Name: assessment of swim endurance and swim behavior in adult zebrafish
Uploaded: 2021-11-12T13:00:00
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Nous remercions la ressource partagée Zebrafish de l’Université de Washington pour les soins aux animaux. Cette recherche a été soutenue par le NIH (R01 NS113915 à M.H.M.).

Les poissons-zèbres adultes des souches Ekkwill et AB ont été maintenus à l’installation centrale Zebrafish de l’Université de Washington. Toutes les expériences sur les animaux ont été effectuées conformément aux protocoles institutionnels de l’IACUC sur les animaux.
REMARQUE : Un exemple de configuration expérimentale est illustré à la figure 1A. Le couvercle d’étalonnage (personnalisé), le couvercle d’endurance de nage (personnalisé) e...

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	<li>Becker, C. G., Becker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+regeneration+from+ependymo-radial+glial+cells:+cook,+little+pot,+cook.">Neuronal regeneration from ependymo-radial glial cells: cook, little pot, cook.</a> Developmental Cell. 32 (4), 516-527 (2015).</li><li>Mokalled, M. H., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+regeneration+toolkit.">A regeneration toolkit.</a> Developmental Cell. 47 (3), 267-280 (2018).</li><li>Orger, M. B., de Polavieja, G. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury-induced+ctgfa+directs+glial+bridging+and+spinal+cord+regeneration+in+zebrafish.">Injury-induced ctgfa directs glial bridging and spinal cord regeneration in zebrafish.</a> Science. 354 (6312), 630-634 (2016).</li><li>Kizil, C., Kaslin, J., Kroehne, V., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+neurogenesis+and+brain+regeneration+in+zebrafish.">Adult neurogenesis and brain regeneration in zebrafish.</a> Developmental Neurobiology. 72 (3), 429-461 (2012).</li><li>Wolman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+screen+identifies+PAPP-AA-mediated+IGFR+signaling+as+a+novel+regulator+of+habituation+learning.">A genome-wide screen identifies PAPP-AA-mediated IGFR signaling as a novel regulator of habituation learning.</a> Neuron. 85 (6), 1200-1211 (2015).</li><li>Granato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+controlling+and+mediating+locomotion+behavior+of+the+zebrafish+embryo+and+larva.">Genes controlling and mediating locomotion behavior of the zebrafish embryo and larva.</a> Development. 123, 399-413 (1996).</li><li>Brockerhoff, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+screen+for+isolating+zebrafish+mutants+with+visual+system+defects.">A behavioral screen for isolating zebrafish mutants with visual system defects.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (23), 10545-10549 (1995).</li><li>Moens, C. B., Yan, Y. L., Appel, B., Force, A. G., Kimmel, C. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neuron+regeneration+in+adult+zebrafish.">Motor neuron regeneration in adult zebrafish.</a> Journal of Neuroscience. 28 (34), 8510-8516 (2008).</li><li>Klatt Shaw, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+EMT+reprograms+glial+progenitors+to+promote+spinal+cord+repair.">Localized EMT reprograms glial progenitors to promote spinal cord repair.</a> Developmental Cell. 56 (5), 613-626 (2021).</li><li>Ahmed, R. U., Alam, M., Zheng, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+spinal+cord+injury+and+behavioral+tests+in+laboratory+rats.">Experimental spinal cord injury and behavioral tests in laboratory rats.</a> Heliyon. 5 (3), 01324 (2019).</li><li>Pajoohesh-Ganji, A., Byrnes, K. R., Fatemi, G., Faden, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combined+scoring+method+to+assess+behavioral+recovery+after+mouse+spinal+cord+injury.">A combined scoring method to assess behavioral recovery after mouse spinal cord injury.</a> Neuroscience Research. 67 (2), 117-125 (2010).</li><li>Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+reliable+locomotor+rating+scale+for+open+field+testing+in+rats.">A sensitive and reliable locomotor rating scale for open field testing in rats.</a> Journal of Neurotrauma. 12 (1), 1-21 (1995).</li><li>Scheff, S. W., Saucier, D. A., Cain, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+method+for+analyzing+rating+scale+data:+the+BBB+locomotor+score.">A statistical method for analyzing rating scale data: the BBB locomotor score.</a> Journal of Neurotrauma. 19 (10), 1251-1260 (2002).</li><li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+behavioral+responses+of+zebrafish+larvae+to+yohimbine+treatment.">Differential behavioral responses of zebrafish larvae to yohimbine treatment.</a> Psychopharmacology (Berl). 232 (1), 197-208 (2015).</li><li>Wakamatsu, Y., Ogino, K., Hirata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swimming+capability+of+zebrafish+is+governed+by+water+temperature,+caudal+fin+length+and+genetic+background.">Swimming capability of zebrafish is governed by water temperature, caudal fin length and genetic background.</a> Scientific Reports. 9 (1), 16307 (2019).</li><li>Ahmed, O., Seguin, D., Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+predator+avoidance+task+in+zebrafish.">An automated predator avoidance task in zebrafish.</a> Behavioral Brain Research. 216 (1), 166-171 (2011).</li><li>Conradsen, C., McGuigan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexually+dimorphic+morphology+and+swimming+performance+relationships+in+wild-type+zebrafish+Danio+rerio.">Sexually dimorphic morphology and swimming performance relationships in wild-type zebrafish Danio rerio.</a> Journal of Fish Biology. 87 (5), 1219-1233 (2015).</li><li>Leris, I., Sfakianakis, D. G., Kentouri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+zebrafish+Danio+rerio+males+better+swimmers+than+females.">Are zebrafish Danio rerio males better swimmers than females.</a> Journal of Fish Biology. 83 (5), 1381-1386 (2013).</li></ol>

Le poisson-zèbre adulte est un système de vertébrés populaire pour modéliser les maladies humaines et étudier les mécanismes de régénération des tissus. L’édition du génome CRISPR/Cas9 a révolutionné les études génétiques inversées pour la modélisation des maladies chez le poisson-zèbre; cependant, la génétique à grande échelle chez le poisson-zèbre adulte a été entravée par des défis biologiques et techniques, y compris l’indisponibilité des tissus de poisson-zèbre adultes au phénotyp...

Les poissons-zèbres adultes sont éminemment utilisés pour étudier les mécanismes du développement neuromusculaire et musculo-squelettique et la modélisation des maladies1,2,3. Les poissons-zèbres sont capables de réparer efficacement et spontanément plusieurs tissus, y compris le cerveau, la moelle épinière et les muscles squelettiques4,5,6,7. La capacité remarquable de régénérer les tissus neuromusculaires et de modéliser les maladies attire une communauté scientifique croissante dans la recherche sur le poisson-zèbre adulte1,2,3. Cependant, bien que des tests de locomotion et de comportement de nage soient disponibles et normalisés pour les larves de poisson-zèbre, il est de plus en plus nécessaire de développer des protocoles analogues chez les poissons adultes8,9,10,11. L’objectif de cette étude est de décrire des protocoles pour quantifier l’endurance à la nage et le comportement de nage chez le poisson-zèbre adulte. Nous présentons ces protocoles dans le contexte de la recherche sur la régénération de la moelle épinière. Cependant, les protocoles comportementaux décrits ici sont également applicables aux études sur la régénération neuronale et musculaire, le développement neuromusculaire et musculo-squelettique, ainsi que la modélisation des maladies neuromusculaires et musculo-squelettiques.
Paralysie inverse du poisson-zèbre dans les 8 semaines suivant la transsection complète de la moelle épinière. Contrairement aux mammifères peu régénératifs, les poissons-zèbres présentent des réponses pro-régénératives immunitaires, neuronales et gliales nécessaires à la réparation fonctionnelle de la moelle épinière12,13,14. Une lecture ultime de la réparation fonctionnelle de la moelle épinière est la capacité du tissu lésionné à retrouver sa fonction après une blessure. Une série de méthodes normalisées pour évaluer la régénération fonctionnelle chez les rongeurs comprend des tests locomoteurs, moteurs, sensoriels et sensorimoteurs15,16,17. Les tests largement utilisés dans les lésions de la moelle épinière chez la souris comprennent l’échelle locomotrice basso mouse Scale (BMS), les tests moteurs des membres antérieurs, les tests sensoriels tactiles et les tests sensorimoteurs de marche en grille15,17. Contrairement aux systèmes de poissons-zèbres mammifères ou larvaires, les tests comportementaux chez les poissons-zèbres adultes sont moins développés, mais beaucoup plus nécessaires pour répondre aux besoins croissants des communautés de régénération tissulaire et de modélisation des maladies.
Les transsections complètes de la moelle épinière entraînent une paralysie complète caudale au site de la blessure. Peu de temps après la blessure, les animaux paralysés sont moins actifs et évitent autant que possible de nager. Pour compenser la perte de capacité de nage, les animaux paralysés présentent des éclats courts et fréquents en surutilisant leurs nageoires pectorales, qui sont rostrales à la lésion. Cette stratégie de nage compensatoire entraîne un épuisement rapide et une capacité de nage inférieure. Au fur et à mesure que la moelle épinière du poisson-zèbre se régénère, les animaux retrouvent une fonction de nage oscillatoire lisse caudale à la lésion, ce qui permet une endurance accrue à la nage et des paramètres de comportement de nage améliorés. Ici, nous décrivons des méthodes pour quantifier l’endurance de nage du poisson-zèbre à des vitesses de courant d’eau croissantes et le comportement de nage à de faibles vitesses de courant.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AutoSwim software</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>MI10000</td>
			<td>Optional - for Automatic control of current velocity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Customized lid</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>MI10001</td>
			<td>This customized lid is used for swim endurance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAQ-BT</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>SW10600</td>
			<td>Optional - for Automatic control of current velocity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eheim pump</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>PU10160</td>
			<td>20 L/min. This pump is placed in theflow-through tank.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>Fiji</td>
			<td>Freely available through Image J (Fiji)</td>
			<td>Specific script available at https://github.com/MokalledLab/SwimBehavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowtherm</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>AC10000</td>
			<td>Handheld digital flow meter - for calibration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Camera</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>VE10380</td>
			<td>USB 3.0 color video camera (4MP)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR light panel</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>VE10775</td>
			<td>450 x 210 mm, placed under the swim tunnel&#160; chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofocal lens</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>VE10388</td>
			<td>25mm manual lens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC Tubing</td>
			<td>VWR</td>
			<td>60985-534</td>
			<td>5/16 x 7/16&#34;&#160; Wall thickness: 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R Studio</td>
			<td>R Studio</td>
			<td>Freely available. Version 3.6 with extra packages.</td>
			<td>Specific script available at https://github.com/MokalledLab/SwimBehavior</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swim tunnel respirometer</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>SW10060</td>
			<td>5L (120V/60Hz). The system includes the swim chamber, motor, manual control of water current velocity, 1 pump placed inside the chamber, standard swim tunnel lid for swim behavior, and modified swim tunnel lid for calibration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>uEye Cockpit</td>
			<td>IDS</td>
			<td>Freely available software to control camera parameters</td>
			<td>Alternative cameras and accompanying softwares could be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vane wheel flow probe</td>
			<td>Loligo Systems</td>
			<td>AC10002</td>
			<td>Digital flow probe - for calibration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of swim endurance and swim behavior in adult zebrafish

En raison de leur capacité de régénération reconnue, les poissons-zèbres adultes sont un modèle de premier plan pour les vertébrés pour interroger les mécanismes de régénération innée de la moelle épinière. Après une transsection complète de leur moelle épinière, les poissons-zèbres étendent les ponts gliaux et axonaux à travers les tissus sectionnés, régénèrent les neurones proximaux de la lésion et retrouvent leurs capacités de nage dans les 8 semaines suivant la blessure. La récupération de la fonction de nage est donc une lecture centrale pour la réparation fonctionnelle de la moelle épinière. Ici, nous décrivons un ensemble de tests comportementaux pour quantifier la capacité motrice du poisson-zèbre à l’intérieur d’un tunnel de nage fermé. L’objectif de ces méthodes est de fournir des mesures quantifiables de l’endurance à la nage et du comportement de nage chez les poissons-zèbres adultes. Pour l’endurance de la natation, les poissons-zèbres sont soumis à une vitesse de courant d’eau en constante augmentation jusqu’à épuisement et le temps d’épuisement est signalé. Pour l’évaluation du comportement de nage, les poissons-zèbres sont soumis à de faibles vitesses de courant et les vidéos de natation sont capturées avec une vue dorsale du poisson. Le pourcentage d’activité, la fréquence des rafales et le temps passé contre le courant de l’eau fournissent des lectures quantifiables du comportement de nage. Nous avons quantifié l’endurance à la nage et le comportement de nage chez les poissons-zèbres de type sauvage avant les blessures et après la transsection de la moelle épinière. Nous avons constaté que le poisson-zèbre perdait sa fonction de nage après la transsection de la moelle épinière et retrouvait progressivement cette capacité entre 2 et 6 semaines après la blessure. Les méthodes décrites dans cette étude pourraient être appliquées aux études neurocomportementales, musculo-squelettiques, de régénération musculaire squelettique et de régénération neuronale chez le poisson-zèbre adulte.

Nous avons mis en place le tunnel de nage comme décrit à la section 1 de ce protocole (Figure 1). Nous avons évalué l’endurance à la nage (section 2 de ce protocole) ainsi que le comportement de nage (sections 3 et 4 de ce protocole) du poisson-zèbre adulte au départ et après une lésion de la moelle épinière (Figure 2).
Pour établir la fonction motrice de base, nous avons examiné l’endurance à la nage du poisson-zèb...

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Assessment of Swim Endurance and Swim Behavior in Adult Zebrafish

Capable de récupération fonctionnelle après une lésion de la moelle épinière, le poisson-zèbre adulte est un système modèle de premier plan pour élucider les mécanismes innés de la régénération neuronale. Ici, nous décrivons les tests d’endurance et de comportement de natation comme des lectures fonctionnelles de la régénération de la moelle épinière.

Évaluation de l’endurance à la nage et du comportement de nage chez le poisson-zèbre adulte

Due to their renowned regenerative capacity, adult zebrafish are a premier vertebrate model to interrogate mechanisms of innate spinal cord regeneration. ...

Les poissons-zèbres offrent un modèle de régénération neuronale précieux en raison de leur capacité à se remettre d’une lésion de la moelle épinière. Cette méthode décrit l’endurance à la nage et le comportement de nage comme des lectures de la réparation fonctionnelle de la moelle épinière. Cette technique fournit une évaluation fiable et quantifiable de l’endurance à la nage et du comportement de nage chez le poisson-zèbre adulte.Ces méthodes sont également applicables aux études du développement neuromusculaire et musculo-squelettique, de la maladie et de la régénération. Pour évaluer l’endurance à nager, ouvrez le logiciel de contrôle de la vitesse d’écoulement. Cliquez sur la case intitulée Expérience et décochez Uswim et Uwater.Ensuite, modifiez la vitesse d’écoulement dans la boîte uwater en bas à gauche pour ajuster les vitesses du courant d’eau. Pour commencer un protocole automatisé, cliquez sur la case Démarrer la journalisation. Dans la fenêtre de dialogue qui s’ouvre, choisissez Automatisé dans la liste déroulante.Pour ouvrir un fichier de protocole précédemment enregistré, cliquez sur l’icône de fichier à côté du fichier de protocole. Ensuite, configurez le fichier de sortie en cliquant sur l’icône du fichier à côté du fichier journal. Dans la fenêtre de l’explorateur de fichiers qui s’ouvre, nommez le fichier de sortie et enregistrez-le à l’emplacement souhaité.Ensuite, configurez une fenêtre de minuterie fractionnée pour assurer un accès simultané au logiciel de contrôle de la vitesse d’écoulement et aux fenêtres de minuterie sur l’écran de l’ordinateur. Ensuite, installez un aquarium de collecte de poissons pour abriter les poissons épuisés après leur retrait du tunnel de baignade. Remplissez le réservoir de collecte et un long tube de polychlorure de vinyle avec de l’eau du système de poisson zèbre.Placez une extrémité du tube prérempli dans le réservoir de collecte et une autre dans le réservoir tampon, en veillant à ce que l’eau puisse s’écouler librement du réservoir tampon dans le réservoir de collecte. Serrez l’extrémité supérieure du tube avec un clip de liant pour empêcher l’écoulement de l’eau et utilisez le clip de liant pour contrôler l’écoulement de l’eau au besoin. Fermez le tunnel de natation avec le couvercle d’endurance de natation avant de placer un groupe de poissons à l’intérieur du tunnel de natation.Pour acclimater le poisson au tunnel de nage et à la direction de l’écoulement, démarrez le chronomètre fractionné et ajustez la vitesse actuelle à zéro centimètre par seconde pendant les cinq premières minutes, à neuf centimètres par seconde pendant les cinq minutes suivantes et à 10 centimètres par seconde pendant les cinq minutes suivantes. Après l’acclimatation, ouvrez le protocole et démarrez le programme automatisé de contrôle de la vitesse d’écoulement, qui augmentera la vitesse du courant d’eau de deux centimètres par seconde chaque minute. Surveillez le poisson pour l’épuisement.Les poissons épuisés seront poussés vers l’arrière du tunnel de baignade. Pour vous assurer qu’un poisson est épuisé, tapotez doucement l’extrémité arrière du tunnel ou créez une ombre sur cette zone pour stimuler le poisson à nager. Les poissons épuisés n’ont pas répondu au stimulus de sursaut et gisaient à plat à l’extrémité arrière du tunnel.Lorsqu’un poisson est épuisé, désaler le tube de collecte du poisson. Ouvrez la fenêtre du tunnel de nage et ramassez les poissons dans l’aquarium de collecte. Enregistrez le temps à l’épuisement à l’aide du chronomètre fractionné.Une fois que tous les poissons sont épuisés et collectés dans le réservoir de collecte, cliquez sur le bouton Arrêt d’urgence du logiciel de contrôle de la vitesse d’écoulement et arrêtez la minuterie. Pour capturer des films pour le test de comportement de nage, placez un groupe de poissons dans le tunnel de nage et fermez le tunnel à l’aide d’un couvercle standard entièrement fermé. Ensuite, ouvrez une nouvelle fenêtre d’enregistrement et nommez le fichier.Ne cliquez pas encore sur Enregistrer. Avant de commencer une nouvelle expérience, placez une serviette en papier ou un morceau de tissu sur le côté du tunnel de nage pour vous assurer que tous les comportements sont dus à la nage des poissons et non à une réaction de sursaut causée par un mouvement dans l’environnement. Après vous être assuré que l’eau est calme et qu’aucune ondulation ne se déplace sur le cadre, cliquez sur Enregistrer dans la fenêtre du logiciel de l’appareil photo pour commencer à enregistrer le fichier vidéo.Cliquez ensuite sur Démarrer dans le logiciel de contrôle de la vitesse d’écoulement pour commencer le protocole, qui se poursuivra sans interruption. Regardez le film pour vous assurer qu’aucune image n’est lâchée, qu’il n’y a pas de bulles dans le champ de vision et que tous les poissons sont enregistrés. Une fois l’enregistrement vidéo terminé, cliquez sur Arrêt d’urgence pour mettre fin au protocole de contrôle de la vitesse d’écoulement et vérifier que le fichier de sortie de données est enregistré automatiquement.Ensuite, fermez la fenêtre d’enregistrement pour enregistrer le fichier vidéo. Après l’enregistrement, retirez le couvercle. Récupérez soigneusement les poissons et retournez-les dans leur aquarium.Pour analyser les films capturés, ouvrez le tracking_v2. ijm script aux Fidji et cliquez sur Exécuter pour commencer le programme. Dans la fenêtre contextuelle, choisissez le dossier contenant les films de comportement de natation à suivre et cliquez sur Ouvrir.Recherchez l’une des images du premier film, une boîte de dialogue et la région d’intérêt, ou gestionnaire de retour sur investissement, qui apparaîtra. Suivez les instructions données dans la boîte de dialogue et créez un retour sur investissement au bas de la chambre du tunnel de nage. Cliquez ensuite sur OK et assurez-vous qu’aucun coin noir n’est vu.La fenêtre de seuil s’ouvre avec un cadre de seuil modifié. Changez le jeu de couleurs du noir et blanc au rouge et ajustez la valeur maximale jusqu’à ce que la première image n’affiche que le poisson en rouge et rien d’autre. Enregistrez le seuil et cliquez sur OK dans la boîte de dialogue.Pour aligner, assembler et acquérir des statistiques descriptives, ouvrez le SwimBehavior_v7-3. R script dans RStudio et cliquez sur Source dans le coin supérieur droit de la section script. Dans une nouvelle fenêtre qui s’ouvre, choisissez le dossier contenant le _raw.csv générés par Fidji et cliquez sur Ouvrir. Le programme s’exécutera automatiquement. Dans la boîte de dialogue contextuelle, confirmez le nombre de poissons dans chaque film.Cliquez sur Oui si les chiffres donnés sont corrects ou non si les chiffres sont incorrects. Une fois les fichiers alignés, recherchez un _aligned nouvellement généré. fichier csv.Après vous être assuré que le programme combine les données, exécute des statistiques et trace des graphiques de sortie, recherchez les fichiers d’analyse générés dans un nouveau dossier intitulé Résultats dans le dossier parent contenant les _raw. csv et _aligned. csv.L’endurance en natation évaluée à deux, quatre et six semaines après la blessure a montré une perte de 60% de la capacité d’endurance en natation à deux semaines. Le poisson régénérant a progressivement retrouvé son endurance à la nage quatre et six semaines après sa blessure. Dans le test de comportement de nage, les commandes nageaient régulièrement dans la partie avant de la chambre du tunnel de nage correspondant à une position Y élevée.En revanche, deux semaines après la blessure, les poissons blessés ne pouvaient pas maintenir une capacité de nage stable à contre-courant. Par conséquent, leurs pistes de nage sont plus irrégulières, avec une diminution globale de la position Y. La position Y a augmenté quatre et six semaines après la blessure, ce qui indique que les animaux en régénération ont progressivement retrouvé leur capacité à nager.De plus, par rapport aux témoins non blessés, les animaux blessés deux semaines après la blessure étaient nettement moins actifs, calés dans le quadrant arrière du tunnel de nage et ont perdu leur capacité à nager contre de faibles vitesses de courant. Conformément à leur capacité innée à atteindre une récupération fonctionnelle, les animaux lésés ont progressivement normalisé les paramètres de comportement de nage quatre et six semaines après la blessure. L’utilisation du logiciel de contrôle de la vitesse d’écoulement dans ce protocole est facultative.L’alternative consiste à contrôler manuellement le moteur à courant d’eau. Les tests décrits dans cette étude peuvent être utilisés pour pré-dépister les phénotypes neuronaux, musculaires ou squelettiques. Le tissu d’intérêt peut ensuite être récolté pour un examen histologique ou moléculaire.Notre laboratoire et d’autres ont utilisé ce protocole pour identifier les gènes nécessaires à la réparation neuronale innée et les facteurs suffisants pour améliorer la régénération neuronale.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Studying the Integration of Adult-born Neurons

Etudier l&#39;intégration des adultes-né Neurones

Neurogenesis occurs in adult mammalian brains in the sub-ventricular zone (SVZ) of the lateral ventricle and in the sub-granular zone (SGZ) of the ...

Recherche

Neurosciences

The Mouse Forced Swim Test

Le test de natation forcée souris

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

Marquage rétrograde des cellules ganglionnaires de la rétine à l&#39;âge adulte de poisson zèbre avec des colorants fluorescents

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

Enregistrement électrophysiologique dans le cerveau d&#39;Intact poisson zèbre adulte

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Automated Analysis of C. elegans Swim Behavior Using CeleST Software

Automated Analysis of C. elegans Swim Behavior Using CeleST Software

Analyse automatisée de<em&gt; C. elegans</em&gt; Comportement Swim Utiliser Celest Software

Dissecting the neuronal and neuromuscular circuits that regulate behavior remains a major challenge in biology. The nematode Caenorhabditis elegans has ...

Modeling Amyloid-&#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Modélisation de toxicité amyloïde-β42 et neurodégénérescence dans le cerveau de poisson-zèbre adulte

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to ...

Assessment of Long-term Depression Induction in Adult Cerebellar Slices

Évaluation de l'induction à long terme de dépression dans les tranches de cérévelateur adultes

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...

A Scalable Model to Study the Effects of Blunt-Force Injury in Adult Zebrafish

Un modèle évolutif pour étudier les effets des blessures contondantes chez le poisson-zèbre adulte

Blunt-force traumatic brain injuries (TBI) are the most common form of head trauma, which spans a range of severities and results in complex and ...

Shuttle Box Assay as an Associative Learning Tool for Cognitive Assessment in Learning and Memory Studies using Adult Zebrafish

Shuttle Box Assay en tant qu’outil d’apprentissage associatif pour l’évaluation cognitive dans les études d’apprentissage et de mémoire à l’aide de poissons-zèbres adultes

Cognitive deficits, including impaired learning and memory, are a primary symptom of various developmental and age-related neurodegenerative diseases and ...

Deep-Tissue Three-Photon Fluorescence Microscopy in Intact Mouse and Zebrafish Brain

Microscopie à fluorescence à trois photons des tissus profonds dans le cerveau intact d’une souris et d’un poisson-zèbre

Multiphoton microscopy techniques, such as two-photon microscopy (2PM) and three-photon microscopy (3PM), are powerful tools for deep-tissue in vivo ...