Name: stab wound injury model of the adult optic tectum using zebrafish and medaka for the comparative analysis of regenerative capacity
Uploaded: 2022-02-10T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stab Wound Injury Model of the Adult Optic Tectum Using Zebrafish and Medaka for the Comparative Analysis of Regenerative Capacity at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل JSPS KAKENHI رقم المنحة 18K14824 و 21K15195 ومنحة داخلية من AIST ، اليابان.

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية في المعهد الوطني للعلوم والتكنولوجيا الصناعية المتقدمة. تم الحفاظ على الزرد والميداكا وفقا للإجراءات القياسية28.
1. إصابة جرح طعنة في القفص البصري للبالغين
<ol><li...

<ol>
	<li>Becker, T., Wullimann, M. F., Becker, C. G., Bernhardt, R. R., Schachner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+regrowth+after+spinal+cord+transection+in+adult+zebrafish.">Axonal regrowth after spinal cord transection in adult zebrafish.</a> Journal of Comparative Neurology. 377 (4), 577-595 (1997).</li><li>Raymond, P. A., Barthel, L. K., Bernardos, R. L., Perkowski, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+retinal+stem+cells+and+their+niches+in+adult+zebrafish.">Molecular characterization of retinal stem cells and their niches in adult zebrafish.</a> BMC Developmental Biology. 6, 36 (2006).</li><li>M&#228;rz, M., Schmidt, R., Rastegar, S., Str&#228;hle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+response+following+stab+injury+in+the+adult+zebrafish+telencephalon.">Regenerative response following stab injury in the adult zebrafish telencephalon.</a> Developmental Dynamics. 240 (9), 2221-2231 (2011).</li><li>Kang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+tissue+repair+by+regeneration+enhancer+elements.">Modulation of tissue repair by regeneration enhancer elements.</a> Nature. 532 (7598), 201-206 (2016).</li><li>Sim&#245;es, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+directly+contribute+collagen+to+scar+formation+during+zebrafish+heart+regeneration+and+mouse+heart+repair.">Macrophages directly contribute collagen to scar formation during zebrafish heart regeneration and mouse heart repair.</a> Nature Communications. 11 (1), 600 (2020).</li><li>Hoang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+regulatory+networks+controlling+vertebrate+retinal+regeneration.">Gene regulatory networks controlling vertebrate retinal regeneration.</a> Science. 370 (6519), (2020).</li><li>Alunni, A., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+view+of+regenerative+neurogenesis+in+vertebrates.">A comparative view of regenerative neurogenesis in vertebrates.</a> Development. 143 (5), 741-753 (2016).</li><li>Diotel, N., L&#252;bke, L., Str&#228;hle, U., Rastegar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+and+distinct+features+of+adult+neurogenesis+and+regeneration+in+the+telencephalon+of+zebrafish+and+mammals.">Common and distinct features of adult neurogenesis and regeneration in the telencephalon of zebrafish and mammals.</a> Frontiers in Neuroscience. 14, 568930 (2020).</li><li>Labusch, M., Mancini, L., Morizet, D., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+and+divergent+features+of+adult+neurogenesis+in+zebrafish.">Conserved and divergent features of adult neurogenesis in zebrafish.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 525 (2020).</li><li>Ito, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+reparative+phenotypes+between+zebrafish+and+medaka+after+cardiac+injury.">Differential reparative phenotypes between zebrafish and medaka after cardiac injury.</a> Developmental Dynamics. 243 (9), 1106-1115 (2014).</li><li>Lai, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+analyses+in+zebrafish+and+medaka+reveal+that+harnessing+the+immune+response+promotes+cardiac+regeneration.">Reciprocal analyses in zebrafish and medaka reveal that harnessing the immune response promotes cardiac regeneration.</a> eLife. 6, 25605 (2017).</li><li>Lust, K., Wittbrodt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activating+the+regenerative+potential+of+M&#252;ller+glia+cells+in+a+regeneration-deficient+retina.">Activating the regenerative potential of M&#252;ller glia cells in a regeneration-deficient retina.</a> eLife. 7, 32319 (2018).</li><li>Shimizu, Y., Kawasaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regenerative+capacity+of+the+optic+tectum+of+adult+medaka+and+zebrafish.">Differential regenerative capacity of the optic tectum of adult medaka and zebrafish.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 686755 (2021).</li><li>Adolf, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+and+acquired+features+of+adult+neurogenesis+in+the+zebrafish+telencephalon.">Conserved and acquired features of adult neurogenesis in the zebrafish telencephalon.</a> Developmental Biology. 295 (1), 278-293 (2006).</li><li>Grandel, H., Kaslin, J., Ganz, J., Wenzel, I., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurogenesis+in+the+adult+zebrafish+brain:+origin,+proliferation+dynamics,+migration+and+cell+fate.">Neural stem cells and neurogenesis in the adult zebrafish brain: origin, proliferation dynamics, migration and cell fate.</a> Developmental Biology. 295 (1), 263-277 (2006).</li><li>Alunni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+neural+stem+cells+in+the+medaka+optic+tectum+proliferation+zones.">Evidence for neural stem cells in the medaka optic tectum proliferation zones.</a> Developmental Neurobiology. 70 (10), 693-713 (2010).</li><li>Kuroyanagi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+zones+in+adult+medaka+(Oryzias+latipes)+brain.">Proliferation zones in adult medaka (Oryzias latipes) brain.</a> Brain Research. 1323, 33-40 (2010).</li><li>Ito, Y., Tanaka, H., Okamoto, H., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+neural+stem+cells+and+their+progeny+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum.">Characterization of neural stem cells and their progeny in the adult zebrafish optic tectum.</a> Developmental Biology. 342 (1), 26-38 (2010).</li><li>Shimizu, Y., Ueda, Y., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signaling+regulates+proliferation+and+differentiation+of+radial+glia+in+regenerative+processes+after+stab+injury+in+the+optic+tectum+of+adult+zebrafish.">Wnt signaling regulates proliferation and differentiation of radial glia in regenerative processes after stab injury in the optic tectum of adult zebrafish.</a> Glia. 66 (7), 1382-1394 (2018).</li><li>Ueda, Y., Shimizu, Y., Shimizu, N., Ishitani, T., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+sonic+hedgehog+and+notch+signaling+in+regenerative+neurogenesis+in+adult+zebrafish+optic+tectum+after+stab+injury.">Involvement of sonic hedgehog and notch signaling in regenerative neurogenesis in adult zebrafish optic tectum after stab injury.</a> Journal of Comparative Neurology. 526 (15), 2360-2372 (2018).</li><li>Kiyooka, M., Shimizu, Y., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+deacetylase+inhibition+promotes+regenerative+neurogenesis+after+stab+wound+injury+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum.">Histone deacetylase inhibition promotes regenerative neurogenesis after stab wound injury in the adult zebrafish optic tectum.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 529 (2), 366-371 (2020).</li><li>Shimizu, Y., Kawasaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+acetyltransferase+EP300+regulates+the+proliferation+and+differentiation+of+neural+stem+cells+during+adult+neurogenesis+and+regenerative+neurogenesis+in+the+zebrafish+optic+tectum.">Histone acetyltransferase EP300 regulates the proliferation and differentiation of neural stem cells during adult neurogenesis and regenerative neurogenesis in the zebrafish optic tectum.</a> Neuroscience Letters. 756, 135978 (2021).</li><li>Shimizu, Y., Kiyooka, M., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analyses+reveal+IL6/Stat3+signaling+involvement+in+radial+glia+proliferation+after+stab+wound+injury+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum.">Transcriptome analyses reveal IL6/Stat3 signaling involvement in radial glia proliferation after stab wound injury in the adult zebrafish optic tectum.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 668408 (2021).</li><li>Lindsey, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midbrain+tectal+stem+cells+display+diverse+regenerative+capacities+in+zebrafish.">Midbrain tectal stem cells display diverse regenerative capacities in zebrafish.</a> Scientific Reports. 9 (1), 4420 (2019).</li><li>Yu, S., He, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+cell-cycle+entry+and+cell-state-dependent+fate+outputs+of+injury-reactivated+tectal+radial+glia+in+zebrafish.">Stochastic cell-cycle entry and cell-state-dependent fate outputs of injury-reactivated tectal radial glia in zebrafish.</a> eLife. 8, 48660 (2019).</li><li>Bisese, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+transcriptome+response+of+the+midbrain/diencephalon+to+injury+in+the+adult+mummichog+(Fundulus+heteroclitus).">The acute transcriptome response of the midbrain/diencephalon to injury in the adult mummichog (Fundulus heteroclitus).</a> Molecular Brain. 12 (1), 119 (2019).</li><li>Schmidt, R., Beil, T., Str&#228;hle, U., Rastegar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stab+wound+injury+of+the+zebrafish+adult+telencephalon:+a+method+to+investigate+vertebrate+brain+neurogenesis+and+regeneration.">Stab wound injury of the zebrafish adult telencephalon: a method to investigate vertebrate brain neurogenesis and regeneration.</a> Journal of Visualized Experiments. (4), e51753 (2014).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio) 5th ed. , (2007).</li><li>Kaslin, J., Kroehne, V., Ganz, J., Hans, S., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+of+neuroepithelial-like+and+radial+glia-like+progenitor+cells+in+cerebellar+regeneration.">Distinct roles of neuroepithelial-like and radial glia-like progenitor cells in cerebellar regeneration.</a> Development. 144 (8), 1462-1471 (2017).</li><li>Curado, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+targeted+cell+ablation+in+zebrafish:+a+new+tool+for+regeneration+studies.">Conditional targeted cell ablation in zebrafish: a new tool for regeneration studies.</a> Developmental Dynamics. 236 (4), 1025-1035 (2007).</li><li>Shimizu, Y., Ito, Y., Tanaka, H., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radial+glial+cell-specific+ablation+in+the+adult+zebrafish+brain.">Radial glial cell-specific ablation in the adult zebrafish brain.</a> Genesis. 53 (7), 431-439 (2015).</li><li>Godoy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+neurons+regenerate+following+chemogenetic+ablation+in+the+olfactory+bulb+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Dopaminergic neurons regenerate following chemogenetic ablation in the olfactory bulb of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Scientific Reports. 10 (1), 12825 (2020).</li><li>Sawahata, M., Izumi, Y., Akaike, A., Kume, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+brain+ischemia-reperfusion+model+induced+by+hypoxia-reoxygenation+using+zebrafish+larvae.">In vivo brain ischemia-reperfusion model induced by hypoxia-reoxygenation using zebrafish larvae.</a> Brain Research Bulletin. 173, 45-52 (2021).</li></ol>

هنا يتم وصف مجموعة من الطرق التي يمكن استخدامها للحث على إصابات جرح الطعنات في القفص البصري باستخدام إبرة لتسهيل تقييم انتشار RGC والتمايز بعد إصابة الدماغ. جروح الطعنات بوساطة الإبرة هي طريقة بسيطة وفعالة يمكن تطبيقها على العديد من العينات التجريبية باستخدام مجموعة قياسية من الأدوات. تم ?...

الزرد (Danio rerio) لديها قدرة متزايدة على تجديد الجهاز العصبي المركزي (CNS) مقارنة بالثديياتالأخرى 1،2،3. في الآونة الأخيرة ، لفهم الآليات الجزيئية الكامنة وراء هذه القدرة التجديدية المتزايدة بشكل أفضل ، تم إجراء تحليلات مقارنة لتجديد الأنسجة باستخدام تقنية تسلسل الجيل التالي4،5،6. تختلف هياكل الدماغ في الزرد ورباعيات الأرجل تماما7،8،9. وهذا يعني أنه تم تطوير العديد من نماذج إصابات الدماغ باستخدام أسماك صغيرة ذات هياكل دماغية وخصائص بيولوجية مماثلة لتسهيل التحقيق في الآليات الجزيئية الأساسية التي تساهم في هذه القدرة التجديدية المتزايدة.
بالإضافة إلى ذلك ، medaka (Oryzias latipes) هو مختبر شهير ذو قدرة منخفضة على تجديد القلب والخلايا العصبية10،11،12،13 مقارنة بسمك الزرد. يمتلك الزرد والميداكا هياكل دماغية ومنافذ مماثلة للخلايا الجذعية العصبية البالغة (NSCs)14،15،16،17. في الزرد والميداكا ، يشتمل القفص البصري على نوعين من NSCs ، الخلايا الجذعية الشبيهة بالظهارة العصبية والخلايا الدبقية الشعاعية (RGCs)15,18. تم تطوير إصابة جرح طعنة للقفص البصري لسمك الزرد البالغ سابقا ، وتم استخدام هذا النموذج للتحقيق في الآليات الجزيئية التي تنظم تجديد الدماغ في هذه الحيوانات19،20،21،22،23. هذا النموذج إصابة طعنة الزرد الشباب البالغين الناجم عن تكوين الخلايا العصبية التجديدية من RGCs19،24،25. إصابة جرح الطعنة هذه في القفص البصري هي طريقة قوية وقابلة للتكرار 13،19،20،21،22،23،24،25. عندما تم تطبيق نفس نموذج الإصابة على medaka للبالغين ، تم الكشف عن القدرة العصبية المنخفضة ل RGCs في medaka optic tectum من خلال التحليل المقارن لانتشار RGC والتمايز بعد الإصابة13.
كما تم تطوير نماذج إصابة جرح الطعنات في القفص البصري في نماذج المومياوات26 ، ولكن لم يتم توثيق تفاصيل إصابة القفص جيدا عند مقارنتها بإصابة الدماغ27. تسمح إصابة جرح الطعنة في القفص البصري باستخدام الزرد والميداكا بالتحقيق في الاستجابات الخلوية التفاضلية والتعبير الجيني بين الأنواع ذات القدرة التفاضلية على التجدد. يصف هذا البروتوكول كيفية إجراء إصابة جرح طعنة في القفص البصري باستخدام إبرة الحقن. يمكن تطبيق هذه الطريقة على الأسماك الصغيرة مثل الزرد و medaka. يتم شرح عمليات تحضير العينات للتحليل النسيجي والانتشار الخلوي وتحليل التمايز باستخدام الكيمياء الهيستولوجية المناعية الفلورية والأقسام المبردة هنا.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 mL syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS-10ESZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1M Tris-HCl (pH 9.0)</td>
			<td>NIPPON GENE</td>
			<td>314-90381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needle</td>
			<td>Dentronics</td>
			<td>HS-2739A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde Phosphate Buffer Solution</td>
			<td>Wako</td>
			<td>163-20145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum block</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>115 x 80 x 37 mm (W x D x H) is enough size to freeze 6 cryomolds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-BLBP</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ABN14</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-BrdU</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab1893</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-HuC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21271</td>
			<td>1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PCNA</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-56</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brmodeoxyuridine</td>
			<td>Wako</td>
			<td>023-15563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope C1 plus</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomold</td>
			<td>Sakura Finetek Japan</td>
			<td>4565</td>
			<td>10 x 10 x 5 mm (W x D x H)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM1960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Danio rerio WT strains RW</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension tube</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SF-ET3520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount (TM) Aqueous Mounting Medium, for use with fluorescent dye-stained tissues</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>F4680-25ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>DUMONT</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor Plus 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A32723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 546</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342 solution</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>23491-52-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>080-01066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubation Chamber for 10 slides Dark Orange</td>
			<td>COSMO BIO CO., LTD.</td>
			<td>10DO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAS coat sliding glass</td>
			<td>Matsunami glass</td>
			<td>MAS-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro cover glass</td>
			<td>Matsunami glass</td>
			<td>C024451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ745T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal horse serum blocking solution</td>
			<td>VECTOR LABRATORIES</td>
			<td>S-2000-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T Compound</td>
			<td>Sakura Finetek Japan</td>
			<td>83-1824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oryzias latipes WT strains Cab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAP Pen Super-Liquid Blocker</td>
			<td>DAIDO SANGYO</td>
			<td>PAP-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS) Tablets, pH 7.4</td>
			<td>TaKaRa</td>
			<td>T9181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam tray</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>100 x 100 x 10 mm (W x D x H) styrofoam sheet is available as tray</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Wako</td>
			<td>196-00015</td>
			<td>30 % (w/v) Sucrose in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (MS-222)</td>
			<td>nacarai tesque</td>
			<td>14805-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trisodium Citrate Dihydrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>191-01785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Wako</td>
			<td>04605-250</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stab wound injury model of the adult optic tectum using zebrafish and medaka for the comparative analysis of regenerative capacity

في حين أن الزرد لديه قدرة فائقة على تجديد الجهاز العصبي المركزي (CNS) ، فإن medaka لديه قدرة أقل على تجديد الجهاز العصبي المركزي. تم تطوير نموذج إصابة الدماغ في القفص البصري البالغ لسمك الزرد والميداكا وتم إجراء تحليلات نسيجية وجزيئية مقارنة لتوضيح الآليات الجزيئية التي تنظم القدرة التجديدية العالية لهذا النسيج عبر هذه الأنواع من الأسماك. هنا يتم تقديم نموذج إصابة جرح الطعنة للصمت البصري البالغ باستخدام إبرة وتحليلات نسيجية لتكاثر وتمايز الخلايا الجذعية العصبية (NSCs). تم إدخال إبرة يدويا في المنطقة الوسطى من القفص البصري ، ثم تم ترشيح الأسماك داخل القلب ، وتم تشريح أدمغتها. ثم تم تشريح هذه الأنسجة بالتبريد وتقييمها باستخدام تلطيخ مناعي ضد علامات انتشار وتمايز NSC المناسبة. يوفر نموذج إصابة القفص هذا نتائج قوية وقابلة للتكرار في كل من الزرد والميداكا ، مما يسمح بمقارنة استجابات NSC بعد الإصابة. هذه الطريقة متاحة للأسماك الصغيرة ، بما في ذلك الزرد ، والميداكا ، وسمك الكيلي الأفريقي ، وتمكننا من مقارنة قدرتها على التجدد والتحقيق في الآليات الجزيئية الفريدة.

تؤدي إصابة جرح الطعنة في القفص البصري باستخدام إدخال إبرة في نصف الكرة الأيمن (الشكل 1 والشكل 4 أ والشكل 5 أ) إلى استجابات خلوية مختلفة ، بما في ذلك تكاثر الخلايا الدبقية الشعاعية (RGC) وتوليد الخلايا العصبية حديثي الولادة. وبالمثل ، تم استخدام ?...

Watch this Scientific Journal Video about Stab Wound Injury Model of the Adult Optic Tectum Using Zebrafish and Medaka for the Comparative Analysis of Regenerative Capacity at JoVE.com

Stab Wound Injury Model of the Adult Optic Tectum Using Zebrafish and Medaka for the Comparative Analysis of Regenerative Capacity

تم وصف نموذج إصابة الدماغ الميكانيكية في الزرد البالغ للتحقيق في الآليات الجزيئية التي تنظم قدرتها العالية على التجدد. تشرح الطريقة إنشاء إصابة جرح طعنة في القفص البصري لأنواع متعددة من الأسماك الصغيرة لتقييم الاستجابات التجديدية باستخدام التلوين المناعي الفلوري.

نموذج إصابة جرح الطعنة للتكتوم البصري البالغ باستخدام الزرد و Medaka للتحليل المقارن للقدرة التجديدية

While zebrafish have a superior capacity to regenerate their central nervous system (CNS), medaka has a lower CNS regenerative capacity. A brain injury ...

إصابة جرح الطعنة هي طريقة إصابة ميكانيكية تحفز الاستئصال الخلوي غير المحدد. تسهل هذه الطريقة تقييم انتشار RGC والتمايز بعد إصابة الدماغ. إصابة جرح الطعنة بوساطة الإبرة هي طريقة بسيطة يتم تنفيذها بكفاءة للحث على إصابة الدماغ.يمكن تطبيق هذه الطريقة على العديد من العينات التجريبية باستخدام مجموعة قياسية من الأدوات. تم توضيح القدرة التجديدية لسمك الزرد باستخدام نموذج إصابة جرح الطعنة. تساهم رؤى جديدة في الآلية الجزيئية التي تنظم تجديد الخلايا العصبية في العلاج التجديدي في الجهاز العصبي المركزي.ابدأ بوضع سمكة الزرد البالغة المخدرة أو ميداكا على صينية الستايروفوم. ثبت السمكة في وضع مستقيم بين إبرتين بقياس 30 يتم إدخالهما عموديا في الستايروفوم. أمسك جسم السمكة لمنع رأس السمكة من الحركة ، ثم أدخل إبرة قياس 30 عموديا عبر الجمجمة في المنطقة الإنسية لأحد كرات القفص البصري.بعد ذلك ، قم بنقل الأسماك المصابة إلى حوض للأسماك بمياه منشأة الأسماك العذبة. بمجرد أن تتعافى الأسماك تماما من التخدير ، انقل الخزان إلى نظام التكاثر. ضع مناشف ورقية على صينية الستايروفوم لوضع السمك المخدر.ثم ثبت جسم السمكة في مكانه عن طريق إدخال إبرتين من عيار 30 عموديا على جانبي الزعنفة الشرجية. بمجرد وضع السمكة ، قم بعمل شق بطني من فتحة الشرج إلى القلب. حافظ على القلب مرئيا عن طريق إدخال إبرتين قياس 30 على كل جانب.ثم استخدم طرف الملقط لإزالة الطبقة الظهارية الفضية. أدخل إبرة قياس 30 في البطين ، مع إبقاء الشطبة لأعلى ، وقم بعمل شق في الأذين باستخدام الملقط. بعد ذلك ، ادفع PBS إلى الأذين عن طريق الضغط لأسفل على المحقنة لطرد الدم من الأذين.عندما يتم تصريف الدم وتتحول الخياشيم إلى اللون الأبيض ، أوقف نضح PBS. في وقت لاحق ، قم بإزالة الإبر التي تثبت جسم السمكة في مكانها ، وقم بتثبيت الجانب البطني للأسماك لأسفل. بعد قطع الحبل الشوكي وإزالة الجمجمة من القفص البصري والدماغ الدماغي ، قم بقطع الأعصاب البصرية وتشريح الدماغ.بعد ذلك ، انقل الأدمغة إلى أنابيب سعة 1.5 ملليلتر مع ملليلتر واحد من 4٪ بارافورمالدهيد في برنامج تلفزيوني ، لإصلاحه طوال الليل عند أربع درجات مئوية. بعد غسل الأدمغة الثابتة ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني لمدة خمس دقائق لكل منها ، انقل الأدمغة إلى أنابيب سعة 1.5 ملليلتر مع ملليلتر واحد من وزن 30٪ من حجم السكروز في برنامج تلفزيوني كواقي للتبريد ، واحتضانها طوال الليل عند أربع درجات مئوية. قم بإعداد مركب التضمين عن طريق الجمع بين 30٪ سكروز مع 30 ملليلتر من درجة حرارة القطع المثلى ، أو OCT ، مركب ، وتخزين المركب عند أربع درجات مئوية.لتبريد cryomold مرة واحدة ، احتضن كتلة من الألومنيوم طوال الليل عند 80 درجة مئوية تحت الصفر ، وضع الكتلة المبردة مسبقا في صندوق الستايروفوم بغطاء لمنع الاحترار. بالنسبة للأقسام الإكليلية ، قم بتضمين الدماغ المقطعي في cryomold عن طريق ضبط الاتجاه باستخدام ملقط تحت المجهر. بعد ذلك ، ضع cryomold على كتلة الألومنيوم المبردة مسبقا في صندوق الستايروفوم ، واترك مركب OCT يتجمد ويصبح أبيض.عندما يتجمد المركب ، ضع دائرة صغيرة من مركب OCT على قرص عينة قبل تركيب كتلة التبريد على قرص العينة. عن طريق وضع قرص العينة في cryostat ، قم بتجميد مركب OCT. ثم ضع قرص العينة على رأس العينة في جهاز التبريد.بعد ضبط اتجاه كتلة التبريد ، قم بقص OCT لإزالة أي مناطق إضافية. قم بقص المقاطع التسلسلية بسمك 14 ميكرومتر من خلال القفص البصري بالكامل باستخدام cryostat ، وقم بتخزين الشرائح عند 25 درجة مئوية تحت الصفر. تم تقييم انتشار الخلايا الدبقية الشعاعية ، أو RGC ، في أنسجة المخ من الزرد.كانت معظم RGCs تتكاثر مستضد الخلية سلبيا في نصف الكرة غير المصاب المقابل. في يومين بعد الإصابة ، تم تحفيز انتشار RGC على الجانب المصاب من medaka tectum. بعد إصابة الدماغ ، تم تقييم نسب الخلايا وتمايز RGC باستخدام برومودوكيوريدين ، أو BrdU ، وضع العلامات.يظهر التحليل التمثيلي الخلايا العصبية حديثي الولادة في سبعة أيام بعد الإصابة في الزرد المصاب و medaka. واحدة من الخطوات الحاسمة في إصابات جرح الطعنات هي إدخال الإبرة يدويا. الإصابة المستمرة ضرورية لخلق نتائج قابلة للتكرار.الأصباغ الفلورية فعالة كعلامات للجرح. يشير مدى انتشار صبغة الفلورسنت إلى موقع وعمق إصابة جرح الطعنة. ومن المحتمل أن تتكيف هذه التقنية مع أنواع الأسماك الصغيرة الأخرى، ويسمح التكيف مع الميداكا بإجراء مقارنات بين القدرة على التجدد.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

التجديد الكلى في اسماك الزرد الكبار قبل جنتاميسين المستحثة الإصابات

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

تحليل الزرد اليرقات الهيكل العظمي النزاهة العضلات مع ايفانز الأزرق صبغ

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Salinity-dependent Toxicity Assay of Silver Nanocolloids Using Medaka Eggs

التي تعتمد على ملوحة سمية الفحص من الفضة Nanocolloids عن طريق الميداكا البيض

Salinity is an important characteristic of the aquatic environment. For aquatic organisms it defines the habitats of freshwater, brackish water, and ...

Isolation and Expansion of Adult Canine Hippocampal Neural Precursors

العزل والتوسع في تعليم الكبار الناب الحصين العصبية السلائف

The rate of neurogenesis within the adult hippocampus has been shown to vary across mammalian species. The canine hippocampus, demonstrating a structural ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

في فيفو التصوير التعبير المعدلة وراثيا الجينات في الفرد الشبكية الأسلاف في الجنين اسماك الزرد همي لدراسة الخلية التأثيرات Nonautonomous

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

A Seminiferous Tubule Squash Technique for the Cytological Analysis of Spermatogenesis Using the Mouse Model

تقنية إسكواش أنبوب سيمينيفيروس لتحليل الحيوانات المنوية باستخدام نموذج الماوس الخلوية

Meiotic progression in males is a process that requires the concerted action of a number of highly regulated cellular events. Errors occurring during ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

التصور للنشاط الكهربائي الخلوية في الزرد الأجنة في وقت مبكر، والأورام

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

نماذج الإصابة الزرد الكبار دراسة آثار البردنيزولون في تجديد أنسجة العظام

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

Visualization of Tangential Cell Migration in the Developing Chick Optic Tectum

التصور للهجرة الخلية عرضية في تيكتوم الألياف الضوئية النامية في الفرخ

Time-lapse imaging is a powerful method to analyze migrating cell behavior. After fluorescent cell labeling, the movement of the labeled cells in culture ...

Mapping the Emergent Spatial Organization of Mammalian Cells using Micropatterns and Quantitative Imaging

رسم خرائط التنظيم المكاني الناشئ للخلايا الثديية باستخدام الأنماط الدقيقة والتصوير الكمي

A fundamental goal in biology is to understand how patterns emerge during development. Several groups have shown that patterning can be achieved in vitro ...