Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
2:00
32P-Labeling of Oligonucleotides
2:52
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
3:53
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
5:08
Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
5:38
Setup and Running of Urea-PAGE Gels
6:27
Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
8:09
Conclusion
Transcript
يصف هذا البروتوكول فحصا خلويا لمراقبة كفاءة الربط، باستخدام مراسل إدارة قابل للتكيف. يمكن استخدام هذا الفحص المراسل لدراسة آثار الطفرات المرتبطة بالمرض في مواقع إكسون أو الوصلة ، ولتصميم العلاج ، وخاصة جسيمات واحدة ، لتحسين التعرف على مواقع الربط
Sign in or start your free trial to access this content
يصف هذا البروتوكول فحصا لمراسل minigene لمراقبة تأثير طفرات موقع 5'-splice على الربط ويطور مثبط U1 snRNA لإنقاذ تثبيط الربط الناجم عن الطفرة. يتم التعبير عن بنى المراسل والمثبط U1 snRNA في خلايا HeLa ، ويتم تحليل الربط عن طريق تمديد التمهيدي أو RT-PCR.