Name: a robust discovery platform for the identification of novel mediators of melanoma metastasis
Uploaded: 2022-03-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis at JoVE.com

NYU Langone Health'teki İleri Araştırma Teknolojileri Bölümü'ne (DART) ve özellikle Perlmutter Kanser Merkezi Destek Hibe / NCI 5P30CA016087 tarafından kısmen desteklenen Deneysel Patoloji Araştırma Laboratuvarı, Genom Teknoloji Merkezi, Sitometri ve Hücre Sıralama Laboratuvarı, Klinik Öncesi Görüntüleme Çekirdeği'ne teşekkür ederiz. NYU Disiplinlerarası Melanom İşbirliği Grubu'na (PI: Dr. Iman Osman), IRB onaylı protokoller (Universal Consent study #s16-00122 ve Interdisciplinary Melanom Cooperative Group study #10362) aracılığıyla elde edilen hasta kaynaklı melanom kısa süreli kültürlerine+ (10-230BM ve 12-273BM) erişim sağladığı için teşekkür ederiz. 113/6-4L ve 131/4-5B1 melanom hücre hatları* sağladığı için Dr. Robert Kerbel'e (Toronto Üniversitesi) ve WM 4265-2, WM 4257s-1, WM 4257-2 melanom kısa süreli kültürleri sağladığı için Dr. Meenhard Herlyn'e (Wistar Enstitüsü) teşekkür ederiz**. E.H., NIH / NCI R01CA243446, P01CA206980, Amerikan Kanser Derneği-Melanom Araştırma İttifakı Ekibi Bilim Ödülü ve bir NIH Melanom SPORE (NCI P50 CA225450; PI: I.O.). Şekil 1, Biorender.com ile oluşturulmuştur.

NOT: Aşağıdaki protokolde yer alan hayvan prosedürleri, New York Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Tüm prosedürler, Uluslararası Laboratuvar Hayvanları Bakımı Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği (AAALAC) tarafından onaylanan tesislerde yürütülmektedir. Şekil 1, genel deneysel yaklaşımı göstermektedir.
1. Hasta kaynaklı melanom kısa süreli kültürler (STC'ler)</stron...

<ol>
	<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Cancer+Statistics+2020:+GLOBOCAN+Estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Adler, N. R., Haydon, A., McLean, C. A., Kelly, J. W., Mar, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+pathways+in+patients+with+cutaneous+melanoma.">Metastatic pathways in patients with cutaneous melanoma.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 30 (1), 13-27 (2017).</li><li>Platz, A., Egyhazi, S., Ringborg, U., Hansson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cutaneous+melanoma;+a+review+of+NRAS+and+BRAF+mutation+frequencies+in+relation+to+histogenetic+subclass+and+body+site.">Human cutaneous melanoma; a review of NRAS and BRAF mutation frequencies in relation to histogenetic subclass and body site.</a> Molecular Oncology. 1 (4), 395-405 (2008).</li><li>Alonso, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+study+in+melanoma+identifies+epithelial-mesenchymal+transition+as+a+major+determinant+of+metastasis.">A high-throughput study in melanoma identifies epithelial-mesenchymal transition as a major determinant of metastasis.</a> Cancer Research. 67 (7), 3450-3460 (2007).</li><li>Rowe, C. J., Khosrotehrani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+biological+determinants+of+melanoma+progression:+Should+all+be+considered+for+clinical+management.">Clinical and biological determinants of melanoma progression: Should all be considered for clinical management.</a> Australasian Journal of Dermatology. 57 (3), 175-181 (2016).</li><li>Plebanek, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-metastatic+cancer+exosomes+induce+immune+surveillance+by+patrolling+monocytes+at+the+metastatic+niche.">Pre-metastatic cancer exosomes induce immune surveillance by patrolling monocytes at the metastatic niche.</a> Nature Communications. 8 (1), 1319 (2017).</li><li>Orgaz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+pigment+epithelium-derived+factor+enables+migration,+invasion+and+metastatic+spread+of+human+melanoma.">Loss of pigment epithelium-derived factor enables migration, invasion and metastatic spread of human melanoma.</a> Oncogene. 28 (47), 4147-4161 (2009).</li><li>Ladhani, O., Sanchez-Martinez, C., Orgaz, J. L., Jimenez, B., Volpert, O. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pigment+epithelium-derived+factor+blocks+tumor+extravasation+by+suppressing+amoeboid+morphology+and+mesenchymal+proteolysis.">Pigment epithelium-derived factor blocks tumor extravasation by suppressing amoeboid morphology and mesenchymal proteolysis.</a> Neoplasia. 13 (7), 633-642 (2011).</li><li>Ju, R. J., Stehbens, S. J., Haass, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+melanoma+cell-stroma+interaction+in+cell+motility,+invasion,+and+metastasis.">The role of melanoma cell-stroma interaction in cell motility, invasion, and metastasis.</a> Frontiers in Medicine - Dermatology. 5, 307 (2018).</li><li>Wiley, H. E., Gonzalez, E. B., Maki, W., Wu, M. T., Hwang, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+CC+chemokine+receptor-7+and+regional+lymph+node+metastasis+of+B16+murine+melanoma.">Expression of CC chemokine receptor-7 and regional lymph node metastasis of B16 murine melanoma.</a> Journal of the National Cancer Institute. 93 (21), 1638-1643 (2001).</li><li>Meier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+pathways+and+time+courses+in+the+orderly+progression+of+cutaneous+melanoma.">Metastatic pathways and time courses in the orderly progression of cutaneous melanoma.</a> British Journal of Dermatology. 147 (1), 62-70 (2002).</li><li>Turner, N., Ware, O., Bosenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+metastasis:+melanoma+and+other+cancers.">Genetics of metastasis: melanoma and other cancers.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 35 (5-6), 379-391 (2018).</li><li>Ubellacker, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+protects+metastasizing+melanoma+cells+from+ferroptosis.">Lymph protects metastasizing melanoma cells from ferroptosis.</a> Nature. 585 (7823), 113-118 (2020).</li><li>Cukierman, E., Pankov, R., Stevens, D. R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+cell-matrix+adhesions+to+the+third+dimension.">Taking cell-matrix adhesions to the third dimension.</a> Science. 294 (5547), 1708-1712 (2001).</li><li>Cunningham, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin-binding+protein+requirement+for+cortical+stability+and+efficient+locomotion.">Actin-binding protein requirement for cortical stability and efficient locomotion.</a> Science. 255 (5042), 325-327 (1992).</li><li>Unger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+carcinomas:+physiologically+relevant+3D+models+to+improve+anti-cancer+drug+development.">Modeling human carcinomas: physiologically relevant 3D models to improve anti-cancer drug development.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 79-80, 50-67 (2014).</li><li>Fong, E. L., Harrington, D. A., Farach-Carson, M. C., Yu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heralding+a+new+paradigm+in+3D+tumor+modeling.">Heralding a new paradigm in 3D tumor modeling.</a> Biomaterials. 108, 197-213 (2016).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+melanoma+cell+lines+by+their+mortal+malignancy+using+an+experimental+metastatic+model.">Characterization of mouse melanoma cell lines by their mortal malignancy using an experimental metastatic model.</a> Life Science. 70 (7), 791-798 (2002).</li><li>Meeth, K., Wang, J. X., Micevic, G., Damsky, W., Bosenberg, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+YUMM+lines:+a+series+of+congenic+mouse+melanoma+cell+lines+with+defined+genetic+alterations.">The YUMM lines: a series of congenic mouse melanoma cell lines with defined genetic alterations.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 29 (5), 590-597 (2016).</li><li>Koya, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibitor+vemurafenib+improves+the+antitumor+activity+of+adoptive+cell+immunotherapy.">BRAF inhibitor vemurafenib improves the antitumor activity of adoptive cell immunotherapy.</a> Cancer Research. 72 (16), 3928-3937 (2012).</li><li>Jenkins, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+murine+BRaf(V600E)+melanoma+cell+lines+with+sensitivity+to+PLX4032.">Multiple murine BRaf(V600E) melanoma cell lines with sensitivity to PLX4032.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 27 (3), 495-501 (2014).</li><li>Tuncer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SMAD+signaling+promotes+melanoma+metastasis+independently+of+phenotype+switching.">SMAD signaling promotes melanoma metastasis independently of phenotype switching.</a> The Journal of Clinical Investigation. 129 (7), 2702-2716 (2019).</li><li>Schwartz, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incipient+Melanoma+Brain+Metastases+Instigate+Astrogliosis+and+Neuroinflammation.">Incipient Melanoma Brain Metastases Instigate Astrogliosis and Neuroinflammation.</a> Cancer Research. 76 (15), 4359-4371 (2016).</li><li>Perez-Guijarro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodel+preclinical+platform+predicts+clinical+response+of+melanoma+to+immunotherapy.">Multimodel preclinical platform predicts clinical response of melanoma to immunotherapy.</a> Nature Medicine. 26 (5), 781-791 (2020).</li><li>Krepler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Comprehensive+Patient-Derived+Xenograft+Collection+Representing+the+Heterogeneity+of+Melanoma.">A Comprehensive Patient-Derived Xenograft Collection Representing the Heterogeneity of Melanoma.</a> Cell Reports. 21 (7), 1953-1967 (2017).</li><li>Agrawal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systems+biology+approach+identifies+FUT8+as+a+driver+of+melanoma+metastasis.">A systems biology approach identifies FUT8 as a driver of melanoma metastasis.</a> Cell. 31 (6), 804-819 (2017).</li><li>Hanniford, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+silencing+of+CDR1as+drives+IGF2BP3-mediated+melanoma+invasion+and+metastasis.">Epigenetic silencing of CDR1as drives IGF2BP3-mediated melanoma invasion and metastasis.</a> Cancer Cell. 37 (1), 55-70 (2020).</li><li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PRMT5+control+of+cGAS/STING+and+NLRC5+pathways+defines+melanoma+response+to+antitumor+immunity.">PRMT5 control of cGAS/STING and NLRC5 pathways defines melanoma response to antitumor immunity.</a> Science Translational Medicine. 12 (551), (2020).</li><li>de Miera, E. V., Friedman, E. B., Greenwald, H. S., Perle, M. A., Osman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+five+new+melanoma+low+passage+cell+lines+representing+the+clinical+and+genetic+profile+of+their+tumors+of+origin.">Development of five new melanoma low passage cell lines representing the clinical and genetic profile of their tumors of origin.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 25 (3), 395-397 (2012).</li><li>Morsi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+clinically+relevant+mouse+model+of+melanoma+brain+metastasis.">Development and characterization of a clinically relevant mouse model of melanoma brain metastasis.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 26 (5), 743-745 (2013).</li><li>Huynh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+vivo+microRNA+targeting+of+liver+metastasis.">Efficient in vivo microRNA targeting of liver metastasis.</a> Oncogene. 30 (12), 1481-1488 (2011).</li><li>Zou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+variables+that+affect+human+hepatocyte+AAV+transduction+in+liver+chimeric+mice.">Experimental variables that affect human hepatocyte AAV transduction in liver chimeric mice.</a> Molecular Therapy Methods and Clinical Development. 18, 189-198 (2020).</li><li>Kleffman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanoma-secreted+Amyloid+Beta+Suppresses+Neuroinflammation+and+Promotes+Brain+Metastasis.">Melanoma-secreted Amyloid Beta Suppresses Neuroinflammation and Promotes Brain Metastasis.</a> bioRxiv. , 854885 (2019).</li><li>Curtis, A., Calabro, K., Galarneau, J. R., Bigio, I. J., Krucker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+variations+of+skin+pigmentation+in+C57BL/6+mice+affect+optical+bioluminescence+quantitation.">Temporal variations of skin pigmentation in C57BL/6 mice affect optical bioluminescence quantitation.</a> Molecular Imaging and Biology. 13 (6), 1114-1123 (2011).</li><li>Sil, P., Wong, S. W., Martinez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=More+than+skin+deep:+autophagy+is+vital+for+skin+barrier+function.">More than skin deep: autophagy is vital for skin barrier function.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1376 (2018).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+CRISPR+screen+in+a+mouse+model+of+tumor+growth+and+metastasis.">Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis.</a> Cell. 160 (6), 1246-1260 (2015).</li><li>Hart, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+CRISPR+screens+reveal+fitness+genes+and+genotype-specific+cancer+liabilities.">High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities.</a> Cell. 163 (6), 1515-1526 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+essential+genes+in+the+human+genome.">Identification and characterization of essential genes in the human genome.</a> Science. 350 (6264), 1096-1101 (2015).</li><li>Edgar, R., Domrachev, M., Lash, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Expression+Omnibus:+NCBI+gene+expression+and+hybridization+array+data+repository.">Gene Expression Omnibus: NCBI gene expression and hybridization array data repository.</a> Nucleic Acids Research. 30 (1), 207-210 (2002).</li><li>Lappalainen, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+European+Genome-phenome+Archive+of+human+data+consented+for+biomedical+research.">The European Genome-phenome Archive of human data consented for biomedical research.</a> Nature Genetics. 47 (7), 692-695 (2015).</li><li>Cerami, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cBio+cancer+genomics+portal:+an+open+platform+for+exploring+multidimensional+cancer+genomics+data.">The cBio cancer genomics portal: an open platform for exploring multidimensional cancer genomics data.</a> Cancer Discovery. 2 (5), 401-404 (2012).</li><li>Grossman, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+shared+vision+for+cancer+genomic+data.">Toward a shared vision for cancer genomic data.</a> New England Journal of Medicine. 375 (12), 1109-1112 (2016).</li></ol>

Bu teknik raporun amacı, melanom metastazındaki potansiyel aktörlerin araştırılması için standartlaştırılmış, yukarıdan aşağıya bir iş akışı sunmaktır. İn vivo deneyler maliyetli ve zaman alıcı olabileceğinden, verimliliği en üst düzeye çıkarma ve elde edilen bilgilerin değerini artırma stratejileri çok önemlidir.
Aynı deneydeki bulguları çapraz doğrulamak için tamamlayıcı yaklaşımların kullanılması zorunludur. Örneğin, hem NuMA immüno...

Metastatik melanom ile ilişkili yüksek mortalite, dünya çapında melanom insidansının artmasıyla birleştiğinde1 (2025 yılına kadar tahminen% 7.86'lık bir artış) yeni tedavi yaklaşımları gerektirmektedir. Hedef keşfindeki ilerlemeler, oldukça karmaşık bir süreç olan tekrarlanabilir metastaz modellerine dayanmaktadır. Metastatik kaskadın adımları boyunca, melanom hücreleri bağışıklık sisteminden kaçmak ve uzak dokuların kolonizasyonunu sağlamak için sayısız engelin üstesinden gelmelidir2. Melanom hücrelerinin esnekliği ve uyarlanabilirliği, yüksek genetik mutasyon yükü 3 ve nöral tepe kökeni de dahil olmak üzere çok sayıda faktörden kaynaklanır ve bu da çok önemli fenotipik plastisite 3,4,5'i sağlar. Her adımda, transkripsiyonel programlar, metastaz yapan melanom hücrelerinin, bağışıklık sistemi6, hücre dışı ortam 7,8 ve temas ettikleri fizikselbariyerlerin hücresel mimarisini içeren mikro çevre ile çapraz konuşmadan gelen ipuçlarına dayanarak bir durumdan diğerine geçmesine izin verir. Örneğin, melanom hücreleri, önemli bağışıklık astarlayıcı tümör salgılanan faktörlerin ekspresyonunu azaltarak bağışıklık gözetimindenkaçarlar 6.
Çalışmalar, melanom hücrelerinin metastaz10 için uzak "hedef" organı hazırlamak için kemokinler ve sitokinler salgıladığı bir "premetastatik niş" tanımlamaktadır. Bu bulgular, metastatik melanom hücrelerinin organ tropizmi ve uzak dokulara erişmek için izledikleri anatomik yol hakkında önemli sorular ortaya çıkarmaktadır. İntravazasyondan sonra, melanom hücrelerinin lenfatikler (lenfatik yayılım) ve kan damarları (hematojen yayılım) yoluyla metastaz yaptıkları bilinmektedir2,11. Hastaların çoğu lokalize hastalık ile başvururken, olguların küçük bir alt kümesi uzak metastatik hastalık ile başvurmakta ve lenfatik yayılım göstermemektedir (negatif lenf nodu tutulumu)11, melanom için alternatif metastatik yolakların varlığını düşündürmektedir.
Metastatik bir bölgeyi kolonize ettiklerinde, melanom hücreleri epigenetik ve metabolik adaptasyonlara uğrar12,13. Yeni bölmelere erişmek ve istila etmek için, melanom hücreleri proteazlar 14 ve sitoiskelet modifikasyonları11,15 kullanır, bu da yeni konumlarına geçmelerini ve büyümelerini sağlar. Melanom hücrelerini hedeflemedeki zorluk, bu tür adaptasyonların karmaşıklığında ve sayısında yatmaktadır; Bu nedenle, alan mümkün olduğunca çok sayıda adımı ve uyarlamayı deneysel olarak yeniden yaratmak için çaba göstermelidir. Organoidler ve 3D kültürler16,17 gibi in vitro tahlillerdeki sayısız ilerlemeye rağmen, bu modeller sadece in vivo metastatik kaskadı tam olarak özetlememektedir.
Murin modelleri, tekrarlanabilirlik, teknik fizibilite ve insan hastalığının simülasyonu arasında bir denge kurarak değer göstermiştir. İntravasküler, ortopik ve heterotopik olarak implante edilmiş melanom hücreleri, hasta kaynaklı ksenogreftlerden veya kısa süreli kültürlerden bağışıklık sistemi baskılanmış veya insanlaştırılmış farelere metastatik melanomda hedef keşfinin bel kemiğini temsil eder. Bununla birlikte, bu sistemler genellikle metastaz üzerinde çok önemli bir biyolojik kısıtlamadan yoksundur: bağışıklık sistemi. Bu kısıtlamaya sahip olan sinjenik melanom metastazı modelleri bu alanda nispeten azdır. B16-F1018, YUMM hücre hatları ailesi 19, SM1 20, D4M3 21, RIM3 22veya daha yakın zamanda immünokompetan farelerde geliştirilen bu sistemler, RMS 23 veM1 (Mel114433), M3 (HCmel1274), M4 (B2905) 24 melanom hücre hatları dahil olmak üzere, melanom progresyonunda konakçı immün yanıtının karmaşık rolünün araştırılmasını kolaylaştırır.
Burada, melanom metastazı hedef tanımlaması için bir boru hattı sunulmaktadır. Melanom hasta kohortlarından üretilen artan ve daha büyük 'omik' veri kümeleri ile, en klinik vaat eden çalışmaların, büyük veri entegrasyonundan kaynaklanan çalışmalar olduğunu ve titiz fonksiyonel ve mekanik sorgulamaya yol açtığını varsayıyoruz25,26,27,28. Metastatik süreçteki potansiyel hedefleri incelemek için fare modellerini kullanarak, in vivo-spesifik olayları ve doku etkileşimlerini açıklayabilir, böylece klinik çeviri olasılığını artırabilir. Metastatik yükü ölçmek için birden fazla yöntem özetlenmiş ve herhangi bir deneyin sonuçları hakkında tamamlayıcı veriler sağlanmıştır. Çeşitli organlardaki tümörlerden tek hücreli izolasyon için bir protokol, metastatik hücrelerde gen ekspresyonunun tarafsız karakterizasyonuna yardımcı olmak için tanımlanmıştır, bu da tek hücreli veya toplu RNA diziliminden önce gelebilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >#15 Scapel Blade&#160;</td>
			<td >WPI</td>
			<td >500242</td>
			<td >For surgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >#3 Scapel Handle</td>
			<td >WPI</td>
			<td >500236</td>
			<td>For surgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 mL Tuberculin syringe, slip tip&#160;</td>
			<td >BD</td>
			<td >309626</td>
			<td>Injections</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10 mL syringe, slip tip&#160;</td>
			<td >BD</td>
			<td >301029</td>
			<td>Perfusion</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10% Formalin Sodium Buffered</td>
			<td >EK Industries</td>
			<td >4499-20L</td>
			<td>For perfusion/tissue fixative</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >15 mL Conical</td>
			<td >Corning&#160;</td>
			<td>430052</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >15 mL Conical Polypropylene Centrifuge Tubes</td>
			<td >Falcon</td>
			<td>352196</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >200 Proof Ethanol</td>
			<td >Deacon Labs</td>
			<td >04-355-223</td>
			<td>Histology</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >22G &#8211; 22mm needle</td>
			<td >BD</td>
			<td >305156</td>
			<td>Perfusion</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4-0 Vicryl Suture</td>
			<td >Ethicon</td>
			<td >J464G</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4% Carson&#39;s phosphate buffered paraformaldehyde&#160;</td>
			<td >EMS</td>
			<td >15733-10</td>
			<td>For perfusion/tissue fixative</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >40&#181;m</td>
			<td >Corning</td>
			<td >431750</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >5-0 Absorbable Suture&#160;</td>
			<td >Ethicon</td>
			<td >6542000</td>
			<td>Closure</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >50 mL Conical&#160;</td>
			<td >Corning&#160;</td>
			<td >430828</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >50mL Conical Polypropylene Centrifuge Tubes</td>
			<td >Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >7-0 Silk suture&#160;</td>
			<td >FST</td>
			<td >18020-70</td>
			<td>Ligature</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >70&#181;m</td>
			<td >Corning</td>
			<td >431751</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-fade mounting media&#160;&#160;</td>
			<td >Vector Labs</td>
			<td >H-1000-10</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Approximator applying Forceps, 10cm&#160;</td>
			<td >WPI</td>
			<td>14189</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Avance</td>
			<td >Bruker</td>
			<td >3 HD</td>
			<td>NMR Console&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Biospec 7030&#160;</td>
			<td >Bruker</td>
			<td >7030</td>
			<td>Micro MRI</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >BSA</td>
			<td >Bioreg</td>
			<td >A941</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Castroviejo suturing forceps, straight tips 5.5mm tying platform, 11cm&#160;</td>
			<td >WPI</td>
			<td>WP5025501</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Coplin Staining Jar</td>
			<td >Bel-Art&#160;</td>
			<td >F44208-1000</td>
			<td>Histology</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >D9542-1MG</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >dCas9-KRAB</td>
			<td >Addgene</td>
			<td >110820</td>
			<td>Genetic manipulation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DNase I</td>
			<td >NEB</td>
			<td >M0303L</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DPBS</td>
			<td >Corning</td>
			<td >21-030-CM</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Extra Sharp Uncoated Single Edge Blade</td>
			<td >GEM</td>
			<td >62-0167</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Extracellular Matrix Substrate&#160;</td>
			<td >Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>Consider the Growth Factor Reduced ( as alternative&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >FBS</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>SH30910.03</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fiji Image J</td>
			<td >Fiji Image J</td>
			<td >Software</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Goat anti-rabbit HRP conjugated multimer&#160;</td>
			<td >Thermo Fisher</td>
			<td >A16104</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Goat Serum</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >PCN5000</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HBSS</td>
			<td >Corning</td>
			<td >21-020-CV</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hematoxylin&#160;</td>
			<td>Richard-Allan Scientific&#160;</td>
			<td >7231</td>
			<td>Histology</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Illumina III&#160;</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>CLS136334</td>
			<td>BLI Instrument</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Insulin syringe 28G - 8mm needle</td>
			<td >BD</td>
			<td >329424</td>
			<td>Injections</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Insulin syringe 31G - 6mm needle&#160;</td>
			<td >BD</td>
			<td >326730</td>
			<td>Injections</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Iris Forceps, 10.2cm, Full Curve, serrated</td>
			<td >WPI</td>
			<td >504478</td>
			<td>For perfusion and surgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane USP</td>
			<td >Covetrus</td>
			<td >11695067772</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Jewelers #7 Forceps Titanium 11 cm 0.07 x 0.01 mm Tip</td>
			<td >WPI</td>
			<td>WP6570</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ketamine HCl 100mg/mL</td>
			<td >Mylan Ind.</td>
			<td >1049007</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >lentiCRISPRv2</td>
			<td >Addgene</td>
			<td>98290</td>
			<td>Genetic manipulation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin, DyLight 649</td>
			<td >Invitrogen</td>
			<td>L32472</td>
			<td>Vascular endothelial cells marker</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MEM non-essential amino acids X 100</td>
			<td >Corning</td>
			<td>25-025-CI</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Metzenbaum Scissors</td>
			<td >WPI</td>
			<td >503269</td>
			<td>For surgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microinjection Unit</td>
			<td >KOPF</td>
			<td >5000</td>
			<td>Intracardiac injections</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaCl</td>
			<td >Fisher</td>
			<td>S25877&#160;</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle 30G x 25mm</td>
			<td >BD</td>
			<td>305128</td>
			<td>Intracardiac Injection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle 33G x 15mm</td>
			<td >Hamilton</td>
			<td>7747-01</td>
			<td>Intracarotid Injection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle holder, Castroviejo, 14cm, with lock, 1.2mm Serrated Jaws</td>
			<td >WPI</td>
			<td>14137-G</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td >005557</td>
			<td>Murine model</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NU/J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td >002019</td>
			<td>Murine model</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Nuclear Mitotic Apparatus Protein polyclonal rabbit anti-human&#160;</td>
			<td >Abcam</td>
			<td >97585</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicillin-Streptomycin 10000U/mL</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >15140122</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Percoll</td>
			<td >GE</td>
			<td >0891-01</td>
			<td>density separation solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PI Classic Surgical Gloves</td>
			<td >Cardinal Health</td>
			<td >2D72PT75X</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >pLKO Tet-On</td>
			<td >Addgene</td>
			<td >21915</td>
			<td>Genetic manipulation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Povidone-Iodine 10% Solution</td>
			<td >Medline</td>
			<td >MDS093943</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Proparacaine Drops 0.5%</td>
			<td >Akorn Pharma</td>
			<td>AX0501</td>
			<td>Opthalmic local anesthetic</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Puralube Petrolatum Opthalmic Ointment</td>
			<td >Dechra</td>
			<td >83592</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Razor Blade Double Edge Blades&#160;</td>
			<td >EMS</td>
			<td >72000</td>
			<td>Shaving and Vibrotome Brain Slicing&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Reflex 9mm EZ Clip&#160;</td>
			<td >Braintree</td>
			<td>EZC-&#160;KIT</td>
			<td>Wound closure</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >RPMI 1640&#160;</td>
			<td >Corning</td>
			<td >10-040-CM</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scissors, Spring 10.5cm Str, 8mm Blades</td>
			<td >WPI</td>
			<td>501235</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Semi-Automatic Vibrating Blade Microtome</td>
			<td >Leica</td>
			<td >VT1200</td>
			<td>Brain Slice Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Single Channel Anesthesia Vaporizer System</td>
			<td >Kent Scientific</td>
			<td >VetFlo-1210S&#160;</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Smartbox Tabletop Chamber System and Exhaust Blower</td>
			<td >EZ Systems</td>
			<td >TT4000</td>
			<td>CO2 Euthanasia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile Fenestrated Disposable Drape</td>
			<td >Medline</td>
			<td >NON21002</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile Non-Reinforced Aurora Surgical Gowns with Set-In Sleeves</td>
			<td >Medline</td>
			<td >DYNJP2715</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >T25 Flask</td>
			<td >Corning&#160;</td>
			<td >430639</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tris</td>
			<td >Corning</td>
			<td >46-031-CM</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Triton X-100</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >X100-500ML</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Troutman tying forceps, 10cm, Curved G pattern, 0.52mm tip with tying platform</td>
			<td >WPI</td>
			<td>WP505210</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vessel clips 10G Pressure 5x 0.8mm Jaws, 5/pkg</td>
			<td >WPI</td>
			<td>15911</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Visiopharm</td>
			<td>Visiopharm</td>
			<td>Visiopharm</td>
			<td>NuMA Staining Quantification Software</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylasine 100mg/mL</td>
			<td >Akorn Pharma</td>
			<td >59399-111-50</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylene</td>
			<td >Fisher</td>
			<td>X3P-1GAL</td>
			<td>Histology</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a robust discovery platform for the identification of novel mediators of melanoma metastasis

Metastaz, hücrelerin in vitro tahlillerle sadece eksik modellenen engellerin üstesinden gelmelerini gerektiren karmaşık bir süreçtir. Melanom metastazındaki yeni oyuncuları tanımlamak için sağlam, tekrarlanabilir in vivo modeller ve standartlaştırılmış yöntemler kullanılarak sistematik bir iş akışı oluşturulmuştur. Bu yaklaşım, bir genin metastazdaki rolünü tam olarak karakterize etmek için belirli deneysel aşamalarda veri çıkarımına izin verir. Modeller, genetiği değiştirilmiş melanom hücrelerinin intrakardiyak, intradermal veya subkutan enjeksiyonlar yoluyla farelere sokulması ve ardından seri in vivo görüntüleme ile izlenmesiyle oluşturulur. Önceden belirlenmiş son noktalara ulaşıldıktan sonra, primer tümörler ve / veya metastaz taşıyan organlar toplanır ve çeşitli analizler için işlenir. Tümör hücreleri, tek hücreli RNA dizilimi de dahil olmak üzere çeşitli 'omik' platformlardan herhangi birine sıralanabilir ve tabi tutulabilir. Organlar, metastazların genel yükünü ölçmek ve spesifik anatomik konumlarını haritalamak için görüntüleme ve immünohistopatolojik analizlere tabi tutulur. Engraftma, izleme, doku hasadı, işleme ve analiz için standartlaştırılmış protokoller de dahil olmak üzere bu optimize edilmiş boru hattı, hasta tarafından türetilmiş, kısa vadeli kültürler ve çeşitli katı kanser türlerinin insan ve murin hücre hatları için benimsenebilir.

Aşağıdaki rakamlar, melanom metastazının yeni sürücülerinin tanımlanması için açıklanan iş akışının nasıl uygulandığını göstermektedir. Şekil 2 , fukoziltransferaz FUT8'in in vivo melanom metastazının susturulmasının etkilerinin incelendiği yayınlanmış bir çalışmanın sonuçlarını özetlemektedir26. Kısaca, insan hasta glikomik verilerinin analizi (lektin dizileri ile elde edilen) ve transkriptomik profilleme, karşılı...

Watch this Scientific Journal Video about A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis at JoVE.com

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

Bu makalede, melanom metastazının yeni aday aracılarını ve etki mekanizmalarını test etmek için kullanılan tekniklerin bir iş akışı açıklanmaktadır.

Melanom Metastazının Yeni Arabulucularının Belirlenmesi için Sağlam Bir Keşif Platformu

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Bu protokol, melanom metastazının aday düzenleyicilerinin in vivo etkilerini ve aynı zamanda diğer solid malignitelerin metastazını değerlendirmek için kullanılabilecek sürekli bir iş akışı içindeki bir dizi tekniği açıklamaktadır. Sistematik iş akışımızın temel avantajı, sağlam ve standartlaştırılmış in vivo modeller ve teknikler sayesinde verilerin tekrarlanabilirliğinin artmasıdır. Bu boru hattı, Omics verilerinden veya in vitro tahlillerden çıkarılan adayları in vivo bir ortamda test ederek hedef keşfi ve terapi geliştirme için bir yol sunar.Bu protokolde sunulan tekniklerle ilişkili öğrenme eğrisi, sağlanan materyaller kullanılarak ve adımları uygularken ayrıntılı açıklama izlenerek kısaltılır. Prosedürün gösterilmesine yardımcı olmak, Preklinik Görüntüleme Çekirdeği'nde bir araştırma bilimcisi olan Orlando Aristizabal ve laboratuvarımda bir eğitmen olan Ran Moubarak olacak. İntradermal enjeksiyonlar için, aseptik koşulları korurken biyogüvenlik kabini içinde sekiz ila 10 haftalık bir fareyi anestezi altına alın ve tıraş edin.Daha sonra cildi iğne bıçağının yörüngesine karşı geriye doğru kavrayın ve geri çekin ve altı milimetre uzunluğunda, 31 gauge insülin şırınga iğnesi kullanarak, eğim yukarı bakacak şekilde cildi keskin bir açıyla hafifçe delin. Kubbe şeklinde bir tekerlek gözlenene kadar tümör hücresi süspansiyonunun 30 mikrolitresini yavaşça enjekte edin. Tümör büyümesinin, kilo kaybının ve genel sağlık durumunun ilerlemesini izleyin.Bu izleme seansları sırasında, kaliperlerle ölçümler yapın ve hacmi hesaplamak için tümörün uzunluk ve genişlik boyutlarını kullanın. İntrakardiyak enjeksiyonlar için, anestezi uygulanmış bir fareyi ultrason makinesinin ısıtılmış platformuna aktarın. Daha sonra hipoalerjenik bant kullanarak, fareyi burun konisine sabitleyin.Toraksı düz bir tıraş bıçağı veya neşter bıçağı ile tıraş edin, 30 derecelik bir açıyla eğin ve prosedür alanının etrafındaki cildi% 10 povidon iyot ile temizleyin. Ardından, sol ventrikülün kesitsel bir görünümünü elde etmek için yönlendirilmiş yatay bir pencere yakalamak için ultrason probunu farenin sol tarafındaki toraksın ortasına yerleştirin. Probun uzun ekseni yukarı bakacak şekilde, probu 50 derecelik bir açıyla ve ısıtılmış platformu 20 derecelik bir açıyla sabitleyin, ardından probu ve destek çerçevesini pozisyonda kilitleyin.Güvenlik kabininin içinde çalışırken, hücre süspansiyonunu 30 gauge bir inç iğne ile bir mililitrelik bir tüberkülin şırıngasında hazırlayın. Şırıngada bulunan hava kabarcıklarını çıkarın. Şırıngayı stereotaktik enjektöre kilitleyin.Daha sonra ultrason rehberliğinde, iğneyi torasik duvardan kalbin sol ventrikülüne ilerletin ve tümör hücresi süspansiyonunun 100 ila 250 mikrolitresini yavaşça enjekte edin. Aşamalı hayatta kalma ameliyatı için, anestezi uygulanan fareyi ısınma pedine yerleştirin ve% 10'luk bir povidon iyot çözeltisi ile prosedür alanının etrafındaki cildi temizleyin. Steril kişisel koruma ekipmanı ve eldiven giydikten sonra, hayvanın vücudunun üzerine steril bir örtü koyun.Daha sonra, İris makası veya neşter kullanarak, tümörün kenarından beş ila yedi milimetrelik bir rezeksiyon marjını koruyarak cildi kesin. İntradermal tümörler durumunda, tümörü çevresel cilt ile birlikte rezeke edin. Subkutan tümörler için, tümörü deri altında disseke edin ve çıkarın.Tümör rezeksiyonundan sonra, yarayı dokuz milimetrelik zımbalama cihazıyla kapatın. İn vivo görüntüleme için, bir mililitre insülin şırıngası ve 28 gauge iğne ile intraperitoneal enjeksiyon yoluyla fareye d-luciferin substratı uygulayın, ardından fareyi uyuşturun ve biyolüminesans görüntüleme tarayıcısının içindeki bir burun konisine yerleştirin. Başlat'a basarak cihazı başlatın ve pozlama süresini otomatik olarak ayarlayın.Arka plan çıkarma için boş bir görüntü yakalamak üzere, edin'i tıklatın ve alma sırası tamamlandıktan sonra görüntüyü kaydedin. Veri analizi ve aynı in vivo görüntüleme yazılımı için, görüntülerin kaydedildiği klasöre gidin ve tek bir deneyden tüm farelerin görüntülerini açın. Birimleri ışımaya ayarlayın ve bireysel sinyalin gruplar arasında normalleşmesini engelleyeceğinden ilgili onay kutusunun işaretli olmadığından emin olun.Daha sonra, ilgi alanı veya ROI çizim aracını kullanarak, beyin bölgesi için dairesel ROI'ler ve vücut için dikdörtgen ROI'ler çizin, beyin YG'sindeki kulakları ve burnu hariç tutun, çünkü spesifik olmayan parlaklık yayma eğilimindedirler. Önyargıyı en aza indirmek için, ışıldayan sinyal üst üste bindirilmemiş farelerin fotoğraflarına YG'ler çizin, ardından sinyali ölçmek ve verileri bir elektronik tabloya aktarmak için YG'leri ölç'ü seçin. İlgilenilen vücut bölgelerindeki toplam ışıldayan akıyı çizerek gruplar arasındaki farklılıkları analiz edin.Yazılım kullanarak bir NuMA boyamasından sonra, diğer organ parankimi ve boş alanlar hariç, organ dokusundaki tüm NuMA boyalı hücreleri içerecek şekilde bir ROI çizin. Her organ için uygun pozitif ve negatif denetimleri kullanırken NuMA pozitif ve NuMA negatif hücrelerini kategorilere ayırmak için ayarları yapın. Her örnek için NuMA pozitif hücrelerinin toplam yüzdesi sayısını ölçmek için yerleşik bir yazılım algoritması kullanın.Biyolüminesans, parlak alan, ex vivo floresan ve hematoksilin ve eozin boyama görüntüleri, aday genlerin melanom metastazı üzerindeki etkilerinin analizinde çok yönlü yaklaşımı göstermektedir. Fukoziltransferaz susturulması, melanom hücrelerinin metastatik yayılımını bozmuştur. Kontrol Linda virüsü ile enfekte olmuş melanom hücrelerinin NuMA lekeli akciğer bölümleri ve Linda virüsünü eksprese eden bir metastaz baskılayıcı ile burada gösterilmiştir.Metastatik melanom hücreleri yeşil olarak etiketlenir ve organ alanı yeşil kapaklı bir çizgi ile sınırlandırılır. İntradermal enjeksiyonlar yaparken ciltte uygun gerginliği korumak, şırıngalar hazırlarken hava embolisinden kaçınmak ve hayvanın hareketine müdahale etmemesi veya yara komplikasyonlarına yatkın hale getirmemesi gereken yeterli rezeksiyon marjları elde etmek, başarı oranını ve tekrarlanabilirliği artırmaya yardımcı olur. İmmün filtrasyonu incelemek için multipleks görüntülemenin daha fazla kullanılması, gen ekspresyon analizi için tek hücreli RNA dizilimi ve mekansal transkriptomiklerin tümü, intratümöral heterojenliği incelemek için ücretsiz yollar sağlayabilir.Bu protokolde açıklanan tekniklerin kombinasyonu, melanom beyin metastazında, melanom salgılanan amiloid beta'nın nöroinflamasyonu baskılamadaki ve beyin metastazını teşvik etmedeki rolü gibi yeni düzenleyicileri tanımlamamıza yardımcı oldu.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

İleri Hayvan Karaciğer Kolorektal Metastaz Model: Görüntüleme Teknikleri ve Metastatik Klonların Özellikleri

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Kanser Araştırmaları

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

Apoptozis ters sonra yeni kurulan meme kanser kök hücre benzeri hücre akış sitometrik algılama

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Akım moleküler Analizi ve metastatik potansiyel değerlendirme için sirkülasyon tümör hücrelerinin mikromanipülasyon

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

İmmünficient Farelerde Karaciğer Ortotopik İnsan Uveal Melanom Xenograft Platformu Üretimi

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

A Novel Stromal Fibroblast-Modulated 3D Tumor Spheroid Model for Studying Tumor-Stroma Interaction and Drug Discovery

Tümör-Stroma Etkileşimi ve İlaç Keşfini İncelemek İçin Yeni Bir Stromal Fibroblast-Modüle 3D Tümör Küresel Modeli

Tumor-stroma interactions play an important role in cancer progression. Three-dimensional (3D) tumor spheroid models are the most widely used in vitro ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Perfüzyonlu Mikroakışkan Platformda Hasta Kaynaklı Ksenogreftlerin Ex vivo 3D Hidrojel Kültürleri için Geliştirilmiş Canlılık

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Modeling Primary Bone Tumors and Bone Metastasis with Solid Tumor Graft Implantation into Bone

Primer Kemik Tümörleri ve Kemik Metastazlarının Solid Tümör Grefti İmplantasyonu ile Modellenmesi

Primary bone tumors or bone metastasis from solid tumors result in painful osteolytic, osteoblastic, or mixed osteolytic/osteoblastic lesions. These ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

Karaciğer Metastazı Stromasını İncelemek için Kolorektal Kanser Organoidlerinin Portal Ven Enjeksiyonu

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...