Name: generation of hook ischemia-reperfusion model using a three-day developing chick embryo
Uploaded: 2022-02-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Hook Ischemia-Reperfusion Model using a Three-Day Developing Chick Embryo at JoVE.com

ビデオ撮影と編集中の彼の批判的なインプットに対するハリ・シャンカール、ナレーションのためのバケル・フセイン氏、ビデオ編集のためのアスガル・リズヴィ氏、ビデオ撮影のためのモハマド・ハイダー氏、実験中の支援のためのモハマド・デンマーク・シディキ氏に感謝したいと思います。

Eraのラクナウ医科大学と病院の制度的動物倫理委員会は、動物実験の管理と監督を目的とした委員会(CPCSEA)に従ってこれらの実験を行うための正式な承認は必要ないという書面による免除を発行しました。しかし、胚性苦痛の可能性を最小限に抑えるために、標準的な操作手順に従った。
1. バッファ調製(表1)
<ol><li>リンガーのソリューションを準備する<ol>
...

<ol>
	<li>Fauzia, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+Embryo:+A+Preclinical+Model+for+Understanding+Ischemia-Reperfusion+Mechanism.">Chick Embryo: A Preclinical Model for Understanding Ischemia-Reperfusion Mechanism.</a> Frontiers in Pharmacology. 21 (9), 1034 (2018).</li><li>Eltzschig, H. K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia+and+reperfusion--from+mechanism+to+translation.">Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation.</a> Nature Medicine. 17 (11), 1391-1401 (2011).</li><li>Raza, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+naringenin+is+mediated+through+suppression+of+NF-&#954;B+signaling+pathway+in+experimental+stroke.">Neuroprotective effect of naringenin is mediated through suppression of NF-&#954;B signaling pathway in experimental stroke.</a> Neuroscience. 29 (230), 157-171 (2013).</li><li>Raza, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hesperidin+ameliorates+functional+and+histological+outcome+and+reduces+neuroinflammation+in+experimental+stroke.">Hesperidin ameliorates functional and histological outcome and reduces neuroinflammation in experimental stroke.</a> Brain Research. 28 (1420), 93-105 (2011).</li><li>Raza, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silymarin+protects+neurons+from+oxidative+stress+associated+damages+in+focal+cerebral+ischemia:+a+behavioral,+biochemical+and+immunohistological+study+in+Wistar+rats.">Silymarin protects neurons from oxidative stress associated damages in focal cerebral ischemia: a behavioral, biochemical and immunohistological study in Wistar rats.</a> Journal of the Neurological Sciences. 15 (1-2), 45-54 (2011).</li><li>Fan, L., Zhou, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AG490+protects+cerebral+ischemia/reperfusion+injury+via+inhibiting+the+JAK2/3+signaling+pathway.">AG490 protects cerebral ischemia/reperfusion injury via inhibiting the JAK2/3 signaling pathway.</a> Brain and Behavior. 11 (1), 01911 (2021).</li><li>Wu, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Mechanistic+Concepts+in+Ischemia+and+Reperfusion+Injury.">Current Mechanistic Concepts in Ischemia and Reperfusion Injury.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 46 (4), 1650-1667 (2018).</li><li>Collard, C. D., Gelman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology,+clinical+manifestations,+and+prevention+of+ischemia-reperfusion+injury.">Pathophysiology, clinical manifestations, and prevention of ischemia-reperfusion injury.</a> Anesthesiology. 94 (6), 1133-1138 (2001).</li><li>Allen, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+as+in+vitro+models+for+drug+screening+and+toxicity+studies.">Cell lines as in vitro models for drug screening and toxicity studies.</a> Drug Development and Industrial Pharmacy. 31 (8), 757-768 (2005).</li><li>Schmeer, C., Gamez, A., Tausch, S., Witte, O. W., Isenmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+modulate+heat+shock+protein+expression+and+enhance+retinal+ganglion+cell+survival+after+transient+retinal+ischemia/reperfusion+in+vivo.">Statins modulate heat shock protein expression and enhance retinal ganglion cell survival after transient retinal ischemia/reperfusion in vivo.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 49 (11), 4971-4981 (2008).</li><li>Huang, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+and+meta-analysis+of+acupuncture+for+improving+learning+and+memory+ability+in+animals.">A systematic review and meta-analysis of acupuncture for improving learning and memory ability in animals.</a> BMC Complementary and Alternative Medicine. 16 (1), 297 (2016).</li><li>Sommer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+stroke:+Experimental+models+and+reality.">Ischemic stroke: Experimental models and reality.</a> Acta Neuropathologica. 133 (2), 245-261 (2017).</li><li>Yang, W., Chen, J., Meng, Y., Chen, Z., Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+targets+for+treating+ischemia-reperfusion+injury+in+the+liver.">Novel targets for treating ischemia-reperfusion injury in the liver.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), 1302 (2018).</li><li>Seabra, R., Bhogal, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+research+using+early+life+stage+models.">In vivo research using early life stage models.</a> In Vivo. 24 (4), 457-462 (2010).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+peptide+alleviates+oxidative+stress+and+NLRP3+inflammasome+activation+after+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+by+regulating+AMPK/GSK-3beta.">Adiponectin peptide alleviates oxidative stress and NLRP3 inflammasome activation after cerebral ischemia-reperfusion injury by regulating AMPK/GSK-3beta.</a> Experiments in Neurology. 329, 113302 (2020).</li><li>Aboutaleb, N., Jamali, H., Abolhasani, M., Pazoki Toroudi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lavender+oil+(Lavandula+angustifolia)+attenuates+renal+ischemia/reperfusion+injury+in+rats+through+suppression+of+inflammation,+oxidative+stress+and+apoptosis.">Lavender oil (Lavandula angustifolia) attenuates renal ischemia/reperfusion injury in rats through suppression of inflammation, oxidative stress and apoptosis.</a> Biomedicine and Pharmacotherapy. 110, 9-19 (2019).</li><li>Wallert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alpha-Tocopherol+preserves+cardiac+function+by+reducing+oxidative+stress+and+inflammation+in+ischemia/reperfusion+injury.">alpha-Tocopherol preserves cardiac function by reducing oxidative stress and inflammation in ischemia/reperfusion injury.</a> Redox Biology. 26, 101292 (2019).</li><li>Ashafaq, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catechin+hydrate+ameliorates+redox+imbalance+and+limits+inflammatory+response+in+focal+cerebral+ischemia.">Catechin hydrate ameliorates redox imbalance and limits inflammatory response in focal cerebral ischemia.</a> Neurochemical Research. 37 (8), 1747-1760 (2012).</li><li>Gallagher, S., Chakavarti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoblot+analysis.">Immunoblot analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. 20 (16), 759 (2008).</li><li>Abt, M. A., Grek, C. L., Ghatnekar, G. S., Yeh, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+lung+metastasis+in+mouse+mammary+tumor+models+by+quantitative+real-time+PCR.">Evaluation of lung metastasis in mouse mammary tumor models by quantitative real-time PCR.</a> Journal of Visualized Experiments. (107), e53329 (2016).</li><li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agarose+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+DNA+fragments.">Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.</a> Journal of Visualized Experiments. (62), e3923 (2012).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathelicidin+aggravates+myocardial+ischemia/reperfusion+injury+via+activating+TLR4+signaling+and+P2X(7)R/NLRP3+inflammasome.">Cathelicidin aggravates myocardial ischemia/reperfusion injury via activating TLR4 signaling and P2X(7)R/NLRP3 inflammasome.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 139, 75 (2020).</li><li>Franke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+NLRP3+inflammasome+drives+inflammation+in+ischemia/reperfusion+injury+after+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">The NLRP3 inflammasome drives inflammation in ischemia/reperfusion injury after transient middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Behaviour and Immunity. 92, 223 (2021).</li><li>Lawrence, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nuclear+factor+NF-kappaB+pathway+in+inflammation.">The nuclear factor NF-kappaB pathway in inflammation.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 1 (6), 001651 (2009).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pterostilbene+attenuates+astrocytic+inflammation+and+neuronal+oxidative+injury+after+ischemia-reperfusion+by+inhibiting+NF-kappaB+phosphorylation.">Pterostilbene attenuates astrocytic inflammation and neuronal oxidative injury after ischemia-reperfusion by inhibiting NF-kappaB phosphorylation.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2408 (2009).</li><li>Prakash, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sivelestat-loaded+nanostructured+lipid+carriers+modulate+oxidative+and+inflammatory+stress+in+human+dental+pulp+and+mesenchymal+stem+cells+subjected+to+oxygen-glucose+deprivation.">Sivelestat-loaded nanostructured lipid carriers modulate oxidative and inflammatory stress in human dental pulp and mesenchymal stem cells subjected to oxygen-glucose deprivation.</a> Materials Science and Engineering: C Materials for Biological Applications. 120, 111700 (2021).</li><li>Prakash, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+enhances+autophagy+in+stem+cells+through+Erk1/2+signaling+pathway+-+implications+for+neurotransplantations.">Oxidative stress enhances autophagy in stem cells through Erk1/2 signaling pathway - implications for neurotransplantations.</a> Stem Cell Reviews and Reports. , (2021).</li><li>Ahmad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gelatin-coated+polycaprolactone+nanoparticle-mediated+naringenin+delivery+rescue+human+mesenchymal+stem+cells+from+oxygen+glucose+deprivation-induced+inflammatory+stress.">Gelatin-coated polycaprolactone nanoparticle-mediated naringenin delivery rescue human mesenchymal stem cells from oxygen glucose deprivation-induced inflammatory stress.</a> ACS Biomaterials Science and Engineering. 5 (2), 683-695 (2019).</li><li>Guan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuroprotective+effects+of+carvacrol+on+ischemia/reperfusion-induced+hippocampal+neuronal+impairment+by+ferroptosis+mitigation.">The neuroprotective effects of carvacrol on ischemia/reperfusion-induced hippocampal neuronal impairment by ferroptosis mitigation.</a> Life Science. 235, 116795 (2019).</li><li>Jin, Z., Guo, P., Li, X., Ke, J., Wang, Y., Wu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+irisin+against+cerebral+ischemia/+reperfusion+injury+via+Notch+signaling+pathway.">Neuroprotective effects of irisin against cerebral ischemia/ reperfusion injury via Notch signaling pathway.</a> Biomedicine and Pharmacotherapy. 120, 109452 (2019).</li><li>Wainrach, S., Sotelo, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+microscope+study+of+the+developing+chick+embryo+heart.">Electron microscope study of the developing chick embryo heart.</a> Zeitschrift fur Zellforschung und mikroskopische Anatomie. 55, 622-634 (1961).</li><li>Joshi, V. C., Wilson, A. C., Wakil, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assay+for+the+terminal+enzyme+of+the+stearoyl+coenzyme+A+desaturase+system+using+microsomes.">Assay for the terminal enzyme of the stearoyl coenzyme A desaturase system using microsomes.</a> Journal of Lipid Research. 18 (1), 32-36 (1977).</li><li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research.">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Development Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li><li>Mann, R. A., Moore, K. L., Persaud, T. V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+in+the+u~e+of+the+early+chick+embryo+88+a+teratological+model.">Limitations in the u~e of the early chick embryo 88 a teratological model.</a> Teratology. 7, 22-23 (1973).</li><li>Chen, T., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+models+of+ischemia-reperfusion+injury.">In vitro models of ischemia-reperfusion injury.</a> Regenerative English and Translation Medicine. 4 (3), 142-153 (2018).</li><li>Ma, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+cerebral+ischemia:+A+review.">Animal models of cerebral ischemia: A review.</a> Biomedicine and Pharmacotherapy. 131, 110686 (2020).</li><li>Bromage, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+ischaemic+conditioning+reduces+infarct+size+in+animal+in+vivo+models+of+ischaemia-reperfusion+injury:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Remote ischaemic conditioning reduces infarct size in animal in vivo models of ischaemia-reperfusion injury: a systematic review and meta-analysis.</a> Cardiovascular Research. 113 (3), 288-297 (2017).</li><li>Kalogeris, T., Baines, C. P., Krenz, M., Korthuis, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+ischemia/reperfusion+injury.">Cell biology of ischemia/reperfusion injury.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. 298, 229-317 (2012).</li><li>Hogers, B., DeRuiter, M. C., Baasten, A. M., Gittenberger-de Groot , A. C., Poelmann, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracardiac+blood+flow+patterns+related+to+the+yolk+sac+circulation+of+the+chick+embryo.">Intracardiac blood flow patterns related to the yolk sac circulation of the chick embryo.</a> Circ Res. 76 (5), 871-877 (1995).</li><li>Rezzola, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=angiogenesis-inflammation+cross+talk+in+diabetic+retinopathy:+novel+insights+from+the+chick+embryo+chorioallantoic+membrane/human+vitreous+platform.">angiogenesis-inflammation cross talk in diabetic retinopathy: novel insights from the chick embryo chorioallantoic membrane/human vitreous platform.</a> Frontiers in Immunology. 11, 581288 (2020).</li></ol>

虚血再灌流研究の目的は、細胞死を予防し、回復を促進する治療戦略を作成することです29,30.I/R研究における現在の制約を克服するために、我々は信頼性の高い、再生可能なI/Rモデルを作り出すためにフックI/Rのひよこ胚モデルを設計した。私たちの知る限りでは、私たちの知る限りでは、ストレス信号(酸化ストレスや炎症ストレスなど)を研究す...

虚血再灌流組織損傷は、心臓発作、虚血性脳卒中、外傷、および末梢血管疾患を含む多くの病理に関連している1、2、3、4,5。これは主に、疾患の進行に関する包括的な理解の欠如と効果的な研究モデルの欠如によるものです。虚血性損傷は、組織の特定の領域への血液供給が遮断されたときに起こる。その結果、虚血性組織は最終的に壊死するが、速度は組織によって異なる。したがって、血液供給を回復することは、損傷を軽減するのに役立つ可能性があります。しかし、再灌流は虚血単独で6,7,8よりも多くの組織損傷を引き起こすことが観察されている。したがって、効果的な治療介入を開発するためには、虚血再灌流の分子および細胞機構を理解することが必要である。現在、I/R傷害に対する有効な治療法は知られていない。この格差により、in vitroからin vivoモデルに至るまで、既存の問題9,10,11,12,13に対処するための新しい実験モデルが作成されました。
ひよこ胚(ガルス・ガルス・ドメスティックス)は、アクセスの容易さ、倫理的受容性、比較的大きなサイズ(他の胚と比較して)、低コスト、および急速な成長のために研究に広く使用されています14。72時間の発達でひよこ胚を使用して、脊髄の助けを借りて右ビテリン動脈を閉塞して放出することで、ovo I/Rの中に胚を作り出しました。フックI/R虚血再灌流モデルと命名しました(図1)。本研究で利用されたモデルは、I/R損傷15,16,17に頻繁に関連する酸化および炎症経路を含むすべての下流プロセスを正確にシミュレートすることができる。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>(-80&#176;C) freezer</td>
			<td>Haier, China</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5mL Centrifuge tube</td>
			<td>TARSONS, India</td>
			<td>500010X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100mm Petri dish (sterile)</td>
			<td>Tarsons, India</td>
			<td>460050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G Needle (18G&#215;1.5 (1.25&#215;38mm)</td>
			<td>Ramsons, India</td>
			<td>13990</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>DISPO VAN</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G Needle (26G&#215;1/2 (10.45x13mm)</td>
			<td>DISPO VAN, india</td>
			<td>30722D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37&#176;C egg incubator with adjustable percentage humidity</td>
			<td>Gentek, India</td>
			<td>GL-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37&#176;C laboratory incubator</td>
			<td>SCIENCE TECH, India</td>
			<td>CB 101-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Methyladenine (3-MA)</td>
			<td>Sigma Aldrich, USA</td>
			<td>M9281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3mL Pasture Pipette</td>
			<td>TARSONS, India</td>
			<td>940050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50mL Beaker</td>
			<td>TARSONS, India</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5mL Syringe</td>
			<td>DISPO VAN, India</td>
			<td>IP53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Merck Millipore, United States</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive tape/Cello tape</td>
			<td>Sunrise, India</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ambra1 primers</td>
			<td>Applied Biosystems, Foster city, USA</td>
			<td>Hs00387943_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse IgG</td>
			<td>Cell Signaling Technology, USA</td>
			<td>7076S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Jackson Immuno Research Laboratories, USA</td>
			<td>711-035-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atg7</td>
			<td>R&#38;D Systems, USA</td>
			<td>MAB6608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atg7 primers</td>
			<td>Applied Biosystems, Foster city, USA</td>
			<td>Hs00893766_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave Bag</td>
			<td>Tarsons, India</td>
			<td>550022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave Machine</td>
			<td>Local made, Lucknow, India</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beclin-1</td>
			<td>Proteintech, USA</td>
			<td>66665-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta Actin</td>
			<td>ImmunoTag, USA</td>
			<td>ITT07018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Himedia, Mumbai, India</td>
			<td>TC194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Himedia, Mumbai, India</td>
			<td>GRM534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Catalase</td>
			<td>ImmunoTag, USA</td>
			<td>ITT5155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cleaning wipes</td>
			<td>Kimberly-Clark, India</td>
			<td>370080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cleaved Caspase3</td>
			<td>ImmunoTag, USA</td>
			<td>ITT07022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>di-Sodium hydrogen phosphate heptahydrate</td>
			<td>Himedia, Mumbai, India</td>
			<td>GRM39611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doppler blood flowmeter</td>
			<td>Moors instrument, United Kingdom</td>
			<td>moorVMS-LDF1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg rack</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg rack</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAPDH</td>
			<td>ImmunoTag, USA</td>
			<td>M1000110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAPDH primers</td>
			<td>Applied Biosystems, Foster city, USA</td>
			<td>Hs02758991_g1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Himedia, Mumbai, India</td>
			<td>MB013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kidney tray</td>
			<td>HOSPITO</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3A/B</td>
			<td>Cell Signaling Technology, USA</td>
			<td>4108S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Rankem laboratories, Mumbai, India</td>
			<td>M0252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Narishige, Japan</td>
			<td>M-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl-L-cysteine (NAC)</td>
			<td>Sigma Aldrich, USA</td>
			<td>A7250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Sigma Aldrich, USA</td>
			<td>67604-48-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NF-k&#946;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>51-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NLRP3</td>
			<td>ImmunoTag, USA</td>
			<td>ITT07438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nose plier</td>
			<td>Local made, Lucknow, India</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular forceps</td>
			<td>Stoelting, Germany</td>
			<td>52106-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular iris</td>
			<td>Tufft Surgical Instruments, Jaipur, India</td>
			<td>Hard Age Vannas Micro Scissors Angled 8CM / 3 1/8&#34;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OHP marker pen</td>
			<td>Camlin, India</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORP-150</td>
			<td>ImmunoTag, USA</td>
			<td>ITT08329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pointed sharp edge scissor</td>
			<td>Stoelting, Germany</td>
			<td>52132-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Himedia, Mumbai, India</td>
			<td>MB043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>Himedia, Mumbai, India</td>
			<td>MB050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor</td>
			<td>Abcam, United States</td>
			<td>Ab65621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOD-1</td>
			<td>ImmunoTag, USA</td>
			<td>ITT4364</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific, Mumbai, India</td>
			<td>27605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulphate</td>
			<td>Himedia, Mumbai, India</td>
			<td>GRM886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle 25GA; 3.50 IN (90.51 X 90mm)</td>
			<td>Ramson, India</td>
			<td>GS-2029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Zoom surgical microscope</td>
			<td>Olympus, Japan</td>
			<td>SZ2-STU3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe discarder</td>
			<td>BIOHAZARD</td>
			<td>882210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed forceps</td>
			<td>Stoelting, Germany</td>
			<td>52102-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>G Biosciences, United States</td>
			<td>RC1217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Hydrochloric Acid</td>
			<td>Himedia, Mumbai, India</td>
			<td>MB030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>G Biosciences, United States</td>
			<td>RC1227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White Leghorn Chicken 0-day eggs</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK</td>
			<td>MP Biomedicals, LLC, USA</td>
			<td>FK009</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of hook ischemia-reperfusion model using a three-day developing chick embryo

心筋梗塞、脳卒中、末梢血管疾患などの虚血および再灌流(I/R)障害は、病気や死亡の主要な原因の一部です。イン ビトロ および インビボ モデルの多くは、現在、疾患または損傷した組織におけるI/Rメカニズムを研究するために利用可能です。しかし、現在までに 、ovo I/Rモデルには報告されておらず、I/Rメカニズムのより良い理解と薬物スクリーニングの迅速化を可能にする。この論文では、3日間のひよこ胚に脊髄をカスタマイズしたフックを用いてI/Rの発達と治療メカニズムを理解するI/Rモデリングについて説明する。このモデルは、DNA、RNA、およびタンパク質レベルの異常を調査するために使用できます。この方法は、簡単で、迅速で、安価です。現在のモデルは、独立して、または既存 のin vitro および in vivo I/Rモデルと組み合わせて使用することができます。

ドップラー血流イメージング技術は、当社のモデルの有効性を評価するために使用されました。つまり、コントロールグループのデータと RVA グループのデータを比較して、作成の成功を判断しました。 図4Aは 、制御動物に関連する代表的なフラックスを示し、 図4B はRVAから得られた結果を示している。数値 1 から 8 は、I/R フェーズに関連付け?...

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Generation of Hook Ischemia-Reperfusion Model using a Three-Day Developing Chick Embryo

本論文では、I/Rの発達と治療をよりよく理解するために、脊髄カスタマイズフックを用いた3日間のひよこ胚における虚血再灌流(I/R)モデリングについて述べている。このモデルは、シンプルで迅速で、安価です。

3日間発生した雛胚を用いたフック虚血再灌流モデルの生成

Ischemia and reperfusion (I/R) disorders, such as myocardial infarction, stroke, and peripheral vascular disease, are a few of the leading causes of ...

こんにちは、私はインドのラクナウにあるエラ大学キャンパスのバイオテクノロジー学科にある幹細胞修復神経学研究所の主任研究者であるSyed Shadab Raza博士です。私の研究室では、虚血再灌流障害の根底にある病態生理学的メカニズムと、その過程を逆転させる介入を理解するよう努めています。この文脈では、虚血性脳卒中のインビトロおよびインビボモデルを頻繁に採用する。最近、3日間でひよこ胚を発症する虚血再灌流傷害モデルを作成しました。だから今、私の学生は、ひよこ胚を開発する3日間で虚血再灌流傷害を複製する方法を紹介するつもりです。今、私たちは3日間のひよこ胚で虚血再灌流を作成する方法を紹介するつもりです。当社のモデルは、費用対効果が高く、時間効果が高く、非常に再現性が高い。それでは、始めましょう。1日目。初日の要件。プロシージャ。ティッシュペーパーワイプを使用して70%エタノールでゼロデーエッグをきれいにします。次に、OHPマーカー付きの卵に現在の日、日付を書き、摂氏36〜37度の温度と湿度60〜65%の卵インキュベーターに卵を入れます。次の24時間卵をインキュベートします。2日目。2 日目の要件。プロシージャ。手術用はさみを70%エタノールで拭くか、オートクレーブを続ける。24時間のインキュベーションの後、卵をインキュベーターから取り出して重ねます。次に、セロテープの小片を卵の端に約1インチの長さと幅に取り付け、鋭利な尖ったエッジハサミを使用して卵殻の端に小さな穴を開け、その後、約75度の角度で5 mLシリンジを挿入します。卵黄袋に針を挿入した後、ゆっくりとアルブミンの5〜6 mLを引き出します。アルブミンを取り外した後、セロテープで穴を再シールし、次の48時間、37度の摂氏卵インキュベーターに卵を戻します。4日目。4日目の要件。プロシージャ。リンガーの溶液、0.9%正常生理食塩水、1つのXリン酸緩衝液生理食塩水を、この原稿に記載されている表に従って準備します。その後、3つのソリューションをオートクレーブします。オートクレーブの後、それぞれの溶液は室温で置かれてもよい。次に、37度の卵インキュベーターから卵を取り出します。シェルを切断する前に、Sellotapeで窓の領域をカバーします。そして今、卵の殻に小さな穴を作り、円形の開口部を切断し始めます。このプロセスはウィンドウと呼ばれます。卵の位置を胚の位置に合わせて調整する必要があるため、胚が任意の方向から容易にアクセスできるように、円形カットが十分に大きかっていることを確認してください。さて、ステレオズーム手術顕微鏡を使用して、右のバイタルライン動脈またはRVAを見つける。ここでは、矢印は胚の3日間の発達段階を示す。RVAが配置されると、26 G針を使用して、RVAの左右に2つの小さな穴を作ります。次に、ドップラー血流イメージングプローブをRVAに調整します。ドップラー血流イメージングプローブは、虚血部位から5プラスマイナス1ミリメートル、RVAの遠位端の3分の2を配置する必要があります。必要に応じて、30秒から2分間のフラックス読み取りを行います。これはノルモキシア相の読み取りを行います。今手動で手動で歯の鉗子に続く鼻のペンチの助けを借りてフックの形を与えるために脊髄の端を成形します。さて、マイクロマニピュレーターを使用して、右のバイタルライン動脈のすぐ下に脊髄針を挿入する。あなたは、脊髄針を持ち上げる準備ができています。今、マイクロマニピュレータの助けを借りて、ドップラー血流フラックスが動脈流量の最低80%の減少を示すまで、ゆっくりと動脈を持ち上げる。ドップラーフラックスで80%以上のドロップダウンが達成されたら、脊髄針を上に持ち上げ、動脈を5分間引っ張ります。これは虚血の期間になります。5分のこの虚血タイミングの後、正常な血流レベルを回復させるためにマイクロマニピュレーターの助けを借りてゆっくりと動脈を解放する。今、ドップラー血流メーターは、ノルモキシア中に観察されたものと同様の測定値を示す必要があります。これはRVAの再灌流の期間になります。I/Rプロセス後、胚に2滴、3滴の1XPBSを塗布する。最後にセロテープで窓を再シールし、卵を卵インキュベーターに5時間55分間戻します。5時間55分後、卵インキュベーターから卵を取り出し、卵トレイに置き、窓を開け直します。治療要件。プロシージャ。薬物、活性化剤または阻害剤による動脈の治療のために、RVAはI/ Rプロセスの1時間後に切除されるべきである。胚をシェルから無菌100 mmペトリ皿に取り出して取り除きます。胚がペトリ皿で放出されたら、ステレオズーム手術顕微鏡の指導に眼虹彩を使用してRVAを切除する。RVA の切除寸法は、トランクから 15 + マイナス 1 ミリメートル、トランクに向かって 2 プラスマイナス 1 ミリメートルにする必要があります。RVAを切除した後、新しい滅菌ペトリ皿で1X PBSで洗浄します。所望の処置のために、リンガーの溶液の500マイクロリットルで満たされた殺菌された1.5ミリリットル遠心管に動脈を入れる。遠心分離管に動脈を入れた後、37度の摂氏検査室のインキュベーターに5時間入れる。5時間のインキュベーションの後、37°Cの実験室のインキュベーターからRVAを取り出し、所望の処置のために進む。そして今、結果を提示する。虚血性動脈における虚血再灌流研究におけるモデルの有用性を検証するために、まず酸素調節タンパク質150またはORP150、細胞質スーパーオキシドジスムターゼ1またはSOD1およびカタラーゼの活動を調えた。I/R処理RVAは、対照群と比較するとORP150、細胞質SOD1およびカタラーゼの活性が増加したが、現在の図で明らかなように、N-アセチル-L-システイン、またはNAC、ROSクエンチャー、I/R群の酸化ストレスの減少を補った。炎症調査のためにこのモデルの有用性を確立するために、I/R処理RVA対対照RVAにおけるI/R-1ベータおよびTNF-αの発現を調べた。インターロイキンはいずれも対照群と比較してフックI/R群で過剰発現していることが判明した。抗炎症薬であるナリンゲンの補充は、Il1-βとTNF-αのレベルを有意に低下させた。次に、ウェスタンブロッティングを介したNLRP3およびNF-κベータの発現を調べた。この分析は、RVAで産生されたI/Rに応答して、NLRP3インフラマソームの活性化の証拠と、NF-κベータの証拠を発見した。以前の結果と同様に、ナリンゲンはNLRP3およびNF-κベータの発現を減少させた。これらの結果は、我々のモデルが炎症変化を調査するために使用できることを実証した。次に、アポトーシスおよびオートファジー経路に対するI/Rの効果を検討した。まず、図Aでは、切断カスパーゼ-3の式にアクセスしました。コントロール群と比較してI/R群における切断カスパーゼ-3の発現が増強され、ZVADFMKを受けているI/R群はカスパーゼ-3の発現の減少を示した。オートファジーの場合も同様に、I/R群はLC3の高いタンパク質レベルを示し、哺乳類細胞におけるオートファジーの主要な調節因子であるオートファゴソームマーカーBeclin-1、およびATG-7は、対照群よりも基底オートファジーに必要なタンパク質であり、オートファジー阻害剤である3-maを受けているグループは、上記の3つのオートファジー阻害剤の発現の減少を示した。 図BからD.までの明らかなように図Eは、アンブラ-1およびATG-7 mRNAレベルに対するフック媒介I/Rの効果を示している。これらの結果は、以前の結果と一致した、すなわち、I/R処理されたRVAにおけるアンブラ-1およびATG-7に対するmRNA発現の増強が、それぞれの対照と比較して観察された。しかし、I/Rグループに3-maを追加すると結果が逆転した。現在の図は、DNAの変化を研究するためのモデルの有効性を表しています。コントロール群と比較して、I/R処理群に強いDNA塗抹標本を観察した。しかし、I/R RVAグループへのNACの補充は結果を逆転させた。他のモデルと比べてモデルの効果を調べるには、今回の実験でフックI/RモデルとMCAOモデルで生成したデータを比較しました。簡単に言えば、アポトーシスタンパク質の発現は、切断カスパーゼ-3、オートファジータンパク質、ベクリン-1およびATG-7、および炎症性インターロイキン、TNFおよびIFNにおいて、コントロールRVAよりも高くなるはずだった。興味深いことに、Hook-I/Rモデルは、炎症性ストレスや細胞死経路の分析であったかどうかにかかわらず、MCAOモデルによって得られたものと非常によく似た結果を得た。我々のモデルは、既存のモデルに単独または平行のいずれかのルーチン虚血再灌流実験に使用することができます。しかし、虚血再灌流を模倣する際には、RVAの左右の穴を開ける際、また、動脈や静脈を損傷しないようにRVAを閉塞または放出する際に、最も高い予防措置を講じるべきである。ウエスタンブロッティング、QRT-PCR分析装置、化学酸、イメージング技術などの日常的な分子生物学では、3日間で核血症再灌流に関連する病態生理学を関連付けるために即興でひよこ胚を発症する可能性があります。このモデルは、DNA、RNA、タンパク質レベルで分子力学を効率的に研究するために使用できます。私たちが示したように、ひよこ胚を開発する3日間のI/Rモデリングは、私たちのモデルがI / R研究の分野で新しい道を開くと信じています。この作品で、私はあなたの実験のためにあなたにすべてのベストを願っています。ありがとうございました。

Research

JoVE Journal

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Utero-tubal Embryo Transfer and Vasectomy in the Mouse Model

マウスモデルにおける子宮卵管胚移植と精管切除

The transfer of preimplantation embryos to a surrogate female is a required step for the production of genetically modified mice or to study the effects ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

における虚血/再灌流のための無酸素飢餓モデル<em&gt; C.虫</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...