Name: efficient and cost effective electroporation method to study primary cilium-dependent signaling pathways in the granule cell precursor
Uploaded: 2021-11-30T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Cost Effective Electroporation Method to Study Primary Cilium-Dependent Signaling Pathways in the Granule Cell Precursor at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי קרן הזרעים HKBU ומענק הסטארט-אפ Tier-2 (RG-SGT2/18-19/SCI/009), קרן מחקר מועצת המחקר השיתופית של המועצה למענק מחקר (CRF-C2103-20GF) ל- C.H.H. Hor.

כל ההליכים הקשורים לבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות לטיפול בבעלי חיים ולפרוטוקול שאושר על ידי משרד הבריאות, הונג קונג. רישיונות לניסויים בבעלי חיים בעקבות פקודת בעלי חיים (פיקוח על ניסויים) (סעיף 340) התקבלו ממשרד הבריאות, ממשלת הונג קונג. העבודה בבעלי החיים בוצעה בהתאם לאתיקה לבטיחות בעלי חי?...

<ol>
	<li>Chang, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atoh1+controls+primary+cilia+formation+to+allow+for+SHH-triggered+granule+neuron+progenitor+proliferation.">Atoh1 controls primary cilia formation to allow for SHH-triggered granule neuron progenitor proliferation.</a> Developmental Cell. 48 (2), 184-199 (2019).</li><li>Dahmane, N., Ruizi Altaba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+Hedgehog+regulates+the+growth+and+patterning+of+the+cerebellum.">Sonic Hedgehog regulates the growth and patterning of the cerebellum.</a> Development. 126 (14), 3089-3100 (1999).</li><li>Lewis, P. M., Gritti-Linde, A., Smeyne, R., Kottmann, A., Mcmahon, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+Hedgehog+signaling+is+required+for+expansion+of+granule+neuron+precursors+and+patterning+of+the+mouse+cerebellum.">Sonic Hedgehog signaling is required for expansion of granule neuron precursors and patterning of the mouse cerebellum.</a> Developmental Biology. 270 (2), 393-410 (2004).</li><li>Wechsler-Reya, R. J., Scott, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+neuronal+precursor+proliferation+in+the+cerebellum+by+Sonic+Hedgehog.">Control of neuronal precursor proliferation in the cerebellum by Sonic Hedgehog.</a> Neuron. 22 (1), 103-114 (1999).</li><li>Bangs, F., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cilia+and+mammalian+Hedgehog+signaling.">Primary cilia and mammalian Hedgehog signaling.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 9 (5), 028175 (2017).</li><li>Hor, C. H. H., Lo, J. C. W., Cham, A. L. S., Leung, W. Y., Goh, E. L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifaceted+functions+of+Rab23+on+primary+cilium-+and+Hedgehog+signaling-mediated+cerebellar+granule+cell+proliferation.">Multifaceted functions of Rab23 on primary cilium- and Hedgehog signaling-mediated cerebellar granule cell proliferation.</a> Journal of Neuroscience. 41 (32), 6850-6863 (2021).</li><li>Han, Y. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+and+opposing+roles+of+primary+cilia+in+medulloblastoma+development.">Dual and opposing roles of primary cilia in medulloblastoma development.</a> Nature Medicine. 15 (9), 1062-1065 (2009).</li><li>Spassky, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cilia+are+required+for+cerebellar+development+and+Shh-dependent+expansion+of+progenitor+pool.">Primary cilia are required for cerebellar development and Shh-dependent expansion of progenitor pool.</a> Developmental Biology. 317 (1), 246-259 (2008).</li><li>Wang, T., Larcher, L., Ma, L., Veedu, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+screening+of+commonly+used+commercial+transfection+reagents+towards+efficient+transfection+of+single-stranded+oligonucleotides.">Systematic screening of commonly used commercial transfection reagents towards efficient transfection of single-stranded oligonucleotides.</a> Molecules. 23 (10), 2564 (2018).</li><li>Chicaybam, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+electroporation+protocol+for+the+genetic+modification+of+mammalian+cells.">An efficient electroporation protocol for the genetic modification of mammalian cells.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 4, 99 (2017).</li><li>Lee, H. Y., Greene, L. A., Mason, C. A., Chiara Manzini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+post-natal+mouse+cerebellar+granule+neuron+progenitor+cells+and+neurons.">Isolation and culture of post-natal mouse cerebellar granule neuron progenitor cells and neurons.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (23), e990 (2009).</li><li>Mizoguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+cerebellar+development+in+mice+overexpressing+VGF.">Impaired cerebellar development in mice overexpressing VGF.</a> Neurochemical Research. 44 (2), 374-387 (2019).</li><li>Zhou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+imaging+of+nerve+cells.">Confocal imaging of nerve cells.</a> Current Laboratory Methods in Neuroscience Research. , 235-247 (2014).</li><li>Corbit, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertebrate+Smoothened+functions+at+the+primary+cilium.">Vertebrate Smoothened functions at the primary cilium.</a> Nature. 437 (7061), 1018-1021 (2005).</li></ol>

טרנספקטציה של טרנסג'נים בתרבות GCP ראשונית על ידי שיטת אלקטרופורציה קשורה בדרך כלל עם כדאיות תאים נמוכה ויעילות טרנספקטיבה ירודה9,10. מאמר זה מציג פרוטוקול אלקטרופורציה חסכוני וניתן לשחזור שהפגין יעילות גבוהה וכדאיות. בנוסף, אנו גם מדגימים שיטה פשוטה של לימו?...

GCPs המוח הקטן נמצאים בשימוש נרחב כדי ללמוד את המכונות של מסלול איתות Hh בסוגי תאים אב עצביים בשל השפע הגבוה שלהם רגישות גבוהה למסלול איתות Hh ב vivo1,2,3,4. ב- GCPs, הסיליום העיקרי פועל כרכזת העברת אות Hh מרכזית 5 המתזמרת את התפשטות התאים המבשרים6,7,8. הדמיה חוץ גופית של רכיבי איתות Hh על הסיליום הראשי הוא לעתים קרובות מאתגר בשל רמות הבסיס האנדוגניות הנמוכות שלהם. לפיכך, שינוי טרנסג'ן של רמות ביטוי חלבון ותיוג פלואורופור של גן העניין הן גישות שימושיות כדי ללמוד את המסלול ברזולוציה מולקולרית. עם זאת, מניפולציה גנטית של תרבויות ראשיות GCP באמצעות גישות transfection מבוססות ליפוזום לעתים קרובות לגרום יעילות טרנספקטיבה נמוכה, מעכב חקירות מולקולריות נוספות9. אלקטרופורציה מגבירה את היעילות אך בדרך כלל דורשת ריאגנטים אלקטרופורציה ספציפיים לספקים מופקעים וסוג התאים 10.
מאמר זה מציג שיטת אלקטרופורציה יעילה וחסכונית לתפעול רכיבי מסלול האיתות של Hh בתרבויות הראשיות של GCP. באמצעות פרוטוקול אלקטרופורציה שונה זה, חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) מתויג טרנסג'ן החלקה (pEGFP-Smo) נמסר ביעילות GCPs והשיג שיעורי הישרדות וטרנספקטיה גבוהים של תאים (80-90%). יתר על כן, כפי שמעיד הכתם החיסוני, GCPs שהושפעו הטרנסג'נדרים הראו רגישות גבוהה להפעלה אגוניסטית החלקה של מסלול האיתות HH על ידי סחר EGFP-Smo לסיסים העיקריים. פרוטוקול זה יהיה ישים ישירות ומועיל לניסויים הכרוכים בשינוי גנטי במבחנה של סוגי תאים שקשה להעביר, כגון תרביות תאים ראשוניים אנושיים ומכרסמים, כמו גם תאי גזע פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי בני אדם.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>GCP Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Life Technologies LTD</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 70 &#181;m</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I from bovine pancreas</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Earle&#8217;s Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>14155063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS, qualified</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30028.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutamMAXTM-I ,100x</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>35050061</td>
			<td>L-glutamine substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354277</td>
			<td>Basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain,suspension</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LS003126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-lysine Hydrobromide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAG</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>11914-1</td>
			<td>Smoothened agonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IF staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody mix</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP-goat ab</td>
			<td>Rockland</td>
			<td>600-101-215</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Arl13b mouse monoclonal ab</td>
			<td>NeuroMab</td>
			<td>75-287</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Pax6 rabbit polyclonal ab</td>
			<td>Covance</td>
			<td>PRB-278P</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody mix</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-goat IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11055</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31570</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 donkey anti-rabbit IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31573</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>62247</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CU 500 cuvette chamber</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>CU500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPA Electroporation cuvette (2 mm gap)</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>EC-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Life Technologies LTD</td>
			<td>31985070</td>
			<td>reduced-serum medium for transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pEGFP-mSmo</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>25395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Electroporator NEPA21 TYPE II In Vitro and In Vivo Electroporation</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>NEPA21</td>
			<td>electroporator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient and cost effective electroporation method to study primary cilium-dependent signaling pathways in the granule cell precursor

הסיליום העיקרי הוא אברון איתות קריטי שנמצא כמעט בכל תא שמתמר את הקיפוד (Hh) ומאותת לגירויים מפני השטח של התא. במבשר תאי הגרגיר (GCP), הסיליום הראשי משמש כמרכז איתות מרכזי המתזמר את התפשטות התאים המבשרים על ידי ויסות מסלול האיתות של Hh. החקירה של מכונות איתות Hh תלויות cilium העיקרית מתאפשרת על ידי מניפולציה גנטית במבחנה של רכיבי המסלול כדי לדמיין את הלוקליזציה הדינמית שלהם לסיליום הראשי. עם זאת, טרנספקטציה של טרנסג'נים בתרבויות העיקריות של GCPs באמצעות שיטות אלקטרופורציה הידועות כיום היא בדרך כלל יקרה ולעתים קרובות גורמת בכדאיות תאים נמוכה ויעילות טרנספקטורה לא רצויה. מאמר זה מציג פרוטוקול אלקטרופורציה יעיל, חסכוני ופשוט המדגים יעילות טרנספקטירה גבוהה של ~ 80-90% ואת הכדאיות התא האופטימלית. זוהי שיטת שינוי גנטי פשוטה, ניתנת לשחזור ויעילה החלה על חקר מסלול האיתות העיקרי התלוי בסיליום בתרבויות GCP ראשוניות.

באמצעות Opti-MEM (ראה טבלת החומרים) כמגיב האוניברסלי, מתודולוגיית אלקטרופורציה מוצעת זו יכולה להשיג יעילות אלקטרופורציה גבוהה באופן עקבי בשיעור של ~80-90% (איור 1). יעילות האלקטרופורציה של וקטור Smo-EGFP נקבעה ב- DIV 2 לאחר אלקטרופורציה על ידי כימות אחוז התאים החיוביים לפלואור...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Cost Effective Electroporation Method to Study Primary Cilium-Dependent Signaling Pathways in the Granule Cell Precursor at JoVE.com

Efficient and Cost Effective Electroporation Method to Study Primary Cilium-Dependent Signaling Pathways in the Granule Cell Precursor

כאן, אנו מציגים פרוטוקול אלקטרופורציה במבחנה לשחזור עבור מניפולציה גנטית של מבשרי תאי גרגר המוח הקטן העיקרי (GCPs) כי הוא חסכוני, יעיל, קיימא. יתר על כן, פרוטוקול זה מדגים גם שיטה פשוטה למחקר מולקולרי של מסלולי איתות קיפוד תלויי ציליום ראשוניים בתאי GCP ראשוניים.

שיטת אלקטרופורמציה יעילה וחסכונית לחקר מסלולי איתות ראשוניים תלויי סיליום במבשר תאי הגרגיר

The primary cilium is a critical signaling organelle found on nearly every cell that transduces Hedgehog (Hh) signaling stimuli from the cell surface. In ...

פרוטוקול זה מדגים שיטה פשוטה של שינוי גנטי במבחנה למחקר המולקולרי של מסלול האיתות התלוי בסיליום העיקרי בתרבויות המבשרות העיקריות של תאי הגרגיר. בשל העלות, הכדאיות הנמוכה והיעילות הלקויה של שיטת הטרנספקטיה הנוכחית, אנו מציגים טכניקת אלקטרופורציה פשוטה, חסכונית ויעילה לחקירת מסלול איתות תלוי טיליום בתרבויות GCP ראשוניות. כדי להתחיל, להוסיף 0.5 מיליליטר של מדיום תרבות לתוך כל באר של צלחת התרבות 24-well המכילה תלושי כיסוי מצופים, ולשמור אותו חם ב 37 מעלות צלזיוס בחממה דו תחמוצת הפחמן.פיפטה את המספר הנדרש של תאים לתוך צינור סטרילי 1.5 מיליליטר microcentrifuge ולהסתובב ב 200x G במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. השלך את supernatant ו resuspend את גלולה התא ב 200 מיקרוליטרים של Opti-MEM. חזור על הליך זה פעמיים כדי להבטיח שאין מדיום תרבות שיורית נמצא בצינור.הגדר את הפרמטרים של אלקטרופורציה כמפורט. פיפטה תגובת electroporation בעדינות לערבב היטב, ולהשתמש קצה פיפטה P200 ארוך כדי להעביר נפח מדויק של 100 מיקרוליטר של התערובת לתוך קובט פער שני מילימטר. ברגע שהקובט נמצא בתוך תא הקובט, לחץ על כפתור האומגה של האלקטרופורטור ושים לב לערך העכבה על ידי היצמדות לנפח מדויק של 100 מיקרוליטרים.טווח ערך העכבה צריך להיות כ 30 ו 35. לחץ על לחצן התחל כדי ליזום את הדופק. הקלט את הערכים הנוכחיים הנמדדים ב- Joules המוצגים במסגרת הקריאה.הסר את הקובט מהתא. מיד להוסיף 100 microliters של מדיום תרבות שחומם מראש לתוך cuvette ו resuspended אותו על ידי צנרת למעלה ולמטה פעמיים עד שלוש פעמים. העבר מיד את ההשעיה התאית ללוחית 24 הבאר שהוכנה בעבר.לדגור על התאים ב 37 מעלות צלזיוס בחממה דו תחמוצת הפחמן. שים לב לתאים תחת מיקרוסקופ הפלואורסצנטיות למחרת. במחקר הנוכחי, יעילות האלקטרופורציה של קבוצות שטופלו ב- DMSO ו- SAG נראתה דומה.חיסון של סמן הסיליום הראשי Arl13b מדגים כי שיעור ההשתייכות של GCP בדיו-2 של התרבות הן ברכב והן בקבוצות שטופלו ב- SAG. שיעור ההשתייכות ממחיש את אחוז ה-Pax6 המבטאים GCPs הנושאים סיליום ראשי על פני התא ב-div-2 לאחר אלקטרופורציה. האיור מראה עלייה משמעותית בלוקליזציה EGFP מוחלקת על cilium axoneme העיקרי של Px6 ביטוי GCP תאים ב 24 שעות לאחר טיפול SAG, המציין הפעלה עמוקה של מסלול איתות קיפוד תלוי cilium העיקרי.על מנת להשיג יעילות אלקטרופורציה גבוהה יותר, יש להבטיח טוהר גבוה של הפלסמיד המשמש, ואין מדיה תרבית שאריות נמצא בתערובת אלקטרופורציה פלסמיד. פרוטוקול זה צריך להיות ישים ישירות ומועיל לניסויים בשינוי גנטי במבחנה על תרבויות ראשוניות וסוגי תאים שקשה להעביר, כולל נוירונים ותאי גזע פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי האדם.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Neuroscience

Unit 1

Alternative Signaling Routes in Gene Expression

SCIENTISTS IN ACTION

Design and Construction of a Cost Effective Headstage for Simultaneous Neural Stimulation and Recording in the Water Maze

עיצוב ובנייה של Headstage העלות האפקטיבית של גירוי עצבי סימולטני הקלטה של ​​מבוך המים

Headstage preamplifiers and source followers are commonly used to study neural activity in behavioral neurophysiology experiments. Available commercial ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-תא הדמיה של תאים מבשר חושי האיברים אינטקט תסיסנית גלמים

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

ג&#39;ין אספקה ​​יעילה לתוך השטחים CNS מרובים באמצעות בתוך הרחם Electroporation

The ability to manipulate gene expression is the cornerstone of modern day experimental embryology, leading to the elucidation of multiple developmental ...

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

מניפולציה גנטית של העכבר באמצעות פיתוח היפותלמוס<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation

Genetic  modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very  powerful experimental approach. However, generating novel mouse ...

Sex Stratified Neuronal Cultures to Study Ischemic Cell Death Pathways

Sex differences in neuronal susceptibility to ischemic injury and neurodegenerative disease have long been observed, but the signaling mechanisms ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

מניפולציה גנטית של Cerebellar גרגיר נוירונים<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; בVivo</em&gt; ללמוד עצבי מורפולוגיה וגירה

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

FIM Imaging and FIMtrack: Two New Tools Allowing High-throughput and Cost Effective Locomotion Analysis

FIM הדמיה וFIMtrack: שני כלים חדשים המאפשר תפוקה גבוהה וניתוח תנועה חסכוני

The analysis of neuronal network function requires a reliable measurement of behavioral traits. Since the behavior of freely moving animals is variable to ...

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

הערכת Neurogenesis יסודי<em&gt; Xenopus</em&gt; עוברים באמצעות Immunostaining

Primary neurogenesis is a dynamic and complex process during embryonic development that sets up the initial layout of the central nervous system. During ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In vivo ג&#39;ין העברה בתאי שוואן בעצב מכרסמים Sciatic ידי Electroporation

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

ברחם Electroporation גישות לחקר רגישות של העצבית subpopulations וקישוריות תא יחיד

The nervous system is composed of an enormous range of distinct neuronal types. These neuronal subpopulations are characterized by, among other features, ...