Name: optogenetic phase transition of tdp-43 in spinal motor neurons of zebrafish larvae
Uploaded: 2022-02-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optogenetic Phase Transition of TDP-43 in Spinal Motor Neurons of Zebrafish Larvae at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado por SERIKA FUND (KA), KAKENHI Grant números JP19K06933 (KA) e JP20H05345 (KA).

Todo o trabalho de pesca foi realizado de acordo com o Guia de Cuidado e Uso de Animais De Laboratório do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (identificação de aprovação nº 24-2) do Instituto Nacional de Genética (Japão), que possui uma Garantia de Bem-Estar Animal no arquivo (número de garantia A5561-01) no Escritório de Bem-Estar Animal Laboratorial dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH, EUA).
1. Construção de BACs para expressão de gene TDP-43 optogenét...

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	<li>Brangwynne, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+transitions+and+size+scaling+of+membrane-less+organelles.">Phase transitions and size scaling of membrane-less organelles.</a> Journal of Cell Biology. 203 (6), 875-881 (2013).</li><li>Hyman, A. A., Weber, C. A., Julicher, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid-liquid+phase+separation+in+biology.">Liquid-liquid phase separation in biology.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 30, 39-58 (2014).</li><li>Lennox, A. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+Binding+Antagonizes+Neurotoxic+Phase+Transitions+of+TDP-43.">RNA Binding Antagonizes Neurotoxic Phase Transitions of TDP-43.</a> Neuron. 102 (2), 321-338 (2019).</li><li>Asakawa, K., Handa, H., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+modulation+of+TDP-43+oligomerization+accelerates+ALS-related+pathologies+in+the+spinal+motor+neurons.">Optogenetic modulation of TDP-43 oligomerization accelerates ALS-related pathologies in the spinal motor neurons.</a> Nature Communications. 11 (1), 1004 (2020).</li><li>Otte, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+TDP-43+nucleation+induces+persistent+insoluble+species+and+progressive+motor+dysfunction+in+vivo.">Optogenetic TDP-43 nucleation induces persistent insoluble species and progressive motor dysfunction in vivo.</a> Neurobiology of Disease. 146, 105078 (2020).</li><li>Wendik, B., Maier, E., Meyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mnx+genes+in+endocrine+and+exocrine+pancreas+formation.">Zebrafish mnx genes in endocrine and exocrine pancreas formation.</a> Developmental Biology. 268 (2), 372-383 (2004).</li><li>Seredick, S. D., Van Ryswyk, L., Hutchinson, S. A., Eisen, J. 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L., Abe, G., Schouw, A., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transposon-mediated+BAC+transgenesis+in+zebrafish.">Transposon-mediated BAC transgenesis in zebrafish.</a> Nature Protocols. 6 (12), 1998-2021 (2011).</li><li>Asakawa, K., Abe, G., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+dissection+of+the+spinal+cord+motor+column+by+BAC+transgenesis+and+gene+trapping+in+zebrafish.">Cellular dissection of the spinal cord motor column by BAC transgenesis and gene trapping in zebrafish.</a> Frontiers in Neural Circuits. 7, 100 (2013).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Taslimi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+optogenetic+clustering+tool+for+probing+protein+interaction+and+function.">An optimized optogenetic clustering tool for probing protein interaction and function.</a> Nature Communications. 5, 4925 (2014).</li><li>Asakawa, K., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocadherin-mediated+cell+repulsion+controls+the+central+topography+and+efferent+projections+of+the+abducens+nucleus.">Protocadherin-mediated cell repulsion controls the central topography and efferent projections of the abducens nucleus.</a> Cell Reports. 24 (6), 1562-1572 (2018).</li><li>Redchuk, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+regulation+of+endogenous+proteins.">Optogenetic regulation of endogenous proteins.</a> Nature Communications. 11 (1), 605 (2020).</li></ol>

A expressão mediada por mnr2b-BAC de opTDP-43h e EGFP-TDP-43z em zebrafish fornece uma oportunidade única para imagens ao vivo da transição de fase TDP-43 nos neurônios motores espinhais. A transparência óptica dos tecidos corporais das larvas de zebrafish permite a simples e não invasiva estimulação optogenética de opTDP-43h. Comparações entre neurônios motores espinhais únicos ao longo do tempo demonstraram que a oligomerização dependente da luz do opTDP-43h causa seu agrupamento citoplasmical...

Os grânulos de ribonucleoproteína (RNP) controlam uma miríade de atividades celulares no núcleo e citoplasma, montando partições sem membrana através da separação de fase líquido-líquido (LLPS), fenômeno no qual um fluido homogêneo se mistura em duas fases líquidas distintas1,2. Os LLPS desregulados de proteínas de ligação de RNA que normalmente funcionam como componentes de grânulo RNP promovem a transição de fase anormal, levando à agregação de proteínas. Esse processo foi implicado em doenças neurodesenvolvimentantes e neurodegenerativas3,4,5. A avaliação precisa de uma relação causal entre LLPS aberrantes de proteínas ligantes de RNA e patogênese de doenças é crucial para determinar se e como o LLPS pode ser explorado como um alvo terapêutico eficaz. LLPS de proteínas de ligação de RNA é relativamente fácil de estudar in vitro e em modelos unicelulares, mas é difícil em organismos multicelulares, especialmente em vertebrados. Um requisito crítico para analisar tais LLPS em células individuais dentro de um ambiente tecidual é expressar uma sonda para a imagem e manipulação de LLPS em um tipo de interesse celular vulnerável à doença.
A esclerose lateral amiotrófica (ELA) é uma doença neurológica fatal na qual os neurônios motores do cérebro e da medula espinhal são perdidos seletivamente e progressivamente devido à degeneração. Até o momento, mutações em mais de 25 genes foram associadas à forma herediável (ou familiar) da ELA, que representa 5%-10% do total de casos de ELA, e alguns desses genes causadores de ELA codificam proteínas de ligação de RNA constituídas por RNPs, como hnRNPA1, TDP-43 e FUS6,7. Além disso, a forma esporádica da ELA, que responde por 90%-95% do total de casos de ELA, é caracterizada pela agregação citoplasmática do TDP-43 depositado em neurônios motores degenerados. Uma das principais características dessas proteínas ligadas à RNA associadas à ALS são suas regiões intrinsecamente desordenadas (IDRs) ou domínios de baixa complexidade que carecem de estruturas tridimensionais ordenadas e mediam interações proteína-proteína fracas com muitas proteínas diferentes que impulsionam LLPS7,8. O fato de que mutações causadoras de ELA ocorrem frequentemente nos IDRs levou à ideia de que LLPS aberrantes e transição de fase dessas proteínas relacionadas à ELA podem estar por trás da patogênese da ALS9,10.
Recentemente, o método optoDroplet, uma técnica optogenética baseada em Cryptochrome 2 que permite a modulação de interações proteína-proteína por luz, foi desenvolvido para induzir a transição de fase de proteínas com IDRs11. Como esta técnica foi estendida com sucesso ao TDP-43, começou a descobrir os mecanismos subjacentes à transição de fase patológica do TDP-43 e sua citotoxicidade associada12,13,14,15. Neste protocolo, descrevemos um método genético para fornecer um TDP-43 optogenético para tipos de células vulneráveis à ALS, ou seja, neurônios motores espinhais em zebrafish usando o BAC para o gene mnr2b/mnx2b codificando uma proteína homeodomina para especificação de neurônio motor16,17. A alta translucência das larvas de zebrafish permite uma estimulação leve simples e não invasiva do TDP-43 optogenético que desencadeia sua transição de fase nos neurônios motores espinhais. Também apresentamos um fluxo de trabalho básico para a imagem ao vivo dos neurônios motores espinhais do zebrafish e análise de imagem usando o software Fiji/ImageJ livremente disponível para caracterizar as respostas do TDP-43 optogenético à estimulação da luz. Esses métodos permitem uma investigação da transição de fase do TDP-43 em um ambiente celular vulnerável à ALS e devem ajudar a explorar suas consequências patológicas em níveis celulares e comportamentais.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axioimager Z1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16FA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass base dish</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>3910-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>MEE</td>
			<td>CN-25C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED panel</td>
			<td>Nanoleaf Limited</td>
			<td>Nanoleaf AURORA smarter kit</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mupid-2plus</td>
			<td>TAKARA</td>
			<td>AD110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucleoBond BAC100</td>
			<td>MACHEREY-NAGEL</td>
			<td>740579</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuSieve GTG Agarose</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>50181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective lens</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>XLUMPlanFL N 20&#215;/1.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective lens</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Plan-Neofluar 5x/0.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical power meter</td>
			<td>HIOKI</td>
			<td>3664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical sensor</td>
			<td>HIOKI</td>
			<td>9742-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red solution 0.5%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P0290-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrimeSTAR GXL DNA Polymerase</td>
			<td>TAKARA</td>
			<td>R050A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick Gel Extraction Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Six-well dish</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrometer probe BLUE-Wave</td>
			<td>StellerNet Inc.</td>
			<td>VIS-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe needle</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>NN-2725R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaKaRa Ex Taq</td>
			<td>TAKARA</td>
			<td>RR001A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish BAC clone CH211-172N16</td>
			<td>BACPAC Genomics</td>
			<td>CH211-172N16</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optogenetic phase transition of tdp-43 in spinal motor neurons of zebrafish larvae

A agregação anormal de proteínas e a vulnerabilidade neuronal seletiva são duas marcas principais de doenças neurodegenerativas. As relações causais entre essas características podem ser interrogadas controlando a transição de fase de uma proteína associada à doença em um tipo celular vulnerável, embora essa abordagem experimental tenha sido limitada até agora. Aqui, descrevemos um protocolo para induzir a transição de fase da proteína de ligação de RNA/DNA TDP-43 em neurônios motores espinhais de larvas de zebrafish para modelagem da agregação citoplasmática de TDP-43 ocorrendo em neurônios motores degenerados na esclerose lateral amiotrófica (ELA). Descrevemos um método genético baseado em cromossomo artificial bacteriano (BAC) para fornecer uma variante optogenética TDP-43 seletivamente aos neurônios motores espinhais de zebrafish. A alta translucência das larvas de zebrafish permite a transição de fase do TDP-43 optogenético nos neurônios motores espinhais por uma simples iluminação externa usando um diodo emissor de luz (LED) contra peixes desenfreados. Também apresentamos um fluxo básico de imagens ao vivo dos neurônios motores espinhais do zebrafish e análise de imagem com software Fiji/ImageJ livremente disponível para caracterizar respostas do TDP-43 optogenético à iluminação da luz. Este protocolo permite a caracterização da transição de fase TDP-43 e formação agregada em um ambiente celular vulnerável à ALS, o que deve facilitar a investigação de suas consequências celulares e comportamentais.

Imagem ao vivo de proteínas TDP-43 optogenéticas e não optogenéticas nos neurônios motores espinhais mnr2b+ de larvas de zebrafish Para induzir a transição de fase TDP-43 nos neurônios motores espinhais em zebrafish, um TDP-43h humano que é marcado com mRFP1 e CRY2olig22 no N-e C-termini, respectivamente, foi construído e designado como opTDP-43h14 (Figura 1A). O fragment...

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Optogenetic Phase Transition of TDP-43 in Spinal Motor Neurons of Zebrafish Larvae

Descrevemos um protocolo para induzir a transição de fase da proteína de ligação de DNA TAR 43 (TDP-43) por luz nos neurônios motores espinhais usando zebrafish como modelo.

Transição de fase optogenética do TDP-43 em neurônios motores espinhais de larvas de zebrafish

Abnormal protein aggregation and selective neuronal vulnerability are two major hallmarks of neurodegenerative diseases. Causal relationships between ...

Assim, este protocolo nos permite induzir transições de fase patológica do TDP-43 e abordar sua consequência celular nos neurônios motores espinhais in vivo, o que é relevante para entender por que os neurônios motores degeneram em ELA. Devido à alta transparência das larvas de zebrafish, os neurônios motores da medula espinhal são diretamente visíveis. Assim, pode-se visualizar o comportamento dinâmico do TDP-43 passando por transições de fase em neurônios motores únicos espinhais.Este método oferece um novo modelo animal de ELA. Acreditamos que qualquer método que possa impedir a transição e agregação de fase tdp-43 induzidos pela luz neste modelo de ELA pode ser um potencial candidato à terapia de ELA. Outras proteínas relacionadas à ELA com regiões intrinsecamente desordenadas podem ser expressas para explorar a neurotoxicidade associada às transições de fases anormais.A chave para o sucesso nesta abordagem é expressar o TDP-43 optogenético nos neurônios motores espinhais a nível nãotóxico. A transgênese BAC é um passo demorado, mas uma vez que você cria um peixe transgênico adequado, os seguintes passos são relativamente mais fáceis e simples. Para começar, ligue o diodo emissor de luz, ou painel LED, usando o aplicativo associado instalado em um tablet ou telefone.Em seguida, coloque a sonda espectrômetro em um poço vazio de um prato de 6 poços. Em seguida, usando o aplicativo, ajuste a luz LED para um comprimento de onda de 456 nm. Coloque o sensor óptico de um medidor óptico no poço vazio e ajuste a potência da luz LED.Em seguida, coloque o prato com a configuração do painel LED em uma incubadora a 28 C.Para a imagem das larvas de peixe zebra expressando TDP-43 optogenética, descoriorar o peixe transgênico duplo e anestesia-los em tampão E3 contendo 250 g/mL de Tricane. Em seguida, pré-aqueça 1% de baixa temperatura de fusão agarose contendo 250 g/mL de etil 3-aminobenzoato metanosulfonato a 42 C.Em seguida, coloque uma gota da agarose no prato de base de vidro. O diâmetro da gota de agarose em forma de cúpula no prato de vidro deve ser de 8 a 10 mm.Em seguida, usando uma pipeta Pasteur, adicione o peixe anestesiado à agarose no prato à base de vidro. Minimize a quantidade de tampão E3 adicionado à agarose junto com o peixe. Em seguida, misture por pipetting algumas vezes.Durante a solidificação da agarose, mantenha o peixe de lado usando uma agulha de seringa, de tal forma que a medula espinhal esteja em uma posição horizontal apropriada. Depois que a agarose se solidificar, adicione algumas gotas de tampão E3 no peixe montado em agarose em forma de cúpula. Usando um microscópio confocal equipado com uma lente objetiva de imersão de água 20 vezes, adquira seções z confocal serial da medula espinhal.Inclua a cloaca no lado ventral do peixe nas regiões de interesse como referência para identificar e comparar os segmentos espinhais através dos pontos de tempo. Assim que a imagem estiver completa, use uma agulha de seringa para quebrar cuidadosamente a agarose e remover o peixe da agarose. Mantenha a quantidade de tempo que o peixe está embutido na agarose o mais curto possível, embora a garose incorporando por menos de 30 minutos não afete a viabilidade do peixe.Adicione 7,5 mL de tampão E3 a um poço de um prato de 6 poços e coloque o peixe duplo transgênico imaged nesse poço. Em seguida, coloque o prato no painel LED, mantendo o prato e o painel LED 5 mm separados com um espaçador, e ligue a luz LED azul. Mantenha alguns peixes transgênicos duplos em um prato separado de 6 poços coberto com papel alumínio para peixes de controle nãoilluminados.Após o tempo de iluminação desejado, imagem da medula espinhal do peixe iluminado como demonstrado anteriormente. A realocação citoplasmática do opTDP-43h em neurônios motores espinhal único foi visualizada separando as imagens da série Z adquiridas aos 48. e 72 horas pós fertilização em cada canal EGFP-TDP-43z e opTDP-43h.A partir de imagens de projeção de intensidade máxima de EGFP-TDP-43z, um único neurônio espinhal isolado identificável em ambos os 48. e 72 horas após a fertilização foram selecionadas. Regiões de interesse que cobriam as somas dos neurônios motores foram definidas pelo rastreamento da borda do sinal EGFP em 48.e 72 horas após a fertilização. A intensidade fluorescente normalizada ao longo do eixo principal da soma foi traçada. E em 48 horas após a fertilização, os padrões de ambos os sinais se sobrepuseram em grande parte um ao outro.Em contraste, às 72 horas, o pico para o sinal opTDP-43h foi encontrado na região onde o sinal EGFP-TDP-43z estava baixo, indicando a realocação citoplasmática de opTDP-43h. Para quantificar os sinais opTDP-43h e EGFP-TDP-43z antes e depois da estimulação da luz azul, algumas fatias de imagens de projeção para cada canal das mesmas imagens da série Z foram produzidas em 48. e 72 horas após a fertilização.Das quatro células mnr2b+que foram investigadas, a célula 1, notavelmente exibiu um sinal EGFP-TDP-43z saturado. Os valores relativos de opTDP-43h para EGFP-TDP-43z foram calculados dividindo o valor RFP pelo valor de GFP. As células 2 a 4 apresentaram níveis de opTDP-43h decrescentes após a iluminação da luz azul.É importante minimizar o tempo em que os peixes estão embutidos na agarose para mantê-los saudáveis. Ajustando a intensidade e duração da iluminação LED, controlamos a transição de fase TDP-43 de forma regulamentada temporária, o que pode ajudar a dissecar a progressão da transição patológica de fase TDP-43 no neurônio motor.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissecção e Cultura de Neurônios da Medula Espinhal comissural embrionárias

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Neurociência

Optogenetic Activation of Zebrafish Somatosensory Neurons using ChEF-tdTomato

Optogenética ativação de neurônios Zebrafish somatossensoriais usando chef-tdTomato

Larval  zebrafish are emerging as a model for describing the development and function  of simple neural circuits. Due to their  external fertilization, ...

Extracellularly Identifying Motor Neurons for a Muscle Motor Pool in Aplysia californica

Extracellularly Identifying Motor Neurons for a Muscle Motor Pool in Aplysia californica

Extracelularmente Identificar os neurônios motores de um pool do motor muscular em<em&gt; Aplysia californica</em

In animals with large  identified neurons (e.g. mollusks), analysis of motor pools is done using  intracellular techniques1,2,3,4. Recently,  we developed ...

Optogenetic Perturbation of Neural Activity with Laser Illumination in Semi-intact Drosophila Larvae in Motion

Optogenetic Perturbation of Neural Activity with Laser Illumination in Semi-intact Drosophila Larvae in Motion

Optogenetic Perturbação da atividade neural com Iluminação Laser no Semi-intacta<em&gt; Drosophila</em&gt; As larvas in Motion

Drosophila larval locomotion is a splendid model system in developmental and physiological neuroscience, by virtue of the genetic accessibility of the ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

zebrafish<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Preparação para gravações eletrofisiológicas da Spinal Sensorial e Motor Neurons

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Retrograde Neuroanatomical Tracing of Phrenic Motor Neurons in Mice

Rastreamento neuroanatômica retrógrado do frênico neurônios em ratos

Phrenic motor neurons are cervical motor neurons originating from C3 to C6 levels in most mammalian species. Axonal projections converge into phrenic ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

Rastreamento do comportamento larval de Drosophila em resposta à estimulação optogenética de neurônios olfativos

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolation and Culture of Oculomotor, Trochlear, and Spinal Motor Neurons from Prenatal Islmn:GFP Transgenic Mice

Isolamento e Cultura dos neurônios oculomotores, trochlear e motores espinhais de pré-natal Islmn:GFP Ratos Transgênicos

Oculomotor neurons (CN3s) and trochlear neurons (CN4s) exhibit remarkable resistance to degenerative motor neuron diseases such as amyotrophic lateral ...

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Medição da captação de glicose em modelos de Drosophila de Proteinopatia TDP-43

Amyotrophic lateral sclerosis is a neurodegenerative disorder causing progressive muscle weakness and death within 2-5 years following diagnosis. Clinical ...

In Vivo Wireless Optogenetic Control of Skilled Motor Behavior

In Vivo Wireless Optogenetic Control of Skilled Motor Behavior

In vivo Controle Optogenético Sem Fio do Comportamento Motor Qualificado

Fine motor skills are essential in everyday life and can be compromised in several nervous system disorders. The acquisition and performance of these ...