Name: mass production of entomopathogenic fungi, metarhizium robertsii and metarhizium pinghaense, for commercial application against insect pests
Uploaded: 2022-03-31T13:10:00
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저자들은 Hort Pome, Hort Stone, 그리고 프로젝트 자금을 지원해 주신 산업 프로그램 기술 및 인적 자원 (THRIP : TP14062571871)에 감사드립니다.
오시드: 레토디 엘 마툴웨 http://orcid.org/0000-0002-5118-3578
앙투아네트 P. 말란 http://orcid.org/0000-0002-9257-0312
노막홀와 F. 스토크웨 http://orcid.org/0000-0003-2869-5652

1. 곰팡이 균주의 공급원
<ol><li>남아프리카 공화국 서부 케이프 지방의 사과 과수원에서 채취한 M. pinghaense 5 HEID (GenBank 가입 번호: MT367414/MT895630) 및 M. robertsii 6EIKEN (MT378171/MT380849)의 남아프리카 분리된 곰팡이 균주를 사용하십시오.</li>
	<li>각 EPF의 성장 배양물을 60 g의 사부라우드 덱스트로스 한천 배지 상에서 단리하고, 1 g의 효모 추출물 (SDAY) 및 10 μL의 스트렙토...

<ol>
	<li>Shah, P. A., Pell, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entomopathogenic+fungi+as+biological+control+agents.">Entomopathogenic fungi as biological control agents.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 61 (5), 413-423 (2003).</li><li>Mathulwe, L. L., Malan, A. P., Stokwe, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+biology+and+control+of+the+obscure+mealybug,+Pseudococcus+viburni+(Hemiptera:+Pseudococcidae),+with+special+reference+to+biological+control+using+entomopathogenic+fungi+and+nematodes.">A review of the biology and control of the obscure mealybug, Pseudococcus viburni (Hemiptera: Pseudococcidae), with special reference to biological control using entomopathogenic fungi and nematodes.</a> African Entomology. 29 (1), 1-16 (2020).</li><li>Ibrahim, L., Laham, L., Touma, A., Ibrahim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production,+yield,+quality,+formulation+and+efficacy+of+entomopathogenic+Metarhizium+anisopliae+conidia.">Mass production, yield, quality, formulation and efficacy of entomopathogenic Metarhizium anisopliae conidia.</a> Current Journal of Applied Science and Technology. 9 (5), 427-440 (2015).</li><li>Banu, J. G., Rajalakshmi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardisation+of+media+for+mass+multiplication+of+entomopathogenic+fungi.">Standardisation of media for mass multiplication of entomopathogenic fungi.</a> Indian Journal of Plant Protection. 42 (1), 91-93 (2014).</li><li>Roberts, D. W., Humber, R. A., Cole, G. T., Kendrick, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entomogenous+fungi.">Entomogenous fungi.</a> Biology of Conidial Fungi. , 201-236 (1981).</li><li>Feng, M. G., Poprawski, T. J., Khachatourians, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production,+formulation+and+application+of+the+entomopathogenic+fungus+Beauveria+bassiana+for+insect+control.+Current+status.">Production, formulation and application of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana for insect control. Current status.</a> Biocontrol Science and Technology. 4 (1), 3-34 (1994).</li><li>Karanja, L. W., Phiri, N. A., Oduor, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+solid+substrates+on+mass+production+of+Beauveria+bassiana+and+Metarhizium+anisopliae+entomopathogens.">Effect of different solid substrates on mass production of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae entomopathogens.</a> The Proceedings of the12th KARI Biennial Scientific Conference. , 8-12 (2010).</li><li>Prasad, C. S., Pal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+and+economics+of+entomopathogenic+fungus,+Beauveria+bassiana,+Metarhizium+anisopliae+and+Verticillium+lecanii+on+agricultural+and+industrial+waste.">Mass production and economics of entomopathogenic fungus, Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae and Verticillium lecanii on agricultural and industrial waste.</a> Scholars Journal of Agriculture and Veterinary Sciences. 1 (1), 28-32 (2014).</li><li>Ehlers, R. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+entomopathogenic+nematodes+for+plant+protection.">Mass production of entomopathogenic nematodes for plant protection.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 56 (5), 623-633 (2001).</li><li>Pham, T. A., Kim, J. J., Kim, S. G., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+blastospore+of+entomopathogenic+Beauveria+bassiana+in+a+submerged+batch+culture.">Production of blastospore of entomopathogenic Beauveria bassiana in a submerged batch culture.</a> Mycobiology. 37 (3), 218-224 (2009).</li><li>Bhadauria, B. P., Puri, S., Singh, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+entomopathogenic+fungi+using+agricultural+products.">Mass production of entomopathogenic fungi using agricultural products.</a> The Bioscan. 7 (2), 229-232 (2012).</li><li>Latifian, M., Rad, B., Amani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+entomopathogenic+fungi+Metarhizium+anisopliae+by+using+agricultural+products+based+on+liquid-solid+diphasic+method+for+date+palm+pest+control.">Mass production of entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae by using agricultural products based on liquid-solid diphasic method for date palm pest control.</a> International Journal of Farming and Allied Sciences. 3 (4), 368-372 (2014).</li><li>Agale, S. V., Gopalakrishnan, S., Ambhure, K. G., Chandravanshi, H., Gupta, R., Wani, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+entomopathogenic+fungi+(Metarhizium+anisopliae)+using+different+grains+as+a+substrate.">Mass production of entomopathogenic fungi (Metarhizium anisopliae) using different grains as a substrate.</a> International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences. 7 (1), 2227-2232 (2018).</li><li>Jackson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+nutritional+conditions+for+the+liquid+culture+production+of+effective+fungal+biological+control+agents.">Optimizing nutritional conditions for the liquid culture production of effective fungal biological control agents.</a> Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology. 19 (3), 180-187 (1997).</li><li>Deshpande, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycopesticides+production+by+fermentation.+Potential+and+challenges.">Mycopesticides production by fermentation. Potential and challenges.</a> Critical Reviews in Microbiology. 25 (3), 229-243 (1999).</li><li>Sahayaraj, K., Namasivayam, S. K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+entomopathogenic+fungi+using+agricultural+products+and+by+products.">Mass production of entomopathogenic fungi using agricultural products and by products.</a> African Journal of Biotechnology. 7 (12), 1907-1910 (2008).</li><li>Feng, K. C., Liu, L. B., Tzeng, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Verticillium+lecanii+spore+production+in+solid-state+and+liquid-state+fermentations.">Verticillium lecanii spore production in solid-state and liquid-state fermentations.</a> Bioprocess Engineering. 23 (1), 25-29 (2000).</li><li>Jaronski, S. T., Jackson, M. A., Lacey, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+entomopathogenic+Hypocreales.">Mass production of entomopathogenic Hypocreales.</a> Manual of Techniques in Invertebrate Pathology 2nd edition. , 255-284 (2012).</li><li>Vega, F. E., Jackson, M. A., Mercandier, G., Poprawski, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+nutrition+on+spore+yields+for+various+fungal+entomopathogens+in+liquid+culture.">The impact of nutrition on spore yields for various fungal entomopathogens in liquid culture.</a> World Journal of Microbiology and Biotechnology. 19 (4), 363-368 (2003).</li><li>El Damir, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+growing+media+and+water+volume+on+conidial+production+of+Beauveria+bassiana+and+Metarhizium+anisopliae.">Effect of growing media and water volume on conidial production of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae.</a> Journal of Biological Sciences. 6 (2), 269-274 (2006).</li><li>Pandey, A. K., Kanaujia, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+grains+as+solid+substrates+on+sporulation,+viability+and+pathogenicity+of+Metarhizium+anisopliae+(Metschnikoff)+Sorokin.">Effect of different grains as solid substrates on sporulation, viability and pathogenicity of Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin.</a> Journal of Biological Control. 22 (2), 369-374 (2008).</li><li>Kassa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whey+for+mass+production+of+Beauveria+bassiana+and+Metarhizium+anisopliae.">Whey for mass production of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae.</a> Mycological Research. 112 (5), 583-591 (2008).</li><li>Sharma, S., Gupta, R. B. L., Yadavam, C. P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+of+a+suitable+medium+for+mass+multiplication+of+entomofungal+pathogens.">Selection of a suitable medium for mass multiplication of entomofungal pathogens.</a> Indian Journal of Entomology. 64 (3), 254-261 (2002).</li><li>Bich, G. A., Castrillo, M. L., Villalba, L. L., Zapata, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+rice+by-products,+incubation+time,+and+photoperiod+for+solid+state+mass+multiplication+of+the+biocontrol+agents+Beauveria+bassiana+and+Metarhizium+anisopliae.">Evaluation of rice by-products, incubation time, and photoperiod for solid state mass multiplication of the biocontrol agents Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae.</a> Agronomy Research. 16 (5), 1921-1930 (2018).</li><li>Price, R. E., M&#252;ller, E. J., Brown, H. D., D'Uamba, P., Jone, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+first+trial+of+a+Metarhizium+anisopliae+var.+acridum+mycoinsecticide+for+the+control+of+the+red+locust+in+a+recognised+outbreak+area.">The first trial of a Metarhizium anisopliae var. acridum mycoinsecticide for the control of the red locust in a recognised outbreak area.</a> International Journal of Tropical Insect Science. 19 (4), 323-331 (1999).</li><li>Hatting, J. L., Moore, S. D., Malan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+control+of+phytophagous+invertebrate+pests+in+South+Africa.+Current+status+and+future+prospects.">Microbial control of phytophagous invertebrate pests in South Africa. Current status and future prospects.</a> Journal of Invertebrate Pathology. 165, 54-66 (2019).</li><li>Mathulwe, L. L., Malan, A. P., Stokwe, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+screening+of+entomopathogenic+fungi+and+nematodes+for+pathogenicity+against+the+obscure+mealybug,+Pseudococcus+viburni+(Hemiptera:+Pseudococcidae).">Laboratory screening of entomopathogenic fungi and nematodes for pathogenicity against the obscure mealybug, Pseudococcus viburni (Hemiptera: Pseudococcidae).</a> Biocontrol Science and Technology. , (2021).</li><li>Inglis, G. D., Enkerli, J., Goettel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+techniques+used+for+entomopathogenic+fungi:+Hypocreales.">Laboratory techniques used for entomopathogenic fungi: Hypocreales.</a> Manual of Techniques in Invertebrate Pathology. , 189-253 (2012).</li><li>Mehta, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+carbon+&amp;+nitrogen+sources+on+the+Trichoderma+viride+(Biofungicide)+and+Beauveria+bassiana+(entomopathogenic+fungi).">Impact of carbon &amp; nitrogen sources on the Trichoderma viride (Biofungicide) and Beauveria bassiana (entomopathogenic fungi).</a> European Journal of Experimental Biology. 2 (6), 2061-2067 (2012).</li><li>Burges, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formulation+of+mycoinsecticides.">Formulation of mycoinsecticides.</a> Formulation of Microbial Biopesticides. , 131-185 (1998).</li></ol>

농업 생태계에서 중요한 농업 곤충 해충의 생물학적 방제를위한 미생물 제제의 성공적인 통합은 실험실 조건 하에서 첫 번째 단계로서 엔토모 병원균의 대량 생산의 성공과 용이성에 달려 있습니다. EPF의 대량 생산은 생물학적 제어 9,10,11,12,13을 사용하는 IPM 프로그램을위한 EPF 제품의 대규모 적용 및 가용성...

엔토모병원성 진균(EPF)은 중요한 농작물 해충 1,2의 생물학적 방제에서 작물 보호제로서 중요성을 갖게 되었다. 토양에서 자연적으로 발생하는 엔토모 병원균은 다양한 해충 종의 개체군에서 epizootics를 일으킨다3. EPF의 종은 숙주 특이적이며 비 표적 종을 공격하는 측면에서 상대적으로 적은 위험을 제기하며 환경에 독성이없습니다 4. EPF는 호스트를 침범하는 것뿐만 아니라 즉각적인 환경에서 전파하고 지속하기위한 고유 한 메커니즘을 가지고 있습니다1. 그들은 주로 숙주 표피에 부착되고 침투하여 숙주 헤모코엘에서 침입하고 증식하는 무성 포자를 통해 숙주를 공격합니다. 숙주는 결국 혈림프 영양소의 고갈 또는 곰팡이에 의해 방출 된 독성 대사 산물에 의한 독혈증의 결과로 사망합니다. 사망 후, 이상적인 환경 조건 하에서, 곰팡이는 숙주 사체 5,6의 외부 표면 (명백한 진균증)에 나타납니다.
화학 잔류 물이 인체 건강, 환경 오염 및 해충 저항성의 발달에 미치는 부정적인 영향에 대한 우려가 커짐에 따라 화학 물질 기반 살충제의 투입을 줄이고 작물 보호 및 해충 방제를위한 대안적이고 참신하며 지속 가능한 전략을 모색하려는 세계적인 움직임이 생겨났습니다 6,7,8 . 이것은 기존의 화학 물질 방제 3,8보다 생태 학적으로 유리한 전략 인 통합 해충 관리 (IPM) 프로그램에 사용하기위한 미생물 기반 살충제를 개발할 수있는 기회를 제공했습니다.
농업 해충에 대한 성공적인 미생물 방제제를 개발하려면 먼저 적합한 유기체를 분리, 특성화, 확인 및 대상 해충에 대한 병원성을 확인해야합니다. 그러나, 생물학적 제어 프로그램(9,10,11,12,13)에 사용하기 위한 실행 가능한 생성물을 생산하기 위해서는 미생물 제제의 대규모 생산을 위한 용이하고 비용 효율적인 방법이 요구된다. 양질의 엔토모병원체의 상당한 양의 대량 생산은 미생물 균주, 환경, 표적 해충, 제형, 시장, 적용 전략 및 원하는 최종 생성물 14,15,16에 의존한다. EPF는 액체 기질 발효를 사용하여 배반포자를 생산하거나 공중 원추 6,17,18을 생산하기 위해 고체 기질 발효 공정을 사용하여 대량 생산할 수 있습니다. 그러나 엔토모병원체의 대량 생산 및 제형 공정은 최종 제품의 독성, 비용, 유통 기한 및 현장 효능에 직접적인 영향을 미칩니다. IPM에서 성공적으로 사용하기 위해서는 엔토모 병원균의 생산 공정이 작동하기 쉽고, 최소한의 노동력이 필요하며, 독성이 뛰어나고 실행 가능하며 지속적인 프로파굴레의 고수율 농도를 생산해야하며 비용4,13,14,16이 낮아야합니다.
엔토모병원균의 영양 요구량을 이해하는 것은 모든 배양 방법 4,12를 사용한 대량 재배에 중요하다. 생산 배지의 영양 성분은 생물방제 효능, 수율, 건조 내성 및 지속성 8,19,20,21을 포함하여 생성된 프로파귤류의 특성에 상당한 영향을 미친다. 생산 절차의 최적화는 이러한 인자들(22)을 다루도록 설계된다. EPF의 경우, 곰팡이 코니디아의 좋은 성장, 다공 및 대량 생산을위한 주요 요구 사항은 적절한 수분, 최적의 성장 온도, pH,CO2 및O2의 가스 교환 및 좋은 인, 탄수화물, 탄소 및 질소 공급원을 포함한 영양 (18)입니다.
Jaronski와 Jackson18은 고체 기질 발효 방법을 액체 기질 발효 방법에 비해 EPF 생산을위한 자연 공정에 가장 효율적이고 가장 가까운 근사 방법으로 설명하는데, 이는 자연 조건 하에서 곰팡이 코니듐이 곤충 사체의 표면과 같은 고체 직립 구조에서 부담되기 때문입니다. 전분을 함유 한 농산물 및 부산물은 곰팡이가 히팔 끝에서 고농축 가수 분해 효소의 분비를 통해 전분을 쉽게 분해하고 고체 물질에 침투하며 물질11,17,18,23에 존재하는 영양소에 접근하기 때문에 저실질 곰팡이의 대량 생산에 주로 사용됩니다. . 곡물 제품은 또한 건강한 바이오 매스 생산을위한 요구 사항을 제공하는데, 왜냐하면 그들이 수화되고 멸균 될 때, 기질은 모든 액체 배지16,18,24에서 더 많은 영양소를 흡수 할 수 있기 때문입니다.
이전에 여러 연구가 Beauveria bassiana (Bals)와 같은 EPF 종을 대량 배양하려고 시도했습니다. Vuil., Cordyceps fumosorosea (Wize) Kelper B. Shrestha & Spatafora, Verticillium lecanii (Zimm.) Viegas와 Metarhizium anisopliae (Metschn) 중 일부. 소로킨 종 복합체는 다양한 기질16,23,24 상에서 분리된다. 이러한 대량 생산 및 상업적으로 개발된 단리물에는 M. anisopliae var Metarhizium acridum (Driver & Milner) J.F. Bisch, Rehner & Humber, Metarhizium 69 (Meta 69 strain ICIPE69), 및 M. anisopliae로부터 개발된 Real Metarhizium 69 (L9281) 및 B. bassiana25,26으로부터 개발된 Broadband® (균주 PPRI 5339) 및 Eco-Bb로부터 개발된 Green Muscle®® (균주 IMI 330189)이 포함된다. . 그러나 Metarhizium robertsii J.F. Bisch., S.A. Rehner & Humber 및 Metarhizium pinghaense Chen & Guo의 대량 문화에 대한 시도는 제한적이었습니다. 이들 두 단리물은 이전 연구에서 메뚜기벌레의 조절에 가장 효과적인 것으로서, 슈도코커스 비버니 시뇨레트(Hemiptera: Pseudococcidae)27로 선택되었다. 따라서 현재의 연구는 곤충 해충에 대한 상업적 적용을 위해 M. robertsii 및 M. pinghaense의 국소 분리 물의 충분한 수의 탄력적 인 감염성 프로파굴레를 공식화하고 대량 생산하는 것을 목표로했습니다. 고체 기질 발효 방법은 EPF 단리물 둘 다에 대한 진균성 코니디아를 대량 생산하기 위해 사용되었다. 침엽수 현탁액 및 블라스토포자의 액체 진균 배양을 사용하는 두 가지 EPF 접종 방법이 고체 기질을 접종하기 위해 사용되었다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% Tween 20</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>Added to conidial suspensions to allow fungal spores to mix with water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL McCartney bottles</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>Used to make conidial suspensions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium foil</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used as a cover of the cotton wool plugs on 250-mL flask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to sterilize materials and ingredients used for the conidia production process</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave bags</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>Fermentation bags or solid substrate containers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave tape</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>To secure PVC pipes on the fermentation bags</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brown Kraft paper bags</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to dry conidia cultures on agricultural grains</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bunsen burnner</td>
			<td>Labnet (Labnet International, Inc.)</td>
			<td></td>
			<td>Used to flame equipment (surgical blades,inoculating loops and rims of flasks)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear edge test sieve</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to separate fungal conidia from agricultural grain substrates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn steep liquor</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>66071-94-1</td>
			<td>Ingredient of the blastospore liquid medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Wool</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>Used as plug of the neck for fermentation bags</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duran laboratory bottles</td>
			<td>Neolab</td>
			<td></td>
			<td>Used to autoclave SDA medium and distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to tape and seal the sieve joints to prevent the escape of conidial dust</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ENDECOTTS test sieve</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to separate fungal conidia from agricultural grain substrates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer Flasks, Narrow neck,250-mL flask</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>Carrier of the blastospore liquid medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (99%)</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>Used to sterilize surgical blades and inoculating loops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flaked barley</td>
			<td>Health Connection Wholefoods</td>
			<td></td>
			<td>Agricultural grain used as a solid substrate growth medium for conidia of both M. pinghaense and M. robertsii</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flaked oats</td>
			<td>Tiger brands</td>
			<td></td>
			<td>Agricultural grain used as a solid substrate growth medium for conidia of both M. pinghaense and M. robertsii</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td>Ingredient of the blastospore liquid medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth Chamber/ incubators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For growing fungal conidia culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haemocytometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to determine conidial concentrations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inoculating loops</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>For harvesting spores to innoculate liquid medium for blastospores growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kitchen rolling pin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to manipulate the solid grain substrate bed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar flow Cabinet</td>
			<td>ESCO Laminar Flow Cabinet</td>
			<td></td>
			<td>Provide as sterile environment during substrate inoculation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metarhizium pinghaense conidia</td>
			<td>Stellenbosch University</td>
			<td>5HEID</td>
			<td>Cultures used to mass culture conidia of Metarhizium pinghaense</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metarhizium robertsii conidia</td>
			<td>Stellenbosch University</td>
			<td>6EIKEN</td>
			<td>Cultures used to mass culture conidia of Metarhizium robertsii</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>ZEIZZ (Scope. A1)</td>
			<td></td>
			<td>Used to determine conidial concentrations and conidial viability</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>IncoShake- LABOTEC</td>
			<td></td>
			<td>Used for the blastospore production process</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parboiled rice</td>
			<td>Spekko</td>
			<td></td>
			<td>Agricultural grain used as a solid substrate growth medium for conidia of both M. pinghaense and M. robertsii</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td></td>
			<td>Added to the SDA medium to prevent bacterial contamination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri-dishes</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>Containers for the SDA medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes and pipette tips</td>
			<td>Labnet (BioPette PLUS)</td>
			<td></td>
			<td>Used to measure liquids ingredients</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinylchloride Marley waste pipe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to create a neck for the fermentation bag</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate dibasic (K2HPO4)</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td></td>
			<td>Ingredient of the blastospore liquid medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber band</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to secure the secure the surgical paper over the fermentation bag PVC pipe necks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sabaroud dextrose agar (SDA)</td>
			<td>NEOGEN Culture Media</td>
			<td></td>
			<td>Medium used to culture spores of both Metarhizium pinghaense and Metarhizium robertsii</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To hydrate agricultural grains, to make conidial suspensions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sticky pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to secure the seives on the vibratory shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>Used to scrape off spores from fungal cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical paper</td>
			<td>Lasec</td>
			<td></td>
			<td>Used to cover the PVC necks and cotton wool plugs of the fermentation bag</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratory shaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used to shake conidia off the agricultural grain substrates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>Labnet (Labnet International, Inc.)</td>
			<td></td>
			<td>Used to mix conidial suspensions in Mc Cartney bottles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Biolab</td>
			<td></td>
			<td>Added to the SDA medium to improve spore germination and growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zipper-lock bags</td>
			<td>GLAD</td>
			<td></td>
			<td>Used to to store harvested fungal conidia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mass production of entomopathogenic fungi, metarhizium robertsii and metarhizium pinghaense, for commercial application against insect pests

Metarhizium anisopliae 종 복합체의 Entomopathogenic 진균은 농업 곤충 해충의 생물학적 방제제로서 중요성을 얻고있다. 화학 살충제에 대한 해충 저항성의 증가, 살충제가 인체 건강에 미치는 부정적인 영향에 대한 우려가 커짐에 따라 농약으로 인한 환경 오염은 작물 보호 및 해충 방제를위한 새로운 지속 가능한 전략을 찾는 세계적인 추진력으로 이어졌습니다. 이전에, 보베리아 바시아나와 같은 엔토모병원성 진균(EPF) 종을 대량 배양하려는 시도가 수행되었다. 그러나 곤충 해충에 대한 사용을 위해 Metarhizium robertsii 및 M. pinghaense를 대량 배양하려는 시도는 제한적이었습니다. 이 연구는 상업적 적용을 위해 M. robertsii 및 M. pinghaense의 남아프리카 분리 물의 충분한 수의 탄력적 인 감염성 프로파굴레를 대량 생산하는 것을 목표로했습니다. 세 가지 농산물, 조각난 귀리, 조각난 보리, 쌀이 EPF 고체 발효 기질로 사용되었다. 두 가지 접종 방법, 원추형 현탁액 및 블라스토포자의 액체 진균 배양물을 고체 기질을 접종하기 위해 사용하였다. 원추형 현탁액을 사용한 접종은 블라스토포어 접종 방법을 사용할 때와 비교하여 고체 기질 상에서 증가된 오염 수준이 관찰되었기 때문에 상대적으로 덜 효과적인 것으로 관찰되었다. 플레이크된 귀리는 M. robertsii 및 M. pinghaense 둘 다에 적합한 성장 기질이 아닌 것으로 밝혀졌으며, 건조 코니디아가 기질로부터 수확되지 않았기 때문이다. 플랙 보리는 M. pinghaense보다 M. robertsii conidia의 생산을 선호하는 것으로 밝혀졌으며, 1.47g의 건조 M. robertsii conidia와 M. pinghaense conidia의 0 그램± 평균 1.83g을 기질로부터 수확하였다. 쌀알은 M. pinghaense와 M. robertsii 단리물 모두의 침엽수 대량 생산을 선호하는 것으로 밝혀졌으며, 기질로부터 수확 된 2g± 평균 8.2g 및 4.38g 및 6g ± 2g이 각각 발견되었습니다.

M. pinghaense 및 M. robertsii 둘 다에 대한 쌀 상의 배양물의 함량 질량의 감소는 진균 배양물의 건조 단계 동안 시간에 따라 관찰되었으며, 배양물이 건조되면 질량에서 관찰되는 변화가 없거나 거의 관찰되지 않았다(도 5). M. pinghaense 및 M. robertsii 둘 다의 수확된 건조 진균 코니디아 분말을 도 6에 나타내었다.
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Mass Production of Entomopathogenic Fungi, Metarhizium robertsii and Metarhizium pinghaense, for Commercial Application Against Insect Pests

Entomopathogenic 진균은 농업 곤충 해충의 생물학적 방제제로서 중요성을 얻고있다. 이 연구에서, 곤충 해충에 대한 상업적 적용을 위해 Metarhizium robertsii 및 M. pinghaense 둘 다의 남아프리카 단리물의 충분한 수의 탄력적 감염성 프로파굴레의 대량 생산은 농산물 곡물 제품을 사용하여 성공적으로 수행되었다.

곤충 해충에 대한 상업적 적용을위한 Entomopathogenic Fungi, Metarhizium robertsii 및 Metarhizium pinghaense의 대량 생산

Entomopathogenic fungi of the Metarhizium anisopliae species complex have gained importance as the biological control agents of agricultural insect pests. ...

이 방법은 환경 및 인체 건강에 대한 독성 영향에 대한 우려로 인해 대부분의 살충제가 단계적으로 폐지되는 현재 상황을 감안할 때 상업적 농업 생태계에서 중요한 곤충 해충을 방제하기 위해 엔토모 병원성 곰팡이의 감염성 코니디아를 대량 생산하는 방법에 대한 새로운 정보를 제공합니다. 이 기술은 대량 생산 중에 EPF 코니디아의 최적 수율을 보장하기 위해 사용되는 방법을 설명합니다. 이 방법은 농업 생태계에서 살충제 내성 해충을 손상시키는 대규모 관리를위한 대량 생산 코니디아의 효과에 대한 통찰력을 제공함으로써 통합 해충 관리 및 생물학적 방제에 도움이됩니다.이 절차는 Letodi Luki Mathulwe 박사, Nomakholwa Faith Stokwe 박사 및 Antoinette Paula Malan 교수가 개발하고 시연했습니다. 한 리터의 증류수를 가열하고 끓는점에 도달하기 전에 열을 끕니다. 이제 포도당 30 그램, 인산 칼륨 이염기성 네 그램, 효모 추출물 20 그램, 옥수수 침지액 15 밀리리터를 넣고 내용물을 2 ~ 3 분 동안 부드럽게 끓입니다.총 100 밀리리터의 배지를 아홉 개의 다른 250 밀리리터 플라스크에 붓습니다. 각 플라스크에 면모 플러그를 놓고 마개로 알루미늄 호일로 면봉을 덮으십시오. 플라스크에서 매체를 섭씨 121도에서 55 분 동안 오토클레이브하십시오.나중에 플라스크의 배지를 식히고 스트렙토 마이신 밀리리터 당 10 밀리그램을 각 플라스크의 배지에 첨가하십시오. EPF 단리물 모두에 대해 두 주에서 세 주 된 곰팡이 배양 플레이트에서 곰팡이 코니디아의 두 세 박테리아 루프를 수집하십시오. 곰팡이 코니디아를 멸균 조건 하에서 250 밀리리터 플라스크의 각 100 밀리리터의 액체 매체로 옮기고 플라스크를 밀봉하십시오.액체 배양 플라스크를 약 섭씨 25도에서 140RPM의 오비탈 진탕기 상에서 사흘 동안 인큐베이션하고, 배양물이 곰팡이 블라스토포어 성장과 함께 높은 탁도의 징후를 보이면 배양을 중단한다. 배양물로부터 가능한 박테리아 오염을 검출하기 위해, 24시간 배양 후 각 액체 배양 플라스크로부터 100마이크로리터 샘플을 채취하고 단리물 당 세 개의 SDA 플레이트 상에 플레이트를 그린다. 플레이트를 섭씨 플러스 또는 영하 25도의 조절된 온도에서 48시간 동안 인큐베이션한다.작은 폴리 염화 비닐 폐기물 파이프를 사용하여 오토 클레이브 백의 열린 끝에 발효 백을위한 목을 만들고 오토클레이브 테이프를 사용하여 파이프를 고정하십시오. 발효 중에 충분한 가스 교환을 허용하기 위해 멸균 된 면직물 플러그로 파이프를 닫으십시오. 파끓인 긴 곡물 흰 쌀을 Metarhizium pinghaense와 Metarhizium robertsii의 블라스토 포자를위한 고체 기질 매질로 사용하십시오.각 발효 백에 쌀 한 킬로그램과 멸균 증류수 300 밀리리터를 넣으십시오. 발효 백의 내용물을 부드럽게 섞으십시오. 외부 오토클레이브 백에 똑바로 세우고 섭씨 121도에서 55 분 동안 오토클레이브하십시오.오토클레이빙 후, 기질이 멸균 조건 하에서 약 45분 동안 식히도록 한다. 층류 하에서 메타리지움 핑하엔스 및 메타리지움 로베르트시이 둘 다의 액체 배양 플라스크의 폐쇄를 제거하고 각 플라스크의 테두리를 10초 동안 화염시킨다. 목에서 면모 플러그를 제거하여 100 밀리리터의 액체 배양물을 발효 백에 붓습니다.면 플러그를 다시 끼우고 고무 밴드로 고정된 수술용 종이로 가방의 목 꼭대기를 덮습니다. 가방의 윗부분을 비틀고 마사지로 기판을 흔들고 조작하여 가방의 내용물을 섞으십시오. 두꺼운 침대의 형성을 방지하기 위해 가방의 기질을 평평하게하여 약 섭씨 25도에서 가방을 배양하십시오.접종 및 배양 후 이삼 일 후, 균사체 성장과 곰팡이에 의한 기질의 결합이 눈에 띄게 되었을 때, 봉지의 내용물을 마사지하여 발효 백의 기질을 깨뜨린다. 발효 후, 다공질 배양물을 26 ~ 30kg의 갈색 종이 봉지로 옮기고 시험에서 사용하기 전에 10-12 일 동안 곰팡이 배양물을 건조시킵니다. 종이 봉지의 인장 강도를 향상시키려면 가방 윗부분의 1/3을 수평으로 자르고 가방 바닥을 정렬하십시오.각 발효 백의 기질을 부드럽게 무너 뜨립니다. 각 가방의 모서리를 자르고 잘라낸 모서리가 남긴 공간을 통해 전체 배양물을 종이 봉지로 천천히 옮깁니다. 각 종이 봉지에 라벨을 붙이고 각 가방의 상단 끝을 두 번 접은 다음 스테이플로 닫아 삼각형 텐트 구조를 만듭니다.가방을 와이어 건조 랙에 올려 놓으면 섭씨 약 25 도의 통제 된 온도와 30 ~ 40 %의 낮은 습도에서 건조 할 수 있습니다.수집 팬에 장착 된 세 개의 중첩 된 체를 사용하여 배양물에서 곰팡이 코니디아를 수확하십시오. 건조 배양 샘플을 ETS 메쉬 번호 35에 천천히 로딩하고 체로 한다. 곰팡이 코니디아가 공기 중으로 방출되는 것을 막기 위해 체에 뚜껑을 놓습니다.체에 10 ~ 12 개의 유리 대리석을 추가하여 메쉬 스크린을 통해 곰팡이 코니디아가 통과하도록 돕고 체에 conidia가 유지되지 않도록하여 포자 회복을 줄일 수 있습니다. 전기 테이프를 사용하여 체 조인트를 테이프로 붙이고 밀봉합니다. 체를 끈적 끈적한 패드가 장착 된 진동 쉐이커에 올려 놓고 수집 팬과 체를 분당 560 ~ 640 진동의 움직임으로 20 ~ 25 분 동안 고정시킵니다.수집 팬에서 테스트 체를 제거하고, 코니디아를 수집하고, 수집 된 코니디아를 밀폐 및 불투과성 지퍼 잠금 백에 보관하여 장기간 보관하십시오. 평균 약 1.83 그램의 건조 Metarhizium robertsii conidia가 플레이크 보리 기질에서 수확 된 반면, Metarhizium pinghaense는 기질에서 수확되었습니다. 건조한 곰팡이 코니디아는 메타 리지움 종에 대한 조각난 귀리 기질에서 수확되지 않았습니다.쌀알에서 수확한 그램 당 추정된 평균 코니디아에서 메타리지움의 두 종 사이에 유의한 차이가 관찰되었다. Metarhizium robertsii는 Metarhizium pinghaense보다 그램 당 평균 코니디아 수가 약간 더 높았습니다. 소비된 쌀 기질 상에 존재하는 코니디아의 추정된 수에서 메타리지움의 두 종 사이에 유의한 차이는 관찰되지 않았다.그러나, 메타리지움 핑하엔세는 메타리지움 로베르트시이보다 쌀 기질 상에서 약간 더 높은 코니디아를 가졌고, 두 종의 메타리지움에서 유의한 차이는 쌀 기질 배양물로부터 수득된 그들의 전체 코니디아 수율에서 추정된다. 그러나 Metarhizium pinghaense는 Metarhizium robertsii보다 약간 더 높은 코니디아 수율을 생성했으며, 이는 더 낮은 원추 수율을 생성했습니다. 이 기술의 도전적인 부분은 오염 된 블라스토 포자 접종으로 접종을 통한 기질 오염입니다.따라서 작업하는 동안 항상 불임성을 보장하십시오. 이 데모는 학생들이 전체 프로세스를 종료 할 수있는 서투른 실수없이 기술을 효율적으로 재현 할 수 있도록 도와줍니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Mass Production of Entomopathogenic Fungi, Metarhizium robertsii and Metarhizium pinghaense, for Commercial Application Against Insect Pests

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

곤충 세포에서 재조합 단백질의 생산 mCD1d하는 방법.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

연구

생물학

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

의 효율적인 생산 및 정제 재조합 쥐과 Kindlin-3 생물 물리학 연구 곤충 세포에서

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Application of Membrane and Cell Wall Selective Fluorescent Dyes for Live-Cell Imaging of Filamentous Fungi

필라멘트 곰팡이의 살아있는 세포 이미징을 위한 막 및 세포벽 선택적 형광 염료의 적용

The application of membrane and cell wall selective fluorescent dyes for live-cell imaging analyses of organelle dynamics in fungal cells started two ...

Immunofluorescent Labeling of Plant Virus and Insect Vector Proteins in Hemipteran Guts

Most plant viruses in nature are transmitted from one plant to another by hemipteran insects. A high population density of the vector insects that are ...

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus AAV2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

바쿨로바이러스-곤충세포배양시스템을 이용한 아데노 관련 바이러스(AAV)2 벡터의 생산 및 정화를 위한 공정 개발

Adeno-associated viruses (AAV) are promising vectors for gene therapy applications. Here, the AAV2 vector is produced by co-culture of Spodoptera ...

Isolation and Selection of Entomopathogenic Fungi from Soil Samples and Evaluation of Fungal Virulence against Insect Pests

토양 샘플에서 내토모 병원성 곰팡이의 격리 및 선택 및 곤충 해충에 대한 곰팡이 독성의 평가

Entomopathogenic fungi (EPF) are one of the microbial control agents for integrated pest management. To control local or invasive pests, it is important ...

Comparison of Methods for Isolating Entomopathogenic Fungi from Soil Samples

토양 샘플에서 엔토모병원성 곰팡이를 분리하는 방법의 비교

The goal of the present study is to compare the effectiveness of using insect baits versus artificial selective medium for isolating entomopathogenic ...

Optimized Bioassay for Entomopathogenic Fungi Against Mustard Aphid

Assessment of Aphidicidal Effect of Entomopathogenic Fungi against Parthenogenetic Insect, Mustard Aphid, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Author Spotlight: Eco-Friendly Pest Management Using Entomopathogenic Fungi Against Mustard Aphids 

The mustard aphid (L. erysimi) is a pest that infests various cruciferous crops and transmits plant viruses. To achieve eco-friendly pest management, ...

<meta charset="utf8"></head><body>Forest Wood Borers의 곤충병원성 곰팡이 자원 탐사

Isolation, Behavioral Identification, and Pathogenicity Assessment of Entomopathogenic Fungi from a Forest Wood Borer

<meta charset="utf8"></head><body>저자 스포트라이트: Evaluation of Entomopathogenic Fungi in Wild Monochamus alternatus Populations for Biocontrol Applications in Forest Wood Borers

Isolation, Behavioral Identification, and Pathogenicity Assessment of Entomopathogenic Fungi from a Forest Wood Borer(포레스트 우드 보어의 곤충병원성 곰팡이의 격리, 행동 식별 및 병원성 평가)

Forest wood borers (FWB) cause severe tree damage and economic losses worldwide. The release of entomopathogenic fungi (EPF) during the FWB emergence ...