एक रिपोर्टर आधारित सेलुलर परख निगरानी Splicing दक्षता के लिए

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September 15th, 2021

DOI :

10.3791/63014-v

September 15th, 2021

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Jason Wong¹, William Martelly¹, Shalini Sharma¹

¹Department of Basic Medical Sciences, College of Medicine-Phoenix, University of Arizona

Chapters

0:04

Introduction

0:31

Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids

2:00

³²P-Labeling of Oligonucleotides

2:52

Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension

3:53

Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR

5:08

Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR

5:38

Setup and Running of Urea-PAGE Gels

6:27

Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs

8:09

Conclusion

Transcript

इस प्रोटोकॉल निगरानी Splicing दक्षता के लिए एक सेलुलर परख का वर्णन करता है, एक अनुकूलनीय प्रबंधन रिपोर्टर का उपयोग कर. इस रिपोर्टर परख रोग एक्सॉन या splice साइटों में जुड़े उत्परिवर्तन के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और

Summary

इस प्रोटोकॉल का वर्णन करता है एक minigene रिपोर्टर परख splicing पर 5'-splice साइट उत्परिवर्तन के प्रभाव की निगरानी करने के लिए और उत्परिवर्तन प्रेरित splicing निषेध के बचाव के लिए suppressor U1 snRNA विकसित करता है. रिपोर्टर और दमनकारी U1 snRNA निर्माणों को हेला कोशिकाओं में व्यक्त किया जाता है, और प्राइमर एक्सटेंशन या आरटी-पीसीआर द्वारा स्प्लिसिंग का विश्लेषण किया जाता है।

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