Name: direct stochastic optical reconstruction microscopy of extracellular vesicles in three dimensions
Uploaded: 2021-08-26T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy of Extracellular Vesicles in Three Dimensions at JoVE.com

We willen Oxford Nanoimaging bedanken voor hun constructieve feedback en begeleiding. Dit werk werd gefinancierd door de 5UM1CA121947-10 aan R.P.M. en de 1R01DA040394 aan D.P.D.

1 Voortplanting en onderhoud van cellijnen
<ol><li>Verkrijg menselijke osteosarcoomcellen (U2OS) en plaats de cellen in het groeimedium aangevuld met 10% exosoomvrij foetaal runderserum en 1x penicilline / streptomycine-oplossing. OPMERKING: Exosoomvrij foetaal runderserum werd gegenereerd volgens het protocol dat wordt gepresenteerd in McNamara et. al.26.</li>
	<li>Houd de U2OS-cellen in een met koper beklede incubator op 37 °C in 5% CO2 en doorgangscellen in T175-kolven<sup clas...

EV's zijn een populair studiegebied geworden vanwege hun belangrijke rol in veel intracellulaire processen en cel-naar-cel signalering1,30. Hun visualisatie blijkt echter moeilijk te zijn omdat hun kleine formaat onder de diffractielimiet van lichtmicroscopie valt. Directe stochastische optische reconstructiemicroscopie (dSTORM) is een directe visualisatiemethode die de diffractielimiet omzeilt door fotoswitchinggebeurtenissen van individuele fluoroforen in de lo...

Extracellulaire blaasjes (EV's) zijn membraangebonden blaasjes die door alle celtypen worden afgegeven. Ze bevatten lipiden, eiwitten, metabolieten en nucleïnezuren en dragen deze materialen lokaal over tussen cellen en distaal tussen weefsels en organen. Er zijn drie primaire subtypen van EV's: apoptotische lichamen, microvesicles en exosomen1,2. Hier richten we onze discussie op exosomen en hun bijbehorende eiwitten.
Exosomen zijn uitgescheiden blaasjes afkomstig van de inwaartse ontluiking van vroege endosomen in het multivesiculaire lichaam (MVB). De MVB smelt vervolgens met het plasmamembraan, waardoor de exosomen in de extracellulaire ruimte vrijkomen om naar andere cellen te reizen3,4. Exosomen bestaan op een spectrum van groottes variërend van 40 tot 150 nm en zijn verrijkt met endosomale transmembraaneiwitten die bekend staan als tetraspaninen (CD9, CD63, CD81), membraangebonden endosomale sorteercomplex dat nodig is voor het transport (ESCRT) en lipide vlot-geassocieerde eiwitten1,2,5,6,7.
Het karakteriseren van de biochemische samenstelling van exosomen is een populair veld geworden voor onderzoekers om hun functionele aard beter te begrijpen. Er bestaan veel methoden voor het visualiseren en karakteriseren van exosomen, waaronder flowcytometrie op nanoschaal, nanodeeltjesvolganalyse (NTA), scanning- en transmissie-elektronenmicroscopie (TEM), oppervlakteplasmonresonantie, resistieve pulsdetectie en traditionele lichtmicroscopie, die elk intrinsieke voor- en nadelen bevatten8,9. TEM en cryo-EM kunnen een op nanometer gebaseerde resolutie bereiken, maar vereisen vaak uitdrogings- en vriesbreekstappen, waardoor EV's10, 11krimpen of liggen. NTA vertrouwt op lichtverstrooiing, waardoor de karakterisering van honderden EV's tegelijk mogelijk is, maar is een indirecte meting van de deeltjesgrootte en kan niet gemakkelijk onderscheid maken tussen EV's, virussen en eiwitaggregaten12,13,14,15,16. Nanoschaal flowcytometrie maakt gebruik van lichtverstrooiing van een excitatiepad, dat vervolgens kan worden vertaald in groottemetingen, maar is een opkomende technologie, en er is weinig consensus over welke grootte van deeltjes zich binnen het lineaire detectiebereik bevinden voor verschillende instrumenten12,17,18.
Traditionele lichtmicroscopie met behulp van fluorescerende eiwitten of kleurstoffen is een van de meest gebruikte technieken voor het visualiseren van subcellulaire compartimenten, eiwitcomplexen en signaleringsmachines in een cel. Hoewel deze techniek nuttig blijkt bij het visualiseren van de lokalisatie van complexen, voorkomt de diffractielimiet van traditionele lichtmicroscopie (ongeveer 250-400 nm) de duidelijke resolutie van eiwitten of structuren in het typische groottebereik van een exosoom (40-150 nm)12,19,20.
Superresolutiemicroscopie, namelijk directe stochastische optische reconstructiemicroscopie (dSTORM), onderscheidt zich van conventionele lichtmicroscopie door gebruik te maken van de fotoschakelbare eigenschappen van specifieke fluoroforen en deze knipperende gebeurtenissen te detecteren om beelden tot nanometerprecisie te reconstrueren21. Fotoswitchinggebeurtenissen worden verzameld met behulp van een detectiecamera met hoge framesnelheid in de loop van tienduizenden individuele belichtingen, en een puntspreidingsfunctie wordt gebruikt om met hoge betrouwbaarheid de exacte locatie van de fotoswitching fluorofoor19,20,22in kaart te brengen. Hierdoor kan dSTORM de diffractielimiet van lichtmicroscopie omzeilen. Verschillende groepen hebben het gebruik van superresolutietechnieken gemeld voor het visualiseren en volgen van exosomen en hun bijbehorende eiwitten22,23,24,25. De uiteindelijke resolutie hangt af van de biofysische eigenschappen van de fluorofoor, maar varieert vaak van +/-10-100 nm langs de XY-as, waardoor een resolutie van één molecuul mogelijk is.
Het vermogen om individuele fluoroforen op deze schaal op de XY-as op te lossen, heeft een revolutie teweeggebracht in de microscopie. Er zijn echter weinig gegevens over de driedimensionale (3D) dSTORM van een exosoom. Daarom hebben we geprobeerd een standaard operationele procedure (SOP) vast te stellen voor dSTORM-gebaseerde visualisatie en karakterisering van gezuiverde EV's, inclusief exosomen tot nanometerprecisie in 3D.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 &#181;-Slide 8 well plates</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80827</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X Penicillin Streptomycin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tube</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 mL 0.22 &#181;m vacuum filtration apparatus</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>25-227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>750 kDa hollow-fiber cartridge cutoff filter</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29-0142-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AKTA Flux S</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29-0384-37</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AKTA Start</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29022094-ECOMINSSW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD81 magnetic beads</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10616D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-cubed buffer</td>
			<td>ONI</td>
			<td>&#160;BCA0017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask Red</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>C10046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dubelco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10566016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97068-085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frac 30 Fraction collector</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29022094-ECOMINSSW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine pH=2.0</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP381-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap CaptoCore 700 Column</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>17548151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>9820003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoimager</td>
			<td>Oxford Nanoimaging</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehhyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene glycol</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP233-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase A</td>
			<td>Promega</td>
			<td>A797C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T175 Flasks</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>25-211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetraspek microspheres</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T7279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris- HCl pH=7.5</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>BP153-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unicorn V</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>29022094-ECOMINSSW</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct stochastic optical reconstruction microscopy of extracellular vesicles in three dimensions

Extracellulaire blaasjes (EV's) worden door alle celtypen vrijgegeven en spelen een belangrijke rol bij celsignalering en homeostase. De visualisatie van EV's vereist vaak indirecte methoden vanwege hun kleine diameter (40-250 nm), die onder de diffractielimiet van typische lichtmicroscopie ligt. We hebben een op superresolutiemicroscopie gebaseerde visualisatie van EV's ontwikkeld om de diffractielimiet in zowel twee als drie dimensies te omzeilen. Met behulp van deze aanpak kunnen we de driedimensionale vorm van EV's oplossen tot binnen +/- 20 nm resolutie op de XY-as en +/- 50 nm resolutie langs de Z-as. Concluderend stellen we voor dat superresolutiemicroscopie wordt beschouwd als een karakteriseringsmethode van EV's, inclusief exosomen, evenals omhulde virussen.

Het doel van deze studie was om de effectiviteit van superresolutiemicroscopie te evalueren bij het visualiseren van individuele EV's met nanometerresolutie in drie dimensies (3D). Om de vorm en grootte van individuele EV's te analyseren, gebruikten we fotoschakelbare kleurstof en incubeerden we de EV's met een verrode, membraanintercalerende kleurstof en verwijderden we overtollige kleurstof door middel van chromatografie29. De affiniteit-vastgelegde anti-CD81 en roodgekleurde EV's werden vervolg...

Watch this Scientific Journal Video about Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy of Extracellular Vesicles in Three Dimensions at JoVE.com

Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy of Extracellular Vesicles in Three Dimensions

Directe stochastische optische reconstructiemicroscopie (dSTORM) wordt gebruikt om de typische diffractielimiet van lichtmicroscopie te omzeilen en exosomen op nanometerschaal te bekijken. Het kan worden gebruikt in zowel twee als drie dimensies om exosomen te karakteriseren.

Directe stochastische optische reconstructiemicroscopie van extracellulaire blaasjes in drie dimensies

Extracellular vesicles (EVs) are released by all cell types and play an important role in cell signaling and homeostasis. The visualization of EVs often ...

Dit protocol maakt gebruik van superresolutiemicroscopie, met name directe stochastische optische reconstructiemicroscopie, ook bekend als dSTORM, om de diffractielimiet te omzeilen en EV's met nanometerprecisie in drie dimensies te visualiseren. Een opmerkelijk voordeel van dSTORM is het vermogen om deeltjes onder het diffractieniveau van licht direct te visualiseren zonder stappen te beschadigen die de biochemische aard van de EV veranderen. Veel evolutionair verschillende virussen maken gebruik van EV-signalering, daarom kan dSTORM worden gebruikt om EV's te karakteriseren voor ziektebiomarkers en progressie, en om individuele virusdeeltjes, zoals SARS-CoV2, te visualiseren. Begin met het plaatsen van affiniteitsgezuiverde, extracellulaire blaasjes of EV's op platen met glazen bodem, microslide, acht putten in een totaal volume van 200 microliter en laat ze zich 's nachts bij vier graden Celsius aan het oppervlak hechten.Zonder de bestaande oplossing van de achtputige plaat te verwijderen, bevestigt u EV's op de platen door 200 microliter 4% paraformaldehyde in 1X PBS toe te voegen aan de EV-bevattende oplossing in elke put en laat u de platen gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur incuberen. Verwijder zorgvuldig paraformaldehyde en overtollige oplossing met een micropipette om de EV's niet te storen. Was de EV met 1X PBS om overtollig paraformaldehyde te verwijderen.Voer de wasprocedure drie keer uit. Verwijder overtollige 1x PBS. Bereid 250 microliter dSTORM Bcubed-bufferoplossing per monster door een oplossing van vijf millimolair protocatechuic dioxygenase verdund in beeldvormingsbuffer te maken volgens het protocol van de fabrikant.Voeg 250 microliter van de voorbereide buffer toe aan elke put volgens het protocol van de fabrikant en incubeer de platen gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur voordat u zich afbeeldt om oxiderende moleculen op te ruimen. De EV's kunnen direct worden gevisualiseerd of een week lang bij vier graden Celsius worden opgeslagen. Om de kralen voor te bereiden die nodig zijn voor de kalibratie van de superresolutiemicroscoop, verdunt u microsferen van 100 nanometer tot een concentratie van 0,5% in water van moleculair biologische kwaliteit en pipetteert u 200 microliter in elke put van een glasbodem, microslide, acht-well plaat.Laat de kralen een uur bij kamertemperatuur in de putten bezinken. Voeg zonder de bestaande oplossing te verwijderen 200 microliter 4% paraformaldehyde in PBS toe aan elke put aan de kalibratiepareloplossing en laat 30 minuten bij kamertemperatuur incuberen. Verwijder de paraformaldehyde voorzichtig met een micropipette om de kralen niet te storen en was de kralen drie keer met 1X PBS.Bereid de buffer voor zoals beschreven in het manuscript. Verwijder 1X PBS en voeg 250 microliter van de voorbereide buffer toe aan elke put. Laat de buffer 20 minuten zitten voordat u de visualisatie maakt.Gebruik de knop De microscoop verbinden om verbinding te maken met de 3D-microscoop voordat u iets op het podium plaatst. Voeg 100X olie toe aan het objectief en plaats het midden van de put bovenop het objectief. Schakel in de instelling Acquire de excitatielasers van 473 en 640 nanometer in en klik op Weergeven.Zonder de 3D-lens te activeren, bekijkt u de kralen onder de instelling voor fotonenverzadiging door te klikken op Het aantal fotonen in de opties voor beeldweergave. Stel de initiële laservermogens in op 8,4 milliwatt voor de 473-nanometerlaser en 11,6 milliwatt voor de 640-nanometerlaser. Verlaag de focus van de laser tot ongeveer min 300 nanometer of het brandpuntsvlak van de kalibratieparels om een duidelijke resolutie van de afzonderlijke kralen te produceren.Zodra het Z-vlak is scherpgesteld, past u de laservermogensniveaus verder aan om rekening te houden met variatie in elk gezichtsveld. Onder de instrumentfuncties, volledige 3D-mappingkalibratie en kanaaltoewijzingskalibratie om de fouten op de X-, Y- en Z-as te verkrijgen. stel het maximale aantal gezichtsvelden in op 20, het doelaantal punten op 4.000, de maximale afstand tussen kanalen op 5,0 pixels en de uitsluitingsradius tussen kanalen op 10,0 pixels tijdens de kalibratie van kanaaltoewijzing.Zorg ervoor dat de kalibratie een puntdekking van meer dan 90% oplevert en een kaartkwaliteit die goed is. Sla de gegeven kalibratiegegevens op voor toekomstige beeldacquisities. Voeg 100X olie toe aan het objectief en plaats de voorbereide EV's op de microscoop.Zonder de 3D-lens te activeren, schakelt u de excitatielaser van 640 nanometer in en verhoogt u deze in eerste instantie tot tussen 1,2 en 12,5 milliwatt, afhankelijk van de intensiteit van het signaal in het gezichtsveld om het rode membraan te prikkelen, intercalerende, met kleurstof bevlekte EV's. Schakel onder de opties voor beeldweergave de weergavemethode over van fotonenverzadiging naar percentielen om de EV's beter te visualiseren. Pas het laservermogen aan om ruis te minimaliseren terwijl het signaal wordt gemaximaliseerd en alle andere parameters worden gehandhaafd.Pas de focus van het Z-vlak aan door op het pictogram omhoog of omlaag op de Z-as te klikken. Stel de belichtingstijd in op 20 milliseconden, de frameopname op 10.000 frames en het initiële laservermogen op tussen 1,2 en 12,5 milliwatt, afhankelijk van de intensiteit van het signaal en het gezichtsveld. Activeer de 3D-lens met behulp van het pictogram en start de acquisitie door op de knop Verwerven te klikken.Verhoog tijdens het beeldacquisitieproces het laservermogen met drie stappen van 10 om de 1000 frames, of genoeg om een hoge signaal-ruisverhouding te behouden. Pas het Z-vlak niet aan tijdens de aanschaf. Schakel na de afbeeldingsacquisitie over naar het weergavevenster Analyseren.Voer afwijkingscorrectie uit op de ongefilterde afbeelding en activeer vervolgens filters. Pas het aantal fotonen, lokalisatieprecisie, sigma's en frame-index aan, zoals vermeld in het manuscript. Leg een X-, Y-, Z-plane view-tool over de X-as van individuele EV's vanuit het gezichtsveld en exporteer de afzonderlijke csv-bestanden van fotoswitching-gebeurtenissen.Bisect individuele EV's op de X, Y-as in een X bij Y gezichtsveld met behulp van een lijn histogram tool, die fotoswitching gebeurtenissen in ingestelde afstandsgroepen pint. Maak afbeeldingen van afzonderlijke EV's en sla ze op als tif-bestanden. Maak 3D-video's van individuele EV's met behulp van een 3D-visualisatietool en kleur op basis van plaatsing langs de Z-as.Na de kalibratie van de microscoop die een gemiddelde fout van 16 nanometer op de X-, Y-as en 38 nanometer op de Z-as produceerde, werden de gezuiverde U20s EV's met succes gevisualiseerd met een resolutie van maximaal 20 nanometer op de X-, Y-as en 50 nanometer langs de Z-as. Individuele EV's gevisualiseerd via dSTORM in 3D-fotogeschakeld gedurende de belichting van 10.000 frames naarmate het laservermogen werd verhoogd, en waren gemakkelijk zichtbaar in het verkregen beeld. Post-acquisitie beeldcorrectie in het Z-vlak, fotonentellingen, sigma's en lokalisatieprecisie van het gereconstrueerde beeld resulteerden in een duidelijke resolutie van de EV in 3D.De EV-foto wisselde alleen tijdens de eerste 7.000 frames, zoals te zien is door de legende in de rechterbovenhoek. Het histogram bevestigt dat de meerderheid van de fotoswitching-gebeurtenissen plaatsvond binnen een straal van 100 nanometer, wat bevestigt dat de gevisualiseerde EV een exosoom is en dat de isolatie van EV's met een kleine diameter succesvol was. Grootteverdelingsanalyse uitgevoerd op andere individueel getraceerde EV's met behulp van de Tool Line Histogram en de X, Y, Z-plane View-tool bevestigde dat de meeste fotoswitchinggebeurtenissen plaatsvonden binnen een straal van 100 nanometer van het centrum.De fout langs de Z-as werd vergroot, waardoor een langwerpig eindbeeld van de EV langs de axiale as ontstond. Fotoswitchinggebeurtenissen waren niet gecorreleerd met de EV-grootte, wat aantoont dat dSTORM-gebaseerde karakterisering kan worden gebruikt voor kleine EV's zoals exosomen en kleine, omhulde virussen met een diameter van minder dan 100 nanometer. Tijdens het uitvoeren van dSTORM is het belangrijk om te onthouden om het initiële laservermogen zeer laag in te stellen en langzaam te verhogen tijdens de beeldacquisitie om fotobleeken te voorkomen.Sinds de ontwikkeling heeft dSTORM onderzoekers in staat gesteld om de morfologie van subcellulaire structuren beter te begrijpen die voorheen onmogelijk te visualiseren waren vanwege de diffractielimiet van typische lichtmicroscopie.

Research

JoVE Journal

Biology

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase Contrast and Differential Interference Contrast DIC Microscopy

Phase Contrast en differentieel interferentie contrast (DIC) Microscopie

Phase-contrast microscopy is often used to produce contrast for transparent, non light-absorbing, biological specimens. The technique was discovered by ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

Technieken voor de Analyse van de extracellulaire blaasjes Met behulp van flowcytometrie

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

teelt van<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; In drie dimensies in het Laboratorium

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Hemi-laryngeal Setup for Studying Vocal Fold Vibration in Three Dimensions

Hemi-laryngeal Setup voor het bestuderen van de vocale Fold trillingen in drie dimensies

The voice of humans and most non-human mammals is generated in the larynx through self-sustaining oscillation of the vocal folds. Direct visual ...

Three-dimensional Reconstruction of the Vascular Architecture of the Passive CLARITY-cleared Mouse Ovary

Drie-dimensionale reconstructie van de vasculaire architectuur van de passieve duidelijkheid-gewist muis eierstok

The ovary is the main organ of the female reproductive system and is essential for the production of female gametes and for controlling the endocrine ...

Imaging Intermediate Filaments and Microtubules with 2-dimensional Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy

Imaging Intermediaire filamenten en microtubuli met 2-dimensionale directe stochastische optische wederopbouw microscopie

The cytoskeleton, composed of actin microfilaments, microtubules, and intermediate filaments (IF), plays a key role in the control of cell shape, ...

Flow Cytometric Analysis of Extracellular Vesicles from Cell-conditioned Media

Cytometrische analyse van extracellulaire blaasjes van cel-geconditioneerd Media stromen

Flow cytometry (FC) is the method of choice for semi-quantitative measurement of cell-surface antigen markers. Recently, this technique has been used for ...

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

Zuivering en analyse van Caenorhabditis elegans Extracellular Blaasjes

The secretion of small membrane-bound vesicles into the external environment is a fundamental physiological process of all cells. These extracellular ...

Reconstruction of Single-Cell Innate Fluorescence Signatures by Confocal Microscopy

Reconstructie van eencellige aangeboren fluorescentiehandtekeningen door confocale microscopie

Described here is confocal reflection microscopy-assisted single-cell innate fluorescence analysis (CRIF), a minimally invasive method for reconstructing ...

Nanoparticle Tracking Analysis for the Quantification and Size Determination of Extracellular Vesicles

Nanodeeltjes tracking analyse voor de kwantificering en groottebepaling van extracellulaire blaasjes

The physiological and pathophysiological roles of extracellular vesicles (EVs) have become increasingly recognized, making the EV field a quickly evolving ...