Name: drosophila melanogaster larva injection protocol
Uploaded: 2021-10-19T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol at JoVE.com

אנו מודים לחברי המחלקה למדעי הביולוגיה באוניברסיטת ג'ורג' וושינגטון (GWU) על הקריאה הביקורתית של כתב היד. GT נתמכה באמצעות מלגת קיץ של הרלן מ- GWU. כל הדמויות הגרפיות נעשו באמצעות BioRender.

1. גידול זבובים
הערה: מחזור החיים של D. melanogaster מחולק לארבעה שלבים: עובר, זחל, גולם ומבוגר. זמן הייצור עם תנאי גידול אופטימליים במעבדה (כ -25 °C (~ 25 °C (,60% לחות, ומזון מספיק) הוא כ 10 ימים מביצית מופרית למבוגר מעוקל. הנקבות מניחות ~ 100 עוברים ליום, ועובר נמשך כ 24 שעות <sup class="xr...

<ol>
	<li>Takehana, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+a+pattern-recognition+receptor,+peptidoglycan-recognition+protein-LE,+activates+imd/relish-mediated+antibacterial+defense+and+the+prophenoloxidase+cascade+in+Drosophila+larvae.">Overexpression of a pattern-recognition receptor, peptidoglycan-recognition protein-LE, activates imd/relish-mediated antibacterial defense and the prophenoloxidase cascade in Drosophila larvae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (21), 13705-13710 (2002).</li><li>Senger, K., Harris, K., Levine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GATA+factors+participate+in+tissue-specific+immune+responses+in+Drosophila+larvae.">GATA factors participate in tissue-specific immune responses in Drosophila larvae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (43), 15957-15962 (2006).</li><li>Kenmoku, H., Hori, A., Kuraishi, T., Kurata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mode+of+induction+of+the+humoral+innate+immune+response+in+Drosophila+larvae.">A novel mode of induction of the humoral innate immune response in Drosophila larvae.</a> Disease Models &amp; Mech.anisms. 10, 271-281 (2017).</li><li>Kenney, E., Hawdon, J. M., O'Halloran, D., Eleftherianos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterorhabditis+bacteriophora+excreted-secreted+products+enable+infection+by+Photorhabdus+luminescens+through+suppression+of+the+Imd+pathway.">Heterorhabditis bacteriophora excreted-secreted products enable infection by Photorhabdus luminescens through suppression of the Imd pathway.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2372 (2019).</li><li>Cherry, S., Silverman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+in+Drosophila:+New+tricks+from+an+old+friend.">Host-pathogen interactions in Drosophila: New tricks from an old friend.</a> Nature Immunology. 7 (9), 911-917 (2006).</li><li>Younes, S., Al-Sulaiti, A., Nasser, E., Najjar, H., Kamareddine, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+model+organism+in+host-pathogen+interaction+studies.">Drosophila as a model organism in host-pathogen interaction studies.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 214 (2020).</li><li>Kenney, E., Hawdon, J. M., O'Halloran, D. M., Eleftherianos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secreted+virulence+factors+from+Heterorhabditis+bacteriophora+highlight+its+utility+as+a+model+parasite+among+Clade+V+nematodes.">Secreted virulence factors from Heterorhabditis bacteriophora highlight its utility as a model parasite among Clade V nematodes.</a> International Journal for Parasitology. 51 (5), 321-325 (2021).</li><li>Castillo, J. C., Reynolds, S. E., Eleftherianos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+immune+responses+to+nematode+parasites.">Insect immune responses to nematode parasites.</a> Trends in Parasitology. 27 (12), 537-547 (2011).</li><li>Leit&#227;o, A. B., Bian, X., Day, J. P., Pitton, S., Demir, E., Jiggins, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+effects+on+cellular+and+humoral+immune+responses+underlie+genotype-by-genotype+interactions+between+Drosophila+and+parasitoids.">Independent effects on cellular and humoral immune responses underlie genotype-by-genotype interactions between Drosophila and parasitoids.</a> PLoS Pathogens. 15 (10), 1008084 (2019).</li><li>Ramroop, J. R., Heavner, M. E., Razzak, Z. H., Govind, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parasitoid+wasp+of+Drosophila+employs+preemptive+and+reactive+strategies+to+deplete+its+host's+blood+cells.">Parasitoid wasp of Drosophila employs preemptive and reactive strategies to deplete its host's blood cells.</a> PLoS Pathogens. 17 (5), 1009615 (2021).</li><li>Vlisidou, I., Wood, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+blood+cells+and+their+role+in+immune+responses.">Drosophila blood cells and their role in immune responses.</a> The FEBS Journal. 282 (8), 1368-1382 (2015).</li><li>Harnish, J. M., Link, N., Yamamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+model+for+infectious+diseases.">Drosophila as a model for infectious diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (5), 2724 (2017).</li><li>Lemaitre, B., Hoffmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+host+defense+of+Drosophila+melanogaster.">The host defense of Drosophila melanogaster.</a> Annual Reviews of Immunology. 25, 697-743 (2007).</li><li>Garriga, A., Mastore, M., Morton, A., Pino, F. G., Brivio, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+response+of+Drosophila+suzukii+larvae+to+infection+with+the+nematobacterial+complex+Steinernema+carpocapsae-Xenorhabdus+nematophila.">Immune response of Drosophila suzukii larvae to infection with the nematobacterial complex Steinernema carpocapsae-Xenorhabdus nematophila.</a> Insects. 11 (4), 210 (2020).</li><li>Trienens, M., Kraaijeveld, K., Wertheim, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensive+repertoire+of+Drosophila+larvae+in+response+to+toxic+fungi.">Defensive repertoire of Drosophila larvae in response to toxic fungi.</a> Molecular Ecology. 26 (19), 5043-5057 (2017).</li><li>Tafesh-Edwards, G., Eleftherianos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+immunity+against+natural+and+nonnatural+viral+pathogens.">Drosophila immunity against natural and nonnatural viral pathogens.</a> Virology. 540, 165-171 (2020).</li><li>Gold, K. S., Br&#252;ckner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+and+cellular+immunity+in+Drosophila+melanogaster.">Macrophages and cellular immunity in Drosophila melanogaster.</a> Seminars in Immunology. 27 (6), 357-368 (2015).</li><li>Dudzic, J. P., Kondo, S., Ueda, R., Bergman, C. M., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+innate+immunity:+regional+and+functional+specialization+of+prophenoloxidases.">Drosophila innate immunity: regional and functional specialization of prophenoloxidases.</a> BMC Biology. 13, 81 (2015).</li><li>Honti, V., Csord&#225;s, G., Kurucz, &. #. 2. 0. 1. ;., M&#225;rkus, R., And&#243;, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell-mediated+immunity+of+Drosophilamelanogaster:+hemocyte+lineages,+immune+compartments,+microanatomy+and+regulation.">The cell-mediated immunity of Drosophilamelanogaster: hemocyte lineages, immune compartments, microanatomy and regulation.</a> Developmental and Comparative Immunology. 42 (1), 47-56 (2014).</li><li>Siva-Jothy, J. A., Prakash, A., Vasanthakrishnan, R. B., Monteith, K. M., Vale, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+bacterial+infection+and+shedding+in+Drosophila+melanogaster.">Oral bacterial infection and shedding in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (135), e57676 (2021).</li><li>Zabihihesari, A., Hilliker, A. J., Rezai, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+microinjection+of+intact+Drosophila+melanogaster+larva+to+investigate+the+effect+of+serotonin+on+heart+rate.">Localized microinjection of intact Drosophila melanogaster larva to investigate the effect of serotonin on heart rate.</a> Lab on a Chip. 20 (2), 343-355 (2020).</li><li>Flatt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life-history+evolution+and+the+genetics+of+fitness+components+in+Drosophila+melanogaster.">Life-history evolution and the genetics of fitness components in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 214 (1), 3-48 (2020).</li><li>Ciche, T. A., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postembryonic+RNAi+in+Heterorhabditis+bacteriophora:+a+nematode+insect+parasite+and+host+for+insect+pathogenic+symbionts.">Postembryonic RNAi in Heterorhabditis bacteriophora: a nematode insect parasite and host for insect pathogenic symbionts.</a> BMC Developmental Biology. 7, 101 (2007).</li><li>Joyce, S. A., Watson, R. J., Clarke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+pathogenicity+and+mutualism+in+Photorhabdus.">The regulation of pathogenicity and mutualism in Photorhabdus.</a> Current Opinion in Microbiology. 9 (2), 127-132 (2006).</li><li>Yang, G., Waterfield, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+TcdB+and+TccC+subunits+in+secretion+of+the+Photorhabdus+Tcd+toxin+complex.">The role of TcdB and TccC subunits in secretion of the Photorhabdus Tcd toxin complex.</a> PLoS Pathogens. 9 (10), 1003644 (2013).</li><li>Shokal, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+co-occurring+Wolbachia+and+Spiroplasma+endosymbionts+on+the+Drosophila+immune+response+against+insect+pathogenic+and+non-pathogenic+bacteria.">Effects of co-occurring Wolbachia and Spiroplasma endosymbionts on the Drosophila immune response against insect pathogenic and non-pathogenic bacteria.</a> BMC Microbiology. 16, 16 (2016).</li><li>Tomoyasu, Y., Denell, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+RNAi+in+Tribolium+(Coleoptera)+for+analyzing+adult+development.">Larval RNAi in Tribolium (Coleoptera) for analyzing adult development.</a> Development Genes and Evolution. 214 (11), 575-578 (2004).</li></ol>

Drosophila melanogaster הוא בין המודלים החשובים ביותר, מניפולציה ניסיונית המשמשים לחקירות של חסינות מולדת ופתוגנזה של זיהומים מיקרוביאליים שונים. הסיבה לכך היא מחזור החיים הפשוט והמהיר שלה, תחזוקה פשוטה במעבדה, גנטיקה אבולוציונית מבוססת היטב וארגז כלים גנטי מגוון. שיטות קודמות של D. melanogaster</em...

Drosophila melanogaster כבר מנוצל מאוד במחקר ביולוגי וביו-רפואי במשך כמה עשורים, כמו המערך המתוחכם של כלים גנטיים ומולקולריים התפתחו בהתמדה לניתוח של מגוון רחב של מחקרים1,2,3,4. ההיבטים השמורים אבולוציונית של התפתחות, הומאוסטזיס וחסינות מולדת ב- D. melanogaster הפכו אותו לאורגניזם מודל בעל ערך לחקר מחלות אנושיות וחרקים שונות5,6. ראוי לציין, את התפקיד הבסיסי של מודל D. melanogaster לחקר חסינות כבר בא לידי ביטוי במידה רבה במחקרים זבובים למבוגרים. עם זאת, D. melanogaster זחלים מחקרים תרמו גם לידע הנוכחי בעיקר חקר תגובות חיסוניות הסלולר, במיוחד עבור צרעות וזיהומים נמטודות המתרחשים דרך קוטיקל חרק7,8,9,10. זחלי Drosophila melanogaster מחזיקים בשלושה סוגים שונים של תאי דם, הנקראים ביחד המוציטים: פלסמטוציטים, תאי קריסטל ולאמלוציטים11,12,13. תאים אלה יכולים להרכיב מערך של תגובות חיסוניות כאשר זחלי D. melanogaster נגועים בפתוגנים כגון חיידקים, פטריות, וירוסים וטפילים14,15,16. התגובות החיסוניות התאיות כוללות בליעה ישירה (פאגוציטוזיס) של מולקולות קטנות או חיידקים, מלניזציה, אנקפסולציה של פתוגנים גדולים יותר כגון ביצי טפילים, וייצור של מינים חמצן תגובתי (ROS) וסינתיסייזרים תחמוצת החנקן (NOS)17,18,19.
לעומת זאת, פחות מחקרים פורסמו על השימוש במודל הזחל D. melanogaster כדי לנתח תגובות חיסוניות הומוריסטיות. זה בעיקר בשל היישום של בדיקות האכלה לזיהום אוראלי של זחלי D. melanogaster ומספר אתגרים הקשורים זחלים microinjecting כולל טיפול מדויק של זחלים ושימוש נכון של microneedle, במיוחד במהלך חדירה20,21. לפיכך, הידע המוגבל של זיהום זחלים וקשיים טכניים (כלומר, תמותה גבוהה) הפכו לעתים קרובות את מודל הזחל D. melanogaster קשה לשימוש. למודל זחל יהיה פוטנציאל לזהות מנגנונים מולקולריים חדשניים שיספקו תובנות נוספות על אינטראקציות מארח-פתוגן ועל אינדוקציה של תגובות חיסוניות מולדות מארח ספציפיות נגד זיהומים פתוגניים.
כאן פרוטוקול פשוט ויעיל שניתן להשתמש בו כדי להזריק D. melanogaster זחלים עם פתוגנים שונים, כגון חיידקים, מתואר בפירוט. בפרט, D. זחלי מלנוגאסטר משמשים לזריקות עם הפתוגן האנושי Photorhabdus asymbiotica והחיידקים הלא פתוגניים Escherichia coli. שיטה זו יכולה לשמש למניפולציה וניתוח של התגובות החיסוניות של D. melanogaster לזיהומים מיקרוביאליים שונים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Fly Food B (Bloomington Recipe)</td>
			<td>LabExpress</td>
			<td>7001-NV</td>
			<td>Food B, in narrow vials, 100 vials/tray</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 15, Mono Petri Dishes Fully Stackable</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-342</td>
			<td>Diameter 100 x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 x 15, Mono Petri dishes Fully Stackable</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-092</td>
			<td>Diameter 60 x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillaries</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53440-186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grade 1 qualitative filter paper standard grade, circle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28450-150</td>
			<td>Diameter 150 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab culture Class II Type A2 Biosafety Safety Cabinet</td>
			<td>ESCO</td>
			<td>LA2-4A2-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1425-500</td>
			<td>LB agar miller powder 500 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1426-500</td>
			<td>LB broth miller powder 500 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Alfa Aesar, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31911-A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000/2000c Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject III Programmable Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>3-000-207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Drosophila Vials, Polystyrene</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles, hypodermic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-316</td>
			<td>22 G, 25 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Next Generation Micropipette Puller</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>SU-P1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-732</td>
			<td>Buffer PBS tablets biotech grade 200tab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td>Version 8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes - plastic, disposable</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76124-652</td>
			<td>20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

drosophila melanogaster larva injection protocol

השימוש במודלים לא קונבנציונליים לחקר חסינות מולדת וארסיות פתוגן מספק חלופה בעלת ערך למודלים של יונקים, אשר יכול להיות יקר ולהעלות סוגיות אתיות. דגמים לא קונבנציונליים הם זולים לשמצה, קלים לטיפול ותרבות, ואינם תופסים הרבה מקום. הם נוחים גנטית ובעלי רצפי גנום שלמים, והשימוש בהם אינו מציג שיקולים אתיים. זבוב הפירות Drosophila melanogaster, למשל, סיפק תובנות נהדרות על מגוון רחב של התנהגות, התפתחות, חילוף חומרים, ומחקר חסינות. ליתר דיוק, D. melanogaster זבובים בוגרים וזחלים להחזיק כמה תגובות הגנה מולדות המשותפות עם בעלי חוליות. המנגנונים המסדירים את התגובות החיסוניות נחשפו בעיקר באמצעות מחקרים גנטיים ומולקולריים במודל D. melanogaster . כאן מסופקת טכניקת הזרקת זחלים חדשנית, אשר תקדם עוד יותר חקירות של תהליכים חיסוניים מולדים בזחלי D. melanogaster ולחקור את הפתוגנזה של מגוון רחב של זיהומים מיקרוביאליים.

כאשר מבוצעים כראוי, זריקות של D. melanogaster זחלים להראות אפקט ספציפי חיידק. נתוני ההישרדות נאספו במספר נקודות זמן בעקבות זיהומים של P. asymbiotica (זן ATCC43943), E. coli (זן K12) ו- PBS (איור 4). בעוד D. melanogaster זחלים רגישים P. א-סימביוטיקה, אשר פוגע הישרדות במהירות, זחלים מוזרק ...

Watch this Scientific Journal Video about Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol at JoVE.com

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

זבובים בוגרים של Drosophila melanogaster נוצלו בהרחבה כאורגניזמים מודל כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים שבבסיס התגובות החיסוניות המולדות של המארחים ואסטרטגיות זיהום מיקרוביאליות. כדי לקדם את שלב הזחלים D. melanogaster כמערכת מודל נוספת או חלופית, מתוארת טכניקת הזרקת זחלים.

Drosophila melanogaster פרוטוקול הזרקת זחלים

The use of unconventional models to study innate immunity and pathogen virulence provides a valuable alternative to mammalian models, which can be costly ...

פרוטוקול זה מטפל בקשיים ובאתגרים עם זחלים מיקרו-מולקולריים על ידי תיאור שיטה מדויקת שתאפשר שימוש בזחלי דרוסופילה מלנוגסטר כמודל למחקרים חיסוניים ומולקולריים שונים. זוהי טכניקת הזרקה פשוטה המציגה שיטה יעילה, חסכונית ומהירה לספק שוב ושוב מגוון חומרים באופן אחיד, המאפשר תוצאות עקביות ואמינות. התחילו בבחירת זחלי שלב אינסטאר שלישיים ושטיפתם בתמיסה של רינגר בצלחת פטרי קטנה.מניחים נייר סינון בצלחת פטרי ומרטיבים אותו עם 5 מ"ל של הפתרון של רינגר. לאחר מכן מניחים את הזחלים על נייר הסינון. הכינו נימים באמצעות צינורות נימי מזכוכית בגודל 3.5 אינץ' במשגר מיקרופיפט.פתח את נימי הזכוכית בעזרת מלקחיים בינוניים משוננים ישרים. ממלאים את הנימים הפתוחים בשמן מינרלי באמצעות מזרק חד פעמי מפלסטיק. לאחר מכן, להוציא את השמן מתוך צינור נימי עם מזרק nanoliter.מלא את הנימים עם ההכנה החיידקית הרצויה להזרקה. מעבירים את הזחלים המרדים לנייר סינון לח עם הפתרון של רינגר. באמצעות מלקחיים, להפעיל לחץ איתן על הצד הגבי של הקצה האחורי של הזחלים, שבו spiracles קנה הנשימה ניכרים.לאחר מכן, הכנס את המחט אופקית, לכיוון הקצה האחורי של הזחלים, והזריק את מלאי החיידקים. הסר מלקחיים כדי למנוע שפיכה של המולימפה או מעי. לאחר מכן, למשוך את המחט שהוכנסה בעבר לתוך זחלים.להדביק 20 זחלים לכל מצב ניסיוני. בעזרת מברשת צבע, מעבירים בעדינות את הזחלים המוזרקים לנייר סינון לח נפרד. הוסף את הפתרון של רינגר לפי הצורך כדי למנוע התייבשות.דגירה צלחת פטרי בחממה ב 25 C.Drosophila melanogaster זחלים נגועים פוטוגרבדוס א-סימביוטיקה הציג שיעור הישרדות של 57% במשך 24 שעות לאחר הזריקה, בעוד זחל מוזרק עם Escherichia coli הראה שיעור הישרדות 85% באותה נקודת זמן. החשיבות של שיטה זו היא כי המחט מוחזקת בערך במקביל לזחל. הלחץ המופעל להחזיק את הזחל הוא מעט מאוד, מה שמפחית את האפשרות של דליפת המולימפה, פציעה קטלנית, או משלוח לקוי של החומר הרצוי.טכניקה זו יכולה להיות מושלמת עם תרגול.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

Rearing and Injection of Manduca sexta Larvae to Assess Bacterial Virulence

Rearing and Injection of Manduca sexta Larvae to Assess Bacterial Virulence

גידול והזרקה של<em&gt; Manduca סקסטה</em&gt; זחלים להערכה ארסית קטריאלי

Manduca sexta, commonly known as the tobacco hornworm, is considered a significant agricultural pest, feeding on solanaceous plants including tobacco and ...

A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication

פרוטוקול לניתוח שכפול נגיף הצהבת מסוג C

Hepatitis C Virus (HCV) affects 3% of the world&#8217;s population and causes serious liver ailments including&#160;chronic hepatitis, cirrhosis, and ...

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

פרוטוקול להדביק<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; עם<em&gt; Typhimurium סלמונלה</em

In the last decade, C. elegans has emerged as an invertebrate organism to study interactions between hosts and pathogens, including the host defense ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

דוגמנות רירית פטרת בזחל דג הזברה על ידי הזרקת Swimbladder

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

המונוציטים בידוד והזרקה תוך ורידית של Murine מח העצם נגזר

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

זיהום חיידקים מערכתי וחיסון ביטחון פנוטיפים ב<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the premier model organisms for studying the function and evolution of immune defense. Many aspects of ...

Phagocytosis Assay for Apoptotic Cells in Drosophila Embryos

Phagocytosis Assay for Apoptotic Cells in Drosophila Embryos

Assay Phagocytosis עבור תאים אפופטוטיים ב<em&gt; תסיסנית</em&gt; עוברים

The molecular mechanisms underlying the phagocytosis of apoptotic cells need to be elucidated in more detail because of its role in immune and ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

החילוץ של Hemocytes של הזחלים דרוזופילה melanogaster זיהום מיקרוביאלי וניתוח

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

הקמתה של זיהום נגיפי וניתוח של התערבות מארח-וירוס דרוזופילה Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

אינדוקציה של פגיעה בריאות העכבר על ידי הזרקת אנדוקנה של ליאומיצין

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...