Name: isolation of epithelial cells from human dental follicle
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
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इस अध्ययन को कोरियाई सरकार (NRF-2017R1C1B2008406 और NRF-2021R1F1A1064350) द्वारा वित्त पोषित कोरिया के राष्ट्रीय अनुसंधान फाउंडेशन (NRF) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था। डॉ ही-येओन बे ने कृपया प्राथमिक संस्कृति के लिए डीएफ प्रदान किया।

इस अध्ययन को गंगडोंग में क्यूंग ही विश्वविद्यालय अस्पताल के संस्थागत समीक्षा बोर्ड द्वारा अनुमोदित किया गया था (आईआरबी अनुमोदन सं। KHNMC 2017-06-009)।
1. DF ले लीजिए
नोट: रोगियों ने एक पर?...

<ol>
	<li>Tucker, A., Sharpe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cutting-edge+of+mammalian+development;+How+the+embryo+makes+teeth.">The cutting-edge of mammalian development; How the embryo makes teeth.</a> Nature Reviews Genetics. 5 (7), 499-508 (2004).</li><li>Choung, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+CPNE7+on+periodontal+regeneration.">The effect of CPNE7 on periodontal regeneration.</a> Connective Tissue Research. 60 (5), 419-430 (2019).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+immortalized+Hertwig's+epithelial+root+sheath+cell+lines+for+cementum+and+dentin+regeneration.">Development of immortalized Hertwig's epithelial root sheath cell lines for cementum and dentin regeneration.</a> Stem Cell Research and Therapy. 10 (1), 3 (2019).</li><li>Huang, X. F., Bringas, P., Slavkin, H. C., Chai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+of+HERS+during+tooth+root+development.">Fate of HERS during tooth root development.</a> Developmental Biology. 334 (1), 22-30 (2009).</li><li>Farea, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+enhancement+of+a+homogenous+in+vitro+human+Hertwig's+epithelial+root+sheath+cell+population.">Isolation and enhancement of a homogenous in vitro human Hertwig's epithelial root sheath cell population.</a> International Journal of Molecular Sciences. 14 (6), 11157-11170 (2013).</li><li>Jung, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directing+the+differentiation+of+human+dental+follicle+cells+into+cementoblasts+and/or+osteoblasts+by+a+combination+of+HERS+and+pulp+cells.">Directing the differentiation of human dental follicle cells into cementoblasts and/or osteoblasts by a combination of HERS and pulp cells.</a> Journal of Molecular Histology. 42 (3), 227-235 (2011).</li><li>Fang, J., Tang, L., Liu, X. H., Wen, L. Y., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+of+the+unique+odontogenic+properties+of+rat+apical+bud+cells+under+the+developing+apical+complex+microenvironment.">Changes of the unique odontogenic properties of rat apical bud cells under the developing apical complex microenvironment.</a> International Journal of Oral Science. 1 (1), 26-33 (2009).</li><li>Oh, J. E., Yi, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+dental+follicle-derived+Hertwig's+epithelial+root+sheath+cells.">Isolation and characterization of dental follicle-derived Hertwig's epithelial root sheath cells.</a> Clinical Oral Investigations. 25 (4), 1787-1796 (2021).</li><li>Oh, J. E., Kim, R. H., Shin, K. H., Park, N. H., Kang, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delta+Np63+alpha+protein+triggers+epithelial-mesenchymal+transition+and+confers+stem+cell+properties+in+normal+human+keratinocytes.">Delta Np63 alpha protein triggers epithelial-mesenchymal transition and confers stem cell properties in normal human keratinocytes.</a> Journal of Biological Chemistry. 286 (44), 38757-38767 (2011).</li><li>Morsczeck, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+precursor+cells+(PCs)+from+human+dental+follicle+of+wisdom+teeth.">Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth.</a> Matrix Biology. 24 (2), 155-165 (2005).</li><li>Nam, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+profile+of+the+stem+cell+markers+in+human+Hertwig's+epithelial+root+sheath/Epithelial+rests+of+Malassez+cells.">Expression profile of the stem cell markers in human Hertwig's epithelial root sheath/Epithelial rests of Malassez cells.</a> Molecular and Cells. 31 (4), 355-360 (2011).</li><li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+follicle+cells+and+cementoblasts+induce+apoptosis+of+ameloblast-lineage+and+Hertwig's+epithelial+root+sheath/epithelial+rests+of+Malassez+cells+through+the+Fas-Fas+ligand+pathway.">Dental follicle cells and cementoblasts induce apoptosis of ameloblast-lineage and Hertwig's epithelial root sheath/epithelial rests of Malassez cells through the Fas-Fas ligand pathway.</a> European Journal of Oral Sciences. 120 (1), 29-37 (2012).</li><li>Wan, A. C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulating+cell-cell+Interactions+for+organoid+construction+-+are+biomaterials+dispensable.">Recapitulating cell-cell Interactions for organoid construction - are biomaterials dispensable.</a> Trends in Biotechnology. 34 (9), 711-721 (2016).</li><li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+Hertwig's+epithelial+root+sheath+cells+necessary+for+periodontal+formation+by+dental+follicle+cells.">Are Hertwig's epithelial root sheath cells necessary for periodontal formation by dental follicle cells.</a> Archives of Oral Biology. 94, 1-9 (2018).</li><li>Sugaya, T., Tomita, M., Motoki, Y., Miyaji, H., Kawamami, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+enamel+matrix+derivative+on+healing+of+root+surfaces+after+bonding+treatment+and+intentional+replantation+of+vertically+fractured+roots.">Influence of enamel matrix derivative on healing of root surfaces after bonding treatment and intentional replantation of vertically fractured roots.</a> Dental Traumatology. 32 (5), 397-401 (2016).</li><li>Fong, H. K., Foster, B. L., Popowics, T. E., Somerman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+crowning+achievement:+getting+to+the+root+of+the+problem.">The crowning achievement: getting to the root of the problem.</a> Journal of Dental Education. 69 (5), 555-570 (2005).</li><li>Bonczek, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tooth+agenesis:+What+do+we+know+and+is+there+a+connection+to+cancer.">Tooth agenesis: What do we know and is there a connection to cancer.</a> Clinical Genetics. 99 (4), 493-502 (2021).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण चरण शामिल हैं. एकल-कोशिका आबादी की कटाई डीएफ से उपकला कोशिकाओं के सफल अलगाव के लिए आवश्यक है। हमने अपनी परिकल्पना के आधार पर डीएफ से उपकला कोशिकाओं को अलग करने की मांग की कि ?...

दाँत गठन मौखिक उपकला 1 के invagination के साथ शुरू होता है। दांत विकास के चरण के अनुसार, मौखिक उपकला के अलग-अलग नाम हैं, जिनमें आंतरिक और बाहरी तामचीनी उपकला, ग्रीवा लूप और हर्टविग के उपकला जड़ म्यान (एचईआरएस) शामिल हैं। उपकला डिब्बे आसपास के मेसेनकाइमल कोशिकाओं के साथ संवाद करते हैं। उपकला-मेसेनकाइमल इंटरैक्शन दांतों के गठन और ऊतक पुनर्जनन को विनियमित करते हैं। दंत उपकला कोशिकाओं, जैसे कि मौखिक केराटिनोसाइट्स और हर्टविग के उपकला जड़ म्यान कोशिकाओं (एचईआरएससी) की खरीद, दंत उपकला-मेसेनकाइमल इंटरैक्शन 2 के अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण है।
कृंतक-व्युत्पन्न दंत उपकला कोशिकाओं को उपकला संरचना से अलग किया जाता है, जैसे कि एचईआरएस। ली और उनके सहयोगियों ने 8-दिन पुराने चूहों से विकासशील दांत रोगाणुओं के एपिकल भाग की कटाई के बाद चूहे दाढ़-व्युत्पन्न HERSCs को अलग और अमर कर दिया। एचईआरएस को आवर्धन के तहत एपिकल ऊतक से अलग किया गया था। दांत विकास के चरण और उम्र को ध्यान में रखते हुए, नैतिक मुद्दों के कारण मनुष्यों से एचईआरएस की कटाई लगभग असंभव है: मानव एचईआरएस की कटाई के लिए एक छोटे बच्चे से एक विकासशील दांत रोगाणु को हटाने की आवश्यकता होती है। अपरिपक्व दांत रोगाणुओं को शायद ही कभी निकाला जाता है। मानव दंत उपकला कोशिकाओं को मसूड़े और periodontal स्नायुबंधन (पीडीएल) से अलग किया जा सकता है। उपकला संरचना-व्युत्पन्न कोशिकाएं मेसेनकाइमल घटकों के साथ दांत गठन में भाग लेती हैं और मौखिक केराटिनोसाइट्स की तुलना में दंत उपकला-मेसेनकाइमल इंटरैक्शन के अध्ययन के लिए अधिक उपयुक्त हो सकती हैं। उपकला सेल Malassez (ERM) के आराम HERS-व्युत्पन्न उपकला अवशेष हैं और PDL4 में कम संख्या में रहते हैं। अध्ययन PDL5 से मानव HERSCs के अलगाव की रिपोर्ट करते हैं। हालांकि, पीडीएल ऊतक से मानव एचईआरएससी की कटाई हमेशा सफल नहीं होती है क्योंकि इस स्थान में उपकला आबादी की कमी 5,6।
यद्यपि कृंतक-व्युत्पन्न HERSCs को सीरम-युक्त मीडिया 3,7 में बनाए रखा जाता है, मानव डीएफ-व्युत्पन्न उपकला कोशिकाओं को सीरम-मुक्त मीडिया के साथ अन्य मानव उपकला कोशिकाओं के समान सुसंस्कृत किया जाता है, जैसे कि सामान्य मानव एपिडर्मल केराटिनोसाइट्स और सामान्य मानव मौखिक केराटिनोसाइट्स 8,9। इसका तात्पर्य कृंतक दंत उपकला कोशिकाओं और मानव दंत उपकला कोशिकाओं के बीच शारीरिक या कार्यात्मक अंतर से है। दंत उपकला-मेसेनकाइमल इंटरैक्शन के बारे में तंत्र को समझना नैदानिक अनुप्रयोगों के विकास में योगदान कर सकता है, जिसमें पुनर्रोपण के दौरान periodontal reattachment, periodontal रोग में periodontal पुनर्जनन, लुगदी-डेंटिन जटिल पुनर्जनन और जैव-दांत पीढ़ी शामिल हैं। ट्रांसलेशनल अनुसंधान की विशेषताओं को ध्यान में रखते हुए, मानव दंत उपकला कोशिकाएं उपकला-मेसेनकाइमल इंटरैक्शन के अध्ययन के लिए कृंतक दंत उपकला कोशिकाओं की तुलना में अधिक उपयुक्त हो सकती हैं।
मानव डीएफ एक ढीला संयोजी ऊतक है और अक्सर एक प्रभावित दांत में रहता है। DF में मेसेनकाइमल अग्रदूत 10 शामिल हैं। हालांकि, हमारे ज्ञान के लिए, किसी भी अध्ययन ने 2021 से पहले दंत रोम से उपकला कोशिकाओं के अलगाव की सूचना नहीं दी है। ओह और यी ने 20218 में मानव डीएफ से उपकला कोशिकाओं के अलगाव की सूचना दी। उपकला फेनोटाइप की पुष्टि पश्चिमी ब्लोटिंग और आकारिकी विश्लेषण द्वारा की गई थी। डीएफ-व्युत्पन्न उपकला कोशिकाओं की उत्पत्ति के विश्लेषण ने अन्य अध्ययनों के साथ समान परिणामों का प्रदर्शन किया। डीएफ-व्युत्पन्न उपकला कोशिकाएं न तो एंडोथेलियल थीं और न ही हेमटोपोइएटिक 5,11, और ओह और यी ने इन कोशिकाओं को डीएफ-एचईआरएससी के रूप में नामित करने का सुझाव दिया। डीएफ में पीडीएल की तुलना में एक बड़ी मात्रा होती है, और अधिक उपकला कोशिकाओं को डीएफ से अलग किया जा सकता है। यह उपकला उपनिवेशों के उद्भव को बढ़ाता है और डीएफ से उपकला कोशिकाओं की कटाई में एक उच्च सफलता दर में परिणाम देता है। यह अध्ययन दंत उपकला कोशिकाओं के अलगाव के लिए ऊतक स्रोत के रूप में डीएफ का उपयोग करने का सुझाव देता है।
वर्तमान अध्ययन में, एकल कोशिकाओं को पहले से वर्णित प्रक्रियाओं 10,12 के अनुसार डीएफ से अलग किया गया था। डीएफ में विषम सेल आबादी होती है, और प्रक्रिया के शुरुआती चरण में कई सेल प्रकार मौजूद हो सकते हैं। Morsczek और सहयोगियों ने DF-व्युत्पन्न मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं को अलग किया। हमने परिकल्पना की है कि डीएफ में उपकला कोशिकाएं होती हैं और केवल उपकला कोशिकाएं सीरम-मुक्त स्थितियों के तहत जीवित रह सकती हैं। यह अध्ययन उपकला आबादी के चयन और मेसेनकाइमल कोशिकाओं के निषेध के संदर्भ में मोर्सज़ेक एट अल से अलग है। चयन केराटिनोसाइट सीरम-मुक्त मीडिया (एसएफएम) का उपयोग करके किया गया था, जो उपकला कोशिका प्रसार की अनुमति देता है और मेसेनकाइमल सेल प्रसार को रोकता है। यह अध्ययन Oh और Yi8 की एक रिपोर्ट से उत्पन्न हुआ। इस अध्ययन का उद्देश्य मानव डीएफ से उपकला कोशिकाओं के अलगाव के लिए उस रिपोर्ट में उपयोग की जाने वाली विधि के विवरण का वर्णन करना था।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eur 2-Propanol</td>
			<td>EMD millipore Co., MA, USA</td>
			<td>1096341011</td>
			<td>1 L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.05% trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco, Grand island, NY, USA</td>
			<td>25300054</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#956;m cell strainer</td>
			<td>Falcon, NC, USA</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture dish (100 x 20 mm)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td>
			<td>172958</td>
			<td>Discontinued</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td>
			<td>150326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type 1</td>
			<td>Gibco, Grand island, NY, USA</td>
			<td>17100017</td>
			<td>1 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Combi-514R / Refrigerated large capacity centrifuge</td>
			<td>Hanil science industrial Co., LTD., Daejeon, South Korea</td>
			<td>CB-514R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical tube</td>
			<td>SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea</td>
			<td>50015 
			50050</td>
			<td>15 mL 
			50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic vial</td>
			<td>Corning Inc., NY, US</td>
			<td>430488</td>
			<td>2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Missouri, US</td>
			<td>D2650-100ml</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Gibco, Grand island, NY, USA</td>
			<td>17105041</td>
			<td>1 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Welgene Inc., Gyengsangbuk-do, South Korea</td>
			<td>&#160;LB 001-02</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco, Grand island, NY, USA</td>
			<td>16000044</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraeus BB 15 / CO2 incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td>
			<td>51023121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keratinocyte serum-free medium</td>
			<td>Gibco, Grand island, NY, USA</td>
			<td>10724-011</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MVE CryoSystem 2000</td>
			<td>MVE Biological Solutions Co., GA, USA</td>
			<td>CryoSystem 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Mr. Frosty Freezing Container</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td>
			<td>5100-0001</td>
			<td>for 1.2-2 mL CryoVials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus CKX41 / Inverted cell culture microscope</td>
			<td>Olympus Life Science, 
			Waltham, Massachusetts</td>
			<td>22-00723-01</td>
			<td>Discontinued</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Strep</td>
			<td>Gibco, Grand island, NY, USA</td>
			<td>15140122</td>
			<td>100 mL (10,000 U/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet aid XP</td>
			<td>Drummond scientific Co., PA, USA</td>
			<td>HDR-4-000-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classic P1000</td>
			<td>Gilson, Villiers le Bel, France</td>
			<td>F123602</td>
			<td>100-1000 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerant</td>
			<td>Nihon freezer Co. Ltd., Tokyo, Japan</td>
			<td>CLN 540U</td>
			<td>~-80 &#176;C / Discontinued</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipet</td>
			<td>SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea</td>
			<td>91010</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express Enzyme (1x), phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td>
			<td>12605010</td>
			<td>cell dissociation protease</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of epithelial cells from human dental follicle

दंत कूप (डीएफ) को एक मौखिक मैक्सिलोफेशियल सर्जन द्वारा एक प्रभावित तीसरे दाढ़ को हटाने के दौरान काटा गया था। उपकला सेल अलगाव डीएफ फसल के दिन किया गया था। डीएफ को डीपीबीएस के साथ तीन बार धोया गया था और फिर ऊतक कैंची के साथ विच्छेदित किया गया था जब तक कि ऊतक में लुगदी या स्क्विशी स्थिरता नहीं थी। एकल-कोशिका आबादी को सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा पैलेट किया गया था और केराटिनोसाइट सीरम-मुक्त माध्यम से धोया गया था। विषम सेल आबादी को एक संस्कृति पकवान में वितरित किया गया था। उपकला कोशिकाओं का चयन करने के लिए केराटिनोसाइट सीरम-मुक्त माध्यम का उपयोग किया गया था। संस्कृति माध्यम को दैनिक रूप से बदल दिया गया था जब तक कि कोई फ्लोटिंग मलबे या मृत कोशिकाओं को नहीं देखा गया था। उपकला कोशिकाएं सेल जनसंख्या वितरण के बाद 7-10 दिनों के भीतर दिखाई दीं। उपकला कोशिकाएं सीरम-मुक्त माध्यम में बच गईं, जबकि α-संशोधन न्यूनतम आवश्यक माध्यम 10% भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक ने मेसेनकाइमल-प्रकार की कोशिकाओं के प्रसार की अनुमति दी। डीएफ दंत उपकला कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक ऊतक स्रोत है।
इस अध्ययन का उद्देश्य मानव डीएफ से उपकला कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक विधि स्थापित करना था। Periodontal स्नायुबंधन (पीडीएल) का उपयोग मानव दंत उपकला कोशिकाओं के अलगाव के लिए किया गया था। मानव पीडीएल से उपकला कोशिकाओं की खरीद हमेशा छोटे ऊतक की मात्रा के कारण सफल नहीं होती है, जिससे उपकला कोशिकाओं की संख्या कम हो जाती है। DF में PDL की तुलना में एक बड़ी मात्रा होती है और इसमें अधिक कक्ष होते हैं. डीएफ मानव दंत उपकला कोशिकाओं की प्राथमिक संस्कृति के लिए एक ऊतक स्रोत हो सकता है। यह प्रोटोकॉल पीडीएल का उपयोग करके अलगाव विधि की तुलना में आसान और अधिक कुशल है। मानव दंत उपकला कोशिकाओं की खरीद दंत उपकला-मेसेनकाइमल इंटरैक्शन के आगे के अध्ययन की सुविधा प्रदान कर सकती है।

DF कटाई सर्जरी एक मौखिक मैक्सिलोफेशियल सर्जन द्वारा की गई थी। मानव-व्युत्पन्न सामग्री, जिसमें दांत का टुकड़ा, मसूड़े के ऊतक और डीएफ शामिल हैं, एक सर्जन (चित्रा 1 ए) द्वारा एकत्र किए गए थ?...

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Isolation of Epithelial Cells from Human Dental Follicle

दंत कूप में एक उपकला आबादी और मेसेनकाइमल कोशिकाएं होती हैं। उपकला आबादी को एक अलग संस्कृति माध्यम प्रदान करके विषम दंत कूप सेल आबादी से चुना गया था। उपकला कोशिकाएं बच गईं और सीरम-मुक्त माध्यम में उपनिवेशों का गठन किया।

मानव दंत कूप से उपकला कोशिकाओं का अलगाव

The dental follicle (DF) was harvested during the removal of an impacted third molar by an oral maxillofacial surgeon. Epithelial cell isolation was ...

यह प्रोटोकॉल मानव दंत उपकला कोशिकाओं की खरीद के लिए एक बढ़ी हुई विधि का प्रदर्शन करता है। प्रक्रियाओं के दौरान एकत्रित सेल पैलेट की पहचान करना मुश्किल है। सावधान रहें जब आप नुकसान सेल आबादी को रोकने के लिए supernatant संभाल.शुरू करने के लिए, प्रभावित तीसरे दाढ़ के सर्जिकल निष्कर्षण के दौरान दंत रोम की कटाई। सेल अलगाव प्रक्रियाओं को शुरू करें या 3% पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ डीपीबीएस में चार डिग्री सेल्सियस पर दंत रोम को स्टोर करें। दंत रोम को धोने के लिए, चिमटी के साथ दंत कूप को पकड़ो और इसे वॉशिंग ट्यूब 1 में रखें।इसे धीरे-धीरे 10 से 15 बार हिलाएं। इसे बाहर निकालें और इसे ट्यूब 2 में रखें। फिर से, इसे 10 से 15 बार हिलाएं।अंत में, इसे बाहर निकालें और इसे ट्यूब 3 में रखें, फिर इसे हिलाएं। तीन बार धोने के बाद, दंत कूप को 60 मिलीमीटर कल्चर डिश में रखें। ऊतक कैंची के साथ ऊतक कीमा जब तक दंत कूप एक लुगदी या squishy उपस्थिति है.ऊतक हानि को कम करने के लिए संस्कृति पकवान के एक छोटे से साइड सेक्शन का उपयोग करें। एक 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में कोलेजनेज प्रकार 1 और प्रोटीज समाधान के प्रत्येक एक मिलीलीटर मिश्रण। कीमा बनाया हुआ ऊतक को 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करें, फिर धीरे से इसे हिलाएं और इसे 37 डिग्री सेल्सियस पर एक घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।ट्यूब में 0.05% ट्रिप्सिन-ईडीटीए के पांच मिलीलीटर जोड़ें। इसे हिलाएं और 37 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। केराटिनोसाइट माध्यम तैयार करें जिसमें केराटिनोसाइट सीरम-मुक्त माध्यम और 10% भ्रूण गोजातीय सीरम शामिल हैं।एक नए 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में केराटिनोसाइट माध्यम के तीन मिलीलीटर जोड़ें। इस ट्यूब के ऊपर 40 माइक्रोमीटर का छलनी रखें। इसके बाद, एक 10 मिलीलीटर सीरोलॉजिकल पिपेट के साथ ऊतक युक्त ट्यूब से supernatant aspirate और छलनी के माध्यम से इसे पारित करें।एकत्रित निलंबन को 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करें। ट्यूब centrifuge और supernatant निकालें. फिर केराटिनोसाइट सीरम-मुक्त माध्यम के तीन मिलीलीटर जोड़ें।एक और तीन मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज और supernatant को हटाने के लिए। केराटिनोसाइट सीरम-मुक्त माध्यम का उपयोग करके एकल सेल आबादी को 60 मिलीमीटर संस्कृति पकवान में प्लेट करें। 37 डिग्री सेल्सियस पर 5% कार्बन डाइऑक्साइड के ह्यूमिडिफाइड वातावरण में पांच मिलीलीटर की अंतिम मात्रा के साथ संस्कृति पकवान को बनाए रखें।उपकला आकृति विज्ञान के साथ कोशिकाएं एकल कोशिका आबादी को चढ़ाना के बाद सात से 10 दिनों के भीतर दिखाई दीं। कोब्बलस्टोन के आकार की उपकला कोशिकाओं की संख्या उद्भव के समय एक से 10 तक थी और कोशिकाओं ने समय के साथ उपनिवेशों में विस्तार किया। सबसे महत्वपूर्ण कदम छोटे कणों में दंत कूप mincing है.यह कूप ऊतक से एकल कोशिकाओं के पृथक्करण को बढ़ाता है। मेसेनकाइमल कोशिकाओं को मानव दंत कूप से अलग किया जा सकता है। संस्कृति वातावरण युक्त सीरम मेसेनकाइमल कोशिकाओं का चयन करता है और एकल कोशिका आबादी से उपकला विकास को रोकता है।यह प्रोटोकॉल मानव दंत उपकला कोशिकाओं की खरीद की विधि प्रदान करता है। दंत कूप-व्युत्पन्न उपकला कोशिकाओं का उपयोग दंत उपकला-मेसेनकाइमल इंटरैक्शन के अध्ययन के लिए किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

प्राथमिक मानव ब्रोन्कियल उपकला Explants से विकसित कोशिकाओं

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

मानव अग्नाशय के कैंसर xenografts से स्टेम सेल के अलगाव

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

और वयस्क मानव त्वचा से उपकला स्टेम सेल के अलगाव संस्कृति

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation of Mammary Epithelial Cells from Three-dimensional Mixed-cell Spheroid Co-culture

तीन आयामी मिश्रित सेल उपगोल सह संस्कृति से स्तन उपकला कोशिकाओं का अलगाव

While enormous efforts have gone into identifying signaling pathways and molecules involved in normal and malignant cell behaviors1-2, much of this work ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

शाही सेना शोधन द्वारा chromatin अलगाव (कूजन)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Mesenchymal संक्रमण के लिए प्रेरण और उपकला का विश्लेषण

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

मानव Lipoaspirates से वसा व्युत्पन्न स्टेम कोशिकाओं के मैनुअल अलगाव

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

वयस्क माउस छेनी से चिकित्सकीय उपकला स्टेम कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation and Enrichment of Human Lung Epithelial Progenitor Cells for Organoid Culture

ऑर्गेनोइड संस्कृति के लिए मानव फेफड़े उपकला पूर्वज कोशिकाओं का अलगाव और संवर्धन

Epithelial organoid models serve as valuable tools to study the basic biology of an organ system and for disease modeling. When grown as organoids, ...

Isolation and Culture of Primary Oral Keratinocytes from the Adult Mouse Palate

वयस्क माउस तालु से प्राथमिक मौखिक केराटिनोसाइट्स का अलगाव और संस्कृति

For years, most studies involving keratinocytes have been conducted using human and mouse skin epidermal keratinocytes. Recently, oral keratinocytes have ...