Name: efficient and cost effective electroporation method to study primary cilium-dependent signaling pathways in the granule cell precursor
Uploaded: 2021-11-30T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Cost Effective Electroporation Method to Study Primary Cilium-Dependent Signaling Pathways in the Granule Cell Precursor at JoVE.com

Diese Studie wurde unterstützt durch den HKBU Seed Fund und den Tier-2 Start-up Grant (RG-SGT2/18-19/SCI/009), den Research Grant Council-Collaborative Research Fund (CRF-C2103-20GF) an C.H.H. Hor.

Alle tierbezogenen Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien für den Umgang mit Tieren und dem vom Gesundheitsministerium in Hongkong genehmigten Protokoll durchgeführt. Tierversuchslizenzen gemäß der Animal (Control of Experiments) Ordinance (Cap. 340) wurden vom Gesundheitsministerium der Regierung von Hongkong erhalten. Die Tierarbeiten wurden in Übereinstimmung mit der vom HKBU-Forschungsbüro und dem Laborsicherheitsausschuss genehmigten Tiersicherheitsethik durchgeführt. Ausführliche Informat...

<ol>
	<li>Chang, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atoh1+controls+primary+cilia+formation+to+allow+for+SHH-triggered+granule+neuron+progenitor+proliferation.">Atoh1 controls primary cilia formation to allow for SHH-triggered granule neuron progenitor proliferation.</a> Developmental Cell. 48 (2), 184-199 (2019).</li><li>Dahmane, N., Ruizi Altaba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+Hedgehog+regulates+the+growth+and+patterning+of+the+cerebellum.">Sonic Hedgehog regulates the growth and patterning of the cerebellum.</a> Development. 126 (14), 3089-3100 (1999).</li><li>Lewis, P. M., Gritti-Linde, A., Smeyne, R., Kottmann, A., Mcmahon, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+Hedgehog+signaling+is+required+for+expansion+of+granule+neuron+precursors+and+patterning+of+the+mouse+cerebellum.">Sonic Hedgehog signaling is required for expansion of granule neuron precursors and patterning of the mouse cerebellum.</a> Developmental Biology. 270 (2), 393-410 (2004).</li><li>Wechsler-Reya, R. J., Scott, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+neuronal+precursor+proliferation+in+the+cerebellum+by+Sonic+Hedgehog.">Control of neuronal precursor proliferation in the cerebellum by Sonic Hedgehog.</a> Neuron. 22 (1), 103-114 (1999).</li><li>Bangs, F., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cilia+and+mammalian+Hedgehog+signaling.">Primary cilia and mammalian Hedgehog signaling.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 9 (5), 028175 (2017).</li><li>Hor, C. H. H., Lo, J. C. W., Cham, A. L. S., Leung, W. Y., Goh, E. L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifaceted+functions+of+Rab23+on+primary+cilium-+and+Hedgehog+signaling-mediated+cerebellar+granule+cell+proliferation.">Multifaceted functions of Rab23 on primary cilium- and Hedgehog signaling-mediated cerebellar granule cell proliferation.</a> Journal of Neuroscience. 41 (32), 6850-6863 (2021).</li><li>Han, Y. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+and+opposing+roles+of+primary+cilia+in+medulloblastoma+development.">Dual and opposing roles of primary cilia in medulloblastoma development.</a> Nature Medicine. 15 (9), 1062-1065 (2009).</li><li>Spassky, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cilia+are+required+for+cerebellar+development+and+Shh-dependent+expansion+of+progenitor+pool.">Primary cilia are required for cerebellar development and Shh-dependent expansion of progenitor pool.</a> Developmental Biology. 317 (1), 246-259 (2008).</li><li>Wang, T., Larcher, L., Ma, L., Veedu, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+screening+of+commonly+used+commercial+transfection+reagents+towards+efficient+transfection+of+single-stranded+oligonucleotides.">Systematic screening of commonly used commercial transfection reagents towards efficient transfection of single-stranded oligonucleotides.</a> Molecules. 23 (10), 2564 (2018).</li><li>Chicaybam, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+electroporation+protocol+for+the+genetic+modification+of+mammalian+cells.">An efficient electroporation protocol for the genetic modification of mammalian cells.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 4, 99 (2017).</li><li>Lee, H. Y., Greene, L. A., Mason, C. A., Chiara Manzini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+post-natal+mouse+cerebellar+granule+neuron+progenitor+cells+and+neurons.">Isolation and culture of post-natal mouse cerebellar granule neuron progenitor cells and neurons.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (23), e990 (2009).</li><li>Mizoguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+cerebellar+development+in+mice+overexpressing+VGF.">Impaired cerebellar development in mice overexpressing VGF.</a> Neurochemical Research. 44 (2), 374-387 (2019).</li><li>Zhou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+imaging+of+nerve+cells.">Confocal imaging of nerve cells.</a> Current Laboratory Methods in Neuroscience Research. , 235-247 (2014).</li><li>Corbit, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertebrate+Smoothened+functions+at+the+primary+cilium.">Vertebrate Smoothened functions at the primary cilium.</a> Nature. 437 (7061), 1018-1021 (2005).</li></ol>

Die Transfektion von Transgenen in primärer GCP-Kultur durch Elektroporationsmethode ist typischerweise mit einer geringen Zelllebensfähigkeit und einer schlechten Transfektionseffizienz assoziiert9,10. Dieses Papier stellt ein kostengünstiges und reproduzierbares Elektroporationsprotokoll vor, das eine hohe Effizienz und Lebensfähigkeit bewiesen hat. Darüber hinaus demonstrieren wir auch eine einfache Methode zur Untersuchung des primären Cilium-abhängige...

Kleinhirn-GCPs werden häufig verwendet, um die Maschinerie des Hh-Signalwegs in neuronalen Vorläuferzelltypen aufgrund ihrer hohen Häufigkeit und hohen Empfindlichkeit gegenüber dem Hh-Signalweg in vivo zu untersuchen1,2,3,4. In GCPs fungiert das primäre Cilium als pivotaler Hh-Signaltransduktionshub5, der die Proliferation der Vorläuferzellen orchestriert6,7,8. Die In-vitro-Visualisierung von Hh-Signalkomponenten auf dem primären Cilium ist aufgrund ihrer niedrigen endogenen Basalspiegel oft eine Herausforderung. Daher sind die transgene Modifikation der Proteinexpressionsniveaus und die Fluorophormarkierung des interessierenden Gens nützliche Ansätze, um den Signalweg bei molekularer Auflösung zu untersuchen. Die genetische Manipulation von GCP-Primärkulturen unter Verwendung von Liposomen-basierten Transfektionsansätzen führt jedoch häufig zu einer geringen Transfektionseffizienz, was weitere molekulare Untersuchungen behindert9. Die Elektroporation erhöht die Effizienz, erfordert jedoch in der Regel exorbitante herstellerspezifische und zelltypbeschränkte Elektroporationsreagenzien10.
In diesem Artikel wird eine hocheffiziente und kostengünstige Elektroporationsmethode zur Manipulation der Hh-Signalwegkomponenten in GCP-Primärkulturen vorgestellt. Mit diesem modifizierten Elektroporationsprotokoll wurde ein mit grün fluoreszierendem Protein (GFP) markiertes smoothened transgene (pEGFP-Smo) effizient an GCPs abgegeben und erreichte hohe Zellüberlebens- und Transfektionsraten (80-90%). Darüber hinaus zeigten die transfizierten GCPs, wie durch die immunzytochemische Färbung belegt, eine hohe Empfindlichkeit gegenüber der durch Geglätteten Agonisten induzierten Aktivierung des Hh-Signalwegs durch den Transport von EGFP-Smo zu den primären Zilien. Dieses Protokoll ist unmittelbar anwendbar und vorteilhaft für Experimente, die eine genetische In-vitro-Veränderung von schwer zu transfizierenden Zelltypen wie Primärzellkulturen für Menschen und Nagetiere sowie vom Menschen induzierte pluripotente Stammzellen beinhalten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>GCP Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Life Technologies LTD</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 70 &#181;m</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I from bovine pancreas</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Earle&#8217;s Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>14155063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS, qualified</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30028.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutamMAXTM-I ,100x</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>35050061</td>
			<td>L-glutamine substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354277</td>
			<td>Basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain,suspension</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LS003126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-lysine Hydrobromide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAG</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>11914-1</td>
			<td>Smoothened agonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IF staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody mix</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP-goat ab</td>
			<td>Rockland</td>
			<td>600-101-215</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Arl13b mouse monoclonal ab</td>
			<td>NeuroMab</td>
			<td>75-287</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Pax6 rabbit polyclonal ab</td>
			<td>Covance</td>
			<td>PRB-278P</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody mix</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-goat IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11055</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31570</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 donkey anti-rabbit IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31573</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>62247</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CU 500 cuvette chamber</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>CU500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPA Electroporation cuvette (2 mm gap)</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>EC-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Life Technologies LTD</td>
			<td>31985070</td>
			<td>reduced-serum medium for transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pEGFP-mSmo</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>25395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Electroporator NEPA21 TYPE II In Vitro and In Vivo Electroporation</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>NEPA21</td>
			<td>electroporator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient and cost effective electroporation method to study primary cilium-dependent signaling pathways in the granule cell precursor

Das primäre Cilium ist eine kritische Signalorganelle, die auf fast jeder Zelle vorkommt, die Hedgehog (Hh) -Signalreize von der Zelloberfläche überträgt. Im Granulatzellvorläufer (GCP) fungiert das primäre Cilium als zentrales Signalzentrum, das die Proliferation von Vorläuferzellen orchestriert, indem es den Hh-Signalweg moduliert. Die Untersuchung der primären Cilium-abhängigen Hh-Signalmaschinerie wird durch in vitro genetische Manipulation der Signalwegkomponenten erleichtert, um ihre dynamische Lokalisierung zum primären Cilium sichtbar zu machen. Die Transfektion von Transgenen in den Primärkulturen von GCPs unter Verwendung der derzeit bekannten Elektroporationsmethoden ist jedoch im Allgemeinen kostspielig und führt häufig zu einer geringen Zelllebensfähigkeit und unerwünschten Transfektionseffizienz. Dieses Papier stellt ein effizientes, kostengünstiges und einfaches Elektroporationsprotokoll vor, das eine hohe Transfektionseffizienz von ~ 80-90% und eine optimale Zelllebensfähigkeit aufweist. Dies ist eine einfache, reproduzierbare und effiziente genetische Modifikationsmethode, die auf die Untersuchung des primären Cilium-abhängigen Hedgehog-Signalwegs in primären GCP-Kulturen anwendbar ist.

Unter Verwendung des Opti-MEM (siehe Materialtabelle) als universelles Reagenz könnte diese vorgeschlagene Elektroporationsmethode eine konstant hohe Elektroporationseffizienz von ~ 80-90% erreichen (Abbildung 1). Die Elektroporationseffizienz des Smo-EGFP-Vektors wurde bei DIV 2 nach der Elektroporation durch Quantifizierung des Prozentsatzes grün fluoreszenzpositiver Zellen in allen gepaarten Box-Protein-6 (Pax6)-exprimierenden GCP-Zellen bestimmt. Die Elektroporationsef...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Cost Effective Electroporation Method to Study Primary Cilium-Dependent Signaling Pathways in the Granule Cell Precursor at JoVE.com

Efficient and Cost Effective Electroporation Method to Study Primary Cilium-Dependent Signaling Pathways in the Granule Cell Precursor

Hier stellen wir ein reproduzierbares In-vitro-Elektroporationsprotokoll für die genetische Manipulation von primären Kleinhirn-Granulazellvorläufern (GCPs) vor, das kostengünstig, effizient und lebensfähig ist. Darüber hinaus demonstriert dieses Protokoll auch eine einfache Methode für die molekulare Untersuchung primärer Cilium-abhängiger Hedgehog-Signalwege in primären GCP-Zellen.

Effiziente und kostengünstige Elektroporationsmethode zur Untersuchung primärer Cilium-abhängiger Signalwege im Granulatzellvorläufer

The primary cilium is a critical signaling organelle found on nearly every cell that transduces Hedgehog (Hh) signaling stimuli from the cell surface. In ...

Dieses Protokoll demonstriert eine einfache in vitro genetische Modifikationsmethode für die molekulare Untersuchung des primären Cilium-abhängigen Signalwegs in den primären Granulazell-Vorläuferkulturen. Aufgrund der Kosten, der geringen Lebensfähigkeit und der geringen Effizienz der aktuellen Transfektionsmethode führen wir eine einfache, kostengünstige und effiziente Elektroporationstechnik zur Untersuchung des Cilium-abhängigen Signalwegs in primären GCP-Kulturen ein. Geben Sie zunächst 0,5 Milliliter Kulturmedium in jede Vertiefung der 24-Well-Kulturplatte mit beschichteten Deckblättern und halten Sie sie bei 37 Grad Celsius in einem Kohlendioxid-Inkubator warm.Die erforderliche Anzahl von Zellen in ein steriles 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen pipettieren und bei Raumtemperatur fünf Minuten lang bei 200x G drehen. Entsorgen Sie den Überstand und resuspenieren Sie das Zellpellet in 200 Mikrolitern Opti-MEM. Wiederholen Sie diesen Vorgang zweimal, um sicherzustellen, dass kein Restkulturmedium in der Röhre vorhanden ist.Stellen Sie die Parameter der Elektroporation wie aufgeführt ein. Die Elektroporationsreaktion vorsichtig pipettieren, um gut zu mischen, und verwenden Sie eine lange P200-Pipettenspitze, um ein genaues Volumen von 100 Mikrolitern der Mischung in die Zwei-Millimeter-Spaltküvette zu übertragen. Sobald sich die Küvette in der Küvettenkammer befindet, drücken Sie die Omega-Taste des Elektroporators und notieren Sie den Impedanzwert, indem Sie sich an ein genaues Volumen von 100 Mikrolitern halten.Der Impedanzbereich sollte ungefähr 30 und 35 betragen. Drücken Sie die Starttaste, um den Impuls zu starten. Zeichnen Sie die gemessenen Aktuellewerte in Joule auf, die auf dem Leserahmen angezeigt werden.Nehmen Sie die Küvette aus der Kammer. Sofort 100 Mikroliter vorgewärmtes Kulturmedium in die Küvette geben und durch zwei- bis dreimaliges Pipettieren resuspendieren. Übertragen Sie die Zellsuspension sofort auf die zuvor vorbereitete 24-Well-Platte.Inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius in einem Kohlendioxid-Inkubator. Beobachten Sie die Zellen am nächsten Tag unter dem Fluoreszenzmikroskop. In der vorliegenden Studie schien die Elektroporationseffizienz von DMSO- und SAG-behandelten Gruppen vergleichbar zu sein.Die Immunfärbung des primären Ciliummarkers Arl13b zeigt, dass die Flimmerrate von GCP bei div-2 der Kultur sowohl in der Vehikel- als auch in der SAG-behandelten Gruppe erfolgt. Die Kiliationsrate veranschaulicht den Prozentsatz der Pax6-exprimierenden GCPs, die ein primäres Cilium auf der Zelloberfläche bei div-2 nach der Elektroporation tragen. Die Abbildung zeigt einen signifikanten Anstieg der geglätteten EGFP-Lokalisation auf dem primären Ciliumaxtonem von Pax6-Expressions-GCP-Zellen 24 Stunden nach der SAG-Behandlung, was auf eine tiefgreifende Aktivierung des primären Cilium-abhängigen Hedgehog-Signalwegs hinweist.Um eine höhere Elektroporationseffizienz zu erreichen, sollte eine hohe Reinheit des verwendeten Plasmids sichergestellt werden, und es sind keine Rückstandskulturmedien in der Plasmidelektroporationsmischung vorhanden. Dieses Protokoll sollte für In-vitro-Experimente zur genetischen Veränderung an Primärkulturen und Zelltypen, die schwer zu transfizieren sind, einschließlich Neuronen und humaninduzierter pluripotenter Stammzellen, direkt anwendbar und vorteilhaft sein.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Neuroscience

Unit 1

Alternative Signaling Routes in Gene Expression

SCIENTISTS IN ACTION

Design and Construction of a Cost Effective Headstage for Simultaneous Neural Stimulation and Recording in the Water Maze

Planung und Bau eines kostengünstigen Headstage für Simultaneous Neural Stimulation und Aufnahme in the Water Maze

Headstage preamplifiers and source followers are commonly used to study neural activity in behavioral neurophysiology experiments. Available commercial ...

Forschung

Neurowissenschaften

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-Cell-Imaging von Sinnesorgan Vorläuferzellen im Intact Drosophila Puppen

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

Effiziente Gene Lieferung in mehrere ZNS Territories mit In Utero Elektroporation

The ability to manipulate gene expression is the cornerstone of modern day experimental embryology, leading to the elucidation of multiple developmental ...

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Genetische Manipulation der Maus entwickeln Hypothalamus durch<em&gt; In utero</em&gt; Elektroporation

Genetic  modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very  powerful experimental approach. However, generating novel mouse ...

Sex Stratified Neuronal Cultures to Study Ischemic Cell Death Pathways

Sex differences in neuronal susceptibility to ischemic injury and neurodegenerative disease have long been observed, but the signaling mechanisms ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetische Manipulation von Kleinhirnkörnerzellen<em&gt; In-vitro-</em&gt; Und<em&gt; In Vivo</em&gt;, Um neuronale Morphologie und Migration Studieren

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

FIM Imaging and FIMtrack: Two New Tools Allowing High-throughput and Cost Effective Locomotion Analysis

FIM Imaging und FIMtrack: Zwei neuer Instrumente, die Hochdurchsatz und Kosteneffektiv Locomotion Analyse

The analysis of neuronal network function requires a reliable measurement of behavioral traits. Since the behavior of freely moving animals is variable to ...

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

Die Beurteilung Primäre Neurogenese in<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonen Immunostaining

Primary neurogenesis is a dynamic and complex process during embryonic development that sets up the initial layout of the central nervous system. During ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In vivo - Gentransfer auf Schwann - Zellen in der Nagerischiasnerv durch Elektroporation

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

In Utero Ansätze Elektroporation die Erregbarkeit neuronaler Subpopulationen und Einzelzell - Konnektivität zu studieren

The nervous system is composed of an enormous range of distinct neuronal types. These neuronal subpopulations are characterized by, among other features, ...