Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
2:00
32P-Labeling of Oligonucleotides
2:52
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
3:53
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
5:08
Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
5:38
Setup and Running of Urea-PAGE Gels
6:27
Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
8:09
Conclusion
Transcript
Denne protokol beskriver et cellulært assay til overvågning af splejsningseffektivitet ved hjælp af en tilpasningsdygtig administrerende reporter. Denne reporter Assay kan bruges til at studere virkningerne af sygdomsrelaterede mutationer i Exxon-
Sign in or start your free trial to access this content
Denne protokol beskriver et minigen reporter-assay for at overvåge virkningen af 5'-splejsningsstedsmutationer på splejsning og udvikler suppressor U1 snRNA til redning af mutationsinduceret splejsningshæmning. Reporter- og suppressoren U1 snRNA-konstruktioner udtrykkes i HeLa-celler, og splejsning analyseres ved primerudvidelse eller RT-PCR.