Name: measuring cell-edge protrusion dynamics during spreading using live-cell microscopy
Uploaded: 2021-11-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af tilskud NIH MH115939, NS112121, NS105640 og R56MH122449-01A1 (til Anthony J. Koleske) og fra Israel Science Foundation (tilskud nummer 1462/17 og 2142/21) (til Hava Gil-Henn).

Alle metoder beskrevet i denne protokol er blevet godkendt af den institutionelle Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Bar-Ilan University.
BEMÆRK: En trinvis grafisk skildring af den procedure, der er beskrevet i dette afsnit, findes i figur 1.
1. Cellekultur
BEMÆRK: De celler, der anvendes i protokollen, er museembryonale fibroblaster (MEF'er), der blev genereret fra E11,5-13,5 embryon...

<ol>
	<li>Kurosaka, S., Kashina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+embryonic+migration.">Cell biology of embryonic migration.</a> Birth Defects Research Part C - Embryo Today: Reviews. 84 (2), 102-122 (2008).</li><li>Pollard, T. D., Borisy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+motility+driven+by+assembly+and+disassembly+of+actin+filaments.">Cellular motility driven by assembly and disassembly of actin filaments.</a> Cell. 112 (4), 453-465 (2003).</li><li>Ponti, A., Machacek, M., Gupton, S. L., Waterman-Storer, C. M., Danuser, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+distinct+actin+networks+drive+the+protrusion+of+migrating+cells.">Two distinct actin networks drive the protrusion of migrating cells.</a> Science. 305 (5691), 1782-1786 (2004).</li><li>Chesarone, M. A., DuPage, A. G., Goode, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unleashing+formins+to+remodel+the+actin+and+microtubule+cytoskeletons.">Unleashing formins to remodel the actin and microtubule cytoskeletons.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 11 (1), 62-74 (2010).</li><li>Chesarone, M. A., Goode, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+nucleation+and+elongation+factors:+mechanisms+and+interplay.">Actin nucleation and elongation factors: mechanisms and interplay.</a> Current Opinion in Cell Biology. 21 (1), 28-37 (2009).</li><li>Lee, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Actin Cytoskeleton and the Regulation of Cell Migration. Colloquium series on building blocks of the cell: cell structure and function. , (2013).</li><li>Giannone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamellipodial+actin+mechanically+links+myosin+activity+with+adhesion-site+formation.">Lamellipodial actin mechanically links myosin activity with adhesion-site formation.</a> Cell. 128 (3), 561-575 (2007).</li><li>Tojkander, S., Gateva, G., Lappalainen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+stress+fibers--assembly,+dynamics+and+biological+roles.">Actin stress fibers--assembly, dynamics and biological roles.</a> Journal of Cell Science. 125, 1855-1864 (2012).</li><li>Wilson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+II+contributes+to+cell-scale+actin+network+treadmilling+through+network+disassembly.">Myosin II contributes to cell-scale actin network treadmilling through network disassembly.</a> Nature. 465 (7296), 373-377 (2010).</li><li>Chhabra, E. S., Higgs, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+faces+of+actin:+matching+assembly+factors+with+cellular+structures.">The many faces of actin: matching assembly factors with cellular structures.</a> Nature Cell Biology. 9 (10), 1110-1121 (2007).</li><li>Hinz, B., Alt, W., Johnen, C., Herzog, V., Kaiser, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+lamella+dynamics+of+cultured+cells+by+SACED,+a+new+computer-assisted+motion+analysis.">Quantifying lamella dynamics of cultured cells by SACED, a new computer-assisted motion analysis.</a> Experimental Cell Research. 251 (1), 234-243 (1999).</li><li>Bear, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+between+Ena/VASP+proteins+and+actin+filament+capping+regulates+fibroblast+motility.">Antagonism between Ena/VASP proteins and actin filament capping regulates fibroblast motility.</a> Cell. 109 (4), 509-521 (2002).</li><li>Doggett, T. M., Breslin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+actin+cytoskeleton+in+live+endothelial+cells+expressing+GFP-actin.">Study of the actin cytoskeleton in live endothelial cells expressing GFP-actin.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (57), e3187 (2011).</li><li>Miller, A. L., Wang, Y., Mooseker, M. S., Koleske, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Abl-related+gene+(Arg)+requires+its+F-actin-microtubule+cross-linking+activity+to+regulate+lamellipodial+dynamics+during+fibroblast+adhesion.">The Abl-related gene (Arg) requires its F-actin-microtubule cross-linking activity to regulate lamellipodial dynamics during fibroblast adhesion.</a> Journal of Cell Biology. 165 (3), 407-419 (2004).</li><li>Bryce, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortactin+promotes+cell+motility+by+enhancing+lamellipodial+persistence.">Cortactin promotes cell motility by enhancing lamellipodial persistence.</a> Current Biology. 15 (14), 1276-1285 (2005).</li><li>Lapetina, S., Mader, C. C., Machida, K., Mayer, B. J., Koleske, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arg+interacts+with+cortactin+to+promote+adhesion-dependent+cell+edge+protrusion.">Arg interacts with cortactin to promote adhesion-dependent cell edge protrusion.</a> Journal of Cell Biology. 185 (3), 503-519 (2009).</li><li>Miller, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+actin+polymerization+and+adhesion-dependent+cell+edge+protrusion+by+the+Abl-related+gene+(Arg)+tyrosine+kinase+and+N-WASp.">Regulation of actin polymerization and adhesion-dependent cell edge protrusion by the Abl-related gene (Arg) tyrosine kinase and N-WASp.</a> Biochemistry. 49 (10), 2227-2234 (2010).</li><li>Lukic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyk2+regulates+cell-edge+protrusion+dynamics+by+interacting+with+Crk.">Pyk2 regulates cell-edge protrusion dynamics by interacting with Crk.</a> Molecular Biology of the Cell. , (2021).</li></ol>

Cellekant fremspringsdynamik, der består af fremspring, tilbagetrækninger og flæser, er både en forudsætning og en potentiel hastighedsbegrænsende begivenhed i cellemotilitet. Her beskriver vi en hurtig og enkel metode til måling af dynamikken i cellekantfremspring under spredning. Denne metode muliggør korttidsbilleddannelse, genererer en betydelig mængde data, kræver ikke fluorescerende mærkning af celler eller dyrt fluorescerende mikroskopiudstyr og kan bruges som en foreløbig metode til test af cytoskelet...

Cellemigration er en kritisk proces, der styrer udviklingen og funktionen af alle levende organismer. Cellemigration forekommer under både fysiologiske tilstande, såsom embryogenese, sårheling og immunrespons og under patologiske tilstande, såsom kræftmetastase og autoimmun sygdom. På trods af forskelle i celletyper, der deltager i forskellige migrationshændelser, deler alle cellemotilitetshændelser lignende molekylære mekanismer, som er blevet bevaret i evolutionen fra protozoer til pattedyr og involverer fælles cytoskeletale kontrolmekanismer, der kan fornemme miljøet, reagere på signaler og modulere celleadfærd som reaktion1.
En indledende fase i cellemigration kan være dannelsen af meget dynamiske fremspring i forkanten af cellen. Bag lamellipodiet kan man finde lamellen, som kobler actin til myosin II-medieret kontraktilitet og medierer vedhæftning til det underliggende substrat. Lamellipodi induceres af ekstracellulære stimuli såsom vækstfaktorer, cytokiner og celleadhæsionsreceptorer og drives af actinpolymerisation, som tilvejebringer den fysiske kraft, der skubber plasmamembranen fremad2,3. Mange signal- og strukturelle proteiner har været impliceret i dette; blandt dem er Rho GTPaser, som virker koordineret med andre signaler for at aktivere actinregulerende proteiner såsom Arp 2/3-komplekset, WASP-familieproteiner og medlemmer af Formin- og Spire-familierne i lamellipodia2,4,5.
Ud over actinpolymerisation kræves myosin II-aktivitet til generering af kontraktile kræfter ved lamellipodium og den forreste lamel. Disse sammentrækninger, også defineret som cellekant retractioner, kan også skyldes depolymerisering af dendritisk actin i celle periferien og er afgørende for at udvikle den lamellipodiale forkant og tillade fremspringet at fornemme fleksibiliteten i den ekstracellulære matrix og andre celler og bestemme migrationsretningen6,7,8 . Cellekantfremspring, der ikke kan fastgøres til substratet, vil danne perifere membranflæser, arklignende strukturer, der vises på den ventrale overflade af lamellipodia og lameller og bevæger sig baglæns i forhold til migrationsretningen. Da lamellipodium ikke fastgøres til substratet, dannes et bageste lamellipodium under det og skubber mekanisk det første lamellipodium mod den øvre ventrale overflade. Actinfilamenterne i flæsen, der tidligere var parallelle med substratet, bliver nu vinkelret på det, og flæsen er nu placeret over det fremrykkende lamellipodium. Flæsen, der bevæger sig baglæns, falder tilbage i cytosolen og repræsenterer en cellulær mekanisme til genanvendelse af lamellipodial actin9,10.
Her beskriver vi et assay til måling af cellekantfremspringsdynamik. Fremspringsassayet bruger time-lapse-videomikroskopi til at måle fremspringsdynamikken på en enkelt cellekant i 10 minutter under cellens spredningsfase. Fremspringsdynamik analyseres ved at generere kymografer fra disse film. I princippet giver en kymograf detaljerede kvantitative data om bevægelige partikler i et spatiotemporalt plot for at give en kvalitativ forståelse af cellekantdynamikken. Intensiteten af den bevægelige partikel afbildes for alle billedstakke i et tids- versus rumplot, hvor X-aksen og Y-aksen repræsenterer henholdsvis tid og afstand11. Denne metode bruger en manuel kymografanalyse med ImageJ til at få detaljerede kvantitative data, der gør det muligt at hente information fra film og billeder i tilfælde af lavt signal-støj-forhold og / eller høj funktionstæthed og analyse af billeder erhvervet i fasekontrastlysmikroskopi eller dårlig billedkvalitet.
Cellekantens fremspringsdynamikassay beskrevet heri er en hurtig, enkel og omkostningseffektiv metode. Som sådan, og fordi det har vist sig at korrelere direkte med cellemigration11,12, kan det bruges som en foreløbig metode til test af cytoskeletal dynamik involveret i cellemotilitet, før det besluttes at udføre mere ressourcekrævende metoder. Desuden muliggør det også kvantitativ måling af, hvordan genetiske manipulationer (knockout, knockdown eller redningskonstruktioner) af cytoskeletale proteiner påvirker cytoskeletal dynamik ved hjælp af en ligetil platform. Assayet er en lærerig model til at udforske cytoskeletal dynamik i forbindelse med cellemigration og kan bruges til belysning af de mekanismer og molekyler, der ligger til grund for cellemotilitet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 cm cell culture plates</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>P7612-360EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td>Medium contains high glucose (4.5 g/L D-glucose)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s phosphate buffered saline (1xDPBS)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>02-023-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>04-001-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin from human plasma, liquid, 0.1%, suitable for cell culture</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F0895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dishes</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>D35-20-1.5-N</td>
			<td>35mm glass bottom dish, dish size 35 mm, well size 20mm, #1.5 cover glass (0.16-0.19 mm).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ software</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Feely available at: https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS-AF Leica Application Suite 3.2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Microscope acquisition software equipped with an ORCA-Flash 4.0 V2 digital CMOS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica AF6000</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Inverted bright field microscope (40x, NA 1.3 ) equipped with phase-contrast optics, an incubator, and CO2 unit with LAS AF acquisition software equipped with an ORCA-Flash 4.0 V2 digital CMOS camera .</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine solution</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA-Flash 4.0 V2 digital CMOS camera</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin solution</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-052-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring cell-edge protrusion dynamics during spreading using live-cell microscopy

Udviklingen og homeostasen af flercellede organismer er afhængige af koordineret regulering af cellemigration. Cellemigration er en væsentlig begivenhed i konstruktionen og regenereringen af væv og er kritisk i embryonal udvikling, immunologiske reaktioner og sårheling. Dysregulering af cellemotilitet bidrager til patologiske lidelser, såsom kronisk inflammation og kræftmetastase. Cellemigration, vævsinvasion, axon og dendritudvækst initierer alle med actinpolymerisationsmedierede cellekantfremspring. Her beskriver vi en enkel, effektiv, tidsbesparende metode til billeddannelse og kvantitativ analyse af cellekantfremspringsdynamik under spredning. Denne metode måler diskrete træk ved cellekantmembrandynamik, såsom fremspring, tilbagetrækninger og flæser, og kan bruges til at vurdere, hvordan manipulationer af centrale actinregulatorer påvirker cellekantfremspring i forskellige sammenhænge.

I eksperimentet beskrevet i figur 2 blev udødeliggjorte MEF'er belagt på glasbundsfade forbelagt med fibronectin for at aktivere integrinmedieret signalering, blokeret af denatureret BSA, for at blokere frie potentielle steder for celleadhæsion, som ikke er afhængig af integrinaktivering. For at nå den logaritmiske vækstfase ved 70%-80% sammenløb af celler på dagen for eksperimentet blev 0,7 x 106 MEF'er belagt i en vævskulturplade med en diameter på 10 cm 16 timer før ...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy at JoVE.com

Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy

Denne protokol har til formål at måle de dynamiske parametre (fremspring, tilbagetrækninger, flæser) af fremspring ved kanten af spredende celler.

Måling af cellekantfremspringsdynamik under spredning ved hjælp af levende cellemikroskopi

The development and homeostasis of multicellular organisms rely on coordinated regulation of cell migration. Cell migration is an essential event in the ...

Cellekantfremspringsassayet har vist sig at korrelere direkte med cellemigration. Derfor kan det bruges som en foreløbig metode til at identificere kritiske proteiner og signalmekanismer involveret i cellemotilitet. Metoden er hurtig, enkel, omkostningseffektiv og kræver ikke fluorescerende mærkning eller brug af et dyrt fluorescerende mikroskop.Michal Gendler, en studerende fra mit laboratorium, demonstrerer proceduren. Tilsæt to milliliter en normal saltsyreopløsning i midten af en glasbundsskål og inkuber i 20 minutter ved stuetemperatur. Vask fadet tre gange med to milliliter PBS.Fortynd fibronectin ved 10 mikrogram pr. Milliliter koncentration i PBS og tilsæt 200 mikroliter af den fortyndede opløsning til glascenterskålen. Inkuber i en time ved 37 grader Celsius. Forbered 1% BSA-opløsning og PBS og før den gennem et 0,2 mikrometer filter.Denaturere opløsningen ved at inkubere ved 70 grader Celsius i 30 minutter i et forvarmet vandbad. Vask den belagte glasbundsskål med to milliliter PBS tre gange. Tilsæt to milliliter denatureret BSA-opløsning og inkuber skålen ved 37 grader Celsius i en time.Vask glasskålen med to milliliter PBS tre gange. Før 16 til 18 timers eksperiment ved 0,7 millioner celler pr. 10 centimeter diameter vævskulturplade for at opnå 70 til 80% sammenløb. Den næste dag tilsættes to milliliter trypsinopløsning til vævskulturpladen og inkuberes i to til tre minutter, indtil cellerne løsnes.Tilsæt fem milliliter af mediet for at inaktivere trypsin. Brug et hæmacytometer til at tælle cellerne og pladen 20.000 celler i to milliliter af det komplette medium i en bundskål. Derefter inkuberes skålen med belagte celler i en inkubator i 15 minutter.Tænd for varmeenheden, og indstil den til 37 grader Celsius en time før billeddannelse. Tænd også kuldioxidenheden og indstil den til 5% 10 minutter før billeddannelse. Tænd for mikroskopet og kameraet.Tænd computeren, og åbn softwaren til erhvervelse af mikroskop. Indstil forstørrelsen på en 40X fasekontrast med tørt objektiv. Indstil den samlede filmvarighed til 10 minutter med et tidsinterval på fem sekunder.Efter 15 minutters inkubation skal du placere glasbundskålen med klæbede celler i en adapter og fastgøre den. Indsæt adapteren med skålen i slidserne i mikroskopfasen. Tag opvaskedækslet af, læg kuldioxidlåget, og åbn kuldioxidventilen.Find en passende celle til billeddannelse. Start filmanskaffelse efter at have fokuseret på cellen. For at udføre billedanalysen skal du vælge det lige værktøj i billedanalysesoftwaren og lave otte linjer med 20 vilkårlige enheder vinkelret på fremspringene i et radialt arrangement ved hver 45 grader, inklusive lameller og cellekant.I hovedværktøjslinjen skal du gå til billedet, vælge Stakke og derefter klikke på Reslice for at generere et kymografbillede, der beskriver bevægelsen af enkelte punkter i cellemembranen. Ved hjælp af kymografbillederne udtrækkes og manuelt tælles antallet af fremspring, tilbagetrækninger og flæser i hvert af de otte områder i cellen, der er markeret med gitterlinjerne. Disse tal repræsenterer hyppigheden af fremspring, tilbagetrækninger og flæser pr. 10 minutter.Bestem fremspringets persistens, afstand og hastighed ved kymografianalyse. For at bestemme fremspringsafstanden skal du trække vinkelret linje fra bunden af fremspringet til fremspringets højeste top. Tryk på M for at måle længden af linjen i pixels og sikre, at forholdet mellem pixel og mikrometer vides at konvertere længden i mikrometer.Kvantificering af fremspring, reaktioner og flæser blev udført manuelt pr. 10 minutter, og den gennemsnitlige frekvens opnået for fremspring og tilbagetrækninger var 5,1 og 2,1 for flæser. Den repræsentative kymograf havde en fremspringsafstand på ca. 4,8 mikrometer og en fremspringstid på ca. 0,6 minutter. Et eksempel på en celle, der skal udelukkes fra analysen, er repræsenteret.Kymografianalysen afslørede, at cellen ikke var til stede i sin spredningsfase og ikke viste nogen klare membranfremspring. Det vigtigste er at vælge korrekte celler til billeddannelse. En ordentlig celle skal være i sin spredningsfase og bør ikke røre ved andre celler for at undgå celle-cellekommunikation og signalering.Metoden kan bruges som et foreløbigt værktøj til test af cytoskeletal dynamik, der involverer cellemotilitet, inden man beslutter at udføre flere resultater, der kræver cellemigrationsassays.

Research

JoVE Journal

Biology

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Live Cell Response to Mechanical Stimulation Studied by Integrated Optical and Atomic Force Microscopy

To understand the mechanism by which living cells sense mechanical forces, and how they respond and adapt to their environment, a new technology able to ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitative levende celler fluorescens-mikroskopi Analyse af Fission Yeast

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

Live-Cell Imaging Primary Rat Neonatal cardiomyocytes Efter Adenoviral og Lentiviral Transduktion Brug Confocal Spinning Disk Microscopy

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Måling stivheden af<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aortas Brug Atomic force mikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Live Cell Imaging and 3D Analysis of Angiotensin Receptor Type 1a Trafficking in Transfected Human Embryonic Kidney Cells Using Confocal Microscopy

Levende celler og 1a 3D Analyse af angiotensin receptor type handel i transfekterede humane embryoniske nyreceller Brug konfokalmikroskopi

Live-cell imaging is used to simultaneously capture time-lapse images of angiotensin type 1a receptors (AT1aR) and intracellular compartments in ...

Live Cell Fluorescence Microscopy to Observe Essential Processes During Microbial Cell Growth

Live celle Fluorescens mikroskopi for at observere væsentlige processer under mikrobielle cellevækst

Core cellular processes such as DNA replication and segregation, protein synthesis, cell wall biosynthesis, and cell division rely on the function of ...

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Undersøge de skadelige effekter af lav pres Plasma sterilisation på overlevelse af Bacillus subtilis sporer ved hjælp af Live celle mikroskopi

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure ...

Protrusion Force Microscopy: A Method to Quantify Forces Developed by Cell Protrusions

Fremspring Force mikroskopi: En metode til at kvantificere kræfter udviklet af celle fremspring

In numerous biological contexts, animal cells need to interact physically with their environment by developing mechanical forces. Among these, traction ...

Exploiting Live Imaging to Track Nuclei During Myoblast Differentiation and Fusion

At udnytte Live Imaging til Track kerner under Myoblast differentiering og Fusion

Nuclear positioning within cells is important for multiple cellular processes in development and regeneration. The most intriguing example of nuclear ...