Name: drosophila melanogaster larva injection protocol
Uploaded: 2021-10-19T14:45:00
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우리는 원고의 비판적 읽기에 대한 조지 워싱턴 대학 (GWU)의 생물 과학과의 구성원에게 감사드립니다. GT는 GWU의 Harlan 여름 펠로우십을 통해 지원되었습니다. 모든 그래픽 수치는 BioRender를 사용하여 제작되었습니다.

1. 플라이 키어링
참고 : D. melanogaster 수명주기는 배아, 애벌레, 번데기 및 성인의 네 단계로 나뉩니다. 실험실에서 최적의 양육 조건 (~ 25 °C, 60 % 습도 및 충분한 음식)을 가진 생성 시간은 수정 된 난자에서 밀폐 된 성인까지 약 10 일입니다. 암컷은 하루에 ~ 100 개의 배아를 낳고 배아 발생은 약 24 h22 지속됩니다. 유충은 세 가지 발달 단계 (별...

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	<li>Takehana, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+a+pattern-recognition+receptor,+peptidoglycan-recognition+protein-LE,+activates+imd/relish-mediated+antibacterial+defense+and+the+prophenoloxidase+cascade+in+Drosophila+larvae.">Overexpression of a pattern-recognition receptor, peptidoglycan-recognition protein-LE, activates imd/relish-mediated antibacterial defense and the prophenoloxidase cascade in Drosophila larvae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (21), 13705-13710 (2002).</li><li>Senger, K., Harris, K., Levine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GATA+factors+participate+in+tissue-specific+immune+responses+in+Drosophila+larvae.">GATA factors participate in tissue-specific immune responses in Drosophila larvae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (43), 15957-15962 (2006).</li><li>Kenmoku, H., Hori, A., Kuraishi, T., Kurata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mode+of+induction+of+the+humoral+innate+immune+response+in+Drosophila+larvae.">A novel mode of induction of the humoral innate immune response in Drosophila larvae.</a> Disease Models &amp; Mech.anisms. 10, 271-281 (2017).</li><li>Kenney, E., Hawdon, J. M., O'Halloran, D., Eleftherianos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterorhabditis+bacteriophora+excreted-secreted+products+enable+infection+by+Photorhabdus+luminescens+through+suppression+of+the+Imd+pathway.">Heterorhabditis bacteriophora excreted-secreted products enable infection by Photorhabdus luminescens through suppression of the Imd pathway.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2372 (2019).</li><li>Cherry, S., Silverman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+in+Drosophila:+New+tricks+from+an+old+friend.">Host-pathogen interactions in Drosophila: New tricks from an old friend.</a> Nature Immunology. 7 (9), 911-917 (2006).</li><li>Younes, S., Al-Sulaiti, A., Nasser, E., Najjar, H., Kamareddine, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+model+organism+in+host-pathogen+interaction+studies.">Drosophila as a model organism in host-pathogen interaction studies.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 214 (2020).</li><li>Kenney, E., Hawdon, J. M., O'Halloran, D. M., Eleftherianos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secreted+virulence+factors+from+Heterorhabditis+bacteriophora+highlight+its+utility+as+a+model+parasite+among+Clade+V+nematodes.">Secreted virulence factors from Heterorhabditis bacteriophora highlight its utility as a model parasite among Clade V nematodes.</a> International Journal for Parasitology. 51 (5), 321-325 (2021).</li><li>Castillo, J. C., Reynolds, S. E., Eleftherianos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+immune+responses+to+nematode+parasites.">Insect immune responses to nematode parasites.</a> Trends in Parasitology. 27 (12), 537-547 (2011).</li><li>Leit&#227;o, A. B., Bian, X., Day, J. P., Pitton, S., Demir, E., Jiggins, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+effects+on+cellular+and+humoral+immune+responses+underlie+genotype-by-genotype+interactions+between+Drosophila+and+parasitoids.">Independent effects on cellular and humoral immune responses underlie genotype-by-genotype interactions between Drosophila and parasitoids.</a> PLoS Pathogens. 15 (10), 1008084 (2019).</li><li>Ramroop, J. R., Heavner, M. E., Razzak, Z. H., Govind, S. 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M., Link, N., Yamamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+model+for+infectious+diseases.">Drosophila as a model for infectious diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (5), 2724 (2017).</li><li>Lemaitre, B., Hoffmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+host+defense+of+Drosophila+melanogaster.">The host defense of Drosophila melanogaster.</a> Annual Reviews of Immunology. 25, 697-743 (2007).</li><li>Garriga, A., Mastore, M., Morton, A., Pino, F. G., Brivio, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+response+of+Drosophila+suzukii+larvae+to+infection+with+the+nematobacterial+complex+Steinernema+carpocapsae-Xenorhabdus+nematophila.">Immune response of Drosophila suzukii larvae to infection with the nematobacterial complex Steinernema carpocapsae-Xenorhabdus nematophila.</a> Insects. 11 (4), 210 (2020).</li><li>Trienens, M., Kraaijeveld, K., Wertheim, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensive+repertoire+of+Drosophila+larvae+in+response+to+toxic+fungi.">Defensive repertoire of Drosophila larvae in response to toxic fungi.</a> Molecular Ecology. 26 (19), 5043-5057 (2017).</li><li>Tafesh-Edwards, G., Eleftherianos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+immunity+against+natural+and+nonnatural+viral+pathogens.">Drosophila immunity against natural and nonnatural viral pathogens.</a> Virology. 540, 165-171 (2020).</li><li>Gold, K. S., Br&#252;ckner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+and+cellular+immunity+in+Drosophila+melanogaster.">Macrophages and cellular immunity in Drosophila melanogaster.</a> Seminars in Immunology. 27 (6), 357-368 (2015).</li><li>Dudzic, J. P., Kondo, S., Ueda, R., Bergman, C. M., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+innate+immunity:+regional+and+functional+specialization+of+prophenoloxidases.">Drosophila innate immunity: regional and functional specialization of prophenoloxidases.</a> BMC Biology. 13, 81 (2015).</li><li>Honti, V., Csord&#225;s, G., Kurucz, &. #. 2. 0. 1. ;., M&#225;rkus, R., And&#243;, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell-mediated+immunity+of+Drosophilamelanogaster:+hemocyte+lineages,+immune+compartments,+microanatomy+and+regulation.">The cell-mediated immunity of Drosophilamelanogaster: hemocyte lineages, immune compartments, microanatomy and regulation.</a> Developmental and Comparative Immunology. 42 (1), 47-56 (2014).</li><li>Siva-Jothy, J. A., Prakash, A., Vasanthakrishnan, R. B., Monteith, K. M., Vale, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+bacterial+infection+and+shedding+in+Drosophila+melanogaster.">Oral bacterial infection and shedding in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (135), e57676 (2021).</li><li>Zabihihesari, A., Hilliker, A. J., Rezai, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+microinjection+of+intact+Drosophila+melanogaster+larva+to+investigate+the+effect+of+serotonin+on+heart+rate.">Localized microinjection of intact Drosophila melanogaster larva to investigate the effect of serotonin on heart rate.</a> Lab on a Chip. 20 (2), 343-355 (2020).</li><li>Flatt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life-history+evolution+and+the+genetics+of+fitness+components+in+Drosophila+melanogaster.">Life-history evolution and the genetics of fitness components in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 214 (1), 3-48 (2020).</li><li>Ciche, T. A., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postembryonic+RNAi+in+Heterorhabditis+bacteriophora:+a+nematode+insect+parasite+and+host+for+insect+pathogenic+symbionts.">Postembryonic RNAi in Heterorhabditis bacteriophora: a nematode insect parasite and host for insect pathogenic symbionts.</a> BMC Developmental Biology. 7, 101 (2007).</li><li>Joyce, S. A., Watson, R. J., Clarke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+pathogenicity+and+mutualism+in+Photorhabdus.">The regulation of pathogenicity and mutualism in Photorhabdus.</a> Current Opinion in Microbiology. 9 (2), 127-132 (2006).</li><li>Yang, G., Waterfield, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+TcdB+and+TccC+subunits+in+secretion+of+the+Photorhabdus+Tcd+toxin+complex.">The role of TcdB and TccC subunits in secretion of the Photorhabdus Tcd toxin complex.</a> PLoS Pathogens. 9 (10), 1003644 (2013).</li><li>Shokal, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+co-occurring+Wolbachia+and+Spiroplasma+endosymbionts+on+the+Drosophila+immune+response+against+insect+pathogenic+and+non-pathogenic+bacteria.">Effects of co-occurring Wolbachia and Spiroplasma endosymbionts on the Drosophila immune response against insect pathogenic and non-pathogenic bacteria.</a> BMC Microbiology. 16, 16 (2016).</li><li>Tomoyasu, Y., Denell, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+RNAi+in+Tribolium+(Coleoptera)+for+analyzing+adult+development.">Larval RNAi in Tribolium (Coleoptera) for analyzing adult development.</a> Development Genes and Evolution. 214 (11), 575-578 (2004).</li></ol>

초파리 멜라노가스터는 다양한 미생물 감염의 선천적 면역 및 발병기전을 조사하는 데 사용되는 가장 가치 있고 실험적으로 조작된 모델 중 하나입니다. 이것은 간단하고 빠른 수명주기, 실험실에서의 간단한 유지, 잘 정립 된 진화 유전학 및 다양한 유전 도구 상자 때문입니다. D. melanogaster 유충 주사의 이전 방법, 예를 들어 하이브리드 미세 유체 장치 또는 Narishige 미세 조작기를 사...

초파리 멜라노가스터는 광범위한 연구의 분석을 위해 정교한 유전 및 분자 도구 배열이 꾸준히 진화함에 따라 수십 년 동안 생물학적 및 생물 의학 연구에 엄청나게 활용되어 왔습니다1,2,3,4. D. melanogaster의 발달, 항상성 및 선천적 면역의 진화적으로 보존 된 측면은 다양한 인간 및 곤충 질병을 연구하는 데 귀중한 모델 유기체가되었습니다5,6. 특히, 면역을 연구하기위한 D. melanogaster 모델의 근본적인 역할은 성인 파리 연구에서 크게 예시되었습니다. 그러나 D. melanogaster 유충 연구는 또한 현재의 지식에 기여했으며 주로 곤충 큐티클을 통해 발생하는 말벌 및 선충류 감염에 대한 세포 면역 반응을 탐구했습니다7,8,9,10. 초파리 멜라노가스터 유충은 혈구라고 불리는 세 가지 유형의 혈액 세포를 가지고 있습니다 : 혈장 세포, 결정 세포 및 lamellocytes11,12,13. 이 세포들은 D. melanogaster 애벌레가 박테리아, 곰팡이, 바이러스 및 기생충과 같은 병원균에 감염 될 때 일련의 면역 반응을 일으킬 수 있습니다14,15,16. 세포 면역 반응에는 소분자 또는 박테리아의 직접적인 삼킴 (식균증), 멜라닌화, 기생충 알과 같은 더 큰 병원체의 캡슐화, 반응성 산소 종 (ROS) 및 산화 질소 합성 효소 (NOS) 17,18,19의 생산이 포함됩니다.
대조적으로, 체액성 면역 반응을 분석하기 위해 D. melanogaster 애벌레 모델의 사용에 관한 연구는 거의 발표되지 않았습니다. 이것은 주로 D. melanogaster 유충의 구강 감염에 대한 먹이 분석의 적용과 유충의 정확한 취급 및 미세 바늘의 적절한 사용, 특히 침투 중 20,21을 포함하여 미세 주입 유충과 관련된 몇 가지 과제 때문입니다. 따라서, 유충 감염에 대한 제한된 지식과 기술적 어려움 (즉, 높은 사망률)은 종종 D. melanogaster 유충 모델을 사용하기 어렵게 만들었습니다. 애벌레 모델은 숙주-병원체 상호작용 및 병원성 감염에 대한 특정 숙주 선천적 면역 반응의 유도에 대한 추가적인 통찰을 제공할 새로운 분자 메카니즘을 식별할 수 있는 잠재력을 가질 것이다.
여기에 D. melanogaster 유충을 박테리아와 같은 다양한 병원균과 함께 주입하는 데 사용할 수있는 간단하고 효율적인 프로토콜이 자세히 설명되어 있습니다. 특히, D. melanogaster 유충은 인간 병원균 Photorhabdus asymbiotica 및 비병원성 박테리아 대장균과의 주사에 사용됩니다. 이 방법은 다양한 미생물 감염에 대한 D. melanogaster 의 면역 반응의 조작 및 분석에 사용될 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Fly Food B (Bloomington Recipe)</td>
			<td>LabExpress</td>
			<td>7001-NV</td>
			<td>Food B, in narrow vials, 100 vials/tray</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 x 15, Mono Petri Dishes Fully Stackable</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-342</td>
			<td>Diameter 100 x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 x 15, Mono Petri dishes Fully Stackable</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-092</td>
			<td>Diameter 60 x 15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillaries</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53440-186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grade 1 qualitative filter paper standard grade, circle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28450-150</td>
			<td>Diameter 150 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab culture Class II Type A2 Biosafety Safety Cabinet</td>
			<td>ESCO</td>
			<td>LA2-4A2-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1425-500</td>
			<td>LB agar miller powder 500 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1426-500</td>
			<td>LB broth miller powder 500 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Alfa Aesar, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31911-A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000/2000c Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject III Programmable Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>3-000-207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Drosophila Vials, Polystyrene</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles, hypodermic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-316</td>
			<td>22 G, 25 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Next Generation Micropipette Puller</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>SU-P1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-732</td>
			<td>Buffer PBS tablets biotech grade 200tab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td>Version 8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes - plastic, disposable</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76124-652</td>
			<td>20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

drosophila melanogaster larva injection protocol

선천적 면역과 병원균 독성을 연구하기 위해 비전통적인 모델을 사용하는 것은 포유류 모델에 대한 귀중한 대안을 제공하며, 이는 비용이 많이 들고 윤리적 인 문제를 제기 할 수 있습니다. 틀에 얽매이지 않는 모델은 악명 높게도 저렴하고 취급하기 쉽고 문화가 쉬우며 많은 공간을 차지하지 않습니다. 그들은 유전적으로 순응성이 있고 완전한 게놈 서열을 가지고 있으며, 그들의 사용은 윤리적 인 고려 사항을 제시하지 않습니다. 예를 들어, 초파리 초파리 멜라노가스터는 다양한 행동, 발달, 신진 대사 및 면역 연구에 대한 훌륭한 통찰력을 제공했습니다. 보다 구체적으로, D. melanogaster 성인 파리와 애벌레는 척추 동물과 공유되는 몇 가지 선천적 인 방어 반응을 가지고 있습니다. 면역 반응을 조절하는 메커니즘은 대부분 D. melanogaster 모델의 유전 및 분자 연구를 통해 밝혀졌습니다. 여기에 새로운 애벌레 주입 기술이 제공되어 D. melanogaster 유충의 선천적 면역 과정에 대한 조사를 더욱 촉진하고 광범위한 미생물 감염의 발병 기전을 탐구합니다.

올바르게 수행되면 D. melanogaster 유충의 주사는 박테리아 특이적 효과를 나타냅니다. 생존 데이터는 P. asymbiotica (균주 ATCC43943), 대장균 (균주 K12) 및 PBS (도 4)의 감염 후 여러 시점에서 수집되었다. D. melanogaster 유충은 생존을 빠르게 손상시키는 P. asymbiotica에 취약하지만, 대장균 또는 PBS 대조군을 주입 한 유충은 장기간 생존을 보입니다....

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Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

초파리 멜라노가스터 성인 파리는 숙주 항미생물 선천적 면역 반응 및 미생물 감염 전략의 기초가 되는 분자 메커니즘을 조사하기 위한 모델 유기체로서 광범위하게 활용되고 있다. D. melanogaster 유충 단계를 추가 또는 대안 모델 시스템으로서 촉진하기 위해, 애벌레 주입 기술이 기술된다.

초파리 멜라노가스터 유충 주입 프로토콜

The use of unconventional models to study innate immunity and pathogen virulence provides a valuable alternative to mammalian models, which can be costly ...

이 프로토콜은 다양한 면역 및 분자 연구를위한 모델로 Drosophila melanogaster 유충을 사용할 수있는 정확한 방법을 설명함으로써 유충을 미세 주입하는 어려움과 도전을 해결합니다. 이것은 균일 한 방식으로 다양한 물질을 반복적으로 전달할 수있는 효율적이고 비용 효율적이며 신속한 방법을 제시하는 간단한 주입 기술로, 일관되고 신뢰할 수있는 결과를 얻을 수 있습니다. 세 번째 인스타 스테이지 애벌레를 선택하고 작은 페트리 접시에서 링거의 용액으로 씻는 것으로 시작하십시오.페트리 접시에 여과지를 넣고 링거 용액 5ml를 적셔주십시오. 그런 다음 애벌레를 여과지에 놓습니다. 마이크로 피펫 풀러에서 3.5 "유리 모세관 튜브를 사용하여 모세 혈관을 준비하십시오.직선 톱니 모양의 중간 점 포셉의 도움으로 유리 모세관을 엽니 다. 플라스틱 일회용 주사기를 사용하여 열린 모세관을 미네랄 오일로 채 웁니다. 그런 다음 나노 리터 인젝터로 모세관 튜브에서 오일을 배출하십시오.주사를위한 원하는 박테리아 제제로 모세관을 채 웁니다. 마취 된 유충을 링거 (Ringer)의 용액으로 적신 여과지로 옮깁니다. 포셉을 사용하여 기관 스파이라클이 명백한 유충의 후부 끝의 등쪽 쪽에 확고한 압력을 가하십시오.그런 다음 바늘을 수평으로 삽입하여 유충의 후부 끝쪽으로 삽입하고 박테리아 스톡을 주입하십시오. 용혈림프나 장의 유출을 피하기 위해 포셉을 제거하십시오. 그런 다음 이전에 애벌레에 삽입 된 바늘을 철회하십시오.각 실험 조건에 대해 20 마리의 애벌레를 감염시킵니다. 페인트 브러시를 사용하여 주입 된 유충을 별도의 촉촉한 여과지로 부드럽게 옮깁니다. 건조를 방지하기 위해 필요에 따라 링거의 솔루션을 추가하십시오.Photorhabdus asymbiotica에 감염된 25C.Drosophila melanogaster 유충의 배양기에서 페트리 디쉬를 배양하여 주사 후 24시간 동안 57%의 생존율을 보인 반면, 에스케리치아 콜리를 주입한 유충은 동시에 85%의 생존율을 보였다. 이 방법의 중요성은 바늘이 애벌레와 대략 평행하게 유지된다는 것입니다. 유충을 잡기 위해 가해지는 압력은 매우 적기 때문에 혈림프 누출, 치명적인 부상 또는 원하는 물질의 부적절한 전달의 가능성을 줄입니다.이 기술은 연습으로 완성 될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

Rearing and Injection of Manduca sexta Larvae to Assess Bacterial Virulence

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의 양육 및 분사<em&gt; Manduca sexta</em박테리아 독성을 평가하기&gt; 애벌레

Manduca sexta, commonly known as the tobacco hornworm, is considered a significant agricultural pest, feeding on solanaceous plants including tobacco and ...

연구

면역학 및 감염병학

A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication

C 형 간염 바이러스의 복제를 분석하기위한 프로토콜

Hepatitis C Virus (HCV) affects 3% of the world&#8217;s population and causes serious liver ailments including&#160;chronic hepatitis, cirrhosis, and ...

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

감염 프로토콜<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em&gt;와<em&gt; 살모넬라 티피 뮤 리움 (Salmonella typhimurium)</em

In the last decade, C. elegans has emerged as an invertebrate organism to study interactions between hosts and pathogens, including the host defense ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Swimbladder 주입에 의해 애벌레 Zebrafish의 점막 칸디다증 모델링

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

분리 및 설치류 골수의 정맥 주사 유래 단핵구

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

전신 세균 감염 및 면역 방어 표현형에<em&gt; 초파리 melanogaster의</em

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the premier model organisms for studying the function and evolution of immune defense. Many aspects of ...

Phagocytosis Assay for Apoptotic Cells in Drosophila Embryos

Phagocytosis Assay for Apoptotic Cells in Drosophila Embryos

에있는 Apoptotic 세포를위한 Phagocytosis 검정<em&gt; Drosophila</em&gt; 태아

The molecular mechanisms underlying the phagocytosis of apoptotic cells need to be elucidated in more detail because of its role in immune and ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

미생물 감염 및 분석에 대 한 초파리 melanogaster 애벌레에서 Hemocytes의 추출

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

바이러스 성 감염 및 초파리 Melanogaster 상호 작용 호스트-바이러스의 분석의 설립

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

Bleomycin의 내시경 주입에 의한 마우스 폐 손상의 유도

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...