Name: generation of null mutants to elucidate the role of bacterial glycosyltransferases in bacterial motility
Uploaded: 2022-03-11T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Null Mutants to Elucidate the Role of Bacterial Glycosyltransferases in Bacterial Motility at JoVE.com

وقد دعم هذا العمل المجلس الوطني للبحوث في كندا، من أجل الخطة الوطنية للاقتصاد والمنافسة، إسبانيا، ومن أجل مركز المرجعيات في التكنولوجيا الحيوية.

يظهر التمثيل التخطيطي للإجراء في الشكل 1.
1. تحديد المعلوماتية الحيوية لجزيرة السوط غليكوزيل (FGIs) في Aeromonas
<ol><li>لتحديد مجموعات التخليق الحيوي PseAc في جينومات Aeromonas ، استخدم أداة tblastn من قاعدة بيانات NCBI26. أولا ، استرجع البروت?...

<ol>
	<li>Sch&#228;ffer, C., Messner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+facets+of+prokaryotic+glycosylation.">Emerging facets of prokaryotic glycosylation.</a> FEMS Microbiology Review. 41 (1), 49-91 (2017).</li><li>De Maayer, P., Cowan, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flashy+flagella:+flagellin+modification+is+relatively+common+and+highly+versatile+among+the+Enterobacteriaceae.">Flashy flagella: flagellin modification is relatively common and highly versatile among the Enterobacteriaceae.</a> BMC Genomics. 17, 377 (2016).</li><li>Nothaft, H., Szymanski, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+glycosylation+in+bacteria:+sweeter+than+ever.">Protein glycosylation in bacteria: sweeter than ever.</a> Nature Review Microbiology. 8 (11), 765-778 (2010).</li><li>Benz, I., Schmidt, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Never+say+never+again:+protein+glycosylation+in+pathogenic+bacteria.">Never say never again: protein glycosylation in pathogenic bacteria.</a> Molecular Microbiology. 45 (2), 267-276 (2002).</li><li>Guerry, P., Szymanski, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Campylobacter+sugars+sticking+out.">Campylobacter sugars sticking out.</a> Trends in Microbiology. 16 (9), 428-435 (2008).</li><li>Hug, I., Feldman, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analogies+and+homologies+in+lipopolysaccharide+and+glycoprotein+biosynthesis+in+bacteria.">Analogies and homologies in lipopolysaccharide and glycoprotein biosynthesis in bacteria.</a> Glycobiology. 21 (2), 138-151 (2011).</li><li>Iwashkiw, J. A., Vozza, N. F., Kinsella, R. L., Feldman, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pour+some+sugar+on+it:+the+expanding+world+of+bacterial+protein+O-linked+glycosylation.">Pour some sugar on it: the expanding world of bacterial protein O-linked glycosylation.</a> Molecular Microbiology. 89 (1), 14-28 (2013).</li><li>Szymanski, C. M., Wren, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+glycosylation+in+bacterial+mucosal+pathogens.">Protein glycosylation in bacterial mucosal pathogens.</a> Nature Review Microbiology. 3, 225-237 (2005).</li><li>Tan, F. Y. Y., Tang, C. M., Exley, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sugar+coating:+bacterial+protein+glycosylation+and+host-microbe+interactions.">Sugar coating: bacterial protein glycosylation and host-microbe interactions.</a> Trends Biochemistry Sciences. 40 (7), 342-350 (2015).</li><li>Lairson, L. L., Henrissat, B., Davies, G. J., Withers, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycosyltransferases:+structures,+functions,+and+mechanisms.">Glycosyltransferases: structures, functions, and mechanisms.</a> Annual Review Biochemistry. 77, 521-555 (2008).</li><li>Lombard, V., Golaconda Ramulu, H., Drula, E., Coutinho, P. M., Henrissat, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+carbohydrate-active+enzymes+database+(CAZy)+in+2013.">The carbohydrate-active enzymes database (CAZy) in 2013.</a> Nucleic Acids Research. 42, 490-495 (2014).</li><li>Weerapana, E., Imperiali, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asparagine-linked+protein+glycosylation:+from+eukaryotic+to+prokaryotic+systems.">Asparagine-linked protein glycosylation: from eukaryotic to prokaryotic systems.</a> Glycobiology. 16 (6), 91 (2006).</li><li>Faridmoayer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extreme+substrate+promiscuity+of+the+Neisseria+oligosaccharyl+transferase+involved+in+protein+O-glycosylation.">Extreme substrate promiscuity of the Neisseria oligosaccharyl transferase involved in protein O-glycosylation.</a> Journal of Biological Chemistry. 283 (50), 34596-34604 (2008).</li><li>Wacker, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+specificity+of+bacterial+oligosaccharyltransferase+suggests+a+common+transfer+mechanism+for+the+bacterial+and+eukaryotic+systems.">Substrate specificity of bacterial oligosaccharyltransferase suggests a common transfer mechanism for the bacterial and eukaryotic systems.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (18), 7088-7093 (2006).</li><li>Scott, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flagellar+glycosylation+in+Burkholderia+pseudomallei+and+Burkholderia+thailandensis.">Flagellar glycosylation in Burkholderia pseudomallei and Burkholderia thailandensis.</a> Journal of Bacteriology. 193 (14), 3577-3587 (2011).</li><li>Thibault, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+carbohydrate+moieties+and+glycosylation+motifs+in+Campylobacter+jejuni+flagellin.">Identification of the carbohydrate moieties and glycosylation motifs in Campylobacter jejuni flagellin.</a> Journal of Biological Chemistry. 276 (37), 34862-34870 (2001).</li><li>Schirm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural,+genetic+and+functional+characterization+of+the+flagellin+glycosylation+process+in+Helicobacter+pylori.">Structural, genetic and functional characterization of the flagellin glycosylation process in Helicobacter pylori.</a> Molecular Microbiology. 48 (6), 1579-1592 (2003).</li><li>McNally, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+metabolomics+analysis+of+Campylobacter+coli+VC167+reveals+legionaminic+acid+derivatives+as+novel+flagellar+glycans.">Targeted metabolomics analysis of Campylobacter coli VC167 reveals legionaminic acid derivatives as novel flagellar glycans.</a> Journal of Biological Chemistry. 282 (19), 14463-14475 (2007).</li><li>Logan, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+carbohydrate+modifications+on+Campylobacter+jejuni+11168+flagellin+using+metabolomics-based+approaches.">Identification of novel carbohydrate modifications on Campylobacter jejuni 11168 flagellin using metabolomics-based approaches.</a> FEBS Journal. 276 (4), 1014-1023 (2009).</li><li>Wilhelms, M., Fulton, K. M., Twine, S. M., Tom&#225;s, J. M., Merino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+glycosylation+of+polar+and+lateral+flagellins+in+Aeromonas+hydrophila+AH-3.">Differential glycosylation of polar and lateral flagellins in Aeromonas hydrophila AH-3.</a> Journal of Biological Chemistry. 287 (33), 27851-27862 (2012).</li><li>Canals, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-structural+flagella+genes+affecting+both+polar+and+lateral+flagella-mediated+motility+in+Aeromonas+hydrophila.">Non-structural flagella genes affecting both polar and lateral flagella-mediated motility in Aeromonas hydrophila.</a> Microbiology. 153, 1165-1175 (2007).</li><li>Howard, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Campylobacter+jejuni+glycosylation+island+important+in+cell+charge,+legionaminic+acid+biosynthesis,+and+colonization+of+chickens.">Campylobacter jejuni glycosylation island important in cell charge, legionaminic acid biosynthesis, and colonization of chickens.</a> Infection and Immunity. 77 (6), 2544-2556 (2009).</li><li>Verma, A., Arora, S. K., Kuravi, S. K., Ramphal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+specific+amino+acids+in+the+N-terminus+of+Pseudomonas+aeruginosa+flagellin+and+of+flagellin+glycosylation+in+the+innate+immune+response.">Roles of specific amino acids in the N-terminus of Pseudomonas aeruginosa flagellin and of flagellin glycosylation in the innate immune response.</a> Infection and Immunity. 73 (12), 8237-8246 (2005).</li><li>Lamy, B., Baron, S., Barraud, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aeromonas:+the+multifaceted+middleman+in+the+One+Health+world.">Aeromonas: the multifaceted middleman in the One Health world.</a> Current Opinion in Microbiology. 65, 24-32 (2022).</li><li>Gav&#237;n, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+flagella+of+Aeromonas+species+are+essential+for+epithelial+cell+adherence+and+biofilm+formation.">Lateral flagella of Aeromonas species are essential for epithelial cell adherence and biofilm formation.</a> Molecular Microbiology. 43 (2), 383-397 (2002).</li><li>Altschul, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gapped+BLAST+and+PSI-BLAST:+a+new+generation+of+protein+database+search+programs.">Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs.</a> Nucleic Acids Research. 25 (17), 3389-3402 (1997).</li><li>Forn-Cun&#237;, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polar+flagella+glycosylation+in+Aeromonas:+Genomic+characterization+and+Involvement+of+a+specific+glycosyltransferase+(Fgi-1)+in+heterogeneous+flagella+glycosylation.">Polar flagella glycosylation in Aeromonas: Genomic characterization and Involvement of a specific glycosyltransferase (Fgi-1) in heterogeneous flagella glycosylation.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 595697 (2021).</li><li>Milton, D. L., O'Toole, R., Horstedt, P., Wolf-Watz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flagellin+A+is+essential+for+the+virulence+of+Vibrio+anguillarum.">Flagellin A is essential for the virulence of Vibrio anguillarum.</a> Journal of Bacteriol.ogy. 178 (5), 1310-1319 (1996).</li><li>Kov&#225;cs, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Pseudomonas+pyocyanea+by+the+oxidase+reaction.">Identification of Pseudomonas pyocyanea by the oxidase reaction.</a> Nature. 178 (4535), 703 (1956).</li><li>Fulton, K. M., Mendoza-Barber&#225;, E., Twine, S. M., Tom&#225;s, J. M., Merino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polar+glycosylated+and+lateral+non-glycosylated+flagella+from+Aeromonas+hydrophila+strain+AH-1+(Serotype+O11).">Polar glycosylated and lateral non-glycosylated flagella from Aeromonas hydrophila strain AH-1 (Serotype O11).</a> International Journal of Molecular Sciences. 16 (12), 28255-28269 (2015).</li><li>Khider, M., Willassen, N. P., Hansen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alternative+sigma+factor+RpoQ+regulates+colony+morphology,+biofilm+formation+and+motility+in+the+fish+pathogen+Aliivibrio+salmonicida.">The alternative sigma factor RpoQ regulates colony morphology, biofilm formation and motility in the fish pathogen Aliivibrio salmonicida.</a> BMC Microbiology. 18 (1), 116 (2018).</li><li>Pawar, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+genetic+tools+to+tackle+c-di-GMP-dependent+signalling+in+Pseudomonas+aeruginosa.">Novel genetic tools to tackle c-di-GMP-dependent signalling in Pseudomonas aeruginosa.</a> Journal of Applied Microbiology. 120 (1), 205-217 (2016).</li><li>Vander Broek, W., Chalmers, K. J., Stevens, M. P., Stevens, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+proteomic+analysis+of+Burkholderia+pseuomallei+Bsa+Type+III+secretion+system+effectors+using+hypersecreting+mutants.">Quantitative proteomic analysis of Burkholderia pseuomallei Bsa Type III secretion system effectors using hypersecreting mutants.</a> The American Society for Biochemistry and Molecular Biology. 14 (4), 905-916 (2015).</li></ol>

الخطوة المبكرة الحاسمة لهذه الطريقة هي تحديد المناطق المشاركة في غليكوزيل السوط و GTs المفترضة لأن هذه الإنزيمات تظهر تماثلا عاليا وتشارك في العديد من العمليات. يظهر التحليل المعلوماتي الحيوي لجينومات Aeromonas في قواعد البيانات العامة أن هذه المنطقة مجاورة لمنطقة السوط القطبي 2 ، والتي ?...

تم وصف غليكوزيل البروتين في كل من البكتيريا إيجابية الجرام وسالبة الجرام ويتكون من الارتباط التساهمي للجليكان بسلسلة جانبية من الأحماض الأمينية 1,2. في بدائيات النوى ، تحدث هذه العملية عادة عبر آليتين إنزيميتين رئيسيتين: O- و N-glycosylation 3. في O-glycosylation ، يتم ربط الغليكان بمجموعة الهيدروكسيل من بقايا سيرين (Ser) أو ثريونين (Thr). في N-glycosylation ، يتم ربط الجليكان بسلسلة نيتروجين أميد الجانبية لبقايا الأسباراجين (Asn) داخل تسلسلات الببتيد الثلاثي Asn-X-Ser / Thr ، حيث يمكن أن يكون X أي حمض أميني باستثناء البرولين.
يمكن أن يعتمد الجليكان هياكل خطية أو متفرعة ويتكون من السكريات الأحادية أو السكريات المتعددة المرتبطة تساهميا بروابط غليكوزيدية. في بدائيات النوى ، عادة ما يظهر الجليكان تنوعا في تكوين السكر وبنيته مقارنة بالجليكان حقيقيات النواة4. علاوة على ذلك ، تم وصف مسارين مختلفين للغليكوزيل البكتيري يختلفان في كيفية تجميع الجليكان ونقله إلى البروتين المستقبل: الغليكوزيل المتسلسل و en bloc 5,6. بالنسبة للغليكوزيل المتسلسل ، يتم بناء الجليكان المعقد مباشرة على البروتين عن طريق الإضافة المتتالية للسكريات الأحادية. في الغليكوزيل في الكتلة ، يتم نقل جليكان تم تجميعه مسبقا إلى البروتين من أوليغوساكاريد مرتبط بالدهون بواسطة أوليغوساكاريل ترانسفيراز متخصص (OTase). وقد ثبت أن كلا المسارين متورطان في عمليات N- و O-glycosylation 7.
غليكوزيل البروتين له دور في تعديل الخصائص الفيزيائية والكيميائية والبيولوجية للبروتينات. يمكن أن يؤثر وجود الجليكان على كيفية تفاعل البروتين مع رباطه ، مما يؤثر على النشاط البيولوجي للبروتين ، ولكن يمكن أن يؤثر أيضا على استقرار البروتين ، والذوبان ، والقابلية للتحلل البروتيني ، والمناعة ، والتفاعلات بين الميكروبات والمضيف 8,9. ومع ذلك ، فإن العديد من معلمات الجليكوزيل ، مثل عدد الجليكان ، وتكوين الجليكان ، والموضع ، وآلية التعلق ، يمكن أن تؤثر أيضا على وظيفة البروتين وبنيته.
Glycosyltransferases (GTs) هي الإنزيمات الرئيسية في التخليق الحيوي للجليكان المعقدة و glycoconjugates. تحفز هذه الإنزيمات تكوين الرابطة الغليكوسيدية بين مويتي السكر من جزيء متبرع نشط ومتقبل ركيزة معين. يمكن أن تستخدم GTs كلا من النيوكليوتيدات وغير النيوكليوتيدات كجزيئات مانحة وتستهدف مستقبلات الركيزة المختلفة ، مثل البروتينات والسكريات والأحماض النووية والدهون10. لذلك ، فإن فهم GTs على المستوى الجزيئي مهم لتحديد آليات عملها وخصوصيتها ، كما يمكن من فهم كيفية ارتباط تكوين السكر في الجليكان الذي يعدل الجزيئات ذات الصلة بالإمراض. تصنف قاعدة بيانات إنزيم الكربوهيدرات النشطة (CAZy)11 GTs وفقا لتماثل تسلسلها ، مما يوفر أداة تنبؤية نظرا لأن الطية الهيكلية وآليات العمل ثابتة في معظم عائلات GT. ومع ذلك ، هناك أربعة أسباب تجعل من الصعب التنبؤ بخصوصية الركيزة للعديد من GTs: 1) لم يتم تحديد أي شكل تسلسل واضح يحدد خصوصية الركيزة في بدائيات النوى12 ، 2) تظهر العديد من GTs و OTases اختلاط الركيزة 13,14 ، 3) يصعب إنتاج GTs الوظيفية في غلة عالية في شكل مؤتلف و 4) تحديد كل من الركائز المانحة والمتقبلة أمر معقد. وعلى الرغم من ذلك، مكنت دراسات الطفرات الحديثة من الحصول على تقدم كبير في فهم الآليات التحفيزية وطرح ربط GTs.
في البكتيريا ، يبدو أن O-glycosylation أكثر انتشارا من N-glycosylation. لا تظهر مواقع O-glycosylation تسلسلا إجماعا ، والعديد من بروتينات O-glycosylated تفرز أو بروتينات سطح الخلية ، مثل السوط أو pili أو autotransporters 1. يظهر السوط غليكوزيل التباين في عدد المواقع المتقبلة ، وتكوين الجليكان ، والهيكل. على سبيل المثال ، لدى أساطيل Burkholderia spp موقع متقبل واحد فقط ، بينما في Campylobacter jejuni ، لدى الأسواط ما يصل إلى 19 موقعا متقبلا15,16. علاوة على ذلك ، بالنسبة لبعض البكتيريا ، فإن الغليكان عبارة عن سكاريد أحادي واحد ، في حين أن البكتيريا الأخرى تمتلك جليكان غير متجانس مخترق من السكريات الأحادية المختلفة لتشكيل السكريات القليلة. يحدث هذا التباين حتى بين سلالات من نفس النوع. يتم تعديل سوط هيليكوباكتر فقط بواسطة حمض البسيودامينيك (PseAc)17 ، ويمكن تعديل سوط العطيفة بواسطة PseAc ، وهو شكل الأسيتاميدينو من حمض pseudaminic (PseAm) أو حمض legionaminic (LegAm) ، والجليكان المشتق من هذه السكريات مع الأسيتيل أو N-acetylglucosamine أو بدائل البروبيونيك18,19. في Aeromonas ، يتم تعديل السوط بواسطة الجليكان الذي يتراوح تكوينه من مشتق حمض PseAc واحد إلى عديد السكاريد غير المتجانس20 ، ويكون ارتباط الجليكان بمونومرات السوط دائما عبر مشتق PseAc.
بشكل عام ، يعد غليكوزيل السوط ضروريا لتجميع خيوط السوط ، والحركة ، والضراوة ، وخصوصية المضيف. ومع ذلك ، في حين أن السوط من C. jejuni16 ، H. pylori17 ، و Aeromonas sp. 21 لا يمكن أن تتجمع في خيوط ما لم تكن مونومرات البروتين هي غليكوزيليتد ، Pseudomonas spp. و Burkholderia spp. 15 لا تتطلب غليكوزيل لتجميع السوط. علاوة على ذلك ، في بعض سلالات C. jejuni ، تؤثر التغيرات في تكوين السكر في السوط غليكان على التفاعل بين البكتيريا والمضيف وقد تلعب دورا في التهرب من بعض الاستجابات المناعية16. التراص الذاتي هو سمة مظهرية أخرى تتأثر بالتعديلات في تكوين الجليكان المرتبطة بالسوط. يؤدي انخفاض التراص الذاتي إلى انخفاض القدرة على تكوين المستعمرات الدقيقة والأغشية الحيوية22. في بعض البكتيريا ، تم ربط قدرة السوط على تحفيز استجابة مؤيدة للالتهابات بغليكوزيل السوط. وهكذا ، في P. aeruginosa ، يحفز السوط الغليكوزيلاتي استجابة أعلى مؤيدة للالتهابات من unglycosylated23.
Aeromonas هي بكتيريا سالبة الجرام منتشرة في كل مكان في البيئة ، مما يسمح لها بأن تكون في واجهة جميع مكونات One Health 24. تحتوي Aeromonas الميزوفيليك على سوط قطبي واحد ، يتم إنتاجه بشكل تأسيسي. أكثر من نصف العزلات السريرية تعبر أيضا عن السوط الجانبي ، الذي يمكن تحريضه في وسائط أو ألواح عالية اللزوجة. وقد ربطت دراسات مختلفة كلا النوعين من الأسواط بالمراحل المبكرة من التسبب في البكتيريا25. في حين أن السوط القطبي المبلغ عنه حتى الآن هو O-glycosylated في 5-8 Ser أو Thr بقايا مجالاته المناعية المركزية ، فإن السوط الجانبي ليس جليكوزيلا O-glycosylated في جميع السلالات. على الرغم من أن جليكان السوط القطبي من سلالات مختلفة يظهر تنوعا في تركيبته الكربوهيدراتية وطول السلسلة20 ، فقد ثبت أن السكر الرابط هو مشتق حمض البسيودامينيك.
الهدف من هذه المخطوطة هو وصف طريقة للحصول على طفرات فارغة في GTs محددة أو مناطق كروموسومية تحتوي على GTs لتحليل مشاركتها في التخليق الحيوي لالسكريات ذات الصلة وفي الإمراض البكتيرية ، وكذلك دور الجليكان نفسه. على سبيل المثال ، نقوم بتحديد وحذف منطقة كروموسومية تحتوي على GTs من Aeromonas لإثبات مشاركتها في غليكوزيل السوط القطبي وتحليل دور جليكان السوط. نوضح كيفية حذف GT معين لتحديد وظيفته في التخليق الحيوي لهذا الجليكان ودور الجليكان المعدل. على الرغم من استخدام Aeromonas كمثال ، يمكن استخدام المبدأ لتحديد ودراسة جزر غليكوزيل السوط من البكتيريا الأخرى سالبة الجرام وتحليل وظيفة GTs المشاركة في التخليق الحيوي للجليكان الأخرى مثل عديد السكاريد الدهني O-antigen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ABI PRISM Big Dye Terminator v. 3.1 Cycle Sequencing Ready Reaction Kit</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4337455</td>
			<td>Used for sequencing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AccuPrime Taq DNA Polymerase, high fidelity</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12346-086</td>
			<td>Used for amplification of AB, CD and AD fragments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Conda-Pronadise</td>
			<td>8008</td>
			<td>Used for DNA electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alkaline phosphatase, calf intestinal (CIAP)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M1821</td>
			<td>Used to remove phosphate at the 5&#8217; end</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto agar</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>214010</td>
			<td>Use for motility analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BamHI</td>
			<td>Promega</td>
			<td>R6021</td>
			<td>Used for endonuclease restriction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BglII</td>
			<td>Promega</td>
			<td>R6081</td>
			<td>Used for endonuclease restriction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioDoc-It Imagin System</td>
			<td>UVP</td>
			<td></td>
			<td>Bio-imaging station used for DNA visualization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotaq polymerase</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-21040</td>
			<td>Used for colony screening</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cesium chloride</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A1126,0100</td>
			<td>Used for flagella purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A1806,0025</td>
			<td>Used for triparental mating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytiva illustra GFX PCR DNA and Gel Band Purification Kit</td>
			<td>Cytivia</td>
			<td>28-9034-71</td>
			<td>Used for purification of PCR amplicons and DNA fragments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>131026.1211</td>
			<td>Used for DNA electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporation cuvettes 2 mm gap</td>
			<td>VWR</td>
			<td>732-1133</td>
			<td>Used for transformation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium bromide</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A1152,0025</td>
			<td>Use for DNA visualization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyperLadder 1 Kb marker</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-33053</td>
			<td>DNA marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen Easy-DNA gDNA Purification Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10750204</td>
			<td>Used for bacterial chromosomal DNA purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani (LB) Miller agar</td>
			<td>Condalab</td>
			<td>996</td>
			<td>Used for Escherichia coli culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani (LB) Miller broth</td>
			<td>Condalab</td>
			<td>1551</td>
			<td>Used for Escherichia coli culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop ND-1000</td>
			<td>NanoDrop Techonologies Inc</td>
			<td></td>
			<td>Spectrophotometer used for DNA quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rifampicin</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A2220,0005</td>
			<td>Used for triparental mating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOC Medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15544034</td>
			<td>Used for electroporation recovery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectinomycin</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A3834,0005</td>
			<td>Used for triparental mating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW 41 Ti Swinging-Bucket Rotor</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>331362</td>
			<td>Used for flagella purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15224017</td>
			<td>Used for ligation reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticasein soy agar</td>
			<td>Condalab</td>
			<td>1068</td>
			<td>Used for Aeromonas grown</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticasein soy broth</td>
			<td>Condalab</td>
			<td>1224</td>
			<td>Used for Aeromonas grown</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Condalab</td>
			<td>1612</td>
			<td>Use for motility analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A2264,0500</td>
			<td>Used for DNA electrophoresis and flagella purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A4975,0100</td>
			<td>Used for bacterial lysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Clear tubes (14 mm x 89 mm)</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>344059</td>
			<td>Used for flagella purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veriti 96 well Thermal Cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Used for PCR reactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zyppy Plasmid Miniprep II Kit</td>
			<td>Zymmo research</td>
			<td>D4020</td>
			<td>Used for isolation of plasmid DNA</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of null mutants to elucidate the role of bacterial glycosyltransferases in bacterial motility

دراسة الجليكوزيل في بدائيات النوى هي منطقة سريعة النمو. تؤوي البكتيريا هياكل جليكوزيلية مختلفة على سطحها تشكل جليكان رمزا شريطيا خاصا بالسلالة. تظهر الجليكان المرتبطة بها تنوعا أعلى في تكوين السكر وبنيته مقارنة بحقيقيات النوى وهي مهمة في عمليات التعرف على المضيف البكتيري والتفاعل مع البيئة. في البكتيريا المسببة للأمراض ، شاركت البروتينات السكرية في مراحل مختلفة من العملية المعدية ، ويمكن أن تتداخل تعديلات الجليكان مع وظائف محددة للبروتينات السكرية. ومع ذلك ، على الرغم من التقدم المحرز في فهم تكوين الجليكان والبنية ومسارات التخليق الحيوي ، فإن فهم دور البروتينات السكرية في الإمراض أو التفاعل مع البيئة لا يزال محدودا للغاية. علاوة على ذلك ، في بعض البكتيريا ، يتم مشاركة الإنزيمات اللازمة لغليكوزيل البروتين مع مسارات التخليق الحيوي الأخرى متعددة السكاريد ، مثل عديد السكاريد الدهني ومسارات التخليق الحيوي للكبسولة. تم توضيح الأهمية الوظيفية للغليكوزيل في العديد من البكتيريا من خلال طفرة جينات محددة يعتقد أنها تشارك في عملية الجليكوزيل ودراسة تأثيرها على التعبير عن البروتين السكري المستهدف وتعديل الجليكوسين. تحتوي Aeromonas الميزوفيليك على سوط قطبي واحد و O-glycosylated. يظهر السوط غليكان تنوعا في تكوين الكربوهيدرات وطول السلسلة بين سلالات Aeromonas . ومع ذلك ، فإن جميع السلالات التي تم تحليلها حتى الآن تظهر مشتقا من حمض pseudaminic كسكر مرتبط يعدل بقايا السيرين أو الثريونين. مشتق حمض pseudaminic مطلوب لتجميع السوط القطبي ، وفقدانه له تأثير على الالتصاق ، وتشكيل الأغشية الحيوية ، والاستعمار. يصف البروتوكول المفصل في هذه المقالة كيف يمكن استخدام بناء الطفرات الخالية لفهم تورط الجينات أو مناطق الجينوم التي تحتوي على جليكوزيل ترانسفيراز المفترضة في التخليق الحيوي للجليكان السوط. وهذا يشمل القدرة على فهم وظيفة الجليكوسيل ترانسفيراز المعنية ودور الجلايكان. وسيتم تحقيق ذلك من خلال مقارنة المتحور الناقص في الغليكان بالسلالة البرية.

توفر هذه المنهجية نظاما فعالا لتوليد طفرات فارغة في الجينات أو المناطق الكروموسومية في Aeromonas التي يمكن أن تؤثر على غليكوزيل السوط ودور خيوط السوط (الشكل 1).
يبدأ البروتوكول بتحديد المعلوماتية الحيوية ل FGIs المفترضة والجينات التي تقوم بتشفير GTs في هذه الم?...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Null Mutants to Elucidate the Role of Bacterial Glycosyltransferases in Bacterial Motility at JoVE.com

Generation of Null Mutants to Elucidate the Role of Bacterial Glycosyltransferases in Bacterial Motility

هنا ، نصف بناء طفرات فارغة من Aeromonas في جليكوزيل ترانسفيراز محددة أو مناطق تحتوي على جليكوزيل ترانسفيراز ، ومقايسات الحركة ، وتنقية السوط التي أجريت لتحديد مشاركة ووظيفة إنزيماتها المشفرة في التخليق الحيوي للجليكان ، وكذلك دور هذا الجلايكان في التسبب البكتيري.

توليد الطفرات الخالية لتوضيح دور الجليكوسيل ترانسفيراز البكتيري في الحركة البكتيرية

The study of glycosylation in prokaryotes is a rapidly growing area. Bacteria harbor different glycosylated structures on their surface whose glycans ...

لذلك مشتق حمض العصبيات موجود فقط في البكتيريا المسببة للأمراض ، يحتوي السوط aminiglycosylated على هذا السكر. في إطار حذف المنطقة الموجودة في الجينات يمكن أن يساعد في العثور على مجموعات غليكوزيل السوط. هذه التقنية ، أحدث منطقة أو جينات محددة ، مثل glycosyltransferases التي لديها تماثل عال بينها وتشارك في عمليات مختلفة ، وتحليل مشاركتها في عملية غليكوزيل السوط.يمكن أن تساعد هذه التقنية أيضا في العثور على دور الجليكوسيل ترانسفيراز المشاركة في التخليق الحيوي لالسكريات ذات الصلة في البكتيريا المسببة للأمراض وكذلك دور بروتينات ترميز الجينات المشاركة في تكوين السوط. عرض الإجراء سوف مايت بولو ، فني في مختبري. صمم زوجين من الاشعال التي تضخم مناطق الحمض النووي في المنبع والمصب من الجين أو المنطقة المحددة المراد حذفها.يجب أن يتضمن التمهيديان A و D في النهاية الخمسة الرئيسية موقعا مقيدا ل endonuclease يسمح بالاستنساخ في pDM4. تأكد من أن الاشعال B و C داخل الجين المراد حذفه أو داخل الجين الأول والأخير من المنطقة المراد حذفه. تأكد من أن كلا الاشعال في الإطار ويقع بين خمسة إلى ستة كودونات داخل الجين.تأكد من أن كلا التمهيديين يشملان تسلسلا مجانيا ل 21 زوجا أساسيا في الطرف الرئيسي الخمسة للانضمام إلى أمبليونات الحمض النووي AB و CD.استخدم 100 نانوغرام من الحمض النووي الكروموسومي النقي كقالب في مجموعتين من PCRs غير المتماثلة مع الاشعال AB و CD متبوعا بتحليل المنتجات الناتجة في هلام الأغاروز 1٪. تنقية وقياس كمية الأمبليونات المستثناة من الجل الكهربائي الرحلان. امزج 100 نانوغرام من كل أمبليكون مع كواشف PCR بدون برايمر.بعد توسيعه ، أضف الاشعال A و D وقم بتضخيمها كجزء واحد. بعد ذلك تحليل وتنقية وقياس المنتجات الناتجة كما هو موضح سابقا. هضم ميكروغرام واحد من pDM4 و 400 نانوغرام من أمبليكون AD مع endonuclease.اجمع pDM4 المهضوم مع أمبليكون AD عند متجه مولي لإدخال نسبة من واحد إلى أربعة وإعداد تفاعل الربط. احتضان بين عشية وضحاها في 20 درجة مئوية. في وقت لاحق ، قم بتعطيل T4 ligase عند 70 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.تلقيح سلالة الإشريكية القولونية في مرق لوريا بيرتاني ميلر وتحضن عند 30 درجة مئوية مع اهتزاز عند 200 دورة في الدقيقة حتى يتم ملاحظة كثافة بصرية بين 0.4 و 0.6. قم بتكبيل ثقافة البكتيريا عن طريق الطرد المركزي في 5،000 مرة G و 4 درجات مئوية لمدة 15 دقيقة. الكريات في الماء المقطر المبرد وكرر عملية التنظيف مرتين أخريين.انقل تعليق البكتيريا إلى أنابيب الطرد الدقيق وكرر الطرد المركزي عند 14،000 مرة G وأربع درجات مئوية لمدة خمس دقائق. بعد تعليق الكريات في الماء المبرد ، أضف ما يقرب من 3.5 ميكرولتر من خليط الربط واحتضنها على الثلج لمدة خمس دقائق. انقل المحتويات إلى كوفيت كهربائي مبرد بمليمترين.بعد الكهربية ، أضف وسط SOC وانقل محتوياته إلى أنبوب استزراع. احتضن لمدة ساعة واحدة عند 30 درجة مئوية مع الاهتزاز عند 200 دورة في الدقيقة. لوحة الخلايا المحولة على لوحات أجار LB المكملة بالكلورامفينيكول.تحقق من إدراج بنية الحذف في pDM4 بواسطة PCR باستخدام الاشعال التي تحيط بجانب استنساخ pDM4. قم بإعداد ثقافات بين عشية وضحاها بحيث يقوم المتلقي Aeromonas بتصفية ريفامبيسين المقاومة وسلالتين مختلفتين من الإشريكية القولونية. سلالة المتبرع مع البلازميد المؤتلف pDM4 ، وسلالة المساعد مع البلازميد PRK 2073 عند 30 درجة مئوية.نفس العدد من مستعمرات سلالات المتبرع والمتلقي والمساعد في ثلاثة أنابيب LB مع 150 ميكرولتر من LB. ثم على صفيحة أجار LB بدون مضادات حيوية ، امزج المعلقات البكتيرية الثلاثة في قطرتين عند المتلقي للمساعدة إلى نسبة المتبرع من خمسة إلى واحد إلى واحد ، واحتضن الصفيحة وجها لوجه بين عشية وضحاها عند 30 درجة مئوية. حصاد البكتيريا عن طريق إضافة ملليلتر واحد من مرق LB إلى لوحة LB agar. انقل التعليق البكتيري إلى أنبوب ميكروفوج مخروطي 1.5 ملليلتر ودوامة قوية.انشر 100 ميكرولتر من التعليق البكتيري على ألواح LB agar مع ريفامبيسين وكلورامفينيكول. قم بتدوير 200 ميكرولتر و 600 ميكرولتر من العينات ، الكريات في 100 ميكرولتر من مرق LB ولوحة على LB agar مع ريفامبيسين وكلورامفينيكول تليها الحضانة. قم بإجراء اختبار أوكسيديز للتأكد من أن المستعمرات هي Aeromonas.تأكد كذلك من إدخال البلازميد المؤتلف pDM4 في منطقة الكروموسومات المحددة بواسطة PCR باستخدام الاشعال E و F. تنمو المستعمرات المؤتلفة في ملليلترين من LB مع 10٪ من السكروز وبدون مضادات حيوية بين عشية وضحاها عند 30 درجة مئوية. بعد تحضير تخفيفات مختلفة للثقافة ، قم بلوحة 100 ميكرولتر من الثقافات البكتيرية والتخفيفات على لوحة LB agar مع 10٪ من السكروز واحتضنها بين عشية وضحاها عند 30 درجة مئوية.في اليوم التالي ، التقط المستعمرات ونقلها إلى لوحات LB مع وبدون الكلورامفينيكول. بعد احتضانها بين عشية وضحاها عند 30 درجة مئوية ، حدد مستعمرات الكلورامفينيكول الحساسة. قم بتحليل المستعمرات الحساسة بواسطة PCR باستخدام زوج الاشعال EF وحدد المستعمرات التي يرتبط منتج PCR الخاص بها بحجم البنية المحذوفة.ضع قطرة صغيرة من السيليكون في الزوايا الأربع لشريحة الغطاء وقم بتركيب ثقافة Aeromonas المزروعة بين عشية وضحاها على شريحة غطاء. ضع شريحة محفورة على شريحة الغطاء واقلب الشريحة رأسا على عقب. قم بتحليل حركية السباحة بواسطة المجهر الضوئي باستخدام المجهر البصري ، ثم انقل ثلاثة ميكرولترات من الثقافة إلى وسط صفيحة أجار ناعمة.احتضن الصفيحة وجها لوجه بين عشية وضحاها بين 25 و 30 درجة مئوية. باستخدام مسطرة في نهاية الحضانة ، قم بقياس الهجرة البكتيرية من مركز الصفيحة نحو المحيط عبر الأجار. يجهد Aeromonas بين عشية وضحاها في 900 ملليلتر TSB بين 25 إلى 30 درجة مئوية.بعد الطرد المركزي ، الكريات في 20 ملليلتر من 100 ملليمول من المخزن المؤقت لكلوريد الهيدروجين Tris من الرقم الهيدروجيني 7.8. لإزالة السوط المثبت، قم بمسح التعليق في دوامة بقضيب زجاجي لمدة ثلاث إلى أربع دقائق، ثم مرر بشكل متكرر عبر حقنة قياس 21. قم بتكسير البكتيريا عن طريق جهازين متتاليين للطرد المركزي عند أربع درجات مئوية وجمع المادة الفائقة في أنبوب منفصل.بعد الطرد المركزي الفائق ، الكريات في 150 ميكرولتر من 100 ملليمولار كلوريد الهيدروجين تريس الذي يحتوي على اثنين من ملليمولار EDTA العازلة. انقل 150 ميكرولتر من الجزء المخصب من السوط إلى أنبوب رفيع الجدران فائق الوضوح ، واملأه ب 12 ملليلتر من محلول كلوريد السيزيوم. جهاز طرد مركزي فائق الأنبوب بسرعة 60،000 مرة G لمدة 48 ساعة عند أربع درجات مئوية في دوار دلو متأرجح.اجمع شريط السوط في تدرج كلوريد السيزيوم باستخدام حقنة ودياليز ضد 100 ملليمولار كلوريد الهيدروجين Tris بالإضافة إلى ملليمولين EDTA متبوعا بتحليل بواسطة الرحلان الكهربائي و Coomassie الأزرق تلطيخ أو مطياف الكتلة. في الشكل التالي ، حارة WT هي Aeromonas piscicola AH3. تظهر الممرات من واحد إلى ثمانية مستعمرات حساسة للكلورامفينيكول لإعادة التركيب الثانية.ST هو علامة فرط المثانة 1KB. تظهر الممرات من واحد إلى ثلاثة ومن خمسة إلى ثمانية المستعمرات ذات الجين FGI4 من النوع البري ك lane WT. يظهر Lane Four مستعمرة بها جين FGI4 المحذوف. أظهرت المقايسات المجهرية الضوئية أن تعديلات السوط القطبية أو الجانبية تؤدي فقط إلى انخفاض في أقطار الهجرة ، وبالتالي ، فإن طفرات AH-3 FGI و AH-3 FGI-4 تظهر فقط حركة منخفضة فيما يتعلق بسلالة النوع البري.يوضح الشكل السوط القطبي من AH-3 من الحارة الأولى ، وعدم وجود طفرات في منطقة FGI من الحارة الثانية وجين FGI-4 من الحارة الثالثة ، حيث يحتوي كلا المتحورين على سوط قطبي بوزن جزيئي أقل من سلالة النوع البري ، مما يشير إلى حدوث تغييرات في السوط غليكان. من المهم التأكد من أن الطفرات لا تؤثر على الجينات النهائية وتؤدي إلى عدم القدرة على تجميع السوط أو عدم القدرة على خيوط السوط. عندما لا يمكن الكشف عن التغيير في بروتينات السوط ، يلزم تحليل مطياف الكتلة باستخدام البروتين الكلي لببتيدات السوط من أجل معرفة كتلة الجليكان.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Luciferase به لالتهابات جرثومية في صورة الفئران

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

قياس الحمولة الجرثومية والاستجابات المناعية في الفئران المصابة المستوحدة الليستيريا</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

البكتيرية التصوير Bioluminescent<em&gt; في الجسم الحي</em

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of ...

Using the Overlay Assay to Qualitatively Measure Bacterial Production of and Sensitivity to Pneumococcal Bacteriocins

باستخدام تراكب الفحص لقياس نوعيا الإنتاج الجرثومي من والحساسية للالرئوية Bacteriocins

Streptococcus pneumoniae colonizes the highly diverse polymicrobial community of the nasopharynx where it must compete with resident organisms.  We have ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

جيل ومتعدد المظهري فحص عالية المحتوى من<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; المسوخ ينقول

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Methods to Inhibit Bacterial Pyomelanin Production and Determine the Corresponding Increase in Sensitivity to Oxidative Stress

طرق لمنع البكتيرية Pyomelanin الإنتاج وتحديد الزيادة المقابلة في الحساسية للإجهاد التأكسدي

Pyomelanin is an extracellular red-brown pigment produced by several bacterial and fungal species. This pigment is derived from the tyrosine catabolism ...

Visualization of Twitching Motility and Characterization of the Role of the PilG in Xylella fastidiosa

Visualization of Twitching Motility and Characterization of the Role of the PilG in Xylella fastidiosa

التصور من الوخز على الحركة وتوصيف دور<em&gt; PilG</em&gt; في<em&gt; Xylella fastidiosa</em

Xylella fastidiosa is a Gram-negative non-flagellated bacterium that causes a number of economically important diseases of plants. The twitching motility ...

Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance

فحوصات لدراسة دور فيترونيكتين في التصاق البكتيريا ومقاومة المصل

Bacteria utilize complement regulators as a means of evading the host immune response. Here, we describe protocols for evaluating the role vitronectin ...