Name: direct stochastic optical reconstruction microscopy of extracellular vesicles in three dimensions
Uploaded: 2021-08-26T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy of Extracellular Vesicles in Three Dimensions at JoVE.com

نود أن نشكر أكسفورد Nanoimaging على ردود فعلهم البناءة والتوجيه. تم تمويل هذا العمل من قبل 5UM1CA121947-10 إلى R.P.M و1R01DA040394 إلى D.P.D.

1 نشر وصيانة خطوط الخلايا
<ol><li>الحصول على خلايا هشاشة العظام البشرية (U2OS) ووضع الخلايا في المتوسط النمو تستكمل مع 10٪ خالية من المصل البقري الجنين و1x البنسلين / Streptomycin الحل. ملاحظة: تم إنشاء مصل الأبقار الجنينية الخالية من Exosome بعد البروتوكول المقدم في مكنمارا وآخرون. آل26.</li>
	<l...

أصبحت المركبات الكهربائية مجال الدراسة شعبية نظرا لدورها الهام في العديد من العمليات داخل الخلايا والخلايا إلى الخلية الإشارات1،30. ومع ذلك ، فإن تصورها يثبت أن يكون صعبا كما حجمها الصغير يقع تحت الحد الحيود من المجهر الخفيفة. المباشرة الاستوشاستيك البصرية...

الحويصلات خارج الخلية (EVs) هي الحويصلات المرتبطة بالغشاء الصادرة عن جميع أنواع الخلايا. أنها تحتوي على الدهون والبروتينات والأيض والأحماض النووية ونقل هذه المواد محليا بين الخلايا وdistally بين الأنسجة والأعضاء. هناك ثلاثة أنواع فرعية أساسية من المركبات الكهربائية: الهيئات المبرمج، microvesicles، وإكسوسومات1،2. هنا، نركز مناقشتنا على الإكسوسومات والبروتينات المرتبطة بها.
يتم إفراز الحويصلات الخارجية الناشئة من الداخل الناشئة من الاندوسومات المبكرة في الجسم متعدد المركبات (MVB). ثم يندمج MVB مع غشاء البلازما ، ويطلق الإكسوسومات في الفضاء خارج الخلية للسفر إلى خلايا أخرى3،4. Exosomes موجودة على مجموعة من الأحجام تتراوح بين 40 إلى 150 نانومتر ويتم إثراء مع بروتينات ترانسممبران الاندوسومال المعروفة باسم tetraspanins (CD9، CD63، CD81)، مجمع الفرز الاندوسومالية المرتبطة بالغشاء المطلوبة للنقل (ESCRT)، والبروتينات المرتبطة طوف الدهون1،2،5،6،7.
أصبح توصيف التركيبة الكيميائية الحيوية للإكسوسومات مجالا شائعا للباحثين لفهم طبيعتهم الوظيفية بشكل أفضل. توجد العديد من الطرق لتصور وتميز exosomes ، بما في ذلك قياس التدفق النانوي ، وتحليل تتبع الجسيمات النانوية (NTA) ، والمسح الضوئي ونقل المجهر الإلكتروني (TEM) ، وصدى البلازمون السطحي ، واستشعار النبض المقاوم ، والمجهر الخفيف التقليدي ، كل منها يحتوي على إيجابيات وسلبيات جوهرية8،9. TEM و cryo-EM يمكن تحقيق القرار القائم على نانومتر، ولكن غالبا ما تتطلب الجفاف وتجميد كسر الخطوات، وبالتالي تقليص أو lysing المركبات الكهربائية10،11. يعتمد NTA على تشتت الضوء ، مما يسمح بتحديد خصائص مئات المركبات الكهربائية في وقت واحد ، ولكنه قياس غير مباشر لحجم الجسيمات ولا يمكنه التمييز بسهولة بين المركبات الكهربائية والفيروساتومجاميع البروتين12و13و14و15و16. يستخدم قياس التدفق الخلوي النانوي الضوء المتناثر من مسار الإثارة ، والذي يمكن ترجمته بعد ذلك إلى قياسات الحجم ، ولكنه تقنية ناشئة ، وهناك القليل من الإجماع حول حجم الجسيمات ضمن النطاق الخطي للكشف عن الأدوات المختلفة12و17و18.
كان المجهر الخفيف التقليدي باستخدام البروتينات الفلورية أو الأصباغ أحد التقنيات الأكثر توظيفا لتصور المقصورات دون الخلوية ومجمعات البروتين وآلات الإشارات داخل الخلية. في حين أن هذه التقنية تثبت فائدتها في تصور توطين المجمعات ، فإن حد الحيود للتنظير المجهري الخفيف التقليدي (حوالي 250-400 نانومتر) يمنع الدقة الواضحة للبروتينات أو الهياكل في نطاق الحجم النموذجي للإكسوسوم (40-150 نانومتر)12،19،20.
المجهر فائق الدقة ، وهي المجهر المباشر لإعادة البناء البصري العشوائي (dSTORM) ، يميز نفسه عن المجهر الضوئي التقليدي من خلال توظيف الخصائص القابلة للضوء للفلوروفوريس المحددة والكشف عن هذه الأحداث الوامضة لإعادة بناء الصور وصولا إلى الدقة نانومتر21. يتم جمع أحداث Photoswitching باستخدام كاميرا كشف عالية الإطار على مدار عشرات الآلاف من التعرض الفردي ، ويتم استخدام وظيفة انتشار نقطة لرسم خريطة بثقة عالية الموقع الدقيق للفلوروفور الساحرللضوء 19،20،22. وهذا يسمح dSTORM لتجاوز الحد الحيود من المجهر الخفيفة. وأفادت عدة مجموعات استخدام تقنيات فائقة الدقة لتصور وتتبع exosomes والبروتينات المرتبطة بها22،23،24،25. يعتمد القرار النهائي على الخصائص الفيزيائية الحيوية للفلوروفور ، ولكنه يتراوح في كثير من الأحيان من +/-10-100 نانومتر على طول محور XY ، مما يسمح بدقة جزيء واحد.
القدرة على حل الفلوروفوريس الفردية على هذا النطاق على محور XY قد أحدثت ثورة في المجهر. ومع ذلك ، هناك القليل من البيانات عن ثلاثي الأبعاد (3 - D) dSTORM من exosome. لذلك ، سعينا إلى إنشاء إجراء تشغيل قياسي (SOP) للتصور القائم على dSTORM وتوصيف المركبات الكهربائية النقية ، بما في ذلك exosomes إلى الدقة نانومتر في 3-D.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 &#181;-Slide 8 well plates</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80827</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X Penicillin Streptomycin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 mL 0.22 &#181;m vacuum filtration apparatus</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>25-227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>750 kDa hollow-fiber cartridge cutoff filter</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29-0142-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AKTA Flux S</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29-0384-37</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AKTA Start</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29022094-ECOMINSSW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD81 magnetic beads</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10616D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-cubed buffer</td>
			<td>ONI</td>
			<td>&#160;BCA0017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask Red</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>C10046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dubelco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10566016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97068-085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frac 30 Fraction collector</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29022094-ECOMINSSW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine pH=2.0</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP381-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap CaptoCore 700 Column</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>17548151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>9820003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoimager</td>
			<td>Oxford Nanoimaging</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehhyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene glycol</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP233-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase A</td>
			<td>Promega</td>
			<td>A797C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T175 Flasks</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>25-211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetraspek microspheres</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T7279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris- HCl pH=7.5</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP153-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unicorn V</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29022094-ECOMINSSW</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct stochastic optical reconstruction microscopy of extracellular vesicles in three dimensions

يتم تحرير الحويصلات خارج الخلية (EVs) من قبل جميع أنواع الخلايا وتلعب دورا هاما في إشارات الخلايا و التوازن. غالبا ما يتطلب تصور المركبات الكهربائية طرقا غير مباشرة بسبب قطرها الصغير (40-250 نانومتر) ، والذي هو تحت حد الحيود للتنظير الضوئي النموذجي. لقد طورنا تصورا فائق الدقة قائم على المجهر للمركبات الكهربائية لتجاوز حد الحيود في بعدين وثلاثة أبعاد على حد سواء. باستخدام هذا النهج، يمكننا حل شكل ثلاثي الأبعاد من المركبات الكهربائية إلى داخل +/- 20 نانومتر القرار على محور س ص و +/- 50 نانومتر القرار على طول المحور Z. في الختام، نقترح أن يعتبر الفحص المجهري فائق الدقة كطريقة توصيف للمركبات الكهربائية، بما في ذلك الإكسوسومات، وكذلك الفيروسات المغلفة.

كان الهدف من هذه الدراسة تقييم فعالية المجهر فائق الدقة في تصور المركبات الكهربائية الفردية بدقة نانومتر في ثلاثة أبعاد (ثلاثي الأبعاد). لتحليل شكل وحجم المركبات الكهربائية الفردية، قمنا بتوظيف صبغة قابلة للسحر الضوئي واحتضان المركبات الكهربائية بصبغة حمراء بعيدة التشفير، وإزالة الصبغ?...

Watch this Scientific Journal Video about Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy of Extracellular Vesicles in Three Dimensions at JoVE.com

Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy of Extracellular Vesicles in Three Dimensions

يستخدم المجهر المباشر لإعادة البناء البصري العشوائي (dSTORM) لتجاوز حد الحيود النموذجي للتنظير المجهري للضوء وعرض الاكسوسومات على مقياس النانومتر. ويمكن استخدامه في كل من البعدين وثلاثة لتوصيف exosomes.

المجهر المباشر لإعادة البناء البصري العشوائي للحوالق خارج الخلية في ثلاثة أبعاد

Extracellular vesicles (EVs) are released by all cell types and play an important role in cell signaling and homeostasis. The visualization of EVs often ...

يستخدم هذا البروتوكول المجهر فائق الدقة ، وتحديدا المجهر المباشر لإعادة البناء البصري العشوائي ، المعروف أيضا باسم dSTORM ، لتجاوز حد الحيود وتصور المركبات الكهربائية بدقة نانومتر في ثلاثة أبعاد. ميزة واحدة ملحوظة من dSTORM هو قدرته على تصور مباشرة الجسيمات تحت مستوى الحيود من الضوء دون الخطوات الضارة التي تغير الطبيعة الكيميائية الحيوية للEV. العديد من الفيروسات المتميزة تطوريا تستخدم إشارات EV ، لذلك ، يمكن استخدام dSTORM لتوصيف المركبات الكهربائية للمؤشرات الحيوية للمرض والتقدم ، وكذلك لتصور جزيئات الفيروس الفردية ، مثل السارس -CoV2. ابدأ بوضع الحويصلات المنقية من الألفة، أو الحويصلات خارج الخلية، على قاع الزجاج، والميكروسليد، وصفائح ثماني آبار في حجم إجمالي قدره 200 ميكرولتر، والسماح لهم بالتمسك بالسطح بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية.دون إزالة الحل الحالي من لوحة ثمانية آبار، إصلاح المركبات الكهربائية على لوحات بإضافة 200 ميكرولتر من 4٪ paraformaldehyde في برنامج تلفزيوني 1X إلى الحل المحتوي على EV في كل بئر والسماح للوحات لاحتضان لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. إزالة بارافورمالدهيد بعناية والحل الزائد مع micropipette لعدم إزعاج المركبات الكهربائية. غسل EV مع برنامج تلفزيوني 1X لإزالة paraformaldehyde الزائدة.إجراء عملية الغسيل ثلاث مرات. إزالة فائض 1X برنامج تلفزيوني. إعداد 250 ميكرولتر من محلول المخزن المؤقت dSTORM Bcubed لكل عينة عن طريق إنشاء حل من خمسة ملليمولار الأولية ديوكسيجيناز المخفف في المخزن المؤقت للتصوير وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.أضف 250 ميكرولتر من العازلة المعدة إلى كل بئر وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة ، واحتضان اللوحات لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة قبل التصوير لمسح الجزيئات المؤكدة. يمكن تصور المركبات الكهربائية على الفور أو تخزينها في أربع درجات مئوية لمدة أسبوع. لإعداد الخرز اللازم لمعايرة المجهر فائق الدقة ، تمييع 100 نانومتر ميكروسفير إلى تركيز 0.5٪ في مياه درجة البيولوجيا الجزيئية ، وماصة 200 ميكرولتر في كل بئر من قاع الزجاج ، والميكروسميليد ، لوحة من ثمانية آبار.السماح للخرزات لتسوية في الآبار لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. دون إزالة الحل الحالي، إضافة 200 ميكرولتر من 4٪ paraformaldehyde في برنامج تلفزيوني إلى كل بئر إلى محلول حبة المعايرة، والسماح لاحتضان لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. إزالة البارافورمالديهايد بعناية مع micropipette لعدم إزعاج الخرز، وغسل الخرز ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1X.إعداد المخزن المؤقت كما هو موضح في المخطوطة. إزالة برنامج تلفزيوني 1X وإضافة 250 ميكرولتر من المخزن المؤقت المعدة لكل بئر. السماح للمخزن المؤقت بالجلوس لمدة 20 دقيقة قبل التصور.استخدم زر توصيل المجهر للاتصال بالمجهر ثلاثي الأبعاد قبل وضع أي شيء على المسرح. إضافة 100X النفط إلى الهدف، ووضع مركز البئر على رأس الهدف. في الإعداد Acquire ، قم بتشغيل ليزر الإثارة 473-و 640 نانومتر وانقر على View.دون تفعيل العدسة ثلاثية الأبعاد، اعرض الخرز تحت إعداد تشبع الفوتون بالنقر على عدد الفوتونات في خيارات عرض الصور. تعيين القوى الليزر الأولية إلى 8.4 ملليواط لليزر 473 نانومتر، و 11.6 ملليواط لليزر 640 نانومتر. تقليل تركيز الليزر إلى حوالي ناقص 300 نانومتر أو المستوى البؤري للخرز المعايرة لإنتاج دقة واضحة من الخرز الفردية.بمجرد تركيز الطائرة Z، قم بتعديل مستويات طاقة الليزر بشكل أكبر لمراعاة التباين في كل مجال من مجالات الرؤية. تحت وظائف الأداة ، أكمل معايرة الخرائط ثلاثية الأبعاد ومعايرة رسم خرائط القنوات للحصول على الأخطاء على المحور X و Y و Z. تعيين الحد الأقصى لعدد حقول العرض إلى 20، والعدد المستهدف من النقاط إلى 4000، والمسافة القصوى بين القنوات إلى 5.0 بكسل، ونصف قطر الاستبعاد بين القنوات إلى 10.0 بكسل أثناء معايرة رسم خرائط القناة.تأكد من أن المعايرة تنتج تغطية نقطة أكبر من 90٪ ونوعية رسم الخرائط الجيدة. حفظ بيانات المعايرة المعطاة لاكتساب الصور في المستقبل. إضافة 100X النفط على الهدف، ووضع المركبات الكهربائية المعدة على المجهر.دون تفعيل العدسة ثلاثية الأبعاد، قم بتشغيل ليزر الإثارة 640 نانومتر، ورفعه في البداية إلى ما بين 1.2 و 12.5 مللي واط، اعتمادا على كثافة الإشارة في مجال الرؤية لإثارة الغشاء الأحمر، والتداخل، والمركبات الكهربائية الملطخة بالصبغة. ضمن خيارات عرض الصور، قم بتبديل طريقة العرض من تشبع الفوتون إلى المئينات لتصور المركبات الكهربائية بشكل أفضل. ضبط طاقة الليزر لتقليل الضوضاء مع تعظيم إشارة والحفاظ على جميع المعلمات الأخرى.ضبط التركيز من Z-الطائرة بالنقر فوق رمز أعلى أو أسفل على المحور Z. تعيين وقت التعرض إلى 20 مللي ثانية، والتقاط الإطار إلى 10،000 إطار، وقوة الليزر الأولية إلى ما بين 1،2 و 12،5 مللي واط، اعتمادا على كثافة الإشارة ومجال الرؤية. قم بتنشيط العدسة ثلاثية الأبعاد باستخدام الرمز، وابدأ عملية الاستحواذ بالنقر على زر الحصول.خلال عملية الحصول على الصورة، ارفع طاقة الليزر بمقدار ثلاث زيادات بمقدار 10 كل 1000 إطار، أو ما يكفي للحفاظ على نسبة عالية من الإشارة إلى الضوضاء. لا تقم بضبط الطائرة Z أثناء عملية الامتلاك. بعد الحصول على الصورة، قم بالتبديل إلى نافذة تحليل العرض.قم بإجراء تصحيح الانجراف على الصورة غير المصفاة، ثم قم بتنشيط عوامل التصفية. ضبط عدد الفوتونات ودقة التعريب و sigmas و فهرس الإطارات، كما هو مذكور في المخطوطة. تراكب X، Y، Z-الطائرة عرض أداة على طول المحور العاشر من المركبات الكهربائية الفردية من مجال العرض وتصدير ملفات csv الفردية للأحداث photoswitching.تقسيم المركبات الكهربائية الفردية على X، Y-محور في X بواسطة ص حقل الرؤية باستخدام أداة مخطط التكرار الخط، الذي دبابيس الأحداث photoswitching في مجموعات المسافة المحددة. التقاط صور من المركبات الكهربائية واحد وحفظها كملفات tif. إنشاء مقاطع فيديو ثلاثية الأبعاد لمركبات EVs الفردية باستخدام أداة تصور ثلاثي الأبعاد ولون وفقا للموضع على طول المحور Z.بعد معايرة المجهر الذي أنتج خطأ متوسط 16 نانومتر على X و Y-axis و 38 نانومتر على محور Z ، تم تصور المركبات الكهربائية u20s المنقى بنجاح بدقة تصل إلى 20 نانومتر على المحور X و Y و 50 نانومتر على طول المحور Z. تصور المركبات الكهربائية الفردية من خلال dSTORM في صور ثلاثية الأبعاد طوال التعرض للإطار 10،000 كما تم زيادة قوة الليزر، وكانت واضحة بسهولة في الصورة المكتسبة. بعد اقتناء صورة التصحيح في Z - الطائرة ، الفوتون التهم ، سيغماس ، ودقة توطين الصورة التي أعيد بناؤها أدى إلى دقة واضحة من EV في 3D.وEV photowitched خلال 7، 000 فقط الأطر الأولى، كما يتضح من أسطورة في الزاوية اليمنى العليا. ويؤكد الرسم البياني أن غالبية الأحداث الضوئية وقعت في دائرة نصف قطرها 100 نانومتر، مما يؤكد أن EV المرئي هو إكسوسوم، وأن عزل المركبات الكهربائية ذات القطر الصغير كان ناجحا. أكد تحليل توزيع الحجم الذي تم إجراؤه على المركبات الكهربائية الأخرى التي يتم تتبعها بشكل فردي باستخدام أداة الرسم البياني للخط وأداة عرض X و Y و Z-plane أن معظم أحداث التعقب الضوئي وقعت ضمن دائرة نصف قطرها 100 نانومتر من المركز.تم زيادة الخطأ على طول المحور Z، مما أدى إلى صورة نهائية ممدود من EV على طول المحور المحوري. لم تكن أحداث الحكة الضوئية مرتبطة بحجم EV ، مما يدل على أنه يمكن استخدام التوصيف القائم على dSTORM للمركبات الكهربائية الصغيرة مثل exosomes والفيروسات الصغيرة المغلفة التي يقل قطرها عن 100 نانومتر. أثناء أداء dSTORM من المهم أن نتذكر لتعيين قوة الليزر الأولية منخفضة جدا، ورفع ببطء في جميع أنحاء الحصول على الصورة من أجل منع photobleaching.منذ تطورها ، سمحت dSTORM للباحثين بفهم أفضل لمورفولوجيا الهياكل شبه الخلوية التي كان من المستحيل تصورها في السابق بسبب حد الحيود للتنظير الضوئي النموذجي.

Research

JoVE Journal

Biology

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase Contrast and Differential Interference Contrast DIC Microscopy

وعلى النقيض من مرحلة التدخل التفاضلية المجهري التباين (DIC)

Phase-contrast microscopy is often used to produce contrast for transparent, non light-absorbing, biological specimens. The technique was discovered by ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

تقنيات لتحليل خارج الخلية الحويصلات عن طريق التدفق الخلوي

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

زراعة<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; في ثلاثة أبعاد في المختبر

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Hemi-laryngeal Setup for Studying Vocal Fold Vibration in Three Dimensions

هيمي-سرطانات الإعداد لدراسة الاهتزاز إضعاف صوتي في ثلاثة أبعاد

The voice of humans and most non-human mammals is generated in the larynx through self-sustaining oscillation of the vocal folds. Direct visual ...

Three-dimensional Reconstruction of the Vascular Architecture of the Passive CLARITY-cleared Mouse Ovary

إعادة البناء ثلاثي الأبعاد بنية الأوعية الدموية المبيض الماوس مسح الوضوح السلبي

The ovary is the main organ of the female reproductive system and is essential for the production of female gametes and for controlling the endocrine ...

Imaging Intermediate Filaments and Microtubules with 2-dimensional Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy

التصوير خيوط متوسطة وميكروتوبوليس مع الفحص المجهري 2-الأبعاد التعمير البصرية العشوائية المباشرة

The cytoskeleton, composed of actin microfilaments, microtubules, and intermediate filaments (IF), plays a key role in the control of cell shape, ...

Flow Cytometric Analysis of Extracellular Vesicles from Cell-conditioned Media

تحليل سيتوميتريك من حويصلات خارج الخلية من خلية مكيفة وسائل الإعلام تدفق

Flow cytometry (FC) is the method of choice for semi-quantitative measurement of cell-surface antigen markers. Recently, this technique has been used for ...

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

تنقية وتحليل Caenorhabditis elegans خارج الخلية الحويصلات

The secretion of small membrane-bound vesicles into the external environment is a fundamental physiological process of all cells. These extracellular ...

Reconstruction of Single-Cell Innate Fluorescence Signatures by Confocal Microscopy

إعادة بناء خلية واحدة توقيعات الفلورية الفطرية من قبل المجهر Confocal

Described here is confocal reflection microscopy-assisted single-cell innate fluorescence analysis (CRIF), a minimally invasive method for reconstructing ...

Nanoparticle Tracking Analysis for the Quantification and Size Determination of Extracellular Vesicles

تحليل تتبع الجسيمات النانوية لتحديد كمي وحجم الحويصلات خارج الخلية

The physiological and pathophysiological roles of extracellular vesicles (EVs) have become increasingly recognized, making the EV field a quickly evolving ...