Name: high-speed video microscopy analysis for first-line diagnosis of primary ciliary dyskinesia
Uploaded: 2022-01-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-speed Video Microscopy Analysis for First-line Diagnosis of Primary Ciliary Dyskinesia at JoVE.com

小児科看護師のヨハンナ・ユヴァンコスキ夫人には、ブラッシングの素晴らしい助けに特別な感謝の意を表したいと思います。また、Heymut Omran教授(University Clinic Münster, UKM)が、彼らのウェブサイトから正常な毛様体運動の概略図を使用する許可を与えてくれたことに特別な感謝の意を表したいと思います。最後に、原稿の校正をしてくれたPGCEのアラン・ブラウンBA(Hons)氏に感謝します。

倫理声明:
この研究は地元の倫理委員会(69/2017)によって承認され、ヘルシンキの宣言に準拠して実施されました。
1. 呼吸器上皮細胞の採取・輸送
<ol><li>ブラッシング<ol>
<li>ブラッシングの前に、繊毛機能を妨害するバイオフィルムを根絶するために、患者に経口アモキシシリン - クラブラン酸の2週間コースを投与する。抗生物質が処置...

<ol>
	<li>Werner, C., Onnebrink, J. G., Omran, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+primary+ciliary+dyskinesia.">Diagnosis and management of primary ciliary dyskinesia.</a> Cilia. 4 (1), 2 (2015).</li><li>Mirra, V., Werner, C., Santamaria, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+ciliary+dyskinesia:+An+update+on+clinical+aspects,+genetics,+diagnosis+and+future+treatment+strategies.">Primary ciliary dyskinesia: An update on clinical aspects, genetics, diagnosis and future treatment strategies.</a> Frontiers in Pediatrics. 5, 135 (2017).</li><li>Schultz, R., Elenius, V., Lukkarinen, H., Saarela, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+novel+mutations+in+the+DNAH11+gene+in+primary+ciliary+dyskinesia+(CILD7)+with+considerable+variety+in+the+clinical+and+beating+cilia+phenotype.">Two novel mutations in the DNAH11 gene in primary ciliary dyskinesia (CILD7) with considerable variety in the clinical and beating cilia phenotype.</a> BMC Medical Genetics. 21 (1), 237 (2020).</li><li>Knowles, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+of+DNAH11+in+patients+with+primary+ciliary+dyskinesia+with+normal+ciliary+ultrastructure.">Mutations of DNAH11 in patients with primary ciliary dyskinesia with normal ciliary ultrastructure.</a> Thorax. 67 (5), 433-441 (2012).</li><li>Boon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+ciliary+dyskinesia:+critical+evaluation+of+clinical+symptoms+and+diagnosis+in+patients+with+normal+and+abnormal+ultrastructure.">Primary ciliary dyskinesia: critical evaluation of clinical symptoms and diagnosis in patients with normal and abnormal ultrastructure.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 9, 11 (2014).</li><li>Kouis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+primary+ciliary+dyskinesia+in+consecutive+referrals+of+suspected+cases+and+the+transmission+electron+microscopy+detection+rate:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Prevalence of primary ciliary dyskinesia in consecutive referrals of suspected cases and the transmission electron microscopy detection rate: a systematic review and meta-analysis.</a> Pediatric Research. 81 (3), 398-405 (2017).</li><li>Marthin, J. K., Nielsen, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choice+of+nasal+nitric+oxide+technique+as+first-line+test+for+primary+ciliary+dyskinesia.">Choice of nasal nitric oxide technique as first-line test for primary ciliary dyskinesia.</a> European Respiratory Journal. 37 (3), 559-565 (2011).</li><li>Jackson, C. L., Behan, L., Collins, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+diagnostic+testing+in+primary+ciliary+dyskinesia.">Accuracy of diagnostic testing in primary ciliary dyskinesia.</a> European Respiratory Journal. 47 (3), 837-848 (2016).</li><li>Lucas, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=European+Respiratory+Society+guidelines+for+the+diagnosis+of+primary+ciliary+dyskinesia.">European Respiratory Society guidelines for the diagnosis of primary ciliary dyskinesia.</a> European Respiratory Journal. 49 (1), 1601090 (2017).</li><li>Shoemark, A., Dell, S., Shapiro, A., Lucas, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERS+and+ATS+diagnostic+guidelines+for+primary+ciliary+dyskinesia:+similarities+and+differences+in+approach+to+diagnosis.">ERS and ATS diagnostic guidelines for primary ciliary dyskinesia: similarities and differences in approach to diagnosis.</a> European Respiratory Journal. 54 (3), 1901066 (2019).</li><li>Kouis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost-effectiveness+analysis+of+three+algorithms+for+diagnosing+primary+ciliary+dyskinesia:+a+simulation+study.">Cost-effectiveness analysis of three algorithms for diagnosing primary ciliary dyskinesia: a simulation study.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 14 (1), 142 (2019).</li><li>Rubbo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+high-speed+video+analysis+to+diagnose+primary+ciliary+dyskinesia.">Accuracy of high-speed video analysis to diagnose primary ciliary dyskinesia.</a> Chest. 155 (5), 1008-1017 (2019).</li><li>Friedman, N. R., Pachigolla, R., Deskin, R. W., Hawkins, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+technique+to+diagnose+primary+ciliary+dyskinesia.">Optimal technique to diagnose primary ciliary dyskinesia.</a> The Laryngoscope. 110 (9), 1548-1551 (2000).</li><li>Chilvers, M. A., Rutman, A., O&#180;Callaghan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+analysis+of+cilia+and+ciliated+epithelial+ultrastructure+in+healthy+children+and+young+adults.">Functional analysis of cilia and ciliated epithelial ultrastructure in healthy children and young adults.</a> Thorax. 58 (4), 333-338 (2003).</li><li>Lucas, J. S., Paff, T., Goggin, P., Haarman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+methods+in+primary+ciliary+dyskinesia.">Diagnostic methods in primary ciliary dyskinesia.</a> Paediatric Respiratory Reviews. 18, 8-17 (2016).</li><li>Ballenger, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+effect+of+cigarette+smoke+on+human+respiratory+cilia.">Experimental effect of cigarette smoke on human respiratory cilia.</a> New England Journal of Medicine. 263, 832-835 (1960).</li><li>Stanley, P. J., Wilson, R., Greenstone, M. A., Mac William, L., Cole, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cigarette+smoking+on+nasal+mucociliary+clearance+and+ciliary+beat+frequency.">Effect of cigarette smoking on nasal mucociliary clearance and ciliary beat frequency.</a> Thorax. 41 (7), 519-523 (1986).</li><li>Kobbernagel, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+safety+of+azithromycin+maintenance+therapy+in+primary+cilia+dyskinesia+(BESTCILIA):+a+multicentre,+double-blind,+randomised,+placebo-controlled+phase+3+trial.">Efficacy and safety of azithromycin maintenance therapy in primary cilia dyskinesia (BESTCILIA): a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled phase 3 trial.</a> Lancet Respiratory Medicine. 8 (5), 493-505 (2020).</li><li>Takeyama, K., Tamaoki, J., Chiyotani, A., Tagaya, E., Konno, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+macrolide+antibiotics+on+ciliary+motility+in+rabbit+airway+epithelium+in-vitro.">Effect of macrolide antibiotics on ciliary motility in rabbit airway epithelium in-vitro.</a> Journal of Pharmacy and Pharmacology. 45 (8), 756-758 (1993).</li><li>Toskala, E., Haataja, J., Shirasaki, H., Rautliainen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+cells+harvested+with+nasal+brushing:+a+method+for+evaluating+ciliary+function.">Culture of cells harvested with nasal brushing: a method for evaluating ciliary function.</a> Rhinology. 43 (2), 121-124 (2005).</li><li>Pifferi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+cell+culture+method+for+the+diagnosis+of+atypical+primary+ciliary+dyskinesia.">Simplified cell culture method for the diagnosis of atypical primary ciliary dyskinesia.</a> Thorax. 64 (12), 1077-1081 (2009).</li><li>Hirst, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+primary+ciliary+dyskinesia+epithelial+cells+at+air+liquid+interface+can+alter+ciliary+phenotype+but+remains+a+robust+and+informative,+diagnostic+aid.">Culture of primary ciliary dyskinesia epithelial cells at air liquid interface can alter ciliary phenotype but remains a robust and informative, diagnostic aid.</a> PLoS One. 9 (2), 89675 (2014).</li><li>Papon, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+ciliary+beating+in+primary+ciliary+dyskinesia:+a+pilot+study.">Quantitative analysis of ciliary beating in primary ciliary dyskinesia: a pilot study.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 7 (10), 78 (2012).</li><li>Smith, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia+FA:+a+research+tool+for+automated,+high-throughput+measurement+of+ciliary+beat+frequency+using+freely+available+software.">Cilia FA: a research tool for automated, high-throughput measurement of ciliary beat frequency using freely available software.</a> Cilia. 1 (8), 14 (2012).</li><li>Sampaio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliar+Move:+new+software+for+evaluating+ciliary+beat+frequency+helps+find+novel+mutations+by+a+Portuguese+multidisciplinary+team+on+primary+ciliary+dyskinesia.">Ciliar Move: new software for evaluating ciliary beat frequency helps find novel mutations by a Portuguese multidisciplinary team on primary ciliary dyskinesia.</a> European Respiratory Journal Open Research. 7 (1), 00792 (2021).</li><li>Mullowney, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+ciliary+dyskinesia+and+neonatal+respiratory+distress.">Primary ciliary dyskinesia and neonatal respiratory distress.</a> Pediatrics. 134 (6), 1160-1166 (2014).</li><li>Leigh, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardizing+nasal+nitric+oxide+measurement+as+a+test+for+primary+ciliary+dyskinesia.">Standardizing nasal nitric oxide measurement as a test for primary ciliary dyskinesia.</a> Annals of the American Thoracic Society. 10 (6), 574-581 (2013).</li></ol>

ここでは、HSVMAを用いたPCDの診断プロセスを、第一選択診断に照らして説明し、議論する。HSVMAは、比較的容易に確立でき、費用対効果が高く、11、および経験豊富な手12における信頼できる方法であるにもかかわらず、落とし穴のない診断尺度ではない。異常なCBFおよびCBPは、気管支呼吸器上皮15の炎症につながる二次感染に起因する可能...

原発性毛様体ジスキネジア(PCD)は、まれな遺伝性遺伝性疾患であり、これは、鼓動繊毛の動きに障害を引き起こす。診断されない場合、MCCの重度の障害のために後の人生で重度の肺損傷につながる。過去には、その有病率は1:4,000〜50,000の範囲にあると推定されています。着実に診断を改善し、状態の意識が高まっているため、PCDの有病率に関する最新情報は、PCDがはるかに一般的であり、おそらく1:4,000〜20,000の範囲にある可能性があることを示唆しています1,2。しかし、PCD患者は依然として過小診断または診断が遅すぎます1,3。したがって、先天性座位内および/またはヘテロタキシーまたは周産期鼻漏、新生児呼吸困難、鼻閉塞、および摂食困難のいずれかを有する乳児は、PCDの疑いがあるべきである。後の人生では、慢性中耳炎、再発性肺炎、鼻副鼻腔炎、およびMCC障害による慢性的で典型的な湿った咳は、気管支拡張症および肺機能障害と組み合わせて、成人期まで続くPCDの特徴的な症状である2。
PCDの疑いのある患者は、異なる診断ツールを使用して診断することができる。TEMは、過去に第一線診断のゴールドスタンダードと考えられてきました。しかし、PCD症例の最大30%は異常な超構造1,3,4,5,6を示さず、異なる診断アプローチを必要とする。したがって、ますます多くのセンターと欧州呼吸器学会(ERS)のガイドラインは、第一選択診断として鼻一酸化窒素(nNO)とHSVMAの組み合わせを示唆しています1,7,9,10。HSVMAおよびnNOは、PCD11の患者を特定する際に最も費用対効果の高い選択肢でもあります。しかし、遺伝子検査が診断に含まれていたとしても、現在、100%の確実性8、9、10でPCDを除外できるスタンドアロン検査または検査の組み合わせは存在しないことに留意する必要があります。
利用可能な診断オプションのうち、HSVMAは生きている繊毛被覆呼吸器細胞に焦点を当て、毛様体拍動パターン(CBP)および毛様体拍動頻度(CBF)を評価する唯一の検査です。TEMとは対照的に、HSVMAの結果は通常試験日に迅速に入手可能ですが、TEMの結果は試料が採取されてから数ヶ月後に届くことがあります。HSVMAはすべての年齢層に適用できますが、nNOは高度なコンプライアンスを必要とします。5歳未満でそれを使用する試みは、通常、失敗します 10.経験豊富な手において、HSVMAはPCDをそれぞれ100%および96%で診断するための優れた感度および特異性を有する12。
この論文では、鼻の下甲介から繊毛被覆呼吸器細胞を採取すること、採取した細胞を調査部位に輸送するための細胞栄養培地中での保存、CBFおよびCBPを決定するための顕微鏡ビデオ分析のプロセスなど、HSVMAを実行するための段階的な手順を説明する。さらに、正常なCBPとCBFを異常な繊毛機能と比較した患者からのビデオクリップがいくつか示されています(ビデオ3、ビデオ4、ビデオ5、ビデオ6、ビデオ7、およびビデオ8)。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amoxiciline-clavulanic acid</td>
			<td>Orion Oyj</td>
			<td></td>
			<td>40 mg/kg divided in 2 doses/day, for adults 875/125 mg 1 tablet x2/day</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera Software</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td></td>
			<td>HCI Image</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold pack</td>
			<td>any</td>
			<td></td>
			<td>for preservation and transport</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Differential interference microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Inverted, cell observer microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitial High Speed Video Camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td></td>
			<td>Orca Flash 4.0, digital camera type C11440</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#180;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10565018</td>
			<td>basal cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td>1.5 mL tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-bottom microwell dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td>cuvette for microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Unit</td>
			<td>Carl Zeiss/PeCon</td>
			<td>810-450001</td>
			<td>Carl Zeiss incubation elements with PeCon TempModule S1 temperature control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Interdental brush 0.6 mm</td>
			<td>Doft</td>
			<td>872267</td>
			<td>Interdental brush on a long wire with a reusable handle and cap in zipbag</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>100x/1.46, &#945; Plan-Apochromat DIC objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small polystyrene box with lid</td>
			<td>any</td>
			<td></td>
			<td>for transport</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-speed video microscopy analysis for first-line diagnosis of primary ciliary dyskinesia

原発性毛様体ジスキネジア(PCD)は、常染色体劣性形質に主に遺伝する先天性障害である。この障害は繊毛運動の障害を引き起こし、粘液繊毛クリアランス(MCC)の重度の障害をもたらす。診断されていないか、診断が遅すぎると、気管支拡張症の発症と後の人生での肺への深刻な損傷につながります。PCDを診断するための方法のほとんどは時間がかかり、それらを確立するために広範な経済的資源を必要とする。高速ビデオ顕微鏡分析(HSVMA)は、 生体外で繊毛を鼓動させる生きた呼吸器細胞を視覚化および分析する唯一の診断ツールです。それは速く、費用効果が高く、そして、経験豊富な手で、PCDのための診断ツールとして非常に信頼できる。さらに、透過型電子顕微鏡(TEM)などの古典的な診断手段は、形態学的変化がないため、一部の変異には適用できません。 
本稿では、呼吸器上皮細胞の採取プロセス、検体のさらなる調製、およびHSVMAのプロセスについて説明する。また、クリニックがHSVMAを実行するための機器を持っていない場合に、治療のために栄養培地に保管し、調査現場に輸送することによって、ブラシをかけられた細胞を無傷でうまく維持し、殴打する方法についても説明します。また、TEMと診断できないダイニンアーム重鎖11遺伝子(DNAH11)に変異を有する患者からの病理学的拍動パターンを有するビデオも示されている。上気道の感染による決定的でないHSVMAの結果、ならびに赤血球の重ね合わせによるブラッシングの失敗の結果。本稿では、肺疾患患者や希少肺疾患を扱うすべてのユニットに、PCDの日常的な診断の一環としてHSVMAを実行するか、HSVMAを専門とするセンターに検体を送ることを奨励したいと思います。

ビデオ1とビデオ2は、CBFとCBPが正常範囲内にある正常なコントロールを示しています(図1参照)。ビデオ3、ビデオ4、ビデオ5、およびビデオ6は、DNAH11遺伝子にホモ接合型変異を有するPCD患者の2つの症例(c.2341G > A;p. Glu781Lys)3を表す。これらの代表的なビデオが?...

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High-speed Video Microscopy Analysis for First-line Diagnosis of Primary Ciliary Dyskinesia

高速ビデオ顕微鏡分析は、比較的実行しやすく、高速で、費用対効果が高く、経験豊富な手で、原発性毛様体ジスキネジアの第一選択診断のためのかなり信頼性の高いツールであり、重度の肺疾患の診断および治療に関与するすべてのセンターで利用可能であるべきです。

原発性毛様体ジスキネジアの第一選択診断のための高速ビデオ顕微鏡分析

Primary ciliary dyskinesia (PCD) is a congenital disorder predominantly inherited in an autosomal recessive trait. The disorder causes disturbance in the ...

高速ビデオ顕微鏡分析は、原発性毛様体ジスキネジアの第一選択診断のための信頼性の高いツールです。このテクニックは、比較的簡単に実行でき、高速で費用対効果が高く、経験豊富な手では非常に信頼性の高いツールです。そしてそれはすべての年齢層の患者に適当です。ビデオ顕微鏡はまた、二次毛様体機能を明らかにする。例えば、細菌感染やウイルス感染によるものです。しかし、それは主に原発性毛様体ジスキネジアを診断するために使用されています。科学者は、生細胞における細胞内のプロセスまたは生物学的機能を視覚化するためにもこの方法を使用する。この手順で私を手伝ってくれるのは、私たちの検査技師であるティナ・ペロマー夫人です。呼吸器上皮細胞を採取する前に、患者に鼻を徹底的に吹き飛ばすように依頼してください。患者の準備ができたら、患者の頭を片手で固定したままにし、もう片方の手で0.6ミリメートルサイズの歯間ブラシを使用して鼻孔の下甲介をブラッシングして十分な上皮細胞ストリップを収集する。回収した細胞ストリップを、細胞栄養DMEMを含む1.5ミリリットルの微量遠心管に落とす。微量遠心チューブの蓋を閉じた後、チューブを光源に押し付け、チューブを振って、回収された細胞ストリップおよびコングロマリットを発見する。その後、蓋を適切に閉じた微量遠心チューブをポリスチレン製の箱に入れます。箱をしっかりと閉じる前に、チューブが箱の中に固定されていることを確認してください。その後、試料の凍結を避けながら、コールドパックを箱に加えます。ポリスチレンボックスからサンプルを入れたマイクロ遠沈管を取り出した後、顕微鏡加熱ユニットのフードの下に1本のチューブを置き、高速ビデオ顕微鏡分析またはHSVMAのために摂氏37度まで暖めます。次に、コンピュータ上のカメラとビデオユニットのソフトウェアを起動します。ピペットを使用して小さなサンプルを採取し、サンプルを2滴キュベットに入れます。キュベットを蓋で覆ってから顕微鏡下に置きます。倍率100倍の油浸レンズを使用し、光学系の表面に液浸油を1滴入れます。顕微鏡レンズで皿の底に近づきながら、赤血球がなく、粘液含有量の低い細胞集塊を探します。代表的な関心領域(ROI)を見つけたら、最大の繊毛運動を有する拍動繊毛の1つのグループに焦点を当て、ビデオシーケンスを録画する。繊毛を横に、上から叩いて細胞を記録します。代表的な分析は、横方向および上方から見た正常な繊毛運動を示す。DNAH11遺伝子に変異を有する原発性毛様体ジスキネジアまたはPCD患者のサンプルは、毛様体拍動の古典的な硬い最小移動パターンを実証した。横から見ると上から見た時。同じ変異を有する別のPCD患者では、拍動繊毛の異なる運動亢進性が非効率的なパターンが観察された。病理学的毛様体拍動パターンおよび毛様体拍動頻度は、再発性上気道感染を有する患者においても見られた。ブラッシング手順が厳密にHSVMA分析を行った場合、繊毛上皮細胞が赤血球の被膜で覆われたとしても行うことができなかった。この手順で最も重要なステップは、ブラッシングから十分な呼吸細胞を取得し、この材料をビデオ分析のために十分に保存しておくことです。残りの材料は、繊毛の可能性のある構造欠陥を検出するために、または欠陥および毛様体タンパク質の合成を明らかにするために、電子顕微鏡または免疫蛍光顕微鏡法を実行するために使用することができる。

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