Name: measurement of fatty acid &#946;-oxidation in a suspension of freshly isolated mouse hepatocytes
Uploaded: 2021-09-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Fatty Acid ÃŽÂ²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes at JoVE.com

इस काम को रॉबर्टा लियोनार्डी को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ अनुदान आर 35 जीएम 119528 द्वारा समर्थित किया गया था।

चूहों पर सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं (सी 57 बीएल / 6 जे, पुरुष, 9-11 सप्ताह की उम्र) को वेस्ट वर्जीनिया विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समितियों (आईएसीयूसी) द्वारा अनुमोदित किया गया था।
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<ol>
	<li>Alves-Bezerra, M., Cohen, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triglyceride+Metabolism+in+the+Liver.">Triglyceride Metabolism in the Liver.</a> Comprehensive Physiology. 8 (1), 1-8 (2017).</li><li>Lopaschuk, G. D., Ussher, J. R., Folmes, C. D., Jaswal, J. S., Stanley, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+fatty+acid+metabolism+in+health+and+disease.">Myocardial fatty acid metabolism in health and disease.</a> Physiological Reviews. 90 (1), 207-258 (2010).</li><li>Mannaerts, G. P., van Veldhoven, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+and+organization+of+peroxisomal+beta-oxidation.">Functions and organization of peroxisomal beta-oxidation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 804, 99-115 (1996).</li><li>Kerner, J., Hoppel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+import+into+mitochondria.">Fatty acid import into mitochondria.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 1486 (1), 1-17 (2000).</li><li>Baker, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisomal+ABC+transporters:+functions+and+mechanism.">Peroxisomal ABC transporters: functions and mechanism.</a> Biochemical Society Transactions. 43 (5), 959-965 (2015).</li><li>Leonardi, R., Rehg, J. E., Rock, C. O., Jackowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pantothenate+kinase+1+is+required+to+support+the+metabolic+transition+from+the+fed+to+the+fasted+state.">Pantothenate kinase 1 is required to support the metabolic transition from the fed to the fasted state.</a> PloS One. 5 (6), 11107 (2010).</li><li>Shumar, S. A., Kerr, E. W., Fagone, P., Infante, A. M., Leonardi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+Nudt7+decreases+bile+acid+levels+and+peroxisomal+fatty+acid+oxidation+in+the+liver.">Overexpression of Nudt7 decreases bile acid levels and peroxisomal fatty acid oxidation in the liver.</a> Journal of Lipid Research. 60 (5), 1005-1019 (2019).</li><li>Richert, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+in+human+hepatocytes+in+suspension+after+isolation+is+similar+to+the+liver+of+origin,+is+not+affected+by+hepatocyte+cold+storage+and+cryopreservation,+but+is+strongly+changed+after+hepatocyte+plating.">Gene expression in human hepatocytes in suspension after isolation is similar to the liver of origin, is not affected by hepatocyte cold storage and cryopreservation, but is strongly changed after hepatocyte plating.</a> Drug Metabolism and Disposition: The Biological Fate of Chemicals. 34 (5), 870-879 (2006).</li><li>Colbert, R. A., Amatruda, J. M., Young, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+expression+of+hepatocyte+protein+gene-products+associated+with+adaptation+of+cells+to+primary+culture.">Changes in the expression of hepatocyte protein gene-products associated with adaptation of cells to primary culture.</a> Clinical Chemistry. 30 (12), 2053-2058 (1984).</li><li>Spurway, T. D., Sherratt, H. A., Pogson, C. I., Agius, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flux+control+coefficient+of+carnitine+palmitoyltransferase+I+on+palmitate+beta-oxidation+in+rat+hepatocyte+cultures.">The flux control coefficient of carnitine palmitoyltransferase I on palmitate beta-oxidation in rat hepatocyte cultures.</a> Biochemical Journal. 323, 119-122 (1997).</li><li>Consitt, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptor-gamma+coactivator-1alpha+overexpression+increases+lipid+oxidation+in+myocytes+from+extremely+obese+individuals.">Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma coactivator-1alpha overexpression increases lipid oxidation in myocytes from extremely obese individuals.</a> Diabetes. 59 (6), 1407-1415 (2010).</li><li>Lee, S. M., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+hepatocytes+by+a+two-step+collagenase+perfusion+procedure.">Isolation of human hepatocytes by a two-step collagenase perfusion procedure.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (79), e50615 (2013).</li><li>Lilly, K., Chung, C., Kerner, J., VanRenterghem, R., Bieber, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+etomoxiryl-CoA+on+different+carnitine+acyltransferases.">Effect of etomoxiryl-CoA on different carnitine acyltransferases.</a> Biochemical Pharmacology. 43 (2), 353-361 (1992).</li><li>Yu, X. X., Drackley, J. K., Odle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rates+of+mitochondrial+and+peroxisomal+beta-oxidation+of+palmitate+change+during+postnatal+development+and+food+deprivation+in+liver,+kidney+and+heart+of+pigs.">Rates of mitochondrial and peroxisomal beta-oxidation of palmitate change during postnatal development and food deprivation in liver, kidney and heart of pigs.</a> Journal of Nutrition. 127 (9), 1814-1821 (1997).</li><li>Yu, X. X., Drackley, J. K., Odle, J., Lin, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+hepatic+mitochondrial+and+peroxisomal+beta-oxidation+to+increasing+palmitate+concentrations+in+piglets.">Response of hepatic mitochondrial and peroxisomal beta-oxidation to increasing palmitate concentrations in piglets.</a> Biology of the Neonate. 72 (5), 284-292 (1997).</li><li>Veerkamp, J. H., van Moerkerk, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisomal+fatty+acid+oxidation+in+rat+and+human+tissues.+Effect+of+nutritional+state,+clofibrate+treatment+and+postnatal+development+in+the+rat.">Peroxisomal fatty acid oxidation in rat and human tissues. Effect of nutritional state, clofibrate treatment and postnatal development in the rat.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 875 (2), 301-310 (1986).</li><li>Hakvoort, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interorgan+coordination+of+the+murine+adaptive+response+to+fasting.">Interorgan coordination of the murine adaptive response to fasting.</a> Journal of Biological Chemistry. 286 (18), 16332-16343 (2011).</li><li>Sokolovic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcriptomic+signature+of+fasting+murine+liver.">The transcriptomic signature of fasting murine liver.</a> BMC Genomics. 9, 528 (2008).</li><li>Kersten, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptor+alpha+mediates+the+adaptive+response+to+fasting.">Peroxisome proliferator-activated receptor alpha mediates the adaptive response to fasting.</a> Journal of Clinical Investigation. 103 (11), 1489-1498 (1999).</li><li>Li, W. C., Ralphs, K. L., Tosh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+mouse+hepatocytes.">Isolation and culture of adult mouse hepatocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 633, 185-196 (2010).</li><li>Ng, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Primary+Rat+Hepatocytes+with+Multiparameter+Perfusion+Control.">Isolation of Primary Rat Hepatocytes with Multiparameter Perfusion Control.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (170), e62289 (2021).</li><li>Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+primary+culture+of+rat+hepatic+cells.">Isolation and primary culture of rat hepatic cells.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (64), e3917 (2012).</li><li>Fulgencio, J. P., Kohl, C., Girard, J., Pegorier, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+metformin+on+fatty+acid+and+glucose+metabolism+in+freshly+isolated+hepatocytes+and+on+specific+gene+expression+in+cultured+hepatocytes.">Effect of metformin on fatty acid and glucose metabolism in freshly isolated hepatocytes and on specific gene expression in cultured hepatocytes.</a> Biochemical Pharmacology. 62 (4), 439-446 (2001).</li><li>Leonardi, R., Rock, C. O., Jackowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pank1+deletion+in+leptin-deficient+mice+reduces+hyperglycaemia+and+hyperinsulinaemia+and+modifies+global+metabolism+without+affecting+insulin+resistance.">Pank1 deletion in leptin-deficient mice reduces hyperglycaemia and hyperinsulinaemia and modifies global metabolism without affecting insulin resistance.</a> Diabetologia. 57 (7), 1466-1475 (2014).</li><li>Bougarne, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPARalpha+blocks+glucocorticoid+receptor+alpha-mediated+transactivation+but+cooperates+with+the+activated+glucocorticoid+receptor+alpha+for+transrepression+on+NF-kappaB.">PPARalpha blocks glucocorticoid receptor alpha-mediated transactivation but cooperates with the activated glucocorticoid receptor alpha for transrepression on NF-kappaB.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7397-7402 (2009).</li><li>Korelova, K., Jirouskova, M., Sarnova, L., Gregor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+3D+collagen+sandwich+culture+of+primary+mouse+hepatocytes+to+study+the+role+of+cytoskeleton+in+bile+canalicular+formation+in+vitro.">Isolation and 3D collagen sandwich culture of primary mouse hepatocytes to study the role of cytoskeleton in bile canalicular formation in vitro.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (154), e60507 (2019).</li></ol>

यकृत छिड़काव के दौरान, हवा के बुलबुले की शुरूआत से बचना महत्वपूर्ण है, क्योंकि वे यकृत में माइक्रोकेशिकाओं को अवरुद्ध करते हैं, बफर परिसंचरण को रोकते हैं या प्रतिबंधित करते हैं और समग्र रूप से हेपेटोस?...

फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण लिपिड चयापचय में एक आवश्यक प्रक्रिया है, जो फैटी एसिड संश्लेषण और आहार से सेवन को संतुलित करने के लिए एक अपचय मार्ग प्रदान करता है। यह प्रक्रिया हृदय की मांसपेशियों, गुर्दे के प्रांतस्था और उपवास यकृत सहित कई अंगों के लिए ऊर्जा उत्पन्न करती है, और आहार, वसा ऊतक लिपोलिसिस और आंतरिक ट्राइग्लिसराइड स्टोर 1,2 से प्राप्त फैटी एसिड का उपयोग करती है।
β-ऑक्सीकरण मार्ग के माध्यम से फैटी एसिड के ऑक्सीकरण के परिणामस्वरूप एक समय में दो कार्बन द्वारा फैटी एसाइल श्रृंखला का अनुक्रमिक छोटा होना होता है, जिसे एसिटाइल-सीओए के रूप में जारी किया जाता है, और यह प्रक्रिया माइटोकॉन्ड्रिया और पेरोक्सीसोम दोनों में होती है। जबकि अधिकांश फैटी एसिड केवल β-ऑक्सीकरण से गुजरते हैं, कुछ इस मार्ग में प्रवेश करने से पहले विभिन्न कार्बन पर ऑक्सीकरण होते हैं। उदाहरण के लिए, 3-मिथाइल-प्रतिस्थापित फैटी एसिड, जैसे कि फाइटेनिक एसिड, β-ऑक्सीकरण मार्ग में प्रवेश करने से पहले पेरोक्सीसोम में α-ऑक्सीकरण द्वारा एक कार्बन को हटाने से गुजरते हैं। इसी तरह, कुछ फैटी एसिड को पहले एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम में टर्मिनल मिथाइल समूह (ω-ऑक्सीकरण) के ऑक्सीकरण द्वारा डाइकारबॉक्सिलिक फैटी एसिड में परिवर्तित किया जाता है, इससे पहले कि β-ऑक्सीकरण3 द्वारा पेरोक्सीसोम में अधिमानतः ऑक्सीकरण किया जाता है।
विशिष्ट ऑर्गेनेल के बावजूद, एक फैटी एसिड को पहले कोएंजाइम ए (सीओए) थियोस्टर, या एसाइल-सीओए में परिवर्तित किया जाना चाहिए, ताकि β-ऑक्सीकरण मार्ग के माध्यम से ऑक्सीकरण किया जा सके। माइटोकॉन्ड्रियल मैट्रिक्स में लंबी श्रृंखला एसाइल-सीओए के β-ऑक्सीकरण के लिए कार्निटाइन शटल की आवश्यकता होती है, जहां कार्निटाइन पामिटॉयलट्रांसफेरेज़ 1 (सीपीटी 1) एसाइल-सीओए के एसाइलकार्निटाइन में रूपांतरण को उत्प्रेरित करता है और इस प्रक्रिया में दर-सीमित एंजाइम है4. एक बार माइटोकॉन्ड्रियल मैट्रिक्स में स्थानांतरित होने के बाद, एसाइल-सीओए को फिर से बनाया जाता है और माइटोकॉन्ड्रियल β-ऑक्सीकरण मशीनरी के लिए सब्सट्रेट के रूप में काम करता है। उपवास की स्थिति में, यकृत माइटोकॉन्ड्रिया में β-ऑक्सीकरण के माध्यम से उत्पादित एसिटाइल-सीओए मुख्य रूप से केटोजेनेसिस के लिए चैनल किया जाता है। पेरोक्सीसोम बहुत लंबी श्रृंखला, शाखित-श्रृंखला और डाइकारबॉक्सिलिक फैटी एसिड के β-ऑक्सीकरण के लिए प्राथमिक साइट के रूप में कार्य करते हैं। पेरोक्सीसोम को फैटी एसिड सब्सट्रेट आयात करने के लिए कार्निटाइन शटल की आवश्यकता नहीं होती है, इसके बजाय एटीपी-बाइंडिंग कैसेट (एबीसी) ट्रांसपोर्टर एबीसीडी 1-35 की गतिविधि के माध्यम से संवाददाता एसाइल-सीओए आयात करते हैं। पेरोक्सीसोम के भीतर, एसाइल-सीओए को तब एंजाइमों के एक समर्पित सेट द्वारा ऑक्सीकरण किया जाता है, जो माइटोकॉन्ड्रियल फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण मशीनरी से अलग होता है। माइटोकॉन्ड्रिया और पेरोक्सीसोम दोनों को फैटी एसाइल श्रृंखलाओं को ऑक्सीकरण करने के लिए एनएडी + और मुक्त सीओए की आपूर्ति की भी आवश्यकता होती है। यकृत में सीओए के स्तर को उपवास के जवाब में वृद्धि के लिए दिखाया गया है, जो फैटी एसिड ऑक्सीकरण की बढ़ी हुई दर का समर्थन करता है जो इस राज्य में होता है6. इसके अलावा, पेरोक्सिसोम में सीओए गिरावट में वृद्धि के परिणामस्वरूप पेरोक्सिसोमल फैटी एसिड ऑक्सीकरण में चयनात्मक कमी होती है7. इसलिए, कोशिका के भीतर फैटी एसिड ऑक्सीकरण की प्रक्रिया को फैटी एसिड के सक्रियण, परिवहन और ऑक्सीकरण में शामिल एंजाइमों की अभिव्यक्ति के स्तर और गतिविधियों के साथ-साथ कई उपकोशिकीय डिब्बों में कॉफ़ैक्टर्स और अन्य चयापचयों की सांद्रता द्वारा विनियमित किया जाता है।
फैटी एसिड ऑक्सीकरण को मापने के लिए ऊतक होमोजेनेट्स का उपयोग करने वाली प्रक्रियाएं इस प्रक्रिया को विनियमित और समर्थन करने वाले सेलुलर आर्किटेक्चर को नष्ट कर देती हैं, जिससे डेटा का संग्रह होता है जो विवो चयापचय में सटीक रूप से प्रतिबिंबित नहीं करता है। जबकि मढ़वाया प्राथमिक हेपेटोसाइट्स का उपयोग करने वाली तकनीकें इस प्रणाली को संरक्षित करती हैं, विस्तारित अवधि के लिए पृथक कोशिकाओं को संवर्धन करने से इन विवो जीन अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल का नुकसान होता है जो कोशिकाओं में मौजूद था जब वे अभी भी जानवर 8,9 के भीतर रह रहे थे। निम्नलिखित प्रोटोकॉल प्राथमिक हेपेटोसाइट्स को अलग करने और [1-14सी] पामिटिक एसिड का उपयोग करके अलगाव के तुरंत बाद और निलंबन में फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण के लिए उनकी क्षमता परख करने के लिए एक विधि का वर्णन करता है। परख एसिड-घुलनशील चयापचयों (एएसएम) या एसिटाइल-सीओए जैसे उत्पादों से जुड़ी रेडियोधर्मिता के माप पर आधारित है, जो [1-14 सी] पामिटिक एसिड10,11 के β-ऑक्सीकरण द्वारा उत्पादित है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>(R)-(+)-Etomoxir sodium salt</td>
			<td>Tocris Bioscience</td>
			<td>4539/10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[1-14C]-Palmitic acid, 50&#8211;60 mCi/mmol, 0.5 mCi/mL</td>
			<td>American Radiolabeled Chemicals</td>
			<td>ARC 0172A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 M HEPES, sterile</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25060CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L disposable capillaries/pistons for positive displacement pipette</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>17008604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L, 200 &#181;L, and 10 &#181;L pipettes and tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL, 10 mL, and 25 mL serological pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tubes</td>
			<td>CellTreat</td>
			<td>229421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Perchloric acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A2296-1LB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA, fatty acid-free</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP9704100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 dihydrate</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>223506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>E-217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Pharmco</td>
			<td>111000200CSPP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter System, 0.22 &#956;m PES Filter, 500 mL, Sterile</td>
			<td>CellTreat</td>
			<td>229707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin sulphate</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>G-400-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HDPE, 6.5 mL scintillation vials</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-342-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic needles 22 G, 1.5 in</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP366-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase TM Research Grade</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>5401119001</td>
			<td>Defined blend of purified collagenase I and II with a medium concentration of thermolysin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M199 medium</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>M5017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4 heptahydrate</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>M1880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>accuSpin Micro 17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdissecting Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-5980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Chem-Impex International</td>
			<td>30070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>424270010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitic acid</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>P0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Cytiva Life Sciences</td>
			<td>SH30256.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Positive displacement pipette MR-10, 10 &#181;L</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>17008575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated centrifuge with inserts for 50 mL conical tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>5810 R</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-bottom, 14 mL, polypropylene culture test tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-956-9A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintillation counter</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>TriCarb 4810 TR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ScintiVerse BD cocktail</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SX18-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking water bath, 30 L capacity</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td></td>
			<td>&#160;Model G76</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cell strainers, 100 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thumb Dressing Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-8120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25900CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable-flow peristaltic pump</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>138762</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water baths, 2&#8211;2.5 L capacity</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of fatty acid &#946;-oxidation in a suspension of freshly isolated mouse hepatocytes

फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण यकृत की ऊर्जा मांगों को पूरा करने और अतिरिक्त प्रक्रियाओं के लिए सब्सट्रेट और कॉफ़ैक्टर्स प्रदान करने के लिए एक महत्वपूर्ण चयापचय मार्ग है, जैसे कि कीटोजेनेसिस और ग्लूकोनोजेनेसिस, जो पूरे शरीर के ग्लूकोज होमियोस्टेसिस को बनाए रखने और उपवास की स्थिति में अतिरिक्त-यकृत अंग समारोह का समर्थन करने के लिए आवश्यक हैं। फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण माइटोकॉन्ड्रिया और पेरोक्सीसोम के भीतर होता है और कई तंत्रों के माध्यम से विनियमित होता है, जिसमें फैटी एसिड, एंजाइम अभिव्यक्ति के स्तर और कोएंजाइम ए और एनएडी + जैसे कॉफ़ैक्टर्स की उपलब्धता और सक्रियण शामिल है। यकृत होमोजेनेट्स, सेल लिसिस में फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण को मापने वाले परखों में और कॉफ़ैक्टर्स के सुपरफिजियोलॉजिकल स्तरों के सामान्य जोड़ इन नियामक तंत्रों के प्रभावों को मुखौटा करते हैं। इसके अलावा, होमोजेनेट्स में ऑर्गेनेल की अखंडता को नियंत्रित करना मुश्किल है और तैयारी के बीच काफी भिन्न हो सकता है। बरकरार प्राथमिक हेपेटोसाइट्स में फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण का माप उपरोक्त नुकसान को दूर करता है। यह प्रोटोकॉल 14सी-लेबल वाले पामिटिक एसिड के साथ ऊष्मायन ताजा पृथक प्राथमिक माउस हेपेटोसाइट्स के निलंबन में फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण के माप के लिए एक विधि का वर्णन करता है। संस्कृति के दिनों के घंटों से बचने से, इस विधि में प्रोटीन अभिव्यक्ति के स्तर और मूल यकृत की चयापचय मार्ग गतिविधि को बेहतर ढंग से संरक्षित करने का लाभ होता है, जिसमें खिलाए गए चूहों की तुलना में उपवास वाले चूहों से पृथक हेपेटोसाइट्स में फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण की सक्रियता शामिल है।

यहां वर्णित यकृत छिड़काव आमतौर पर 80% की औसत व्यवहार्यता के साथ 30-40 मिलियन कोशिकाओं / यकृत की पैदावार करता है, जैसा कि ट्रिपैन ब्लू बहिष्करण (चित्रा 2) द्वारा अनुमान लगाया गया है। क्रेब्स-हेन्से?...

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Measurement of Fatty Acid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण एक आवश्यक चयापचय मार्ग है जो हेपेटोसाइट्स सहित कई अलग-अलग सेल प्रकारों में ऊर्जा उत्पन्न करने के लिए जिम्मेदार है। यहां, हम 14सी-लेबल वाले पामिटिक एसिड का उपयोग करके ताजा पृथक प्राथमिक हेपेटोसाइट्स में फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण को मापने की एक विधि का वर्णन करते हैं।

ताजा पृथक माउस हेपेटोसाइट्स के निलंबन में फैटी एसिड β-ऑक्सीकरण का मापन

Fatty acid &#946;-oxidation is a key metabolic pathway to meet the energy demands of the liver and provide substrates and cofactors for additional ...

यह प्रोटोकॉल प्राथमिक माउस हेपेटोसाइट्स में कुल माइटोकॉन्ड्रियल और पेरोक्सिसोमल फैटी एसिड बीटा-ऑक्सीकरण के माप के लिए एक मजबूत विधि प्रदान करने के लिए विकसित किया गया था। बरकरार कोशिकाओं का उपयोग ऑर्गेनेल अखंडता और जगह में नियामक तंत्र को बनाए रखता है। इसके अतिरिक्त, ताजा पृथक हेपेटोसाइट्स परख मूल के यकृत के संबंध में जीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन को कम करता है।सर्जरी चुनौतीपूर्ण हो सकती है। आपको आत्मविश्वासी, मेहनती और एकाग्र होना होगा। एक बार कैनुलेशन सफल होने के बाद, कोशिश करें और आराम करें, लेकिन ध्यान दें और छिड़काव की गुणवत्ता की निगरानी करें।प्रक्रिया शुरू करने के लिए, उदारतापूर्वक 70% इथेनॉल के साथ संवेदनाहारी माउस के पेट और छाती स्प्रे। फिर पेट के आधार के पास त्वचा और पेट की दीवार को खींचने के लिए संदंश का उपयोग करें और अंगों को उजागर करने के लिए मिडलाइन के दोनों ओर और डायाफ्राम तक पार्श्व रूप से काट लें। आंतों को दाईं ओर ले जाकर और यकृत के लोब को धीरे-धीरे फ्लिप करके अवर वेना कावा, या आईवीसी को उजागर करें।आईवीसी को थोड़ा झुकाव और कैनुलेशन की सुविधा के लिए माउस के पीछे एक सुई टोपी जैसे एक छोटी बेलनाकार वस्तु डालें। सबसे कम गति पर बफर एक के साथ पंप शुरू करने के बाद, आईवीसी में सुई डालें। फिर दबाव को दूर करने के लिए पोर्टल नस को काटें और रक्त और छिड़काव बफर की जल निकासी की अनुमति दें।प्रवाह दर को सात एमएल प्रति मिनट तक बढ़ाने से पहले। गर्म बफर एक के साथ जिगर को परफ्यूज करें और सुनिश्चित करें कि बफर युक्त ट्यूब में डाली गई लाइन हवा के बुलबुले पेश करने से बचने के लिए लगातार जलमग्न रहती है। छिड़काव होता है, जबकि बफर दो के लिए कोलेजनेज समाधान के 130 माइक्रोलीटर जोड़ें, और एक सीरोलॉजिकल पिपेट के साथ पाइपिंग द्वारा मिश्रण करें।चूंकि बफर युक्त ट्यूब में मात्रा लगभग पांच एमएल तक कम हो जाती है, धीरे-धीरे ट्यूब के किनारे पाइपिंग करके बफर दो के पांच एमएल को बफर करने के लिए जोड़ें। ट्यूब में शेष बफर दो जोड़ने से पहले दो बार इसके अलावा दोहराएं। छिड़काव बंद करो जब बफर दो के बारे में 5 से 10 मिलीलीटर ट्यूब में छोड़ दिया जाता है।फिर यकृत को एक्साइज करें और इसे 100-एमएल संस्कृति पकवान में स्थानांतरित करें जिसमें 20 मिलीलीटर बर्फ-ठंडा बफर दो हो। लामिना प्रवाह हुड के तहत, धीरे-धीरे सर्जिकल कैंची और चिमटी का उपयोग करके यकृत ऊतक को तोड़ दें। इसके बाद हेपेटोसाइट्स निलंबन में लगभग 20 मिलीलीटर बर्फ-ठंडा एम 199 बफर जोड़ें और बड़े जिगर के टुकड़ों से अतिरिक्त हेपेटोसाइट्स की रिहाई को धीरे-धीरे बढ़ावा देने के लिए सिरिंज के प्लंजर का उपयोग करके 100-माइक्रोन सेल छलनी के माध्यम से इसे फ़िल्टर करें।संग्रह ट्यूब पूर्ण होने तक सेल निलंबन इकट्ठा करने के लिए एम 199 बफर के साथ 100-एमएल संस्कृति पकवान और सेल छलनी धो लें। फिर चार डिग्री सेल्सियस पर दो मिनट के लिए 50 एक्स जी पर निलंबन अपकेंद्रित्र। घुमावदार द्वारा ठंडे एम 199 के 30 मिलीलीटर में हेपेटोसाइट गोली को फिर से निलंबित करने से पहले सतह पर तैरनेवाला की आकांक्षा करें।एक बार धोएं। कई प्रतिक्रियाओं के लिए सब्सट्रेट मिश्रण तैयार करने से पहले पामिटिक एसिड और गोजातीय सीरम एल्बुमिन, या बीएसए, समाधान को पिघलाएं। एक माइक्रोसेंट्रिफ्यूज ट्यूब में प्रति प्रतिक्रिया बीएसए समाधान के विभाज्य 13.5 माइक्रोलीटर।ट्यूब को 41 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करने के बाद, प्रति प्रतिक्रिया 200 एमएम पामिटिक एसिड समाधान का एक माइक्रोलीटर जोड़ें। घुलनशील पामिटिक एसिड-बीएसए कॉम्प्लेक्स के गठन की सुविधा के लिए 20 से 30 मिनट के लिए 41 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेशन से पहले और दौरान ट्यूब को सख्ती से भंवर करें। इस समय के दौरान, पर्क्लोरिक एसिड के 1 एम के 133 माइक्रोलीटर विभाज्य जिसका उपयोग अलग-अलग 1.5-एमएल माइक्रोसेंट्रिफ्यूज ट्यूबों में प्रतिक्रियाओं को रोकने के लिए किया जाएगा।प्रतिक्रियाओं को शुरू करने से पहले, तैयार रेडियोधर्मी बीएसए-पामिटिक एसिड कॉम्प्लेक्स को पतला करने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक ट्यूब में प्रति प्रतिक्रिया एम 199 बफर के 485.5 माइक्रोलीटर को विभाज्य और सेते हैं। अगला नमूनों के रूप में अलग-अलग 14-एमएल गोल नीचे ट्यूबों में अवरोधकों के साथ या बिना एम 199 के 750 माइक्रोलीटर वितरित करें। हेपेटोसाइट धोने के चरणों के दौरान, प्रतिक्रियाओं को शुरू करने से 10 से 15 मिनट पहले, ट्यूबों को 180 से 200 घूर्णन प्रति मिनट पर 37 डिग्री सेल्सियस पर सेट किए गए एक मिलाते हुए पानी के स्नान में स्थानांतरित करें।यदि हेपेटोसाइट्स की व्यवहार्यता कम से कम 75% है, तो स्पष्ट बीएसए-पामिटिक एसिड समाधान युक्त माइक्रोसेंट्रिफ्यूज ट्यूब पर प्रति प्रतिक्रिया कार्बन -14 पामिटिक एसिड के 0.8 माइक्रोलीटर को स्थानांतरित करके सब्सट्रेट मिश्रण की तैयारी को पूरा करें। 41 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान के लिए ट्यूब लौटने से पहले भंवर। अंतिम हेपेटोसाइट पुन: निलंबन के तुरंत बाद, एक एमएल पिपेट का उपयोग करके मिलाते हुए पानी के स्नान में 14-एमएल गोल नीचे ट्यूबों में से प्रत्येक में हेपेटोसाइट निलंबन के 750 माइक्रोलीटर स्थानांतरित करें और इनक्यूबेटर में स्थानांतरित करने से पहले ट्यूबों को संक्षेप में कम गति से भंवर करें, प्रत्येक जोड़ को 30 सेकंड तक चौंका दें।पांच मिनट के लिए 3000 एक्स जी पर स्पिन करने के लिए हेपेटोसाइट्स के एक अलग विभाज्य को 1.5-एमएल माइक्रोसेंट्रिफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें। परिणामों को सामान्य करने के लिए नमूने में प्रोटीन की कुल मात्रा को मापने के लिए शून्य से 80 डिग्री सेल्सियस पर गोली को संग्रहीत करने से पहले सतह पर तैरनेवाला निकालें। जबकि हेपेटोसाइट्स 37 डिग्री सेल्सियस पर पूर्व-इनक्यूबेशन में हैं, प्रतिक्रियाओं को शुरू करने के लिए तैयार होने तक 37 डिग्री सेल्सियस पर रखने के लिए रेडियोधर्मी बीएसए-पामिटिक एसिड कॉम्प्लेक्स को गर्म माध्यम में जोड़ें।प्रतिक्रियाओं को शुरू करने के लिए, पानी के स्नान से हेपेटोसाइट्स को हटा दें और हेपेटोसाइट्स में सब्सट्रेट मिश्रण के 500 माइक्रोलीटर जोड़ें। 15 मिनट के लिए सेते हैं करने के लिए पानी के स्नान करने के लिए लौटने से पहले पांच सेकंड के लिए एक कम गति पर कोशिकाओं भंवर। प्रतिक्रियाओं का एक सेट शुरू करें और पृष्ठभूमि रेडियोधर्मिता निर्धारित करने के लिए तुरंत रोकें।हस्तांतरण और गिनती करने के लिए 6-एमएल जगमगाहट शीशियों में बचे हुए सब्सट्रेट मिश्रण के 200 से 250 माइक्रोलीटर के डुप्लिकेट विभाज्य सेट करें। प्रतिक्रियाओं को रोकने के लिए, मध्यम गति से भंवर द्वारा निलंबित करने के लिए पानी के स्नान से हेपेटोसाइट्स को हटा दें और फिर हेपेटोसाइट निलंबन के 400 माइक्रोलीटर को पर्क्लोरिक एसिड युक्त माइक्रोसेंट्रिफ्यूज ट्यूबों में स्थानांतरित करें। तुरंत टोपी और भंवर सभी नमूनों के लिए अनुक्रम दोहराने से पहले ट्यूबों, 30 सेकंड से चौंका देने.10 मिनट के लिए 13, 000 एक्स जी पर 1.5-एमएल माइक्रोसेंट्रिफ्यूज ट्यूबों को कताई करने के बाद, सतह पर तैरनेवाला के 300 माइक्रोलीटर को 6-एमएल जगमगाहट शीशी में स्थानांतरित करें और नमूनों में रेडियोधर्मिता की गणना करने के लिए जगमगाहट द्रव के 4 एमएल जोड़ें और सब्सट्रेट मिश्रण विभाज्य एक जगमगाहट काउंटर में। अध्ययन में, यकृत छिड़काव ने प्रति यकृत 30 से 40 मिलियन कोशिकाओं का उत्पादन किया, 80% की औसत व्यवहार्यता के साथ यह भी देखा गया कि उपवास समूह में ग्लूकोज एकाग्रता को कम करने से हेपेटोसाइट्स की उपज या व्यवहार्यता पर कोई नकारात्मक प्रभाव नहीं पड़ा। खिलाया और उपवास वाले नर चूहों से पृथक हेपेटोसाइट निलंबन, सीपीटी 1 और माइटोकॉन्ड्रियल फैटी एसिड ऑक्सीकरण के एक शक्तिशाली अवरोधक एटोमोक्सिर की उपस्थिति और अनुपस्थिति में फैटी एसिड बीटा-ऑक्सीकरण क्षमता के लिए परख की गई थी।पृष्ठभूमि रेडियोधर्मिता से जुड़े प्रति मिनट, या सीपीएम की गिनती पामिटिक एसिड के बैच के साथ भिन्न होती है। हालांकि, सीपीएम अभी भी सब्सट्रेट मिश्रण के साथ ऊष्मायन किए गए नमूनों की तुलना में काफी कम था। उपवास वाले चूहों से पृथक हेपेटोसाइट्स माइटोकॉन्ड्रियल और पेरोक्सीसोमल फैटी एसिड बीटा-ऑक्सीकरण दोनों की दरों में एक मजबूत वृद्धि दिखाते हैं।खिलाया और उपवास चूहों से पृथक हेपेटोसाइट्स में पामिटिक एसिड किस दर पर ऑक्सीकरण किया जाता है, यह निर्धारित करने के लिए डेटा का आगे अध्ययन किया गया था। बुलबुले को लाइन में प्रवेश करने से रोकें। छिड़काव के दौरान सुई को स्थिर रखें।हेपेटोसाइट्स को संभालते समय कोमल रहें। उन्हें वितरित करते समय उन्हें निलंबन में रखें। इस प्रक्रिया से पृथक हेपेटोसाइट्स का उपयोग फैटी एसिड संश्लेषण जैसे अन्य चयापचय मार्गों को परखने के लिए निलंबन के रूप में किया जा सकता है, या उन्हें सेल संस्कृति प्रयोगों के लिए चढ़ाया जा सकता है।

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Measurement of Fatty Acid &#946;-Oxidation in a Suspension of Freshly Isolated Mouse Hepatocytes

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Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

में फैटी एसिड की पहचान<em&gt; बेसिलस cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Hydrolysis of a Ni-Schiff-Base Complex Using Conditions Suitable for Retention of Acid-labile Protecting Groups

एक नी-शिफ़-बेस की हाइड्रोलिसिस परिसर का उपयोग स्थितियां एसिड अस्थायी रक्षा समूह की अवधारण के लिए उपयुक्त

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Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

निलंबन सेल संस्कृतियों में डीएनए नुकसान-प्रेरित प्रोटीन परिसरों का पता लगाने और विज़ुअलाइज़ेशन निकटता के बंधन परख का उपयोग करना

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माउस से हेपैटोसाइट्स और Sinusoidal Endothelial कोशिकाओं का शुद्धि जिगर छिड़काव

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

फैटी एसिड 13सी Isotopologue profiling Invertebrate उपभोक्ताओं के पौष्टिकता कार्बन हस्तांतरण और लिपिड चयापचय में अंतर्दृष्टि प्रदान करता है

Fatty acids (FAs) are useful biomarkers in food web ecology because they are typically assimilated as a complete molecule and transferred into consumer ...

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

अलग Mitochondria और प्रसंस्कृत कोशिकाओं में Mitochondrial कैल्शियम आमद का विश्लेषण

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Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

गतिशील Proteomic और Langendorff छिड़काव के बाद अलग माउस दिल से Polysomes के miRNA विश्लेषण

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

चाय से व्युत्पन्न एक नव स्थापित सेल निलंबन संस्कृति में छह प्रणालीगत कीटनाशक के चयापचय पर अध्ययन(कैमेलिया Sinensis एल.) पत्ते

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

जीवाणु रोगजनक फैटी एसिड समावेश के अध्ययन के लिए चिकन अंडे Yolk से लाइपोप्रोटीन कणों का अलगाव झिल्ली Phospholipids में शामिल

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

Kinetic Screening of Nuclease Activity using Nucleic Acid Probes

न्यूक्लिक एसिड जांच का उपयोग कर न्यूक्लीज गतिविधि का काइनेटिक स्क्रीनिंग

Nucleases are a class of enzymes that break down nucleic acids by catalyzing the hydrolysis of the phosphodiester bonds that link the ribose sugars. ...