Name: measuring cell-edge protrusion dynamics during spreading using live-cell microscopy
Uploaded: 2021-11-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av tilskudd NIH MH115939, NS112121, NS105640 og R56MH122449-01A1 (til Anthony J. Koleske) og fra Israel Science Foundation (tilskudd nummer 1462/17 og 2142/21) (til Hava Gil-Henn).

Alle metoder beskrevet i denne protokollen er godkjent av den institusjonelle dyrepleie- og brukskomiteen (IACUC) ved Bar-Ilan University.
MERK: En trinnvis grafisk fremstilling av prosedyren som er beskrevet i dette avsnittet, vises i figur 1.
1. Cellekultur
MERK: Cellene som brukes i protokollen er mus embryonale fibroblaster (MEFer) som ble generert fra E11.5-13.5 embryoer av villtype C57BL ...

<ol>
	<li>Kurosaka, S., Kashina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+embryonic+migration.">Cell biology of embryonic migration.</a> Birth Defects Research Part C - Embryo Today: Reviews. 84 (2), 102-122 (2008).</li><li>Pollard, T. D., Borisy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+motility+driven+by+assembly+and+disassembly+of+actin+filaments.">Cellular motility driven by assembly and disassembly of actin filaments.</a> Cell. 112 (4), 453-465 (2003).</li><li>Ponti, A., Machacek, M., Gupton, S. L., Waterman-Storer, C. M., Danuser, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+distinct+actin+networks+drive+the+protrusion+of+migrating+cells.">Two distinct actin networks drive the protrusion of migrating cells.</a> Science. 305 (5691), 1782-1786 (2004).</li><li>Chesarone, M. A., DuPage, A. G., Goode, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unleashing+formins+to+remodel+the+actin+and+microtubule+cytoskeletons.">Unleashing formins to remodel the actin and microtubule cytoskeletons.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 11 (1), 62-74 (2010).</li><li>Chesarone, M. A., Goode, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+nucleation+and+elongation+factors:+mechanisms+and+interplay.">Actin nucleation and elongation factors: mechanisms and interplay.</a> Current Opinion in Cell Biology. 21 (1), 28-37 (2009).</li><li>Lee, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Actin Cytoskeleton and the Regulation of Cell Migration. Colloquium series on building blocks of the cell: cell structure and function. , (2013).</li><li>Giannone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamellipodial+actin+mechanically+links+myosin+activity+with+adhesion-site+formation.">Lamellipodial actin mechanically links myosin activity with adhesion-site formation.</a> Cell. 128 (3), 561-575 (2007).</li><li>Tojkander, S., Gateva, G., Lappalainen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+stress+fibers--assembly,+dynamics+and+biological+roles.">Actin stress fibers--assembly, dynamics and biological roles.</a> Journal of Cell Science. 125, 1855-1864 (2012).</li><li>Wilson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+II+contributes+to+cell-scale+actin+network+treadmilling+through+network+disassembly.">Myosin II contributes to cell-scale actin network treadmilling through network disassembly.</a> Nature. 465 (7296), 373-377 (2010).</li><li>Chhabra, E. S., Higgs, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+faces+of+actin:+matching+assembly+factors+with+cellular+structures.">The many faces of actin: matching assembly factors with cellular structures.</a> Nature Cell Biology. 9 (10), 1110-1121 (2007).</li><li>Hinz, B., Alt, W., Johnen, C., Herzog, V., Kaiser, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+lamella+dynamics+of+cultured+cells+by+SACED,+a+new+computer-assisted+motion+analysis.">Quantifying lamella dynamics of cultured cells by SACED, a new computer-assisted motion analysis.</a> Experimental Cell Research. 251 (1), 234-243 (1999).</li><li>Bear, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+between+Ena/VASP+proteins+and+actin+filament+capping+regulates+fibroblast+motility.">Antagonism between Ena/VASP proteins and actin filament capping regulates fibroblast motility.</a> Cell. 109 (4), 509-521 (2002).</li><li>Doggett, T. M., Breslin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+actin+cytoskeleton+in+live+endothelial+cells+expressing+GFP-actin.">Study of the actin cytoskeleton in live endothelial cells expressing GFP-actin.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (57), e3187 (2011).</li><li>Miller, A. L., Wang, Y., Mooseker, M. S., Koleske, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Abl-related+gene+(Arg)+requires+its+F-actin-microtubule+cross-linking+activity+to+regulate+lamellipodial+dynamics+during+fibroblast+adhesion.">The Abl-related gene (Arg) requires its F-actin-microtubule cross-linking activity to regulate lamellipodial dynamics during fibroblast adhesion.</a> Journal of Cell Biology. 165 (3), 407-419 (2004).</li><li>Bryce, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortactin+promotes+cell+motility+by+enhancing+lamellipodial+persistence.">Cortactin promotes cell motility by enhancing lamellipodial persistence.</a> Current Biology. 15 (14), 1276-1285 (2005).</li><li>Lapetina, S., Mader, C. C., Machida, K., Mayer, B. J., Koleske, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arg+interacts+with+cortactin+to+promote+adhesion-dependent+cell+edge+protrusion.">Arg interacts with cortactin to promote adhesion-dependent cell edge protrusion.</a> Journal of Cell Biology. 185 (3), 503-519 (2009).</li><li>Miller, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+actin+polymerization+and+adhesion-dependent+cell+edge+protrusion+by+the+Abl-related+gene+(Arg)+tyrosine+kinase+and+N-WASp.">Regulation of actin polymerization and adhesion-dependent cell edge protrusion by the Abl-related gene (Arg) tyrosine kinase and N-WASp.</a> Biochemistry. 49 (10), 2227-2234 (2010).</li><li>Lukic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyk2+regulates+cell-edge+protrusion+dynamics+by+interacting+with+Crk.">Pyk2 regulates cell-edge protrusion dynamics by interacting with Crk.</a> Molecular Biology of the Cell. , (2021).</li></ol>

Cell-edge fremspringdynamikk, bestående av fremspring, tilbaketrekninger og ruffles, er både en forutsetning og en potensiell hastighetsbegrensende hendelse i cellemotilitet. Her beskriver vi en rask og enkel metode for å måle dynamikken i cellekantprotrusjoner under spredning. Denne metoden muliggjør korttidsavbildning, genererer en betydelig mengde data, krever ikke fluorescerende merking av celler eller dyrt fluorescerende mikroskopiutstyr, og kan brukes som en foreløpig metode for å teste cytoskeletal dynamikk...

Cellemigrasjon er en kritisk prosess som styrer utviklingen og funksjonen til alle levende organismer. Cellemigrasjon skjer i både fysiologiske forhold, som embryogenese, sårheling og immunrespons, og i patologiske forhold, som kreftmetastase og autoimmun sykdom. Til tross for forskjeller i celletyper som deltar i forskjellige trekkhendelser, deler alle cellemotilitetshendelser lignende molekylære mekanismer, som har blitt bevart i evolusjon fra protozoer til pattedyr, og involverer vanlige cytoskeletale kontrollmekanismer som kan føle miljøet, reagere på signaler og modulere celleadferd som svar1.
Et innledende stadium i cellemigrasjon kan være dannelsen av svært dynamiske fremspring i forkant av cellen. Bak lamellipodiumet kan man finne lamellen, som par handler med myosin II-mediert kontraktilitet og formidler vedheft til det underliggende substratet. Lamellipodia er indusert av ekstracellulære stimuli som vekstfaktorer, cytokiner og celleadhesjonsreseptorer og drives av aktinpolymerisering, noe som gir den fysiske kraften som skyver plasmamembranen fremover2,3. Mange signalering og strukturelle proteiner har blitt involvert i dette; blant dem er Rho GTPases, som virker koordinert med andre signaler for å aktivere aktinregulerende proteiner som Arp 2/3-komplekset, WASP-familieproteiner og medlemmer av Formin- og Spire-familiene i lamellipodia2,4,5.
I tillegg til aktinpolymerisering er myosin II-aktivitet nødvendig for å generere kontraktilkrefter ved lamellipodium og den fremre lamellen. Disse sammentrekningene, også definert som tilbaketrekninger av cellekanten, kan også skyldes depolymerisering av dendritisk aktin ved celleperiærien og er avgjørende for å utvikle lamellipodial forkant og la fremspringet føle fleksibiliteten til den ekstracellulære matrisen og andre celler og bestemme retningen for migrasjon6,7,8 . Cellekantutstikk som ikke kan festes til substratet, vil danne perifere membran ruffles, arklignende strukturer som vises på ventral overflate av lamellipodia og lamell og beveger seg bakover i forhold til migrasjonsretningen. Ettersom lamellipodiumet ikke klarer å feste seg til substratet, dannes et bakre lamellipodium under det og skyver mekanisk det første lamellipodiumet mot den øvre ventrale overflaten. Aktinfilamentene i ruffle som tidligere var parallelle med substratet, blir nå vinkelrett på det, og ruffle er nå plassert over det fremadstormende lamellipodiumet. Ruffle som beveger seg bakover faller tilbake i cytosol og representerer en cellulær mekanisme for resirkulering lamellipodial actin9,10.
Her beskriver vi en analyse for måling av cellekant fremspringdynamikk. Fremspringsanalysen bruker videomikroskopi for tidsforløp til å måle enkeltcellekantutstikksdynamikk i 10 minutter under spredningsfasen av cellen. Fremspringsdynamikk analyseres ved å generere kymografer fra disse filmene. I prinsippet gir en kymografi detaljerte kvantitative data om bevegelige partikler i et romlig plott for å gi en kvalitativ forståelse av cellekantdynamikk. Intensiteten til den bevegelige partikkelen tegnes inn for alle bildestakker i en tid kontra et mellomrom, der X-aksen og Y-aksen representerer henholdsvis tid og avstand11. Denne metoden bruker en manuell kymografanalyse med ImageJ for å få detaljerte kvantitative data, slik at du kan hente informasjon fra filmer og bilder i tilfelle lavt signal-til-støy-forhold og / eller høy funksjonstetthet, og analysen av bilder som er anskaffet i fasekontrastlysmikroskopi eller dårlig bildekvalitet.
Cellekantprotrusjonsdynamikkanalysen som er beskrevet her, er en rask, enkel og kostnadseffektiv metode. Som sådan, og fordi det har vist seg å direkte korrelere med cellemigrasjon11,12, kan den brukes som en foreløpig metode for å teste cytoskeletal dynamikk involvert i cellemotilitet før du bestemmer deg for å utføre mer ressurskrevende metoder. Videre muliggjør den også kvantitativ måling av hvordan genetiske manipulasjoner (knockout, knockdown eller redningskonstruksjoner) av cytoskeletale proteiner påvirker cytoskeletal dynamikk ved hjelp av en enkel plattform. Analysen er en lærerik modell for å utforske cytoskeletal dynamikk i sammenheng med cellemigrasjon og kan brukes til belysning av mekanismene og molekylene som ligger til grunn for cellemotiliteten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 cm cell culture plates</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>P7612-360EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td>Medium contains high glucose (4.5 g/L D-glucose)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s phosphate buffered saline (1xDPBS)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>02-023-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>04-001-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin from human plasma, liquid, 0.1%, suitable for cell culture</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F0895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dishes</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>D35-20-1.5-N</td>
			<td>35mm glass bottom dish, dish size 35 mm, well size 20mm, #1.5 cover glass (0.16-0.19 mm).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ software</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Feely available at: https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS-AF Leica Application Suite 3.2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Microscope acquisition software equipped with an ORCA-Flash 4.0 V2 digital CMOS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica AF6000</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Inverted bright field microscope (40x, NA 1.3 ) equipped with phase-contrast optics, an incubator, and CO2 unit with LAS AF acquisition software equipped with an ORCA-Flash 4.0 V2 digital CMOS camera .</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine solution</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA-Flash 4.0 V2 digital CMOS camera</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin solution</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-052-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring cell-edge protrusion dynamics during spreading using live-cell microscopy

Utviklingen og homeostase av multicellulære organismer er avhengig av koordinert regulering av cellemigrasjon. Cellemigrasjon er en viktig begivenhet i bygging og regenerering av vev, og er kritisk i embryonal utvikling, immunologiske responser og sårheling. Dysregulering av cellemotilitet bidrar til patologiske lidelser, som kronisk betennelse og kreftmetastase. Cellemigrasjon, vevsinvasjon, axon og dendritutvekst starter alle med aktinpolymeriseringsmediert cellekantutstikk. Her beskriver vi en enkel, effektiv, tidsbesparende metode for avbildning og kvantitativ analyse av cellekant fremspringdynamikk under spredning. Denne metoden måler diskrete egenskaper ved cellekantmembrandynamikk, for eksempel fremspring, tilbaketrekninger og ruffles, og kan brukes til å vurdere hvordan manipulasjoner av viktige aktinregulatorer påvirker cellekantutstikk i forskjellige sammenhenger.

I eksperimentet beskrevet i figur 2 ble udødeliggjorte MEFer belagt på glassbunnsretter forhåndsbelagt med fibronectin for å aktivere integrinsk mediert signalering, blokkert av denaturert BSA, for å blokkere frie potensielle steder for celleadhesjon som ikke er avhengig av integrinsk aktivering. For å nå den logaritmiske vekstfasen ved 70% -80% sammenløp av celler på eksperimentets dag, ble 0,7 x 106 MEF-er belagt i en vevskulturplate med 10 cm diameter 16 timer før eks...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy at JoVE.com

Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy

Denne protokollen tar sikte på å måle de dynamiske parametrene (fremspring, tilbaketrekninger, ruffles) av fremspring på kanten av spredningsceller.

Måling av cellekantprotruderingsdynamikk under spredning ved hjelp av live-cellemikroskopi

The development and homeostasis of multicellular organisms rely on coordinated regulation of cell migration. Cell migration is an essential event in the ...

Utstikkende cellekantanalyse har vist seg å korrelere direkte med cellemigrering. Derfor kan den brukes som en foreløpig metode for å identifisere kritiske proteiner og signalmekanismer involvert i cellemotilitet. Metoden er rask, enkel, kostnadseffektiv og krever ikke fluorescerende merking eller bruk av et dyrt fluorescerende mikroskop.Å demonstrere prosedyren vil være Michal Gendler, en student fra laboratoriet mitt. Tilsett to milliliter av en vanlig saltsyreoppløsning i midten av en glassbunnfat og inkuber i 20 minutter ved romtemperatur. Vask parabolen tre ganger med to milliliter PBS.Fortynn fibronektin ved 10 mikrogram per milliliterkonsentrasjon i PBS og tilsett 200 mikroliter av den fortynnede løsningen på glasssenterfatet. Inkuber i en time ved 37 grader Celsius. Forbered 1%BSA-løsning og PBS og send den gjennom et 0,2 mikrometer filter.Denaturer løsningen ved å inkubere ved 70 grader Celsius i 30 minutter i et forvarmet vannbad. Vask den belagte glassbunnsfatet med to milliliter PBS tre ganger. Tilsett to milliliter denaturert BSA-løsning og inkuber parabolen ved 37 grader Celsius i en time.Vask glassfatet med to milliliter PBS tre ganger. Før 16 til 18 timers eksperiment ved 0,7 millioner celler per 10 centimeter diameter vevskulturplate for å oppnå 70 til 80% samløp. Neste dag legger du til to milliliter trypsinoppløsning til vevskulturplaten og inkuberer i to til tre minutter til cellene blir løsnet.Tilsett fem milliliter av mediet for å inaktivere trypsin. Bruk et hemacytometer, tell cellene og platen 20 000 celler i to milliliter av hele mediet i en bunnfat. Inkuber deretter parabolen med belagte celler i en inkubator i 15 minutter.Slå på varmeenheten og sett den på 37 grader Celsius en time før bildebehandling. Slå også på karbondioksidenheten og sett den til 5%10 minutter før avbildning. Slå på mikroskopet og kameraet.Slå på datamaskinen og åpne programvaren for anskaffelse av mikroskop. Still inn forstørrelsen på en 40X tørr linsefasekontrast. Sett den totale filmvarigheten til 10 minutter med et tidsintervall på fem sekunder.Etter 15 minutter med inkubasjon, plasser glassbunnsfatet med festede celler i en adapter og fest den. Sett adapteren med parabolen inn i sporene i mikroskopstadiet. Ta av paraboldekselet, plasser karbondioksidlokket og åpne karbondioksidventilen.Finn en passende celle for avbildning. Start filmanskaffelse etter å ha fokusert på cellen. For å utføre bildeanalysen, velg det rette verktøyet i bildeanalyseprogramvaren og lag åtte linjer med 20 vilkårlige enheter vinkelrett på fremspringene i et radialt arrangement ved hver 45 grader, inkludert lamell og cellekant.Gå til bildet på hovedverktøylinjen, velg Stabler, og klikk deretter Reslice for å generere et kymografibilde som beskriver bevegelsen av enkeltpunkter i cellemembranen. Bruk kymografbildene til å trekke ut og manuelt telle antall fremspring, tilbaketrekninger og ruffles i hver av de åtte regionene i cellen som er merket med rutenettlinjene. Disse tallene representerer frekvensen av fremspring, tilbaketrekninger og ruffles per 10 minutter.Bestem fremspringets utholdenhet, avstand og hastighet ved kymografianalyse. For å bestemme fremspringavstanden, tegn vinkelrett linje fra bunnen av fremspringet til den høyeste toppen av fremspringet. Trykk på M for å måle lengden på linjen i piksler og sørg for at forholdet mellom piksel og mikrometer er kjent for å konvertere lengden i mikrometer.Kvantifisering av fremspring, reaksjoner og ruffles ble utført manuelt per 10 minutter, og den gjennomsnittlige frekvensen oppnådd for fremspring og tilbaketrekninger var 5,1 og 2,1 for ruffles. Den representative kymografen hadde en fremspringavstand på ca. 4,8 mikrometer og en fremspringstid på ca. 0,6 minutter. Et eksempel på en celle som bør utelates fra analysen, representeres.Kymografianalysen viste at cellen ikke var til stede i spredningsfasen og ikke viste noen klare membranutstikk. Det viktigste er å velge riktige celler for avbildning. En riktig celle bør være i spredningsfasen og bør ikke berøre andre celler for å unngå cellecellekommunikasjon og signalering.Metoden kan brukes som et foreløpig verktøy for testing av cytoskeletal dynamikk som involverer cellemotilitet før du bestemmer deg for å utføre flere resultater krevende cellemigrasjonsanalyser.

Research

JoVE Journal

Biology

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Live Cell Response to Mechanical Stimulation Studied by Integrated Optical and Atomic Force Microscopy

To understand the mechanism by which living cells sense mechanical forces, and how they respond and adapt to their environment, a new technology able to ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitative Live-Cell fluorescens-mikroskopi Analyse av Fission gjær

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

Live-Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Etter adenovirus og Lentiviral Transduksjon Bruke Confocal Spinning Disk Mikros

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Måle Stivhet<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mus Aorta Bruke Atomic Force Microscopy

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Live Cell Imaging and 3D Analysis of Angiotensin Receptor Type 1a Trafficking in Transfected Human Embryonic Kidney Cells Using Confocal Microscopy

Live-Cell Imaging og 3D Analyse av angiotensin reseptor type 1a Trafficking i transfekterte humane embryonale nyreceller ved hjelp konfokalmikroskopi

Live-cell imaging is used to simultaneously capture time-lapse images of angiotensin type 1a receptors (AT1aR) and intracellular compartments in ...

Live Cell Fluorescence Microscopy to Observe Essential Processes During Microbial Cell Growth

Live celle fluorescens mikroskopi å observere viktige prosesser under mikrobiell cellevekst

Core cellular processes such as DNA replication and segregation, protein synthesis, cell wall biosynthesis, and cell division rely on the function of ...

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Undersøke den skadelige effekter av lav press plasmasterilisering på overlevelse av Bacillus subtilis Spores ved hjelp av Live celle mikroskopi

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure ...

Protrusion Force Microscopy: A Method to Quantify Forces Developed by Cell Protrusions

Protrusion Force mikroskopi: En metode for å kvantifisere styrker utviklet av cellen utstikkende deler

In numerous biological contexts, animal cells need to interact physically with their environment by developing mechanical forces. Among these, traction ...

Exploiting Live Imaging to Track Nuclei During Myoblast Differentiation and Fusion

Utnytte Live bildebehandling til spor kjerner Myoblast differensiering og Fusion

Nuclear positioning within cells is important for multiple cellular processes in development and regeneration. The most intriguing example of nuclear ...