Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
2:00
32P-Labeling of Oligonucleotides
2:52
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
3:53
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
5:08
Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
5:38
Setup and Running of Urea-PAGE Gels
6:27
Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
8:09
Conclusion
Transcript
Detta protokoll beskriver en cellulär analys för övervakning av splitsningseffektivitet, med hjälp av en anpassningsbar hanteringsreporter. Denna reporter Assay kan användas för att studera effekterna av sjukdomen Associerade mutationer i Exxon el
Sign in or start your free trial to access this content
Detta protokoll beskriver en minigene reporter analys för att övervaka effekten av 5's-skarvning webbplats mutationer på skarvning och utvecklar suppressor U1 snRNA för räddning av mutation-inducerad splitsning hämning. Reportern och suppressorn U1 snRNA konstruktioner uttrycks i HeLa celler, och splitsning analyseras av primer förlängning eller RT-PCR.