Name: measuring cell-edge protrusion dynamics during spreading using live-cell microscopy
Uploaded: 2021-11-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy at JoVE.com

Detta arbete stöddes av bidrag NIH MH115939, NS112121, NS105640 och R56MH122449-01A1 (till Anthony J. Koleske) och från Israel Science Foundation (bidragsnummer 1462/17 och 2142/21) (till Hava Gil-Henn).

Alla metoder som beskrivs i detta protokoll har godkänts av den institutionella Djurvårds- och användningskommittén (IACUC) vid Bar-Ilan University.
OBS: En steg-för-steg-grafisk bild av proceduren som beskrivs i detta avsnitt visas i figur 1.
1. Cellodling
OBS: Cellerna som används i protokollet är musembryonal fibroblaster (MEF) som genererades från E11.5-13.5 embryon av vild typ C57B...

<ol>
	<li>Kurosaka, S., Kashina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+embryonic+migration.">Cell biology of embryonic migration.</a> Birth Defects Research Part C - Embryo Today: Reviews. 84 (2), 102-122 (2008).</li><li>Pollard, T. D., Borisy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+motility+driven+by+assembly+and+disassembly+of+actin+filaments.">Cellular motility driven by assembly and disassembly of actin filaments.</a> Cell. 112 (4), 453-465 (2003).</li><li>Ponti, A., Machacek, M., Gupton, S. L., Waterman-Storer, C. M., Danuser, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+distinct+actin+networks+drive+the+protrusion+of+migrating+cells.">Two distinct actin networks drive the protrusion of migrating cells.</a> Science. 305 (5691), 1782-1786 (2004).</li><li>Chesarone, M. A., DuPage, A. G., Goode, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unleashing+formins+to+remodel+the+actin+and+microtubule+cytoskeletons.">Unleashing formins to remodel the actin and microtubule cytoskeletons.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 11 (1), 62-74 (2010).</li><li>Chesarone, M. A., Goode, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+nucleation+and+elongation+factors:+mechanisms+and+interplay.">Actin nucleation and elongation factors: mechanisms and interplay.</a> Current Opinion in Cell Biology. 21 (1), 28-37 (2009).</li><li>Lee, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Actin Cytoskeleton and the Regulation of Cell Migration. Colloquium series on building blocks of the cell: cell structure and function. , (2013).</li><li>Giannone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamellipodial+actin+mechanically+links+myosin+activity+with+adhesion-site+formation.">Lamellipodial actin mechanically links myosin activity with adhesion-site formation.</a> Cell. 128 (3), 561-575 (2007).</li><li>Tojkander, S., Gateva, G., Lappalainen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+stress+fibers--assembly,+dynamics+and+biological+roles.">Actin stress fibers--assembly, dynamics and biological roles.</a> Journal of Cell Science. 125, 1855-1864 (2012).</li><li>Wilson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+II+contributes+to+cell-scale+actin+network+treadmilling+through+network+disassembly.">Myosin II contributes to cell-scale actin network treadmilling through network disassembly.</a> Nature. 465 (7296), 373-377 (2010).</li><li>Chhabra, E. S., Higgs, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+faces+of+actin:+matching+assembly+factors+with+cellular+structures.">The many faces of actin: matching assembly factors with cellular structures.</a> Nature Cell Biology. 9 (10), 1110-1121 (2007).</li><li>Hinz, B., Alt, W., Johnen, C., Herzog, V., Kaiser, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+lamella+dynamics+of+cultured+cells+by+SACED,+a+new+computer-assisted+motion+analysis.">Quantifying lamella dynamics of cultured cells by SACED, a new computer-assisted motion analysis.</a> Experimental Cell Research. 251 (1), 234-243 (1999).</li><li>Bear, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+between+Ena/VASP+proteins+and+actin+filament+capping+regulates+fibroblast+motility.">Antagonism between Ena/VASP proteins and actin filament capping regulates fibroblast motility.</a> Cell. 109 (4), 509-521 (2002).</li><li>Doggett, T. M., Breslin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+actin+cytoskeleton+in+live+endothelial+cells+expressing+GFP-actin.">Study of the actin cytoskeleton in live endothelial cells expressing GFP-actin.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (57), e3187 (2011).</li><li>Miller, A. L., Wang, Y., Mooseker, M. S., Koleske, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Abl-related+gene+(Arg)+requires+its+F-actin-microtubule+cross-linking+activity+to+regulate+lamellipodial+dynamics+during+fibroblast+adhesion.">The Abl-related gene (Arg) requires its F-actin-microtubule cross-linking activity to regulate lamellipodial dynamics during fibroblast adhesion.</a> Journal of Cell Biology. 165 (3), 407-419 (2004).</li><li>Bryce, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortactin+promotes+cell+motility+by+enhancing+lamellipodial+persistence.">Cortactin promotes cell motility by enhancing lamellipodial persistence.</a> Current Biology. 15 (14), 1276-1285 (2005).</li><li>Lapetina, S., Mader, C. C., Machida, K., Mayer, B. J., Koleske, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arg+interacts+with+cortactin+to+promote+adhesion-dependent+cell+edge+protrusion.">Arg interacts with cortactin to promote adhesion-dependent cell edge protrusion.</a> Journal of Cell Biology. 185 (3), 503-519 (2009).</li><li>Miller, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+actin+polymerization+and+adhesion-dependent+cell+edge+protrusion+by+the+Abl-related+gene+(Arg)+tyrosine+kinase+and+N-WASp.">Regulation of actin polymerization and adhesion-dependent cell edge protrusion by the Abl-related gene (Arg) tyrosine kinase and N-WASp.</a> Biochemistry. 49 (10), 2227-2234 (2010).</li><li>Lukic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyk2+regulates+cell-edge+protrusion+dynamics+by+interacting+with+Crk.">Pyk2 regulates cell-edge protrusion dynamics by interacting with Crk.</a> Molecular Biology of the Cell. , (2021).</li></ol>

Cellkantsutsprångsdynamik, bestående av utsprång, indragningar och volanger, är både en förutsättning och en potentiell hastighetsbegränsande händelse i cellmotilitet. Här beskriver vi en snabb och enkel metod för att mäta dynamiken i cellkantsutsprång under spridning. Denna metod möjliggör kortvarig avbildning, genererar en betydande mängd data, kräver inte fluorescerande märkning av celler eller dyr fluorescerande mikroskopiutrustning och kan användas som en preliminär metod för att testa cytoskele...

Cellmigration är en kritisk process som styr utvecklingen och funktionen hos alla levande organismer. Cellmigration sker i både fysiologiska tillstånd, såsom embryogenes, sårläkning och immunsvar, och i patologiska tillstånd, såsom cancermetastaser och autoimmun sjukdom. Trots skillnader i celltyper som deltar i olika migrationshändelser delar alla cellmotilitetshändelser liknande molekylära mekanismer, som har bevarats i evolutionen från protozoer till däggdjur, och involverar gemensamma cytoskelettkontrollmekanismer som kan känna av miljön, svara på signaler och modulera cellbeteende som svar1.
Ett första steg i cellmigration kan vara bildandet av mycket dynamiska utsprång vid cellens framkant. Bakom lamellipodiet kan man hitta lamellen, som kopplar aktin till myosin II-medierade kontraktilitet och förmedlar vidhäftning till det underliggande substratet. Lamellipodi induceras av extracellulära stimuli såsom tillväxtfaktorer, cytokiner och celladhesionsreceptorer och drivs av aktinpolymerisation, vilket ger den fysiska kraften som skjuter plasmamembranet framåt2,3. Många signalerings- och strukturproteiner har varit inblandade i detta; bland dem är Rho GTPaser, som verkar samordnat med andra signaler för att aktivera aktinreglerande proteiner såsom Arp 2/3-komplexet, WASP-familjeproteiner och medlemmar av Formin- och Spire-familjerna i lamellipodia2,4,5.
Förutom aktinpolymerisation krävs myosin II-aktivitet för att generera kontraktila krafter vid lamellipodiet och den främre lamellen. Dessa sammandragningar, även definierade som cellkantsindragningar, kan också bero på depolymerisation av dendritiskt aktin vid cellperiferin och är kritiska för att utveckla den lamellipodiella framkanten och låta utsprånget känna av flexibiliteten hos den extracellulära matrisen och andra celler och bestämma migrationsriktningen6,7,8 . Cellkantsutsprång som inte kan fästa vid substratet kommer att bilda perifera membranvolanger, arkliknande strukturer som uppträder på den ventrala ytan av lamellipodi och lamell och rör sig bakåt i förhållande till migrationsriktningen. Eftersom lamellipodiet inte fäster vid substratet bildas ett bakre lamellipodium under det och skjuter mekaniskt det första lamellipodiet mot den övre ventrala ytan. Aktinfilamenten i volangen som tidigare var parallella med substratet blir nu vinkelräta mot det, och volangen är nu placerad ovanför det framåtskridande lamellipodiet. Ruffle som rör sig bakåt faller tillbaka i cytosolen och representerar en cellulär mekanism för återvinning av lamellipodial aktin9,10.
Här beskriver vi en analys för mätning av cellkantsutsprångsdynamik. Utskjutningsanalysen använder time-lapse-videomikroskopi för att mäta utskjutningsdynamiken med en enda cellkant i 10 minuter under cellens spridningsfas. Utskjutningsdynamiken analyseras genom att generera kymografer från dessa filmer. I princip ger en kymograf detaljerade kvantitativa data om rörliga partiklar i ett spatiotemporalt diagram för att ge en kvalitativ förståelse av cellkantdynamiken. Intensiteten hos den rörliga partikeln ritas för alla bildstaplar i ett tids- kontra rymddiagram, där X-axeln respektive Y-axeln representerar tid och avstånd11. Denna metod använder en manuell kymografanalys med ImageJ för att få detaljerade kvantitativa data, vilket gör det möjligt att hämta information från filmer och bilder vid lågt signal-brusförhållande och / eller hög funktionsdensitet och analys av bilder som förvärvats i faskontrastljusmikroskopi eller dålig bildkvalitet.
Cellkantsutskjutningsdynamikanalysen som beskrivs här är en snabb, enkel och kostnadseffektiv metod. Som sådan, och eftersom det har visat sig direkt korrelera med cellmigration11,12, kan det användas som en preliminär metod för att testa cytoskelettdynamik som är involverad i cellmotilitet innan man bestämmer sig för att utföra mer resurskrävande metoder. Dessutom möjliggör det också kvantitativ mätning av hur genetiska manipulationer (knockout, knockdown eller räddningskonstruktioner) av cytoskelettproteiner påverkar cytoskelettdynamiken med hjälp av en enkel plattform. Analysen är en lärorik modell för att utforska cytoskelettdynamik i samband med cellmigration och kan användas för att belysa de mekanismer och molekyler som ligger bakom cellmotilitet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 cm cell culture plates</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>P7612-360EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td>Medium contains high glucose (4.5 g/L D-glucose)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s phosphate buffered saline (1xDPBS)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>02-023-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>04-001-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin from human plasma, liquid, 0.1%, suitable for cell culture</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F0895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dishes</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>D35-20-1.5-N</td>
			<td>35mm glass bottom dish, dish size 35 mm, well size 20mm, #1.5 cover glass (0.16-0.19 mm).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ software</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Feely available at: https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS-AF Leica Application Suite 3.2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Microscope acquisition software equipped with an ORCA-Flash 4.0 V2 digital CMOS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica AF6000</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Inverted bright field microscope (40x, NA 1.3 ) equipped with phase-contrast optics, an incubator, and CO2 unit with LAS AF acquisition software equipped with an ORCA-Flash 4.0 V2 digital CMOS camera .</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine solution</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA-Flash 4.0 V2 digital CMOS camera</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin solution</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-052-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring cell-edge protrusion dynamics during spreading using live-cell microscopy

Utvecklingen och homeostasen av multicellulära organismer är beroende av samordnad reglering av cellmigration. Cellmigration är en viktig händelse vid konstruktion och regenerering av vävnader och är avgörande för embryonal utveckling, immunologiska svar och sårläkning. Dysregulering av cellmotilitet bidrar till patologiska störningar, såsom kronisk inflammation och cancermetastasering. Cellmigration, vävnadsinvasion, axon och dendritutväxt initieras alla med aktinpolymerisationsmedierade cellkantsutsprång. Här beskriver vi en enkel, effektiv och tidsbesparande metod för avbildning och kvantitativ analys av cellkantsutsprångsdynamik under spridning. Denna metod mäter diskreta egenskaper hos cellkantsmembrandynamiken, såsom utsprång, indragningar och volanger, och kan användas för att bedöma hur manipuleringar av viktiga aktinregulatorer påverkar cellkantsutsprång i olika sammanhang.

I experimentet som beskrivs i figur 2 pläterades odödliga MEF på glasbottenskålar förbelagda med fibronektin för att aktivera integrinmedierad signalering, blockerad av denaturerad BSA, för att blockera fria potentiella platser för cellvidhäftning som inte är beroende av integrinaktivering. För att nå den logaritmiska tillväxtfasen vid 70% -80% sammanflöde av celler på experimentdagen pläterades 0,7 x 106 MEF i en vävnadsodlingsplatta med en diameter på 10 cm 16 ...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy at JoVE.com

Measuring Cell-Edge Protrusion Dynamics during Spreading using Live-Cell Microscopy

Detta protokoll syftar till att mäta de dynamiska parametrarna (utsprång, indragningar, volanger) av utsprång vid kanten av spridande celler.

Mätning av cellkantsutsprångsdynamik under spridning med hjälp av livecellmikroskopi

The development and homeostasis of multicellular organisms rely on coordinated regulation of cell migration. Cell migration is an essential event in the ...

Cellkantsutskjutningsanalysen har visat sig direkt korrelera med cellmigration. Därför kan den användas som en preliminär metod för att identifiera kritiska proteiner och signalmekanismer som är involverade i cellmotilitet. Metoden är snabb, enkel, kostnadseffektiv och kräver inte fluorescerande märkning eller användning av ett dyrt fluorescerande mikroskop.Demonstrerar proceduren kommer att vara Michal Gendler, en student från mitt laboratorium. Tillsätt två milliliter av en normal saltsyralösning i mitten av en glasskål och inkubera i 20 minuter vid rumstemperatur. Tvätta skålen tre gånger med två milliliter PBS.Späd fibronektin vid 10 mikrogram per milliliter koncentration i PBS och tillsätt 200 mikroliter av den utspädda lösningen till glasskålen. Inkubera i en timme vid 37 grader Celsius. Förbered 1% BSA-lösning och PBS och passera den genom ett 0,2 mikrometerfilter.Denaturera lösningen genom att inkubera vid 70 grader Celsius i 30 minuter i ett förvärmt vattenbad. Tvätta den belagda glasbottenskålen med två milliliter PBS tre gånger. Tillsätt två milliliter denaturerad BSA-lösning och inkubera skålen vid 37 grader Celsius i en timme.Tvätta glasskålen med två milliliter PBS tre gånger. Före 16 till 18 timmars experiment vid 0,7 miljoner celler per 10 centimeter diameter vävnadsodlingsplatta för att uppnå 70 till 80% sammanflöde. Nästa dag, tillsätt två milliliter trypsinlösning till vävnadsodlingsplattan och inkubera i två till tre minuter tills cellerna lossnar.Tillsätt fem milliliter av mediet för att inaktivera trypsinet. Använd en hemacytometer, räkna cellerna och plattan 20 000 celler i två milliliter av det kompletta mediet i en bottenskål. Inkubera sedan skålen med pläterade celler i en inkubator i 15 minuter.Slå på värmeenheten och ställ in den på 37 grader Celsius en timme före avbildning. Slå också på koldioxidenheten och ställ in den på 5%10 minuter före avbildning. Slå på mikroskopet och kameran.Slå på datorn och öppna programvaran för förvärv av mikroskop. Ställ in förstoringen på en 40X torr linsfaskontrast. Ställ in den totala filmlängden på 10 minuter med ett tidsintervall på fem sekunder.Efter 15 minuters inkubation, placera glasbottenskålen med vidhäftade celler i en adapter och fixa den. Sätt i adaptern med skålen i slitsarna i mikroskopsteget. Ta av disklocket, placera koldioxidlocket och öppna koldioxidventilen.Leta reda på en lämplig cell för avbildning. Starta filmförvärv efter att ha fokuserat på cellen. För att utföra bildanalysen, välj det raka verktyget i bildanalysprogramvaran och gör åtta linjer med 20 godtyckliga enheter vinkelrätt mot utsprången i ett radiellt arrangemang vid varje 45 grader, inklusive lamell och cellkant.I huvudverktygsfältet går du till bild, väljer Staplar och klickar sedan på Reslice för att generera en kymografbild som beskriver rörelsen av enskilda punkter i cellmembranet. Med hjälp av kymografbilderna extraherar och räknar du manuellt antalet utsprång, indragningar och volanger i var och en av de åtta regionerna i cellen som markeras av rutnätslinjerna. Dessa siffror representerar frekvensen av utsprång, indragningar och volanger per 10 minuter.Bestäm utskjutningspersistensen, avståndet och hastigheten genom kymografianalys. För att bestämma utskjutningsavståndet, rita vinkelrätt linje från utsprångets botten till utsprångets högsta topp. Tryck på M för att mäta längden på linjen i pixlar och se till att förhållandet mellan pixel och mikrometer är känt för att konvertera längden i mikrometer.Kvantifiering av utsprång, reaktioner och volanger utfördes manuellt per 10 minuter och den genomsnittliga frekvensen som erhölls för utsprång och indragningar var 5,1 och 2,1 för volanger. Den representativa kymografen hade ett utskjutningsavstånd på cirka 4,8 mikrometer och en utskjutningstid på cirka 0,6 minuter. Ett exempel på en cell som ska uteslutas från analysen representeras.Kymografianalysen visade att cellen inte var närvarande i sin spridningsfas och inte visade några tydliga membranutsprång. Det viktigaste är att välja rätt celler för avbildning. En riktig cell bör vara i sin spridningsfas och bör inte röra andra celler för att undvika cell-cellkommunikation och signalering.Metoden kan användas som ett preliminärt verktyg för att testa cytoskelettdynamik som involverar cellmotilitet innan man bestämmer sig för att utföra fler resultat som kräver cellmigrationsanalyser.

Research

JoVE Journal

Biology

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

Levande cell imaging av F-aktin Dynamics via Fluorescent Speckle Mikroskopi (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Live Cell Response to Mechanical Stimulation Studied by Integrated Optical and Atomic Force Microscopy

Levande cell Svar på mekanisk stimulering studerats av integrerad optisk och atomkraftsmikroskopi

To understand the mechanism by which living cells sense mechanical forces, and how they respond and adapt to their environment, a new technology able to ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitativa levande celler fluorescens-mikroskopi Analys av fissionsjäst

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

Levande cell imaging av Primär Rat Neonatal Cardiomyocytes Efter Adenoviral och Lentiviral Transduction Använda Konfokal Spinning Disk mikroskopi

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Mätning av styvheten hos<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aorta Använda atomkraftsmikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Live Cell Imaging and 3D Analysis of Angiotensin Receptor Type 1a Trafficking in Transfected Human Embryonic Kidney Cells Using Confocal Microscopy

Levande cell imaging och 3D analys av angiotensinreceptor typ 1a handel i transfekterade humana embryonala njurceller med hjälp av konfokalmikroskopi

Live-cell imaging is used to simultaneously capture time-lapse images of angiotensin type 1a receptors (AT1aR) and intracellular compartments in ...

Live Cell Fluorescence Microscopy to Observe Essential Processes During Microbial Cell Growth

Levande cellen fluorescensmikroskopi för att iaktta nödvändiga processer under mikrobiell celltillväxt

Core cellular processes such as DNA replication and segregation, protein synthesis, cell wall biosynthesis, and cell division rely on the function of ...

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Utreda skadliga effekter av låg trycket Plasma sterilisering på överlevnaden för Bacillus subtilis sporer med Live Cell mikroskopi

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure ...

Protrusion Force Microscopy: A Method to Quantify Forces Developed by Cell Protrusions

Utstick Force Microscopy: En metod för att kvantifiera krafter utvecklats av Cell utskjutande delar

In numerous biological contexts, animal cells need to interact physically with their environment by developing mechanical forces. Among these, traction ...

Exploiting Live Imaging to Track Nuclei During Myoblast Differentiation and Fusion

Att utnyttja levande Imaging till spår kärnor under gorgina differentiering och Fusion

Nuclear positioning within cells is important for multiple cellular processes in development and regeneration. The most intriguing example of nuclear ...