad metod, för inducerande genuttryck, i en intakt organism. I vårt fall ett zebrafiskembryon. Fördelen med denna teknik är att den använder ljus, som ett inducerande medel, vilket möjliggör mycket exakt, spacial och temporal kontroll av induktion.Detta protokoll skulle vara användbart för alla situationer där inducible gen uttryck skulle vara användbart. Detta inkluderar saker som härstamning spårning, förstärkning av funktion analyser eller räddnings experiment. Till att börja med placera LED-panelen i förhållande till petriskålarna som innehåller embryon för att leverera 1,5 milliwatt per kvadratcentimeter ljuskraft till flera embryon samtidigt.För att minska risken för fotoskador på tail transcriptional Activator, lägg ljuset med intervaller på en timmes på-off med ett timerrelä, om det lyser i mer än tre timmar. Ta bort Petri skållock för att minimera ljusspridning från kondens. Placera petriskålar som innehåller kontrollembryon och en ljussäker låda för mörka kontroller.Ta bort embryon från belysningen efter önskad aktiveringstid. För total RNA-extraktion, använd en RNA-extraktionssats. Överför embryona till ett mikrocentrifugrör på 1,5 milliliter och ta bort överflödigt äggvatten.När du har tillsats av lysbuffert homogeniserar du embryona med plastprytan. Överför lysatet till en medföljande kolonn och följ tillverkarens instruktioner för att rena RNA. Förvara det renade RNA, vid minus 20 till minus 80 grader Celsius, tills det används eller omedelbart syntetisera cDNA från ett mikrogram, totalt RNA med cDNA-syntessatsen, genom att följa tillverkarens instruktioner.Tillsätt ett mikrogram RNA i en tunn vägg 0,2 milliliter, PCR-rör, som innehåller fyra mikroliter, av fem gånger cDNA reaktionsmästareblandning, följt av tillsats av en mikroliter, av 20 gånger omvänd transkriptasenzymlösning. Utgör därefter en slutlig volym på 20 mikroliter, med nukleasfritt vatten. Placera röret i en programmerad termocyklator för cDNA-syntes.Förvara den syntetiserade cDNA vid minus 20 grader celsius tills den används eller omedelbart används för kvantitativ bedömning. Ställ in de kvantitativa PCR-reaktionerna som innehåller cybergrön enzym master mix. Femfaldiga utspädda cDNA- och GFP-primers vid 325 nanomolarkoncentration i triplikater och utför reaktionen i en programmerad PCR-maskin i realtid.När reaktionen är klar analyserar du smältkurvan för att bestämma reaktionsspecifikiteten. Beräkna ljusaktiverad induktion som vikförändring i förhållande till kontrollembryon med den dubbla Delta CT-metoden. Och använd statistisk programvara för att bestämma betydelsen.Efter att embryona avlägsnats från belysningen, immobilisera embryon för avbildning i 3%metylcellulosa som innehåller 0,01%Tricaine i glasdepressionsrutschbanor. Skaffa fluorescens- och brightfield-bilder på ett fluorescerande stereomikroskop som är anslutet till en digitalkamera med hjälp av standardinställningar för GFP-filter. Sammanfoga brightfield- och fluorescensbilder efter förvärvet med bildbehandlingsprogram.Kvantifiering av GFP-uttrycket indikerade induktion av uttryck så snart som 30 minuter efter exponeringen för blått ljus. Nivåerna av GFP-uttryck fortsatte sedan att öka upp till sex timmar, efter aktivering stadigt. GFP induktion bedömdes också kvalitativt genom att undersöka fluorescens intensitet samtidigt punkter efter aktivering.GFP fluorescens över bakgrundsnivåer observerades först vid tre timmar efter aktivering och blev märkbart ljusare vid sex timmar efter aktivering. I kontrast kontrollerar embryon för alla tid pekar, hållit i mörkret, ställde ut inte, någon märkbar GFP fluorescens. Det aktiverande ljuset måste vara inom det synliga ljusspektrumets blåa intervall.Både rumsljus och solljus innehåller lite blått ljus. Så var noga med att skydda dina negativa kontroller från eventuella omgivande ljuskällor. TAEL C120-systemet är genetiskt kodat och modulärt och kan driva uttryck för alla intressegener.Så i kombination med andra tekniker kan den användas för att svara på en rad biologiska frågor.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live avbildning av medfödda immun och preneoplastiska Cell interaktioner Använda en Inducerbar Gal4 / UAS Expression System i Larvzebrafish Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Mätning Protein Stabilitet i Living Zebrafish embryon Använda Fluorescens Decay Efter Photoconversion (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

En optogenetic tillvägagångssätt för att bedöma Bildande av neurala anslutningar i en samodlingssystemet

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

Funktionell kloning med hjälp av en<em&gt; Xenopus</em&gt; Oocyte Expression System

Identification of genes responsible for embryonic induction poses a number of challenges; to name a few, secreted molecules of interest may be low in ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Spåra celler i GFP-transgen zebrafisk Använda Photoconvertible PSmOrange System

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Multi-target Chromogenic Whole-mount In Situ Hybridization for Comparing Gene Expression Domains in Drosophila Embryos

Multi-target Chromogenic Whole-mount In Situ Hybridization for Comparing Gene Expression Domains in Drosophila Embryos

Multi-mål Kromogent Whole-mount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering för jämförelse Gene Expression domäner i<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryon

To analyze gene regulatory networks active during embryonic development and organogenesis it is essential to precisely define how the different genes are ...

Biosensing Motor Neuron Membrane Potential in Live Zebrafish Embryos

Biosensing Motor Neuron Membran Potential i Live Zebrafish Embryos

The protocols described here are designed to allow researchers to study cell communication without altering the integrity of the environment in which the ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In vivo avbildning av Transgena genuttryck i Individuell Retinal stamceller i chimär Zebrafish embryon att studera Cell Nonautonomous Influenser

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

Fast and Efficient Expression of Multiple Proteins in Avian Embryos Using mRNA Electroporation

Snabb och effektiv uttryck av flera proteiner i aviär embryon med hjälp av mRNA elektroporation

We report that mRNA electroporation permits fluorescent proteins to label cells in living quail embryos more quickly and broadly than DNA electroporation. ...

Quantification of Ethanol Levels in Zebrafish Embryos Using Head Space Gas Chromatography

Kvantifiering av etanolnivåer i zebrafiskembryon med hjälp av kromator

Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASD) describe a highly variable continuum of ethanol-induced developmental defects, including facial dysmorphologies ...