Name: maintaining laboratory cultures of gryllus bimaculatus, a versatile orthopteran model for insect agriculture and invertebrate physiology
Uploaded: 2022-06-08T12:30:00
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Il finanziamento per questo progetto è stato reso possibile attraverso sovvenzioni interne dell'Università del Wisconsin-Madison. Un sincero ringraziamento a Kevin Bachhuber di Bachhuber Consulting Inc. per l'accesso alla sua guida inedita per l'allevamento commerciale di cricket e a Michael Bartlett Smith per la sua assistenza nel perfezionamento e nella risoluzione dei problemi di questi metodi.

1. Preparazione del substrato di ovodeposizione
NOTA: La fibra di cocco è un substrato di ovodeposizione ideale per G. bimaculatus. Per i metodi dettagliati su come separare la fibra di cocco dal mattone di cocco compresso e una nota sulla sicurezza respiratoria, vedere la fase 1.1 relativa ai materiali supplementari .
<ol><li>Lavarsi le mani con acqua e sapone.</li>
	<li>Tarare un contenitore pulito su una bilancia e pesare una massa di fibra di c...

<ol>
	<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+on+the+fly:+a+primer+on+the+Drosophila+model+system.">Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).</li><li>Merkel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+temperature+and+food+quality+on+the+larval+development+of+Gryllus+bimaculatus+(Orthoptera,+Gryllidae).">The effects of temperature and food quality on the larval development of Gryllus bimaculatus (Orthoptera, Gryllidae).</a> Oecologia. 30 (2), 129-140 (1977).</li><li>Bateman, P. 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Studies on the influence of different diets and rearing conditions on the development and growth of the two-spotted cricket Gryllus bimaculatus de Greer Available from: <a target="_blank" href="https://epub.uni-bayreuth.de/310/1/Diss.pdf">https://epub.uni-bayreuth.de/310/1/Diss.pdf</a> (2011)</li><li>Ngonga, C. A., Gor, C. O., Okuto, E. A., Ayieko, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+performance+of+Acheta+domesticus+and+Gryllus+bimaculatus+production+reared+under+improvised+cage+system+for+increased+returns+and+food+security.">Growth performance of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus production reared under improvised cage system for increased returns and food security.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 7, 301-310 (2021).</li><li>Behrens, W., Hoffmann, K. -. H., Kempa, S., G&#228;&#223;ler, S., Merkel-Wallner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+diurnal+thermoperiods+and+quickly+oscillating+temperatures+on+the+development+and+reproduction+of+crickets,+Gryllus+bimaculatus.">Effects of diurnal thermoperiods and quickly oscillating temperatures on the development and reproduction of crickets, Gryllus bimaculatus.</a> Oecologia. 59 (2-3), 279-287 (1983).</li><li>Collavo, A., Paoletti, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Housecricket+smallscale+farming.">Housecricket smallscale farming.</a> Ecological implications of minilivestock. Potential of insects, rodents, frogs and snails. , (2005).</li><li>Simmons, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competition+between+larvae+of+the+field+cricket,+Gryllus+bimaculatus+(Orthoptera:+Gryllidae)+and+its+effects+on+some+life-history+components+of+fitness.">Competition between larvae of the field cricket, Gryllus bimaculatus (Orthoptera: Gryllidae) and its effects on some life-history components of fitness.</a> Journal of Animal Ecology. 56, 1015-1027 (1987).</li><li>Sorjonen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant-based+by-product+diets+for+the+mass-rearing+of+Acheta+domesticus+and+Gryllus+bimaculatus.">The plant-based by-product diets for the mass-rearing of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus.</a> PLOS ONE. 14 (6), 0218830 (2019).</li><li>Maciel-Vergara, G., Jensen, A. B., Lecocq, A., Eilenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+in+edible+insect+rearing+systems.">Diseases in edible insect rearing systems.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 7 (5), 1-18 (2021).</li><li>Alexander, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggressiveness,+territoriality,+and+sexual+behavior+in+field+crickets+(Orthoptera:+Gryllidae).">Aggressiveness, territoriality, and sexual behavior in field crickets (Orthoptera: Gryllidae).</a> Behaviour. , 130-223 (1961).</li><li>Pet food, fish bait, and animal feed. USDA APHIS Available from: <a target="_blank" href="https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/planhealth/import-information/permits/plant-pests/sa_animalfeed/ct_petfood_fishbait_animalfeed">https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/planhealth/import-information/permits/plant-pests/sa_animalfeed/ct_petfood_fishbait_animalfeed</a> (2022)</li><li>Donoughe, S., Extavour, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+development+of+the+cricket+Gryllus+bimaculatus.">Embryonic development of the cricket Gryllus bimaculatus.</a> Developmental Biology. 411 (1), 140-156 (2016).</li><li>Dobermann, D., Michaelson, L., Field, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+an+initial+high-quality+feeding+regime+on+the+survival+of+Gryllus+bimaculatus+(black+cricket)+on+bio-waste.">The effect of an initial high-quality feeding regime on the survival of Gryllus bimaculatus (black cricket) on bio-waste.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 5 (2), 1-8 (2018).</li><li>Lundy, M. E., Parrella, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crickets+are+not+a+free+lunch:+Protein+capture+from+scalable+organic+side-streams+via+high-density+populations+of+Acheta+domesticus.">Crickets are not a free lunch: Protein capture from scalable organic side-streams via high-density populations of Acheta domesticus.</a> PLOS ONE. 10, 0118785 (2015).</li><li>Mazaya, G., Karseno, K., Yanto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+and+phytochemical+activity+of+coconut+shell+extracts.">Antimicrobial and phytochemical activity of coconut shell extracts.</a> Turkish Journal of Agriculture - Food Science and Technology. 8 (5), 1090-1097 (2020).</li></ol>

La semplicità di questo approccio all'allevamento di cricket può avvantaggiare una serie di aree di ricerca e rappresenta un modello generico per un allevamento di cricket di successo, facilmente adattabile a una varietà di esigenze sperimentali. Rispetto a molti altri studi di G. bimaculatus, la dimensione dell'adulto del corpo individuale è più piccola e la maturazione è più lenta14, che attribuiamo alla temperatura di allevamento sub-ottimale impostaci dalle circostanze. I metod...

Come tipizzato dall'insetto iconico, il moscerino della frutta Drosophila melanogaster, l'uso degli insetti come organismi modello di laboratorio offre vantaggi distinti per gli studi in genetica, tossicologia e fisiologia1. Le piccole dimensioni degli insetti riducono lo spazio necessario per le colture e la quantità di mangimi e materiali di consumo necessari. Molti insetti si riproducono rapidamente rendendoli particolarmente adatti alla creazione di linee genetiche specializzate e studi che richiedono la valutazione di più generazioni successive.
Molti studi si concentrano su insetti olometaboli come Drosophila, che presentano metamorfosi e pupa complete. Tuttavia, sono disponibili altri modelli, tra cui Gryllus bimaculatus (De Geer), il cricket da campo a due punte. G. bimaculatus è un insetto paurometabolo che subisce tra 7 e 11 stelle ninfali prima di raggiungere la maturità sessuale2. Questo cricket mostra una vasta gamma di comportamenti legati alla selezione sessuale, tra cui la stridulazione, le esposizioni territoriali e la guardia del compagno3. I grilli immaturi sono diversi dalle larve delle specie di insetti olometaboli in quanto, simili a molti giovani paurometaboli, sono in grado di rigenerare gli arti persi e danneggiati durante l'ecdisi4. Inoltre, il genoma completamente sequenziato di G. bimaculatus è stato pubblicato nel 20215. Queste caratteristiche rendono questi grilli attraenti come obiettivo per la ricerca di base.
I grilli da campo a due macchie sono ampiamente allevati per cibo umano e mangimi per animali. La scala di queste operazioni è spesso molto più ampia che per la ricerca di laboratorio 6,7. Nonostante la differenza di scala, le sfide affrontate dai ricercatori si sovrappongono notevolmente a quelle incontrate dagli agricoltori di cricket commerciali. Queste considerazioni convergono nel contesto della ricerca di laboratorio che mira a migliorare la produzione di insetti commestibili. Mentre l'industria degli insetti commestibili continua ad evolversi e crescere, l'ottimizzazione degli input di mangime e di una miriade di altri aspetti della produzione è un obiettivo primario8. Studi di laboratorio che dimostrano miglioramenti misurati nell'efficienza di allevamento, nella sopravvivenza o nel tempo di generazione in questi grilli hanno il potenziale per contribuire ad aumentare la redditività delle operazioni di allevamento di cricket a lungo termine.
I protocolli di allevamento standardizzati consentono un confronto più ravvicinato tra gli studi che studiano l'ottimizzazione dell'allevamento. Ad oggi sono stati pubblicati pochi protocolli approfonditi per l'allevamento di G. bimaculatus in laboratorio. Un protocollo ideale rifletterebbe le condizioni incontrate nelle operazioni di allevamento di cricket del mondo reale, pur mantenendo le condizioni strettamente controllate necessarie per misurare con precisione i cambiamenti nelle prestazioni di crescita derivanti da trattamenti sperimentali ed evidenziando le strategie di mitigazione del rischio. I metodi descritti in questo documento sono stati sviluppati sulla base di protocolli, tecniche e apparati pubblicati utilizzati per allevare una varietà di specie di cricket in una vasta gamma di scale di produzione di laboratorio e commerciale 2,9,10,11,12. Questi metodi sono anche informati da diverse fonti non peer reviewed, tra cui bollettini tecnici non pubblicati e comunicazioni personali con gli agricoltori di cricket commerciali in Nord America. Questo protocollo è stato sviluppato con l'intenzione di facilitare la creazione di colture di laboratorio di G. bimaculatus specificamente per l'uso in prove relative all'agricoltura degli insetti.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>31-qt (29.3 L) Snap-lid tote bin with lid</td>
			<td>HOMZ</td>
			<td>3430CLBL</td>
			<td>Used to house breeding stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-tier/12-tray Grow Light Stand</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>NC1938548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-gal (189.27L) tote bin with lid</td>
			<td>Sterilite</td>
			<td>#14796603</td>
			<td>Used as secondary containment when handling crickets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL polypropylene graduated cylinder</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>S95171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7.5-qt (7.1 L) snap-lid tote bin with lid</td>
			<td>HOMZ</td>
			<td>3410CLBL</td>
			<td>Used to house exprimental stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accuris 500 g x 0.01 g Balance</td>
			<td>Manufactured by Accuris, a subsidieary of Benchmark Scientific</td>
			<td>W3300-500</td>
			<td>Purchased from Dot Scientific through University of Wisconsin system purchasing service &#34;ShopUW+&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ace Premier 1 Inch Flat Chip Brush</td>
			<td>Ace Hardware&#160;</td>
			<td>#1803261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bel-Art SP Scienceware deionized water wash bottle</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>03-421-160&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bright aluminum window screen&#160;</td>
			<td>Phifer</td>
			<td>UNSPSC# 11162108</td>
			<td>Mesh size 18 x 16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Disposable Plastic Portion Cups 5.5 oz w/ lids</td>
			<td>Wal-Mart</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diablo 4-4/8&#34; x 13 TPI Ultra Fine Finish Bi-Metal Jigsaw Blade</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>#313114935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg Filler Flats-Paper, 12 x 12&#34;</td>
			<td>Uline</td>
			<td>S-5189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lid 100 x 15mm</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>FB0875714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lid 60 x 15mm</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Georgia-Pacific Envision Brown Paper Towels</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>#205675843</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infinity Tough Guy high performance hot-melt glue sticks</td>
			<td>Infinity Bond</td>
			<td>Infinity IM-Tough-Guy-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mazuri Cricket Diet</td>
			<td>Land O&#39; Lakes International</td>
			<td>SKU#&#160; 3002219-105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stanley TimeIt Twin 2-outlet Grounded Mechanical 24 Hour Timer</td>
			<td>Wal-Mart</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vermont Organics Reclamation Soil 11 lb Coir Block</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>#300679904</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining laboratory cultures of gryllus bimaculatus, a versatile orthopteran model for insect agriculture and invertebrate physiology

Gryllus bimaculatus (De Geer) è un grillo di grandi dimensioni distribuito in tutta l'Africa e l'Eurasia meridionale dove viene spesso raccolto in natura come cibo umano. Al di fuori del suo areale nativo, la coltivazione di G. bimaculatus è fattibile grazie alla sua plasticità alimentare, al rapido ciclo riproduttivo, alla mancanza di fabbisogno di diapausa, alla tolleranza per l'allevamento ad alta densità e alla robustezza contro gli agenti patogeni. Pertanto, G. bimaculatus può essere un modello versatile per studi di fisiologia, comportamento, embriologia o genetica degli insetti.
I parametri culturali, come la densità di allevamento, i reffugia all'interno della gabbia, il fotoperiodo, la temperatura, l'umidità relativa e la dieta, influenzano tutti la crescita, il comportamento e l'espressione genica del cricket e dovrebbero essere standardizzati. Nella fiorente letteratura sull'allevamento di insetti per il consumo umano, questi grilli sono spesso impiegati per valutare i candidati additivi per mangimi derivati da residui di colture, sottoprodotti della lavorazione degli alimenti e altri flussi di rifiuti a basso costo.
Per supportare gli esperimenti in corso che valutano le prestazioni di crescita di G. bimaculatus e la qualità nutrizionale in risposta a substrati di alimentazione variabili, è stato sviluppato un set completo di protocolli standard per l'allevamento, la manutenzione, la manipolazione, la misurazione e l'eutanasia in laboratorio ed è presentato qui. Un mangime per cricket standard del settore si è dimostrato nutrizionalmente adeguato e funzionalmente appropriato per il mantenimento a lungo termine degli stock di riproduzione del cricket, nonché per l'uso come mangime di controllo sperimentale. L'allevamento di questi grilli ad una densità di 0,005 grilli / cm3 in gabbie di polietilene da 29,3 L con schermo a una temperatura media di 27 ° C su un fotoperiodo 12 chiaro (L) / 12 scuro (D), con fibra di cocco inumidita che serve sia come fonte di idratazione che come mezzo di ovodeposizione ha sostenuto con successo grilli sani per un arco di 2 anni. Seguendo questi metodi, i grilli in un esperimento controllato hanno prodotto una massa media di 0,724 g 0,190 g al raccolto, con l'89% di sopravvivenza e il 68,2% di maturazione sessuale tra lo stoccaggio (22 giorni) e il raccolto (65 giorni).

I dati che dimostrano il successo dell'allevamento di cricket dalla schiusa ai 65 giorni di età sono stati raccolti durante una prova di alimentazione di settembre 2021. I grilli sono stati coltivati da uova seguendo i passaggi 1.1.1-2.6.1 di questi protocolli e sei gabbie replicate sono state rifornite con 24 grilli casuali di 22 giorni (terza stella) dopo il passaggio 2.7 sopra. I grilli venivano poi allevati in condizioni ambientali; tuttavia, a causa di un malfunzionamento dell'unità di trattamento dell'aria dell'i...

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Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

Questo documento delinea i metodi di base per standardizzare fattori importanti come la densità, la disponibilità di mangime, la fonte di idratazione e i controlli ambientali per l'allevamento a lungo termine di colture di laboratorio del grillo commestibile, Gryllus bimaculatus.

Mantenimento di colture di laboratorio di Gryllus bimaculatus, un modello ortottero versatile per l'agricoltura degli insetti e la fisiologia degli invertebrati

Gryllus bimaculatus (De Geer)&#160;is a large-bodied cricket distributed throughout Africa and Southern Eurasia where it is often wild-harvested as human ...

Queste tecniche descrivono metodi pratici e collaudati per l'allevamento di Gryllus bimaculatus, una mini specie di bestiame chiave allevata per l'alimentazione animale e l'alimentazione umana e un organismo modello alternativo sempre più importante. Questi metodi di laboratorio per la coltura di Gryllus bimaculatus derivano da tecniche comuni in tutta l'industria nordamericana dell'agricoltura di cricket e rappresentano un facsimile su scala di laboratorio delle operazioni di allevamento di cricket. Per iniziare, tarare un contenitore pulito su una bilancia e pesare una massa di fibra di cocco secca delle dimensioni di un pugno umano.Quindi, posizionare la fibra di cocco in un contenitore sigillabile e pulito, che può ospitare l'espansione fino a sei volte il volume originale. Con le mani pulite, rompere delicatamente ciuffi di fibra di cocco dal pezzo rimosso dal blocco più grande. Successivamente, utilizzando un cilindro graduato da 250 millilitri, misurare il volume corretto di acqua deionizzata per ottenere un rapporto cinque a uno in massa di cinque parti di acqua per una parte di fibra di cocco secca e aggiungere lentamente l'acqua deionizzata misurata, idratando uniformemente tutte le particelle di fibra di cocco.Successivamente, macerare manualmente i ciuffi per garantire un'idratazione uniforme e ri-tarare il contenitore in cui la fibra di cocco è stata precedentemente pesata. Pesare 75 grammi di fibra di cocco bagnata e trasferirla in una capsula di Petri da 100 millimetri per 15 millimetri usando un cucchiaio di plastica pulito per garantire che la fibra di cocco sia distribuita uniformemente sul fondo del piatto e che non ci siano ciuffi. Quindi, etichettare il lato della capsula di Petri con nastro da laboratorio con un'etichetta che denota la colonia natale e la data dell'evento di raccolta delle uova.Misurare altri 45 millilitri di acqua deionizzata in un cilindro graduato e aggiungere acqua uniformemente sulla superficie della fibra di cocco imballata nella capsula di Petri per garantire un'idratazione uniforme. Una volta che la capsula di Petri è stata imballata, sigillare la fibra di cocco bagnata rimanente in un recipiente ermetico per la conservazione a meno 20 gradi Celsius. Posizionare il substrato di ovodeposizione idrato in gabbie contenenti le scorte parentali desiderate di grilli il più lontano possibile dal mangime e documentare la data e l'ora.Quindi, posizionare un piccolo contenitore per la spazzatura autoclavabile sul piano di lavoro. Quindi, posizionare una gabbia di plastica pulita, vuota, da 29,3 litri sul banco accanto al contenitore della spazzatura. Posizionare un'altra gabbia da 29,3 litri contenente le scorte di cricket genitore e il substrato di ovodeposizione sul lato opposto del contenitore della spazzatura dalla gabbia vuota.Dopo 24 ore, rimuovere il substrato di ovodeposizione dalla gabbia del grillo genitore e posizionarlo su un recipiente di rifiuti autoclavabile. Ispezionare la parte superiore del substrato di ovodeposizione per eventuali particelle di frass o mangime che i grilli potrebbero aver calciato sulla superficie della fibra di cocco. Quindi, rimuovere i contaminanti di fibra di cocco nel contenitore dei rifiuti con una Scoopula pulita o un cucchiaio di plastica e posizionare il cucchiaio di plastica nel contenitore dei rifiuti.Quindi, posizionare il substrato di ovodeposizione pulito nella gabbia pulita da 29,3 litri. Successivamente, posizionare la gabbia in un'incubatrice impostata a 27 gradi Celsius al 60% di umidità relativa su un fotoperiodo di luce scuro di 12 ore e 12 ore. Riportare la gabbia contenente il bestiame da riproduzione nella posizione originale e cancellare tutti gli oggetti dalla superficie di lavoro.Quindi, posizionare il contenitore dei rifiuti in un congelatore all'interno dell'impianto dedicato allo stoccaggio di oggetti potenzialmente contaminati da uova di cricket. Quindi, disinfettare la superficie di lavoro con una soluzione di candeggina al 10% e lasciarla riposare per 60 secondi. Asciugare la superficie di lavoro con un tovagliolo di carta pulito.Dopo aver aperto il congelatore, smaltire il tovagliolo di carta nel contenitore dei rifiuti. Seleziona due piatti di cartone per uova commerciali inutilizzati da 30,8 centimetri per 30,8 centimetri. E con un coltello da utilità o forti cesoie, tagliale in sei strisce separate larghe 10,1 centimetri di uguali dimensioni.Quindi, spazzolare via i bordi tagliati con le mani per rimuovere le particelle penzolanti di cartone. Quindi, posizionare i sei singoli pezzi di cartone da 10,1 centimetri per 30,8 centimetri verticalmente nella parte inferiore della gabbia, con l'asse più lungo del cartone che attraversa l'asse orizzontale più stretto di una gabbia da 29,3 litri. Posizionare un settimo pezzo di cartone piatto sulla parte superiore dei sei pezzi verticali.Dopo aver selezionato tre pezzi di tovagliolo di carta marrone ruvido di circa 25 centimetri per 25 centimetri, piegare ciascuno a metà. Quindi, posizionarne due in modo tale che coprano la parte superiore del lato prossimale della struttura del cartone e posizionarne uno sopra la pila di cartone sul lato distale. Al giorno 11 post-ovodeposizione, spostare il substrato di ovodeposizione nell'angolo prossimale destro della gabbia.Quando si osserva un portello, nebulizzare gli asciugamani di carta posti sopra la parte superiore dei cartoni, fino a quando non sono bagnati, ma non versano attivamente acqua. Quindi, pulire accuratamente entrambi i lati di un coperchio di Petri da 100 millimetri con etanolo al 70% e lasciarlo asciugare. Quindi, raccogliere 50 grammi di mangime in un frullatore monodose da 60 watt e macinare a 10.000 giri / min per un minuto.Dopo aver misurato un grammo del mangime, agitalo sul coperchio della capsula di Petri nella gabbia. Usando l'estremità pulita di un cucchiaio o Scoopula, distribuire il mangime nel modo più uniforme possibile sul fondo del piatto. Successivamente, sostituisci il mangime ogni due giorni.Scartare il vecchio mangime nel contenitore dei rifiuti autoclavabile. Monitorare la crescita della muffa sul mangime. E se il mangime inizia ad apparire bianco o verdastro, scartare la capsula di Petri e nutrirsi immediatamente.A 14 giorni dopo l'ovodeposizione, utilizzare un pennello da 2,54 centimetri per rimuovere i grilli aggrappati al substrato di fibra di cocco natale spazzolando tutti i grilli dalla superficie e dai lati della fibra di Petri nella gabbia. Quindi, posizionare il substrato di ovodeposizione rimosso nel contenitore di rifiuti autoclavabile e conservarlo nel congelatore fino all'autoclave. Quindi, sostituire il substrato natale con un piatto di fibra di cocco fresco per l'idratazione.Usando una bottiglia di lavaggio dell'acqua deionizzata, aggiungere acqua fino a quando la superficie della fibra di cocco luccica, ma non si accumula. I grilli erano riforniti da una popolazione con una massa media di 21 milligrammi. Alla fine dell'esperimento, la massa media di tutti i grilli giovani e adulti combinati era di 0,724 grammi.A 65 giorni di età, quando l'esperimento si è concluso, erano presenti 30 maschi adulti e la massa media era di 0,721 grammi, mentre per le 58 femmine adulte, la massa media era di 0,841 grammi. La sopravvivenza tra lo stoccaggio e il raccolto è stata dell'89% ed è stata misurata settimanalmente dal conteggio totale di tutti i singoli grilli in tutte le gabbie. Al giorno 65, circa il 68% di tutti i grilli aveva raggiunto l'instar adulto.Evitare la formazione di goccioline d'acqua sul fondo del recinto durante l'irrigazione o l'appannamento. Posizionare un tovagliolo di carta sopra il refugia consente un gradiente di umidità e assorbe le goccioline d'acqua dalla nebulizzazione. Questa procedura serve come modello per i ricercatori in molti campi delle scienze della vita per allevare Gryllus bimaculatus come organismo modello.Ad oggi, sono stati pubblicati pochi protocolli formali per l'allevamento di Gryllus bimaculatus o di qualsiasi altro organismo modello paurometabolo. La codifica e la standardizzazione dei metodi di allevamento per gli insetti utilizzati nell'agricoltura degli insetti consentirà meglio il confronto dei risultati tra i gruppi di ricerca.

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

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Ricerca

Biologia

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Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

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