Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
2:00
32P-Labeling of Oligonucleotides
2:52
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
3:53
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
5:08
Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
5:38
Setup and Running of Urea-PAGE Gels
6:27
Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
8:09
Conclusion
Transcript
Dit protocol beschrijft een cellulaire assay voor het bewaken van splicing-efficiëntie, met behulp van een aanpasbare beherende verslaggever. Deze reporter Assay kan worden gebruikt om de effecten van ziekte geassocieerde mutaties in de Exxon of s
Sign in or start your free trial to access this content
Dit protocol beschrijft een minigene reporter assay om de impact van 5'-splice site mutaties op splicing te monitoren en ontwikkelt suppressor U1 snRNA voor de redding van mutatie-geïnduceerde splicing remming. De reporter en suppressor U1 snRNA constructen worden uitgedrukt in HeLa cellen, en splicing wordt geanalyseerd door primer extensie of RT-PCR.