Name: detectsyn: a rapid, unbiased fluorescent method to detect changes in synapse density
Uploaded: 2022-07-22T12:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about DetectSyn: A Rapid, Unbiased Fluorescent Method to Detect Changes in Synapse Density at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par les National Institutes of Health NINDS R01 NS105005 (KRG) et NS105005-03S1 (KRG), le ministère de la Défense USAMRMC W81XWH-14-1-0061 (KRG), NIAAA R01AA016852, NIAAA T32AA007565 (CFH), et une subvention de FRAXA Research (CFH) et de l’Alzheimer’s Association, AARG-NTF-21-852843 (KRG), AARF-19-614794-RAPID (KRG).

L’isolement des cellules et des tissus des animaux était conforme au Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire des National Institutes of Health et approuvé par le Wake Forest Institutional Animal Care and Use Committee
REMARQUE: Ce protocole est utilisé sur des échantillons déjà traités et fixés selon des paradigmes et des exigences expérimentaux spécifiques. À des fins de démonstration, la formation de synapses due à un traitement antidépresseur rapide ...

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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+and+physiological+plasticity+of+dendritic+spines.">Anatomical and physiological plasticity of dendritic spines.</a> Annual Review of Neuroscience. 30 (1), 79-97 (2007).</li><li>Berry, K. P., Nedivi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spine+Dynamics:+Are+they+all+the+same.">Spine Dynamics: Are they all the same.</a> Neuron. 96 (1), 43-55 (2017).</li><li>Micheva, K. D., Smith, S. 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(65), e3564 (2012).</li><li>Workman, E. R., Niere, F., Raab-Graham, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTORC1-dependent+protein+synthesis+underlying+rapid+antidepressant+effect+requires+GABABR+signaling.">mTORC1-dependent protein synthesis underlying rapid antidepressant effect requires GABABR signaling.</a> Neuropharmacology. 73, 192-203 (2013).</li><li>Li, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTOR-dependent+synapse+formation+underlies+the+rapid+antidepressant+effects+of+NMDA+antagonists.">mTOR-dependent synapse formation underlies the rapid antidepressant effects of NMDA antagonists.</a> Science. 329 (5994), 959-964 (2010).</li></ol>

DetectSyn est un test rapide qui utilise un test de ligature de proximité pour détecter les protéines à moins de 40 nm les unes des autres, ce qui permet de détecter la formation de synapses. Cette technique améliore les tests fluorescents actuels, qui ne servent que de mesures indirectes pour la formation de synapses. DetectSyn détecte des changements quantifiables dans les protéines synaptiques localisées à moins de 40 nm, c’est-à-dire dans la fente synaptique, les unes des autres. En outre, DetectSyn est ...

Les synapses sont l’unité fondamentale de communication entre les neurones1. De nombreuses synapses entre neurones au sein d’une même région donnent naissance à des circuits qui médient le comportement2. Les synapses sont constituées d’un terminal présynaptique d’un neurone qui libère des neurotransmetteurs ou des neuropeptides qui relaient l’information aux récepteurs postsynaptiques d’un autre neurone. La somme des signaux présynaptiques détermine si le neurone postsynaptique déclenchera un potentiel d’action et propagera le message à d’autres neurones.
La synaptopathologie, la décomposition des synapses, survient dans les maladies et les troubles marqués par une diminution du volume neuronal, comme la maladie d’Alzheimer et le trouble dépressif majeur, entraînant des circuits qui ne fonctionnent plus de manière optimale 3,4,5. La restauration de la densité synaptique sous-tend probablement l’efficacité des traitements potentiels pour ces troubles. Par exemple, il a été récemment démontré que l’augmentation des synapses sous-tend l’efficacité comportementale des antidépresseurs rapides6. Pour dépister rapidement les traitements synaptopathologiques possibles, les chercheurs ont besoin de techniques qui identifient rapidement les changements dans le nombre de synapses.
Les méthodologies actuelles sont soit longues et coûteuses (microscopie électronique, tomographie en réseau), soit elles n’examinent que les changements postsynaptiques sans intégrer l’engagement présynaptique (analyses de la colonne vertébrale, immunofluorescence/colocalisation). Les colorants comme DiI ou les protéines fluorescentes comme GFP aident à visualiser les neurones et à caractériser les épines postsynaptiques. Cependant, l’analyse de la colonne vertébrale utilise des ratios définis par les chercheurs pour déterminer la morphologie, ce qui peut diminuer la reproductibilité7. De plus, la façon dont les différentes classes de colonne vertébrale se rapportent aux synapses fonctionnelles est encore en cours dedécouverte 8. La formation de la colonne vertébrale peut être transitoire et peut refléter une plasticité postsynaptique, mais ces épines pourraient être éliminées avant de se stabiliser en une synapse avec un neurone présynaptique9.
La colocalisation fournit un meilleur indicateur pour les synapses que l’analyse de la colonne vertébrale, car on peut s’immunocolorer pour les protéines présynaptiques et postsynaptiques. Cependant, les protéines synaptiques peuvent donner de faibles valeurs de colocalisation parce que les protéines sont juxtaposées et peuvent ne pas se chevaucher de manière cohérente. Ainsi, comme les protéines ne sont pas entièrement superposées, les techniques de colocalisation peuvent ne pas mesurer avec précision les changements dans la formation des synapses en raison de ces informations manquantes. Enfin, bien que la microscopie électronique (EM) et la tomographie en réseau fournissent des images à haute résolution des synapses, elles prennent beaucoup de temps. L’EM nécessite en outre un équipement spécialisé, et les chercheurs sont limités à de petits volumes de tissus pour une expérience donnée. Alors que la tomographie en réseau offre élégamment la possibilité de dépister de nombreuses protéines sur des sections ultraminces et peut être combinée avec EM10, cette technique peut être trop laborieuse et dépasser la portée des expériences qui doivent rechercher rapidement des changements dans la formation de synapses.
DetectSyn est une application spécifique du test de ligature de proximité Duolink. Le test PLA permet la détection générale des interactions protéine-protéine. DetectSyn relie les mesures postsynaptiques proxy en amplifiant un signal fluorescent émis par des protéines pré- et postsynaptiques marquées à moins de 40 nm les unes des autres. Si les protéines synaptiques sont à moins de 40 nm, comme dans une fente synaptique, alors les anticorps secondaires, qui contiennent des sondes d’ADN, s’hybrideront en ADN circulaire. Cet ADN circulaire hybridé exprime une sonde fluorescente, qui est ensuite amplifiée et détectée avec des techniques de microscopie fluorescente standard (voir figure 1). Fondamentalement, contrairement à la TOMOGRAPHIE PAR ET À LA TOMOGRAPHIE PAR RÉSEAU, cette technique ne nécessite pas d’équipement spécialisé et prend à peu près le même temps que l’immunohistochimie standard. L’accessibilité de cette technique permet donc aux chercheurs en dehors des institutions à forte intensité de recherche de participer à la recherche en synaptopathologie. En outre, cette technique peut examiner les changements de densité synaptique dans plusieurs régions du cerveau au sein d’une seule expérience, offrant une représentation plus holistique des changements synaptiques dus à la maladie ou au traitement.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP39920</td>
			<td>PBS made in house works, as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB012929</td>
			<td>For tissue slices, pre-sterilized plates may be unnecessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium foil</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-078-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-MAP2 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear nail polish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1849418</td>
			<td>Other clear nail polish works, as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold block</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13131012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer workstation</td>
			<td>HP</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal or fluorescent microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>A1R HD25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-chicken FITC</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SA1-72000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duolink donkey anti-Mouse PLUS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>DUO92001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duolink donkey anti-Rabbit MINUS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>DUO92005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duolink In Situ Detection Reagents Far Red</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>DUO92013</td>
			<td>Contains ligation stock, amplification stock, ligase, and polymerase.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duolink In Situ Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>DUO82040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duolink In Situ Wash Buffers, Fluorescence</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>DUO82049</td>
			<td>Contains Wash Buffer A and Wash Buffer B; dilute Wash Buffer B to 1% in diH20 for 1% Wash Buffer B.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine-tipped paintbrush</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9691026</td>
			<td>Sable hair, size 00 or 000, can also find at craft stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Cover Glasses: Rectangles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12545MP</td>
			<td>Cover glass is unnecessary for cultured neurons already on glass coverslips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1255015</td>
			<td>For cultured neurons already on glass coverslips, Superfrost slides may be unnecessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer, -20&#176;C</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76449-108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>125480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP381-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image processing software</td>
			<td>e.g. NIS Elements, ImageJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-015-2633</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large petri dish, 100mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular grade water</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP24701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-Synapsin1 antibody</td>
			<td>Synaptic Systems</td>
			<td>106-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-106-1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-388-100</td>
			<td>Working volumes range from 3 &#181;L to 500 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic pasteur pipette</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-708-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision tweezers/foreceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-000-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-PSD95 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab18258</td>
			<td>Other antibody pairs may work, as well, with optimization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76470-402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small petri dish, 60 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-649-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337-100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detectsyn: a rapid, unbiased fluorescent method to detect changes in synapse density

Les synapses sont le site de communication entre les neurones. La force du circuit neuronal est liée à la densité synaptique, et la dégradation des synapses est caractéristique des états pathologiques comme le trouble dépressif majeur (TDM) et la maladie d’Alzheimer. Les techniques traditionnelles pour étudier le nombre de synapses comprennent l’expression génétique de marqueurs fluorescents (p. ex., protéine fluorescente verte (GFP)), les colorants qui remplissent un neurone (p. ex., colorant à la carbocyanine, DiI) et la détection immunofluorescente des marqueurs de la colonne vertébrale (p. ex., densité postsynaptique 95 (DSP95)). Une mise en garde majeure à ces techniques de proxy est qu’elles n’identifient que les changements postsynaptiques. Pourtant, une synapse est une connexion entre une borne présynaptique et une colonne vertébrale postsynaptique. L’étalon-or pour mesurer la formation / élimination des synapses nécessite des techniques de microscopie électronique ou de tomographie par réseau qui prennent beaucoup de temps. Ces techniques nécessitent une formation spécialisée et un équipement coûteux. De plus, seul un nombre limité de neurones peut être évalué et est utilisé pour représenter les changements dans toute une région du cerveau. DetectSyn est une technique fluorescente rapide qui identifie les changements dans la formation ou l’élimination des synapses en raison d’un état pathologique ou d’une activité médicamenteuse. DetectSyn utilise un test de ligature de proximité rapide pour détecter les protéines pré- et postsynaptiques juxtaposées et la microscopie fluorescente standard, une technique facilement disponible pour la plupart des laboratoires. La détection fluorescente de la ponctuation résultante permet une analyse rapide et impartiale des expériences. DetectSyn fournit des résultats plus représentatifs que la microscopie électronique car de plus grandes zones peuvent être analysées qu’un nombre limité de neurones fluorescents. De plus, DetectSyn fonctionne pour les neurones cultivés in vitro et les tranches de tissus fixes. Enfin, une méthode est fournie pour analyser les données collectées à partir de cette technique. Dans l’ensemble, DetectSyn offre une procédure pour détecter les changements relatifs dans la densité des synapses à travers les traitements ou les états pathologiques et est plus accessible que les techniques traditionnelles.

Les données modifiées à partir de Heaney et al.6 sont présentées pour démontrer une expérience où l’on s’attend à une formation accrue de synapses (voir6 pour plus d’informations et une discussion plus approfondie du mécanisme). Auparavant, il a été démontré que les antidépresseurs rapides nécessitent l’activation du récepteur métabotropique inhibiteur, gabab (acide gamma-aminobutyrique sous-type B), pour êtreefficaces 13. ...

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DetectSyn: A Rapid, Unbiased Fluorescent Method to Detect Changes in Synapse Density

DetectSyn est un test fluorescent rapide et impartial qui mesure les changements dans le nombre relatif de synapses (engagement pré- et postsynaptique) entre les traitements ou les états pathologiques. Cette technique utilise une technique de ligature de proximité qui peut être utilisée à la fois dans les neurones cultivés et les tissus fixes.

DetectSyn: Une méthode fluorescente rapide et impartiale pour détecter les changements dans la densité des synapses

Synapses are the site of communication between neurons. Neuronal circuit strength is related to synaptic density, and the breakdown of synapses is ...

DetectSyn tire parti de la technologie de test de ligature de proximité pour identifier rapidement les changements dans les synapses. Nous fournissons également un protocole pour analyser les résultats. Le principal avantage de DetectSyn est la rapidité avec laquelle les résultats peuvent être obtenus dans les grandes régions de tissu qui peuvent être analysées.Pour commencer, retirez soigneusement la solution bloquante avec une pipette Pasteur en plastique sans perturber les cellules. Ensuite, tapissez une grande boîte de Petri en plastique avec Du Parafilm. Et à l’aide de pinces, transférez soigneusement les glissières de couverture sur le Parafilm.Ajouter 60 microlitres de la solution d’anticorps primaires au sommet du couvercle, en veillant à ce que la solution d’anticorps ne déborde pas sur les côtés du couvercle. Pour fournir de l’humidité et éviter que les échantillons ne se dessèchent pendant l’incubation, ajoutez de l’eau ultrapure à une boîte de Petri plus petite et placez soigneusement le plat autour des glissières de couverture. Ensuite, couvrez la plus grande boîte de Petri et incubez les cellules cultivées pendant une heure à température ambiante.Après l’incubation avec l’anticorps primaire, utilisez une pince pour extraire soigneusement la solution d’anticorps primaire des feuillets de couverture sur une serviette en papier et transférez les feuillets de couverture dans leur plaque originale de 24 puits remplie de 500 microlitres de PBS. Ensuite, lavez les échantillons avec du PBS trois fois pendant 10 minutes chacun avec une légère agitation sur un agitateur orbital. Après le dernier lavage, transférer les feuillets de couverture dans la grande boîte de Petri et ajouter 40 microlitres de la solution d’anticorps secondaire au sommet du couvercle.Couvrir la boîte de Pétri et incuber les échantillons à 37 degrés Celsius pendant une heure. Pour la ligature, tout en gardant la ligase sur un bloc froid, diluez la ligase 1 à 40 à l’aide de la crosse de ligature et ajoutez immédiatement 40 microlitres du mélange de ligase aux feuillets de couverture. Couvrir la boîte de Pétri et incuber les échantillons à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes.Pour l’amplification, diluer la polymérase 1280 sur un bloc froid à l’aide de la souche d’amplification. Ajoutez ensuite 40 microlitres du mélange d’amplification aux feuillets de couverture et incubez les échantillons pendant 100 minutes à 37 degrés Celsius. Ensuite, pour le montage, déposez trois microlitres de support de montage sur une glissière.Tapotez l’excès de tampon de lavage du couvercle et placez le couvercle avec des cellules orientées vers le bas dans le support de montage. Scellez les côtés avec une petite quantité de vernis à ongles transparent pour maintenir le couvercle en place. Pour le montage du tissu tranché, transférez soigneusement une tranche de tissu sur la lame préparée et posez-la à plat.Ensuite, déposez 5 à 10 microlitres de support de montage sur la tranche de tissu. Placez un couvercle en verre sur la tranche de tissu et scellez le couvercle avec du vernis à ongles transparent, comme démontré précédemment. Pour l’imagerie numérique avec un microscope confocal, ajustez le gain, le décalage et la puissance laser pour chaque canal fluorescent afin de réduire le bruit de fond et d’améliorer le signal fluorescent.Assurez-vous que le signal fluorescent n’est pas sursaturé. Pour les neurones de culture, sous l’onglet Acquisition ND, cliquez sur Enregistrer dans le fichier. Ensuite, sous Parcourir, choisissez un fichier pour enregistrer l’image et entrez le nom du fichier.Ensuite, sous l’onglet Z, sélectionnez l’option Mode symétrique défini par plage. Réglez le focus sur la meilleure carte à deux plans et cliquez sur le bouton Relatif pour définir ce plan focal comme le milieu de la pile z. Ensuite, réglez la plage à cinq micromètres avec un micromètre et cochez Fermer l’obturateur actif pendant le mouvement Z.Sous l’onglet Longueur d’onde, sélectionnez le nom du bouton optique avec les paramètres d’acquisition précédemment configurés sous Configuration optique et cliquez sur Exécuter maintenant. Pour les tissus découpés, dans le menu Acquérir, choisissez Numériser une grande image, puis sous le panneau de capture, sélectionnez le bouton optique avec les paramètres d’acquisition précédemment configurés. Sélectionnez également l’objectif correct dans ce panneau.Ensuite, sous le panneau de zone et l’oculaire, utilisez les touches fléchées pour définir les limites de la région d’intérêt ou du retour sur investissement. Cliquez ensuite sur Enregistrer une grande image dans un fichier et créez un nom de fichier de chemin d’enregistrement pour l’image. Enfin, sous le panneau de configuration, assurez-vous que Multichannel Capture est coché.Choisissez ensuite le nom du bouton optique avec les paramètres d’acquisition précédemment configurés sous Configuration optique. Dans ImageJ, ouvrez l’option de seuil en accédant au menu de l’image, en cliquant sur Ajuster, puis sur Seuil. Choisissez l’option Arrière-plan sombre si l’image a un arrière-plan sombre.Ensuite, ajustez les limites supérieure et inférieure du seuil selon les paramètres de seuil optimisés précédemment déterminés et cliquez sur Appliquer. Pour les cellules cultivées, utilisez le canal MAP2 et un outil de retour sur investissement à main levée pour dessiner un retour sur investissement pour chaque neurone, y compris les dendrites et le soma. Pour les tissus découpés, dessinez un retour sur investissement à main levée dans l’image de la tranche qui encapsule la zone d’intérêt.Obtenez ensuite la zone du ROI en ouvrant le menu Analyser et en cliquant sur Mesurer. Pour détecter le nombre de punta dans chaque ROI, utilisez un outil de détection automatique comme l’analyse des particules. Dans le menu Analysé, sélectionnez Particules analysées et définissez le diamètre de la taille du puncta.Ensuite, dans le menu déroulant Afficher, choisissez l’option Masques de superposition, puis cochez l’option Afficher les résultats et cliquez sur OK. Pour diviser le nombre de punta par la zone du retour sur investissement individuel, copiez et collez les résultats de chaque image à partir de la fenêtre contextuelle des résultats dans une feuille de calcul. Identifiez le fichier et échantillonnez les données à partir desquelles nous sommes obtenus, et divisez la zone du retour sur investissement par le nombre de punta.Enfin, normaliser les résultats pour contrôler les échantillons, faire la moyenne des résultats pour les échantillons témoins et diviser les résultats obtenus de tous les échantillons par la moyenne du témoin. L’agoniste du GABAB, le baclofène, est nécessaire pour l’efficacité in vitro de l’antidépresseur rapide Ro-256981. Une augmentation de la formation de synapses est démontrée par une augmentation de la punta blanche.Sans baclofène, aucune augmentation de la formation de synapses n’est observée. In vivo, l’injection intrapéritonéale de l’antidépresseur rapide entraîne une augmentation de la formation de synapses par rapport au contrôle salin. Bien que certaines punta apparaissent dans les images de contrôle technique, elles ne sont généralement pas de la même taille que celle démontrée par la spécification blanche par rapport à la grande punta dans les autres panneaux.De plus, ces punta ne sont pas au même endroit comme le démontre certaines punta apparaissant dans le soma. DetectSyn peut identifier les changements dans les synapses dus à un état pathologique ou à un traitement médicamenteux. Cette méthode peut aider à donner un aperçu de tout domaine de recherche qui étudie les troubles affectant le développement ou la dégradation des synapses.

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A Rat Methyl-Seq Platform to Identify Epigenetic Changes Associated with Stress Exposure

Une plate-forme de méthyl-Seq de Rat pour identifier les changements épigénétiques liés à l’exposition de Stress

As genomes of a wider variety of animals become available, there is an increasing need for tools that can capture dynamic epigenetic changes in these ...

Fluorescent Visualization of Mango-tagged RNA in Polyacrylamide Gels via a Poststaining Method

Visualisation fluorescente de l'ARN étiqueté mangue dans les gels de polyacrylamide par l'intermédiaire d'une méthode de coloration

Native and denaturing polyacrylamide gels are routinely used to characterize ribonucleoprotein (RNP) complex mobility and to measure RNA size, ...

Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue

Extraction rapide et rentable de l’ARN du tissu pancréatique rat

Regardless of the extraction method, optimized RNA extraction of tissues and cell lines are carried out in four stages: 1) homogenization, 2) effective ...

Cell Fractionation of U937 Cells by Isopycnic Density Gradient Purification

Fractionnement cellulaire de cellules U937 par purification par gradient de densité isopycnique

This protocol describes a method to obtain subcellular protein fractions from mammalian cells using a combination of detergents, mechanical lysis, and ...