Name: efficient and cost effective electroporation method to study primary cilium-dependent signaling pathways in the granule cell precursor
Uploaded: 2021-11-30T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Cost Effective Electroporation Method to Study Primary Cilium-Dependent Signaling Pathways in the Granule Cell Precursor at JoVE.com

Questo studio è stato supportato da HKBU Seed Fund e Tier-2 Start-up Grant (RG-SGT2/18-19/SCI/009), Research Grant Council-Collaborative Research Fund (CRF-C2103-20GF) a C.H.H. Hor.

Tutte le procedure relative agli animali sono state eseguite in conformità con le linee guida sulla manipolazione degli animali e il protocollo approvato dal Dipartimento della Salute di Hong Kong. Le licenze per esperimenti sugli animali a seguito dell'ordinanza sugli animali (controllo degli esperimenti) (Cap. 340) sono state ottenute dal Dipartimento della Salute, governo di Hong Kong. Il lavoro sugli animali è stato svolto in conformità con l'etica della sicurezza animale approvata dall'Ufficio ricerche HKBU e dal...

<ol>
	<li>Chang, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atoh1+controls+primary+cilia+formation+to+allow+for+SHH-triggered+granule+neuron+progenitor+proliferation.">Atoh1 controls primary cilia formation to allow for SHH-triggered granule neuron progenitor proliferation.</a> Developmental Cell. 48 (2), 184-199 (2019).</li><li>Dahmane, N., Ruizi Altaba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+Hedgehog+regulates+the+growth+and+patterning+of+the+cerebellum.">Sonic Hedgehog regulates the growth and patterning of the cerebellum.</a> Development. 126 (14), 3089-3100 (1999).</li><li>Lewis, P. M., Gritti-Linde, A., Smeyne, R., Kottmann, A., Mcmahon, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+Hedgehog+signaling+is+required+for+expansion+of+granule+neuron+precursors+and+patterning+of+the+mouse+cerebellum.">Sonic Hedgehog signaling is required for expansion of granule neuron precursors and patterning of the mouse cerebellum.</a> Developmental Biology. 270 (2), 393-410 (2004).</li><li>Wechsler-Reya, R. J., Scott, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+neuronal+precursor+proliferation+in+the+cerebellum+by+Sonic+Hedgehog.">Control of neuronal precursor proliferation in the cerebellum by Sonic Hedgehog.</a> Neuron. 22 (1), 103-114 (1999).</li><li>Bangs, F., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cilia+and+mammalian+Hedgehog+signaling.">Primary cilia and mammalian Hedgehog signaling.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 9 (5), 028175 (2017).</li><li>Hor, C. H. H., Lo, J. C. W., Cham, A. L. S., Leung, W. Y., Goh, E. L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifaceted+functions+of+Rab23+on+primary+cilium-+and+Hedgehog+signaling-mediated+cerebellar+granule+cell+proliferation.">Multifaceted functions of Rab23 on primary cilium- and Hedgehog signaling-mediated cerebellar granule cell proliferation.</a> Journal of Neuroscience. 41 (32), 6850-6863 (2021).</li><li>Han, Y. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+and+opposing+roles+of+primary+cilia+in+medulloblastoma+development.">Dual and opposing roles of primary cilia in medulloblastoma development.</a> Nature Medicine. 15 (9), 1062-1065 (2009).</li><li>Spassky, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cilia+are+required+for+cerebellar+development+and+Shh-dependent+expansion+of+progenitor+pool.">Primary cilia are required for cerebellar development and Shh-dependent expansion of progenitor pool.</a> Developmental Biology. 317 (1), 246-259 (2008).</li><li>Wang, T., Larcher, L., Ma, L., Veedu, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+screening+of+commonly+used+commercial+transfection+reagents+towards+efficient+transfection+of+single-stranded+oligonucleotides.">Systematic screening of commonly used commercial transfection reagents towards efficient transfection of single-stranded oligonucleotides.</a> Molecules. 23 (10), 2564 (2018).</li><li>Chicaybam, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+electroporation+protocol+for+the+genetic+modification+of+mammalian+cells.">An efficient electroporation protocol for the genetic modification of mammalian cells.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 4, 99 (2017).</li><li>Lee, H. Y., Greene, L. A., Mason, C. A., Chiara Manzini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+post-natal+mouse+cerebellar+granule+neuron+progenitor+cells+and+neurons.">Isolation and culture of post-natal mouse cerebellar granule neuron progenitor cells and neurons.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (23), e990 (2009).</li><li>Mizoguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+cerebellar+development+in+mice+overexpressing+VGF.">Impaired cerebellar development in mice overexpressing VGF.</a> Neurochemical Research. 44 (2), 374-387 (2019).</li><li>Zhou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+imaging+of+nerve+cells.">Confocal imaging of nerve cells.</a> Current Laboratory Methods in Neuroscience Research. , 235-247 (2014).</li><li>Corbit, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertebrate+Smoothened+functions+at+the+primary+cilium.">Vertebrate Smoothened functions at the primary cilium.</a> Nature. 437 (7061), 1018-1021 (2005).</li></ol>

La trasfezione di transgeni in coltura GCP primaria con metodo di elettroporazione è tipicamente associata a una bassa vitalità cellulare e a una scarsa efficienza di trasfezione9,10. Questo documento introduce un protocollo di elettroporazione economico e riproducibile che ha dimostrato alta efficienza e fattibilità. Inoltre, dimostriamo anche un metodo semplice per studiare la via di segnalazione Hh primaria cilium-dipendente nelle cellule GCP primarie.
...

I GCP cerebellari sono ampiamente utilizzati per studiare il meccanismo della via di segnalazione Hh nei tipi di cellule progenitrici neuronali a causa della loro elevata abbondanza e alta sensibilità alla via di segnalazione Hh in vivo1,2,3,4. Nei GCP, il cilio primario agisce come un hub cardine di trasduzione del segnale Hh5 che orchestra la proliferazione delle cellule precursori6,7,8. La visualizzazione in vitro dei componenti di segnalazione Hh sul cilio primario è spesso difficile a causa dei loro bassi livelli basali endogeni. Quindi, la modifica transgenica dei livelli di espressione proteica e il tagging fluoroforico del gene di interesse sono approcci utili per studiare il percorso a risoluzione molecolare. Tuttavia, la manipolazione genetica delle colture primarie GCP utilizzando approcci di trasfezione basati su liposomi spesso si traduce in una bassa efficienza di trasfezione, ostacolando ulteriori indagini molecolari9. L'elettroporazione aumenta l'efficienza, ma in genere richiede reagenti di elettroporazione esorbitanti specifici del fornitore e limitati al tipo di cella10.
Questo documento introduce un metodo di elettroporazione ad alta efficienza ed economico per manipolare i componenti del percorso di segnalazione Hh nelle colture primarie GCP. Utilizzando questo protocollo di elettroporazione modificato, un transgene Smoothened marcato con proteina fluorescente verde (GFP) (pEGFP-Smo) è stato consegnato in modo efficiente ai GCP e ha raggiunto alti tassi di sopravvivenza e trasfezione cellulare (80-90%). Inoltre, come evidenziato dalla colorazione immunocitochimica, i GCP trasfettati hanno mostrato un'elevata sensibilità all'attivazione indotta da agonisti smoothened della via di segnalazione Hh trafficando EGFP-Smo alle ciglia primarie. Il presente protocollo è direttamente applicabile e vantaggioso per gli esperimenti che comportano la modificazione genetica in vitro di tipi cellulari difficili da trasfettare, come le colture cellulari primarie umane e di roditori, nonché le cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>GCP Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Life Technologies LTD</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 70 &#181;m</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I from bovine pancreas</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Earle&#8217;s Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>14155063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS, qualified</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30028.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutamMAXTM-I ,100x</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>35050061</td>
			<td>L-glutamine substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354277</td>
			<td>Basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain,suspension</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LS003126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-lysine Hydrobromide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAG</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>11914-1</td>
			<td>Smoothened agonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IF staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody mix</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP-goat ab</td>
			<td>Rockland</td>
			<td>600-101-215</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Arl13b mouse monoclonal ab</td>
			<td>NeuroMab</td>
			<td>75-287</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Pax6 rabbit polyclonal ab</td>
			<td>Covance</td>
			<td>PRB-278P</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody mix</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-goat IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11055</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31570</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 donkey anti-rabbit IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31573</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>62247</td>
			<td>Dilution Factor: 1 : 1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CU 500 cuvette chamber</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>CU500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPA Electroporation cuvette (2 mm gap)</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>EC-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM</td>
			<td>Life Technologies LTD</td>
			<td>31985070</td>
			<td>reduced-serum medium for transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pEGFP-mSmo</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>25395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Electroporator NEPA21 TYPE II In Vitro and In Vivo Electroporation</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>NEPA21</td>
			<td>electroporator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient and cost effective electroporation method to study primary cilium-dependent signaling pathways in the granule cell precursor

Il cilio primario è un organello di segnalazione critico che si trova su quasi tutte le cellule che trasducono gli stimoli di segnalazione hedgehog (Hh) dalla superficie cellulare. Nel precursore delle cellule del granulo (GCP), il cilio primario agisce come un centro di segnalazione cardine che orchestra la proliferazione delle cellule precursori modulando la via di segnalazione Hh. Lo studio del meccanismo di segnalazione Hh cilium-dipendente primario è facilitato dalla manipolazione genetica in vitro dei componenti del percorso per visualizzare la loro localizzazione dinamica al cilio primario. Tuttavia, la trasfezione di transgeni nelle colture primarie di GCP utilizzando i metodi di elettroporazione attualmente noti è generalmente costosa e spesso si traduce in bassa vitalità cellulare ed efficienza di trasfezione indesiderata. Questo documento introduce un protocollo di elettroporazione efficiente, economico e semplice che dimostra un'elevata efficienza di trasfezione di ~ 80-90% e una fattibilità ottimale delle celle. Questo è un metodo di modificazione genetica semplice, riproducibile ed efficiente che è applicabile allo studio della via di segnalazione primaria del riccio cilio-dipendente in colture primarie GCP.

Utilizzando l'Opti-MEM (vedi la Tabella dei materiali) come reagente universale, questa metodologia di elettroporazione proposta potrebbe raggiungere un'efficienza di elettroporazione costantemente elevata a ~ 80-90% (Figura 1). L'efficienza di elettroporazione del vettore Smo-EGFP è stata determinata a DIV 2 post elettroporazione quantificando la percentuale di cellule verdi positive alla fluorescenza in tutte le cellule GCP che esprimono la proteina 6 (Pax6) accoppiata. L...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient and Cost Effective Electroporation Method to Study Primary Cilium-Dependent Signaling Pathways in the Granule Cell Precursor at JoVE.com

Efficient and Cost Effective Electroporation Method to Study Primary Cilium-Dependent Signaling Pathways in the Granule Cell Precursor

Qui, presentiamo un protocollo di elettroporazione riproducibile in vitro per la manipolazione genetica dei precursori delle cellule del granulo cerebellare primario (GCP) che è economico, efficiente e praticabile. Inoltre, questo protocollo dimostra anche un metodo semplice per lo studio molecolare delle vie di segnalazione primarie del riccio cilio-dipendenti nelle cellule GCP primarie.

Metodo di elettroporazione efficiente ed economico per studiare le vie di segnalazione cilium-dipendenti primarie nel precursore della cella del granulo

The primary cilium is a critical signaling organelle found on nearly every cell that transduces Hedgehog (Hh) signaling stimuli from the cell surface. In ...

Questo protocollo dimostra un semplice metodo di modificazione genetica in vitro per lo studio molecolare della via di segnalazione primaria cilium-dipendente nelle colture precursori di cellule granuliche primarie. A causa del costo, della bassa redditività e della scarsa efficienza dell'attuale metodo di trasfezione, introduciamo una tecnica di elettroporazione semplice, economica ed efficiente per studiare la via di segnalazione dipendente dal cilio nelle colture primarie GCP. Per iniziare, aggiungere 0,5 millilitri di terreno di coltura in ciascun pozzetto della piastra di coltura a 24 pozzetti contenente scivoli di copertura rivestiti e tenerlo caldo a 37 gradi Celsius in un incubatore di anidride carbonica.Pipettare il numero richiesto di celle in un tubo microcentrifuga sterile da 1,5 millilitri e ruotare a 200x G per cinque minuti a temperatura ambiente. Scartare il surnatante e risospesciare il pellet cellulare in 200 microlitri di Opti-MEM. Ripetere questa procedura due volte per assicurarsi che nel tubo non sia presente alcun terreno di coltura residuo.Impostare i parametri di elettroporazione come elencato. Pipettare delicatamente la reazione di elettroporazione per mescolare bene e utilizzare una lunga punta della pipetta P200 per trasferire un volume esatto di 100 microlitri della miscela nella cuvetta a due millimetri di spazio. Una volta che la cuvetta si trova all'interno della camera della cuvetta, premere il pulsante omega dell'elettroporatore e annotare il valore di impedenza aderendo a un volume preciso di 100 microlitri.L'intervallo del valore di impedenza dovrebbe essere approssimativamente 30 e 35. Premere il pulsante di avvio per avviare l'impulso. Registrate i valori correnti misurati in Joule mostrati sul fotogramma di lettura.Rimuovere la cuvetta dalla camera. Aggiungere immediatamente 100 microlitri di terreno di coltura preriscaldato nella cuvetta e risospesa mediante pipettaggio su e giù due o tre volte. Trasferire immediatamente la sospensione cellulare sulla piastra a 24 pozzetti precedentemente preparata.Incubare le cellule a 37 gradi Celsius in un incubatore di anidride carbonica. Osservare le cellule al microscopio a fluorescenza il giorno seguente. Nel presente studio, l'efficienza di elettroporazione dei gruppi trattati con DMSO e SAG è apparsa comparabile.L'immunocolorazione del marcatore cilio primario Arl13b dimostra che il tasso di ciliazione di GCP a div-2 di coltura sia nel veicolo che nei gruppi trattati con SAG. Il tasso di ciliazione illustra la percentuale di GCP che esprimono Pax6 che portano un cilio primario sulla superficie cellulare a div-2 post-elettroporazione. La figura mostra un aumento significativo della localizzazione EGFP levigata sull'axoneme cilium primario delle cellule GCP di espressione Pax6 a 24 ore dopo il trattamento SAG, indicando una profonda attivazione della via di segnalazione primaria del riccio cilium-dipendente.Al fine di ottenere una maggiore efficienza di elettroporazione, si dovrebbe garantire un'elevata purezza del plasmide utilizzato e nessun mezzo di coltura residuo è presente nella miscela di elettroporazione plasmidica. Questo protocollo dovrebbe essere direttamente applicabile e vantaggioso per esperimenti di modificazione genetica in vitro su colture primarie e tipi di cellule difficili da trasfettare, compresi i neuroni e le cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Neuroscience

Unit 1

Alternative Signaling Routes in Gene Expression

SCIENTISTS IN ACTION

Design and Construction of a Cost Effective Headstage for Simultaneous Neural Stimulation and Recording in the Water Maze

Progettazione e Costruzione di un Headstage conveniente per simultanea Stimolazione Neurale e registrazione nel Labirinto d&#39;acqua

Headstage preamplifiers and source followers are commonly used to study neural activity in behavioral neurophysiology experiments. Available commercial ...

Ricerca

Neuroscienze

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cellula Imaging di cellule sensoriali Precursore in Organo intatto Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

Gene consegna efficiente in più territori SNC utilizzo In Utero Elettroporazione

The ability to manipulate gene expression is the cornerstone of modern day experimental embryology, leading to the elucidation of multiple developmental ...

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

La manipolazione genetica del topo sviluppo dell&#39;ipotalamo attraverso<em&gt; In utero</em&gt; Elettroporazione

Genetic  modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very  powerful experimental approach. However, generating novel mouse ...

Sex Stratified Neuronal Cultures to Study Ischemic Cell Death Pathways

Sex differences in neuronal susceptibility to ischemic injury and neurodegenerative disease have long been observed, but the signaling mechanisms ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Manipolazione genetica delle cerebellare granuli neuroni<em&gt; In Vitro</em&gt; E<em&gt; In Vivo</em&gt; Per studiare neuronale Morfologia e migrazione

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

FIM Imaging and FIMtrack: Two New Tools Allowing High-throughput and Cost Effective Locomotion Analysis

FIM Imaging e FIMtrack: due nuovi strumenti che ad alta produttività e costo effettivo Locomotion Analysis

The analysis of neuronal network function requires a reliable measurement of behavioral traits. Since the behavior of freely moving animals is variable to ...

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

La valutazione primaria neurogenesi in<em&gt; Xenopus</em&gt; Embrioni Utilizzando Immunocolorazione

Primary neurogenesis is a dynamic and complex process during embryonic development that sets up the initial layout of the central nervous system. During ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer di cellule di Schwann nel nervo sciatico roditori da elettroporazione

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

Elettroporazione in utero approcci per studiare l&#39;eccitabilità neuronale sottopopolazioni e connettività single-cell

The nervous system is composed of an enormous range of distinct neuronal types. These neuronal subpopulations are characterized by, among other features, ...