Name: spatiotemporal subcellular manipulation of the microtubule cytoskeleton in the living preimplantation mouse embryo using photostatins
Uploaded: 2021-11-30T15:00:00
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著者らは、原稿作成に関するフォトスタチンとアドバイスを提供してくれたOliver Thorn-Seshold博士とLi Gao博士、撮影支援のためのMonash Production、顕微鏡検査支援のためのMonash Micro Imaging に感謝します。
この研究は、J.Z.への国家保健医療研究評議会(NHMRC)プロジェクト助成金APP2002507とJ.Z.へのカナダ高等研究所(CIFAR)アズリエリ奨学金によって支援されました。オーストラリア再生医療研究所は、ビクトリア州政府とオーストラリア政府からの助成金によって支援されています。

実験は、モナッシュ動物倫理委員会によって動物倫理番号19143の下で承認された。動物は、動物施設(モナッシュ動物研究プラットフォーム)の特定の病原体のない動物ハウス条件で、倫理ガイドラインに厳密に従って飼育された。
1. 着床前マウス胚採取
<ol><li>スーパー排卵および交配マウスは、先に記載したように16、<sup class="xref"...

<ol>
	<li>Hawdon, A., Aberkane, A., Zenker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubule-dependent+subcellular+organisation+of+pluripotent+cells.">Microtubule-dependent subcellular organisation of pluripotent cells.</a> Development. 148 (20), (2021).</li><li>Sanchez, A. D., Feldman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtubule-organizing+centers:+from+the+centrosome+to+non-centrosomal+sites.">Microtubule-organizing centers: from the centrosome to non-centrosomal sites.</a> Current Opinion in Cell Biology. 44, 93-101 (2017).</li><li>Galli, M., Morgan, D. 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M., Gerrard, E. J., Legrand, J. M. D., Hobbs, R. M., Janovjak, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+strategy+and+vector+library+for+the+rapid+generation+of+modular+light-controlled+protein-protein+interactions.">Engineering strategy and vector library for the rapid generation of modular light-controlled protein-protein interactions.</a> Journal of Molecular Biology. 431 (17), 3046-3055 (2019).</li><li>van Haren, J., Adachi, L. S., Wittmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+control+of+microtubule+dynamics.">Optogenetic control of microtubule dynamics.</a> Methods in Molecular Biology. 2101, 211-234 (2020).</li><li>Adikes, R. C., Hallett, R. A., Saway, B. F., Kuhlman, B., Slep, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+microtubule+dynamics+using+an+optogenetic+microtubule+plus+end-F-actin+cross-linker.">Control of microtubule dynamics using an optogenetic microtubule plus end-F-actin cross-linker.</a> Journal of Cell Biology. 217 (2), 779-793 (2018).</li><li>Kogler, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extremely+rapid+and+reversible+optogenetic+perturbation+of+nuclear+proteins+in+living+embryos.">Extremely rapid and reversible optogenetic perturbation of nuclear proteins in living embryos.</a> Developmental Cell. 56 (16), 2348-2363 (2021).</li><li>Maghelli, N., Tolic-Norrelykke, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+ablation+of+the+microtubule+cytoskeleton:+setting+up+and+working+with+an+ablation+system.">Laser ablation of the microtubule cytoskeleton: setting up and working with an ablation system.</a> Methods in Molecular Biology. 777, 261-271 (2011).</li><li>Bukhari, S. N. A., Kumar, G. B., Revankar, H. M., Qin, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+combretastatins+as+potent+tubulin+polymerization+inhibitors.">Development of combretastatins as potent tubulin polymerization inhibitors.</a> Bioorganic Chemistry. 72, 130-147 (2017).</li><li>Gilazieva, Z., Ponomarev, A., Rutland, C., Rizvanov, A., Solovyeva, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promising+applications+of+tumor+spheroids+and+organoids+for+personalized+medicine.">Promising applications of tumor spheroids and organoids for personalized medicine.</a> Cancers (Basel). 12 (10), 2727 (2020).</li><li>Scherer, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+and+uptake+of+the+anticancer+drug+combretastatin+in+cell+spheroids+and+photoisomerization+in+gels+with+multiphoton+excitation.">Three-dimensional imaging and uptake of the anticancer drug combretastatin in cell spheroids and photoisomerization in gels with multiphoton excitation.</a> Journal of Biomedical Optics. 20 (7), 78003 (2015).</li></ol>

微小管ネットワークは、細胞の基本的な内部動作に不可欠です。その結果、ネットワークへのいかなる摂動も細胞機能のあらゆる側面に広範な結果をもたらす傾向があるため、これは生物における微小管ダイナミクスを操作する上で課題を提示する。光スイッチ可能な微小管標的化合物の出現は、微小管増殖阻害の誘導および逆転に対する優れた制御を用いて、細胞内レベルで細胞骨格を正?...

微小管アーキテクチャは、多様な機能をサポートするために、異なる細胞タイプ間で大きく異なる1,2。成長と収縮のそのダイナミックな性質は、細胞外および細胞内の手がかりへの迅速な適応を可能にし、細胞の絶え間なく変化するニーズに応えることを可能にする。したがって、それは細胞の同一性において重要な役割を果たす「形態学的指紋」と考えることができる。
小分子阻害剤を用いた微小管細胞骨格の薬理学的標的化は、発生生物学、幹細胞生物学、癌生物学、および神経生物学3、4、5、6、7における多数の基本的な発見をもたらしている。このアプローチは、不可欠ではありますが、毒性やオフターゲット効果など、さまざまな限界があります。例えば、最も広く使用されている微小管標的化剤の1つであるノコダゾールは、強力な微小管脱重合剤8である。しかしながら、ノコダゾールのような小分子阻害剤は、適用時から活性であり、微小管細胞骨格が多くの重要な細胞機能に必須の性質を有することを考えると、微小管のグローバルな解重合はオフターゲット効果を生じる可能性があり、これは多くの用途には適さない可能性がある。さらに、ノコダゾール処理は、サンプルを薬物なしで洗浄しない限り不可逆的であり、連続的なライブイメージング、したがって個々の微小管フィラメントの正確な追跡を妨げる。
光活性化化合物の開発は、光アンケージド分子の創製から始まり、微小管成長阻害の影響を正確かつ時空間的に制御された方法で標的化およびモニタリングする新しい時代を告げた。可逆的に光交換可能な薬物の1つのファミリーであるフォトスタチン(PST)は、コンブレタスタチンA-4のスチルベン成分をアゾベンゼン9で置き換えることによって開発された。PSTはUV光による照明まで不活性であり、それによって不活性 トランス配置は可逆的異性化によって活性 シス配置に変換される。 Cis-PSTsは、β-チューブリンのコルヒチン結合部位に結合し、β-チューブリンとの界面を遮断し、微小管増殖に必要な二量体化を防止することによって微小管重合を阻害する10。PSTのコホートの中で、PST-1Pは、最も高い効力を有し、完全に水溶性であり、照明後に生理活性の急速な発症を示すため、鉛化合物として浮上している。
PSTの最も効果的な トランスから シス異性化は、360〜420nmの波長で起こり、PST活性化のための二重オプションを可能にする。典型的な共焦点顕微鏡上の405nmレーザーラインを投与して、微小管成長阻害の最適な空間ターゲティングを行うことができる。405nmレーザー照射によるPST活性化の位置とタイミングを正確に特定する機能は、正確な時間的および空間的制御を容易にし、1秒未満の応答時間内に細胞内レベルで微小管ダイナミクスの破壊を可能にします9。あるいは、手頃な価格のLED UV光は、生物全体の照明が微小管アーキテクチャの生物全体の破壊を誘発することを可能にする。これは、空間的ターゲティングではなく、正確にタイミングを合わせた阻害の開始が目標である研究者にとって、費用対効果の高い代替手段となる可能性があります。PSTのもう1つの特徴は、510〜540nmの範囲の波長の緑色光を印加することによってオンデマンドで不活性化されることです9。これにより、PST媒介性増殖阻害の前、最中、および後の微小管フィラメントのトレースが可能になります。
PSTsは、まだ比較的最近の設計ではあるが、アメーバイド12、新生児マウス13の脳から単離されたニューロンにおける細胞遊走の新しいメカニズムの調査、ショウジョウバエメラノガスター14における翼上皮の発生の調査を含む、多様な研究分野にわたる多数のin vitroアプリケーション11で使用されてきた。.他の光反応性薬物は、細胞機能の標的破壊において貴重なツールであることが証明されている。例えば、ブレビスタチンの類似体であるアジドブレビスタチンを、照明下でのミオシン阻害の増強に使用した15、16。これは、細胞機能の時空間的に制御された阻害の能力による新しい発見の可能性を強調している。
生きた3D生物は、生理学的条件下で動物全体、単一細胞、または細胞内レベルで微小管のダイナミクスを操作するための、優れた、より繊細なシステムを提示します。特に、着床前マウス胚は、細胞の内部の働きならびに生物内の細胞間関係についての例外的な洞察を提供する17。PSTの活性化および不活性化の時間的および空間的に標的化された連続的なサイクルは、着床前マウス胚16における非中心染色体微小管組織化中心としての、細胞間の細胞間運動学的構造である相間架橋の特性評価に寄与した。同様の実験セットアップは、胚盤胞形成を可能にするためにマウス胚のシーリングにおける微小管の成長の関与を実証した18。さらに、PSTsは、後脳内の細胞のサブセットにおける微小管増殖を阻害することによって神経細胞遊走を調べるために、ゼブラフィッシュ胚全体においても使用された19。
このプロトコルは、着床前マウス胚におけるPST-1Pの実験セットアップおよび使用を記載する。ここで提示された指示はまた、染色体の分離および細胞分裂の研究、細胞内貨物の輸送、ならびに細胞の形態形成および遊走の研究など、幅広い目的のためのPSTの適用を導くことができる。さらに、このような研究は、オルガノイド系、芽球状、および Caenorhabditis elegans および Xenopus laevisなどの他の胚モデルにおけるPSTの実装を支援し、 体外 受精技術のためのPSTの使用を拡大する可能性がある。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aspirator tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5177</td>
			<td>For mouth aspiration apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber slides - LabTek</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NUN155411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cRNA encoding for EB3-dTomato</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Prepared according to manufacturers instructions using mMessage in vitro Transcription kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture dishes - 35mm</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>150560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human chorionic growth hormone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Tubal Fluid (HTF) medium</td>
			<td>Cosmo-Bio</td>
			<td>CSR-R-B071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris Image Analysis Software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion Oil W 2010</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>444969-0000-000</td>
			<td>For use with microscope immersion objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED torch - Red light</td>
			<td>Celestron</td>
			<td>93588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M2 medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice - wild-type FVB/N, males and females</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Females 8-9 weeks old. Males 2-6 months old.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcapillary Pipettes - Kimble</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z543306</td>
			<td>For mouth aspiration apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection buffer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>5 mM Tris, 5 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Origio</td>
			<td>ART-4008-5P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mMessage In vitro Transcription kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Simplex Optimised Medium (KSOM) medium</td>
			<td>Cosmo-Bio</td>
			<td>CSR-R-B074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pregnant mare serum gonadotrophin</td>
			<td>Prospec Bio</td>
			<td>HOR-272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PST-1P</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Borowiak, M. et al., Photoswitchable Inhibitors of Microtubule Dynamics Optically Control Mitosis and Cell Death. Cell. 162 (2), 403-411, doi:10.1016/j.cell.2015.06.049, (2015).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA purification kit</td>
			<td>Sangon</td>
			<td>B511361-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Black Software</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatiotemporal subcellular manipulation of the microtubule cytoskeleton in the living preimplantation mouse embryo using photostatins

微小管細胞骨格は、細胞のフレームワークを形成し、細胞内輸送、細胞分裂、およびシグナル伝達の基本である。例えば、ノコダゾールを用いたユビキタス微小管ネットワークの伝統的な薬理学的破壊は、あらゆる細胞に壊滅的な結果をもたらす可能性がある。可逆的に光交換可能な微小管阻害剤は、薬物効果を時空間的に制御された方法で実施することを可能にすることによって、限界を克服する可能性を秘めている。そのような薬物ファミリーの1つは、アゾベンゼンベースのフォトスタチン(PST)である。これらの化合物は暗所条件下では不活性であり、UV光で照明すると、β-チューブリンのコルヒチン結合部位に結合し、微小管重合および動的ターンオーバーを遮断する。ここで、3次元(3D)ライブ着床前マウス胚におけるPSTの適用は、細胞内レベルで微小管ネットワークを破壊するように設定されている。このプロトコルは、実験セットアップの手順、および生細胞共焦点顕微鏡を使用したPSTの光活性化および不活性化パラメータを提供します。これにより、再現性が確保され、他の人がこの手順を研究課題に適用できるようになります。PSTのような革新的なフォトスイッチは、動的な細胞内微小管ネットワークの理解を促進し、リアルタイムで細胞骨格を非侵襲的に操作するための強力なツールとして進化する可能性があります。さらに、PSTは、オルガノイド、ブラストイド、または他の種の胚などの他の3D構造において有用であることが証明され得る。

プロトコールに沿って、着床前マウス胚に、赤色蛍光dトマト(EB3−dTomato)でタグ付けされたEB3用のcRNAをマイクロインジェクションした。これにより、EB3が重合する微小管プラス末端24に結合するにつれて、成長する微小管の視覚化が可能になります。
実験は、マウス胚が16個の細胞からなる受精(E3)の3日後に行った。他の移植前発達段階は、調査される科...

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Spatiotemporal Subcellular Manipulation of the Microtubule Cytoskeleton in the Living Preimplantation Mouse Embryo using Photostatins

基礎研究および応用研究で広く使用されている典型的な微小管阻害剤は、細胞に広範な影響を及ぼします。最近、フォトスタチンは、微小管の瞬間的、可逆的、時空間的に正確な操作が可能な光スイッチ可能な微小管阻害剤のクラスとして登場した。この段階的なプロトコルは、3Dライブ着床前マウス胚におけるフォトスタチンの適用を詳述する。

フォトスタチンを用いた生きた着床前マウス胚における微小管細胞骨格の時空間的細胞内操作

The microtubule cytoskeleton forms the framework of a cell and is fundamental for intracellular transport, cell division, and signal transduction. ...

このプロトコルは、生きている着床前マウス胚にフォトスタチンを適用する最初のものであり、他の3D生理学的系上で光スイッチ可能な薬物を使用する用途に関して。光切り替え可能なフォトスタチンは、微小管の成長を空間と時間内で操作し、オフ状態に戻すことを可能にする。実験前に意図せずにフォトスタチンを青色光にさらすと、時期尚早に活性化される可能性があります。そのため、サンプルを準備するときは、常に完全な暗闇または赤色光の条件下で作業することをお勧めします。厳しい暗条件下では、照明に赤色光のみを使用して、超純水中でPST-1Pのストックおよび中間作業溶液を作り始めます。テキスト原稿に記載されているように。次いで、40の最終濃度を達成するように新鮮なKSOMでPST−1Pを希釈し M.To、ライブイメージング用のチャンバースライドを調製し、1つのウェルの中心に10LのPST−1P処理KSOMを加え、半球状液滴を形成した。液滴が蒸発するのを防ぐために、十分な鉱物油でそれを覆います。次いで、調製した培養皿を箔で緩く包むか、または培養皿をインキュベーター内の非気密不透明な容器に入れて、光曝露がないようにする。胚をPST-1P処理KSOM滴に移した後、胚が液滴の中央に集まっていることを確認し、皿の底に沈降させる。液浸対物レンズを準備したら、チャンバースライドを環境チャンバー内の顕微鏡に取り付けます。すべてのPST-1Pが非アクティブなトランスコンフィグレーションにあり、胚が皿の底に沈むことができるように、37°Cと5%CO2に設定し、完全な暗闇の中で設定します。赤色光トーチを使用して、対物レンズを液浸媒体に接触させるように配置します。次に、媒体の液滴の端を見つけて、その上に目標を直接配置します。ライブスキャンモードと561nmレーザーを使用して、液滴内の胚を見つけます。ステージコントローラとライブスキャンモードを使用して、胚全体のzスタックを取得するための開始点と終了点を設定します。信号に応じて、レーザー出力設定を最大5%まで調整します。また、信号に応じてデジタルオフセットを最大0.900に設定して、EB3-dTomato彗星の外観を最適化します。バックグラウンドノイズを最小限に抑えます。ピンホールを 2 m に設定します。512 x 512 のピクセル解像度。そしてピクセルの滞留時間は3.15秒です。ズームを2倍に設定します。生物全体の微小管成長の領域を評価するために、1mのセクション間隔で胚全体のzスタックを取得する。EB3-dTomato彗星追跡実験では、3D Zスタック画像を開き、ズームを3倍に増やします。そして、関心のある特定の細胞内領域の周りに長方形のROIを描画する。次に、設定されたパラメータを使用して、500msの時間間隔で、単一のz平面のタイムラプスムービーを取得します。PST-1Pをアクティブにするには、405nmレーザーに切り替えて、レーザーを10%パワーに設定し、ピンホールを最大に開き、ピクセル解像度を512×512、ピクセルドウェル時間を3.15秒、ズームを3回、500ミリ秒の時間間隔で、20フレームを取得するように設定します。活性化直後は561nmレーザーに切り替え、前述のように取得を繰り返し、PST-1Pの活性化後のEB3-dトマト彗星の損失を確認した。次に、PST-1Pを逆にして非アクティブなトランス状態に戻し、514nmレーザーを作動させ、設定されたパラメータで別のタイムラプスを集録します。EB3-dトマト彗星の回復を可視化するには、561nmレーザーに切り替えて取得を繰り返します。未処理の対照胚では、405nmレーザーによる照射前に、EB3-dTomatoシグナルは核領域を除く細胞の細胞質全体内で高かった。照明後、信号の変化は検出されなかった。405nmレーザーが胚または微小管ダイナミクスに光損傷を引き起こさなかったことを示す。16細胞期胚のPST-1P処理中、厳密な暗条件下では、強いEB3-dトマト発現が3D画像で検出され、不活性なPST-1Pが暗条件下で微小管重合の阻害を誘発しないことを実証した。PST-1Pの活性化前に、単一のz面のタイムラプスイメージングにより、強いEB3-dTomato発現、および細胞内領域での微小管重合が確認された。405nmの光活性化後、数秒以内にEB3-dTomato彗星シグナルの減少が検出された。そして、514nmレーザーを用いてPST-1Pを失活させた際に信号の回復が達成された。EB3−dTomatoをマイクロ注射した胚を、PST−1Pと共にインキュベートして、正常な胚電位を示し、胚盤胞期まで発達した。有糸分裂中の正常な微小管動態。胚に対する活性型PST-1Pの非毒性を示す。取得したタイムラプス映画では、EB3-dTomatoラベリングが彗星のような構造として現れ、成長する微小管フィラメントの追跡を可能にした。暗条件下で保たれたPST−1P処理胚において、個々のEB3−dTomato彗星は、初期マウス胚において非セントロソーム微小管組織化中心として作用する相間架橋から発せられた。tスタックは、相間架橋の領域におけるEB3-dトマト彗星を示す。PST-1Pの活性化後、EB3-dトマト彗星は相間架橋の基部とtスタックで減少した。白色光はPST-1Pを時期尚早にアクティブにする可能性があることに注意してください。したがって、視認性のために赤い光源のみを使用してください。緑色の光はPST-1Pも無効にしますので、緑色の蛍光標識マーカーの使用は避けてください。この技術は、ショウジョウバエ、アメーバ、マウス、および複数のin vitro系において、細胞移動および組織形成を研究するために微小管増殖を標的とするために使用されてきた。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

光変換後の蛍光減衰を使用して生活ゼブラフィッシュ胚におけるタンパク質の安定性の測定（FDAP）

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

発生生物学

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

胸腺の特性を用いてマウス胚における前駆細胞をセトリング<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt;インビトロ</em&gt;アッセイ

Characterizing thymic settling progenitors is important to understand the pre-thymic stages of T cell development, essential to devise strategies for T ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

ゼブラフィッシュ胚におけるマイクロビーズの移植

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

リビングゼブラフィッシュ胚における細胞内構造のイメージング

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

マウス着床前胚でリネージュの仕様を研究するためのタンパク質発現の定量分析

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

フローサイトメトリーによるマウス胚における赤血球系前駆細胞およびその子孫の同定

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

Derivation of Stem Cell Lines from Mouse Preimplantation Embryos

マウス着床前胚幹細胞の誘導

Mouse embryonic stem cell (mESC) derivation is the process by which pluripotent cell lines are established from preimplantation embryos. These lines ...

Effectiveness of the Air Stripping in Two Salmonid Fish, Rainbow Trout (Oncorhynchus Mykiss) and Brown Trout (Salmo Trutta Morpha fario)

Effectiveness of the Air Stripping in Two Salmonid Fish, Rainbow Trout Oncorhynchus Mykiss and Brown Trout Salmo Trutta Morpha fario

2 つのサケ科の魚で空気除去の有効性 (オンコルヒュンクス) レインボー ・ トラウトやブラウン ・ トラウト (タイセイヨウサケMorpha fario)

Egg collection is one of the most crucial procedures during fish reproduction in salmonid hatcheries. Classic methods involve the use of hand massage on ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

ウサギモデルにおける最適胚期における低侵襲胚移植と胚ガラス化

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

In Vitro Reconstitution of Spatial Cell Contact Patterns with Isolated Caenorhabditis elegans Embryo Blastomeres and Adhesive Polystyrene Beads

In Vitro Reconstitution of Spatial Cell Contact Patterns with Isolated Caenorhabditis elegans Embryo Blastomeres and Adhesive Polystyrene Beads

単離されたカエノラブディティス・エレガンス胚ブラストミアと接着剤ポリスチレンビーズを用いた空間細胞接触パターンのインビトロ再構成

In multicellular systems, individual cells are surrounded by the various physical and chemical cues coming from neighboring cells and the environment. ...