Name: differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic beta-cell precursors in a 2d culture system
Uploaded: 2021-12-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af et tilskud fra Qatar National Research Fund (QNRF) (Grant No. NPRP10-1221-160041).

Undersøgelsen er godkendt af den relevante institutionelle videnskabsetiske komité og udført i overensstemmelse med de etiske standarder som fastsat i Helsingfors-erklæringen fra 1964 og dens senere ændringer eller sammenlignelige etiske standarder. Protokollen blev godkendt af Institutional Review Board (IRB) fra HMC (nr. 16260/16) og Qatar Biomedical Research Institute (QBRI) (nr. 2016-003). Dette arbejde er optimeret til hESC'er som H1, H9 og HUES8. Blodprøver blev indhentet fra raske personer fra Hamad Medical ...

<ol>
	<li>Rickels, M. R., Robertson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+islet+transplantation+in+humans:+Recent+progress+and+future+directions.">Pancreatic islet transplantation in humans: Recent progress and future directions.</a> Endocrine Reviews. 40 (2), 631-668 (2019).</li><li>Latres, E., Finan, D. A., Greenstein, J. L., Kowalski, A., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Navigating+two+roads+to+glucose+normalization+in+diabetes:+Automated+insulin+delivery+devices+and+cell+therapy.">Navigating two roads to glucose normalization in diabetes: Automated insulin delivery devices and cell therapy.</a> Cell Metabolism. 29 (3), 545-563 (2019).</li><li>Vaithilingam, V., Tuch, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+and+encapsulation:+An+update+on+recent+developments.">Islet transplantation and encapsulation: An update on recent developments.</a> Review of Diabetic Studies. 8 (1), 51-67 (2011).</li><li>Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+different+types+of+diabetes+using+human+pluripotent+stem+cells.">Modeling different types of diabetes using human pluripotent stem cells.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 78 (6), 2459-2483 (2021).</li><li>Memon, B., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+diabetes:+Beta+cells+versus+pancreatic+progenitors.">Stem cell therapy for diabetes: Beta cells versus pancreatic progenitors.</a> Cells. 9 (2), 283 (2020).</li><li>Balboa, D., Iworima, D. G., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pluripotent+stem+cells+to+model+islet+defects+in+diabetes.">Human pluripotent stem cells to model islet defects in diabetes.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 12, 642152 (2021).</li><li>Gaertner, B., Carrano, A. C., Sander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell+models:+Lessons+for+pancreatic+development+and+disease.">Human stem cell models: Lessons for pancreatic development and disease.</a> Genes &amp; Development. 33 (21-22), 1475-1490 (2019).</li><li>Abdelalim, E. M., Bonnefond, A., Bennaceur-Griscelli, A., Froguel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cells+as+a+potential+tool+for+disease+modelling+and+cell+therapy+in+diabetes.">Pluripotent stem cells as a potential tool for disease modelling and cell therapy in diabetes.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 10 (3), 327-337 (2014).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+diabetes+with+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+pluripotent+stem+cells.">Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 32 (11), 1121-1133 (2014).</li><li>Pagliuca, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+functional+human+pancreatic+beta+cells+in+vitro.">Generation of functional human pancreatic beta cells in vitro.</a> Cell. 159 (2), 428-439 (2014).</li><li>Nair, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulating+endocrine+cell+clustering+in+culture+promotes+maturation+of+human+stem-cell-derived+&#946;+cells.">Recapitulating endocrine cell clustering in culture promotes maturation of human stem-cell-derived &#946; cells.</a> Nature Cell Biology. 21 (2), 263-274 (2019).</li><li>Russ, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+induction+of+human+pancreatic+progenitors+produces+functional+beta-like+cells+in+vitro.">Controlled induction of human pancreatic progenitors produces functional beta-like cells in vitro.</a> EMBO Journal. 34 (13), 1759-1772 (2015).</li><li>Veres, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Charting+cellular+identity+during+human+in+vitro+&#946;-cell+differentiation.">Charting cellular identity during human in vitro &#946;-cell differentiation.</a> Nature. 569 (7756), 368-373 (2019).</li><li>Hrvatin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiated+human+stem+cells+resemble+fetal,+not+adult,+&#946;+cells.">Differentiated human stem cells resemble fetal, not adult, &#946; cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (8), 3038-3043 (2014).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors+into+functional+islets+capable+of+treating+pre-existing+diabetes+in+mice.">Maturation of human embryonic stem cell-derived pancreatic progenitors into functional islets capable of treating pre-existing diabetes in mice.</a> Diabetes. 61 (8), 2016-2029 (2012).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+human+embryonic+stem+cell-derived+NKX6.1-expressing+pancreatic+progenitor+cells+accelerates+the+maturation+of+insulin-secreting+cells+in+vivo.">Enrichment of human embryonic stem cell-derived NKX6.1-expressing pancreatic progenitor cells accelerates the maturation of insulin-secreting cells in vivo.</a> Stem Cells Journal. 31 (11), 2432-2442 (2013).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+human+embryonic+stem+cell-derived+NKX6.1-expressing+pancreatic+progenitor+cells+accelerates+the+maturation+of+insulin-secreting+cells+in+vivo.">Enrichment of human embryonic stem cell-derived NKX6.1-expressing pancreatic progenitor cells accelerates the maturation of insulin-secreting cells in vivo.</a> Stem Cells Journal. 31 (11), 2432-2442 (2013).</li><li>Bruin, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polyhormonal+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+embryonic+stem+cells.">Characterization of polyhormonal insulin-producing cells derived in vitro from human embryonic stem cells.</a> Stem Cell Research. 12 (1), 194-208 (2014).</li><li>Toyoda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+aggregation+optimizes+the+differentiation+of+human+ESCs+and+iPSCs+into+pancreatic+bud-like+progenitor+cells.">Cell aggregation optimizes the differentiation of human ESCs and iPSCs into pancreatic bud-like progenitor cells.</a> Stem Cell Research. 14 (2), 185-197 (2015).</li><li>Memon, B., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+pancreatic+progenitors+co-expressing+PDX1+and+NKX6.1.">Highly efficient differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic progenitors co-expressing PDX1 and NKX6.1.</a> Methods in Molecular Biology. , (2020).</li><li>Memon, B., Karam, M., Al-Khawaga, S., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+pancreatic+progenitors+co-expressing+PDX1+and+NKX6.1.">Enhanced differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic progenitors co-expressing PDX1 and NKX6.1.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 15 (2018).</li><li>Aigha, I. I., Memon, B., Elsayed, A. K., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+two+distinct+NKX6.1+populations+of+pancreatic+progenitors.">Differentiation of human pluripotent stem cells into two distinct NKX6.1 populations of pancreatic progenitors.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 83 (2018).</li><li>Ali, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinocytes+derived+from+patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells+recapitulate+the+genetic+signature+of+psoriasis+disease.">Keratinocytes derived from patient-specific induced pluripotent stem cells recapitulate the genetic signature of psoriasis disease.</a> Stem Cells and Development. 29 (7), 383-400 (2020).</li><li>Elsayed, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+human+induced+pluripotent+stem+cell+line+(QBRIi009-A)+from+a+patient+with+a+heterozygous+deletion+of+FOXA2.">Generation of a human induced pluripotent stem cell line (QBRIi009-A) from a patient with a heterozygous deletion of FOXA2.</a> Stem Cell Research. 42, 101705 (2020).</li><li>Davenport, C., Diekmann, U., Budde, I., Detering, N., Naujok, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+patterning+of+definitive+endoderm+generated+from+human+embryonic+stem+cells+depends+on+the+differential+signaling+of+retinoic+acid,+Wnt-,+and+BMP-signaling.">Anterior-posterior patterning of definitive endoderm generated from human embryonic stem cells depends on the differential signaling of retinoic acid, Wnt-, and BMP-signaling.</a> Stem Cells. 34 (11), 2635-2647 (2016).</li><li>Schroeder, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+selection+of+Sox17-expressing+endoderm+cells+generated+from+murine+embryonic+stem+cells.">Induction and selection of Sox17-expressing endoderm cells generated from murine embryonic stem cells.</a> Cells Tissues Organs. 195 (6), 507-523 (2012).</li><li>Nostro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+NKX6-1++pancreatic+progenitors+from+multiple+human+pluripotent+stem+cell+lines.">Efficient generation of NKX6-1+ pancreatic progenitors from multiple human pluripotent stem cell lines.</a> Stem Cell Reports. 4 (4), 591-604 (2015).</li><li>Elsayed, A. K., Younis, I., Ali, G., Hussain, K., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+development+of+pancreatic+beta+cells+derived+from+human+iPSCs+with+FOXA2+deficiency.">Aberrant development of pancreatic beta cells derived from human iPSCs with FOXA2 deficiency.</a> Cell Death &amp; Disease. 12 (1), 103 (2021).</li><li>Mfopou, J. K., Chen, B., Mateizel, I., Sermon, K., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noggin,+retinoids,+and+fibroblast+growth+factor+regulate+hepatic+or+pancreatic+fate+of+human+embryonic+stem+cells.">Noggin, retinoids, and fibroblast growth factor regulate hepatic or pancreatic fate of human embryonic stem cells.</a> Gastroenterology. 138 (7), 1-14 (2010).</li><li>Mfopou, J. K., De Groote, V., Xu, X., Heimberg, H., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+and+other+soluble+factors+from+differentiating+embryoid+bodies+inhibit+pancreas+development.">Sonic hedgehog and other soluble factors from differentiating embryoid bodies inhibit pancreas development.</a> Stem Cells. 25 (5), 1156-1165 (2007).</li><li>Gattazzo, F., Urciuolo, A., Bonaldo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix:+A+dynamic+microenvironment+for+stem+cell+niche.">Extracellular matrix: A dynamic microenvironment for stem cell niche.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1840 (8), 2506-2519 (2014).</li><li>Watt, F. M., Huck, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+extracellular+matrix+in+regulating+stem+cell+fate.">Role of the extracellular matrix in regulating stem cell fate.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 14 (8), 467-473 (2013).</li><li>Shih, H. P., Panlasigui, D., Cirulli, V., Sander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECM+signaling+regulates+collective+cellular+dynamics+to+control+pancreas+branching+morphogenesis.">ECM signaling regulates collective cellular dynamics to control pancreas branching morphogenesis.</a> Cell Reports. 14 (2), 169-179 (2016).</li><li>Raza, A., Ki, C. S., Lin, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+matrix+properties+on+growth+and+morphogenesis+of+human+pancreatic+ductal+epithelial+cells+in+3D.">The influence of matrix properties on growth and morphogenesis of human pancreatic ductal epithelial cells in 3D.</a> Biomaterials. 34 (21), 5117-5127 (2013).</li><li>Lin, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+and+laminin+promote+differentiation+of+human+mesenchymal+stem+cells+into+insulin+producing+cells+through+activating+Akt+and+ERK.">Fibronectin and laminin promote differentiation of human mesenchymal stem cells into insulin producing cells through activating Akt and ERK.</a> Journal of Biomedical Science. 17, 56 (2010).</li><li>Boretti, M. I., Gooch, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+extracellular+matrix+and+3D+morphogenesis+on+islet+hormone+gene+expression+by+Ngn3-infected+mouse+pancreatic+ductal+epithelial+cells.">Effect of extracellular matrix and 3D morphogenesis on islet hormone gene expression by Ngn3-infected mouse pancreatic ductal epithelial cells.</a> Tissue Engineering Part A. 14 (12), 1927-1937 (2008).</li><li>Boretti, M. I., Gooch, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+cell+clustering+enhances+islet+beta+cell+formation+from+human+cultures+enriched+for+pancreatic+ductal+epithelial+cells.">Induced cell clustering enhances islet beta cell formation from human cultures enriched for pancreatic ductal epithelial cells.</a> Tissue Engineering. 12 (4), 939-948 (2006).</li><li>Beattie, G. M., Rubin, J. S., Mally, M. I., Otonkoski, T., Hayek, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+proliferation+and+differentiation+of+human+fetal+pancreatic+islet+cells+by+extracellular+matrix,+hepatocyte+growth+factor,+and+cell-cell+contact.">Regulation of proliferation and differentiation of human fetal pancreatic islet cells by extracellular matrix, hepatocyte growth factor, and cell-cell contact.</a> Diabetes. 45 (9), 1223-1228 (1996).</li><li>Gage, B. K., Webber, T. D., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+cell+seeding+density+influences+pancreatic+endocrine+development+during+in+vitro+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells.">Initial cell seeding density influences pancreatic endocrine development during in vitro differentiation of human embryonic stem cells.</a> PLoS One. 8 (12), 82076 (2013).</li></ol>

Dette arbejde beskriver en forbedret protokol til generering af pancreasprogenitorer fra hPSC'er med en høj co-ekspression af PDX1 og NKX6.1. Dissociation og replating af den hPSC-afledte endoderm ved halv densitet på frisk matrix resulterede i højere PDX1 og NKX6.1 i hPSC-afledte bugspytkirtelforfædre.
Selvom vækstfaktorcocktailen for hvert trin ligner meget P1-ND 27, har det vist sig, at en mere udvidet fase 3-behandling, herunder FGF og retinoid signalering og BMP og pindsvinehæmning ...

Diabetes er en kompleks metabolisk lidelse, der påvirker millioner af mennesker globalt. Tilskud af insulin betragtes som den eneste behandlingsmulighed for diabetes. Mere avancerede tilfælde behandles med betacelleudskiftningsterapi, opnået ved transplantation af enten hele kadaverbugspytkirtlen eller holme 1,2. Flere spørgsmål omgiver transplantationsterapi, såsom begrænsning med tilgængeligheden og kvaliteten af vævet, invasivitet af transplantationsprocedurer ud over det kontinuerlige behov for immunosuppressive midler. Dette nødvendiggør behovet for at opdage nye og alternative muligheder for betacelleudskiftningsterapi 2,3. Humane pluripotente stamceller (hPSC'er) er for nylig dukket op som et lovende værktøj til forståelse af humane bugspytkirtelbiologi og som en ikke-udtømmende og potentielt en mere personlig kilde til transplantationsterapi 4,5,6,7. hPSC'er, herunder humane embryonale stamceller (hESC'er) og menneskeskabte pluripotente stamceller (hiPSC'er), har en høj selvfornyelseskapacitet og giver anledning til enhver vævstype i det menneskelige legeme. hESC'er stammer fra embryonets indre cellemasse, og hiPSC'er omprogrammeres fra enhver somatisk celle 4,8.
Rettede differentieringsprotokoller er optimeret til at generere betaceller i bugspytkirtlen fra hPSC'er, der sekventielt leder hPSC'er gennem udviklingsstadier i bugspytkirtlen invitro. Disse protokoller genererer hPSC-afledte øorganoider. Mens de i høj grad er forbedret til at øge andelen af betaceller i bugspytkirtlen deri, er effektiviteten af protokoller meget variabel. Det øges ikke til mere end ~ 40% af NKX6.1 + / INSULIN + eller C-PEPTID + celler 5,9,10,11,12,13. De genererede betaceller er imidlertid ikke helt identiske med de voksne humane betaceller med hensyn til deres transkriptionelle og metaboliske profiler og deres respons på glucose 4,5,14. De hPSC-afledte betaceller mangler genekspression af vigtige betacellemarkører som PCSK2, PAX6, UCN3, MAFA, G6PC2 og KCNK3 sammenlignet med voksne mennesker øer5. Derudover har de hPSC-afledte betaceller formindsket calciumsignalering som reaktion på glukose. De er forurenet med de co-genererede polyhormonale celler, der ikke udskiller passende mængder insulin som reaktion på stigende glukoseniveauer5. På den anden side kunne hPSC-afledte bugspytkirtelforfædre, som er ø-prækursorer, genereres mere effektivt in vitro sammenlignet med betaceller og, når de transplanteres in vivo, modnes til funktionelle, insulinudskillende betaceller15,16. Kliniske forsøg er i øjeblikket fokuseret på at demonstrere deres sikkerhed og effektivitet ved transplantation hos T1D-forsøgspersoner.
Især er ekspression af transkriptionsfaktorerne PDX1 (Pancreas og Duodenal Homeobox 1) og NKX6.1 (NKX6 Homeobox 1) inden for den samme pancreas stamcellecelle afgørende for engagement i en betacelleafstamning5. Pankreatiske forfædre, der ikke udtrykker NKX6.1, giver anledning til polyhormonelle endokrine celler eller ikke-funktionelle betaceller17,18. Derfor er en høj co-ekspression af PDX1 og NKX6.1 i bugspytkirtlens stamfaderstadium afgørende for i sidste ende at generere et stort antal funktionelle betaceller. Undersøgelser har vist, at en embryoid krop eller 3D-kultur forbedrer PDX1 og NKX6.1 i bugspytkirtelforfædre, hvor de differentierende celler aggregeres, varierende mellem 40% -80% af PDX1 + / NKX6.1 + population12,19. Sammenlignet med suspensionskulturer er 2D-differentieringskulturer imidlertid mere omkostningseffektive, gennemførlige og praktiske til anvendelse på flere cellelinjer5. Vi viste for nylig, at monolagsdifferentieringskulturer giver mere end op til 90% af PDX1+/NKX6.1+ co-ekspressive hPSC-afledte pancreasforfædre20,21,22. Den rapporterede metode gav en høj replikationskapacitet til de genererede bugspytkirtelforfædre og forhindrede alternative skæbnespecifikationer såsom leverafstamning21. Derfor demonstrerer denne protokol heri en yderst effektiv metode til differentiering af hPSC'er til beta-celleprækursorer i bugspytkirtlen, der co-udtrykker PDX1 og NKX6.1. Denne metode anvender teknikken til dissociering af hPSC-afledt endoderm og manipulation af celletætheden efterfulgt af en udvidet FGF- og retinoidsignalering samt pindsvinehæmning for at fremme PDX1 og NKX6.1 co-ekspression (figur 1). Denne metode kan lette en skalerbar generation af hPSC-afledte beta-celleprækursorer i bugspytkirtlen til transplantationsterapi og sygdomsmodellering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL, conical, centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20X TBS Tween 20</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>28360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well culture plates, flat bottom with lid</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL, conical, centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6- well culture plates, multidish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>140685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>0-7920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activin A</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>338-AC</td>
			<td>Reconstituted in 4 mM HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti NKX6.1 antibody, mouse monoclonal</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>F55A12-C</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:2000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PDX1 antibody, guinea pig polyclonal</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab47308</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:1000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 minus Vit A</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin, heat shock fraction, fatty acid free</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR 99021</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>4423</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>41965047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H + L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 568</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG (H + L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td></td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS 1X</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>PHG0313</td>
			<td>Reconstituted in 0.1% BSA in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF10</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>345-FG</td>
			<td>Reconstituted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G8644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33258</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>23491-45-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX73</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut DMEM/F-12 (1X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12660-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut SR serum replacement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10828-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid (vitamin C)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A92902</td>
			<td>Reconstituted in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>Aliquot the thawed stock and freeze at -20C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCDB131</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10372019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-SOX17</td>
			<td>ORIGENE</td>
			<td>CF500096</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:2000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR Plus</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>85850</td>
			<td>Mix the basal media with supplement. Aliquot and store at -20 &#176;C for longer time or at 4 &#176;C for instant use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene filter units, 0.2 &#181;m PES</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>566-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>72340</td>
			<td>Reconstituted in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOGGIN</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>6057-NG</td>
			<td>Reconstituted in 0.1% BSA in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde solution 4% in PBS</td>
			<td>ChemCruz</td>
			<td>sc-281692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable vacuum aspirator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-FOXA2</td>
			<td>Cell signaling technology</td>
			<td>3143</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:500 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rock inhibitor (Y-27632)</td>
			<td>ReproCell</td>
			<td>04-0012-02</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round Bottom Polystyrene FACS Tubes with Caps, STERILE</td>
			<td>Stellar Scientific</td>
			<td>FSC-9010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SANT-1</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4572</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemFlex</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A3349401</td>
			<td>Mix the basal media with supplement. Aliquot and store at -20 &#176;C for longer time or at 4 &#176;C for instant use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TALI Cellular Analysis Slide</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tali image-based cytometer automated cell counter</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE 100 mL</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12563011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15575-038</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic beta-cell precursors in a 2d culture system

Humane pluripotente stamceller (hPSC'er) er et glimrende værktøj til at studere tidlig udvikling af bugspytkirtlen og undersøge de genetiske bidragydere til diabetes. hPSC-afledte insulinudskillende celler kan genereres til celleterapi og sygdomsmodellering, dog med begrænset effektivitet og funktionelle egenskaber. hPSC-afledte bugspytkirtelforfædre, der er forstadier til betaceller og andre endokrine celler, når de to transkriptionsfaktorer PDX1 og NKX6.1 udtrykker hinanden, angiver stamfædrene til funktionelle, insulinudskillende betaceller både in vitro og in vivo. hPSC-afledte bugspytkirtelforfædre anvendes i øjeblikket til celleterapi hos type 1-diabetespatienter som en del af kliniske forsøg. Imidlertid genererer de nuværende procedurer ikke en høj andel af NKX6.1- og bugspytkirtelforfædre, hvilket fører til co-generation af ikke-funktionelle endokrine celler og få glukoseresponsive, insulinudskillende celler. Dette arbejde udviklede således en forbedret protokol til generering af hPSC-afledte bugspytkirtelforfædre, der maksimerer co-ekspressionen af PDX1 og NKX6.1 i et 2D-monolag. Faktorer som celletæthed, tilgængelighed af frisk matrix og dissociation af hPSC-afledte endodermale celler moduleres, der forstærkede PDX1- og NKX6.1-niveauer i de genererede forfædre i bugspytkirtlen og minimeret forpligtelse til alternativ leverafstamning. Undersøgelsen fremhæver, at manipulation af cellens fysiske miljø under in vitro-differentiering kan påvirke afstamningsspecifikation og genekspression. Derfor letter den nuværende optimerede protokol den skalerbare generering af PDX1 og NKX6.1 co-ekspressive forfædre til celleterapi og sygdomsmodellering.

Resultaterne viser, at optimeret protokol P2-D (figur 1A) forbedrede pancreas stamfaderdifferentieringseffektivitet ved at opregulere PDX1 og NKX6.1 co-ekspression (figur 2A, B og figur 3A). Resultaterne viste især, at dissociation af endodermale celler og deres replating på frisk membranmatrix sammen med en længere varighed af trin 3 forbedrede NKX6.1-ekspression i hPSC-afledte bugspytkirtelforfædre (optimeret ...

Watch this Scientific Journal Video about Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System at JoVE.com

Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System

Den nuværende protokol beskriver en forbedret metode til at øge co-ekspressionen af PDX1 og NKX6.1 transkriptionsfaktorer i bugspytkirtlen forfædre afledt af humane pluripotente stamceller (hPSC'er) i plane monolag. Dette opnås ved at genopfylde den friske matrix, manipulere celletæthed og dissociere de endodermale celler.

Differentiering af humane pluripotente stamceller til pancreas betacelleprækursorer i et 2D-kultursystem

Human pluripotent stem cells (hPSCs) are an excellent tool for studying early pancreatic development and investigating the genetic contributors to ...

Denne optimerede protokol forbedrede dannelsen af beta-celleforstadier i bugspytkirtlen fra humane pluripotente stamceller, som kan bruges til celleterapi til diabetes og undersøgelse af molekylære mekanismer, der understreger diabetesbiogenese. Dette er en gennemførlig teknik, da den bruges til 2D-monolagskulturer. Det er let at anvende og er konsistent på tværs af flere kontroller og patientafledte pluripotente stamcellelinjer.Disse betacelleforstadier, når de transplanteres hos en diabetespatient, kan modnes til insulinudskillende betaceller og kan potentielt vende hyperglykæmi. Derfor kan de øgede procentdele af forfædre i bugspytkirtlen, der genereres ved hjælp af vores protokol, bruges til celleterapi til diabetes. Denne forbedrede protokol kan bruges til at studere tidlig human bugspytkirteludvikling hos raske individer såvel som hos diabetespatienter, hvilket er udfordrende på grund af mangel på vævsprøver.Når de humane pluripotente stamcelle- eller hPSC-kolonier har nået 70 til 80 % sammenløb, vaskes de to gange med varm PBS inde i vævskulturhætten. Derefter opsuges bufferen ved hjælp af en bærbar vakuumaspirator. Derefter tilsættes trin et differentieringsmedium indeholdende CHIR-99021 til kolonierne, og inkuberes pladen ved 37 grader Celsius i 24 timer.Den næste dag skal du erstatte de brugte medier med trin et differentieringsmedium uden CHIR-99021. Efter at have opsuget det brugte medium og vasket de endelige endodermceller to gange med varm PBS, hvirvles pladen for at fjerne celleaffald. Fastgør derefter cellerne ved at tilføje 4% paraformaldehyd, og læg pladen på en todimensionel ryster.Efter fiksering vaskes cellerne med TRIS-bufferet saltvand indeholdende 0,5% Tween, og pladen placeres på rysteren. Permeabiliser derefter de faste celler ved at tilføje en generøs mængde PBS indeholdende 0,5% Triton X-100 og læg pladen tilbage på rysteren. Tilsæt derefter frisklavet blokeringsbuffer til de permeabiliserede celler, og inkuber pladen i en time på rysteren.Tilsæt derefter fortyndede primære antistoffer til de blokerede celler, og læg pladen på rysteren ved fire grader Celsius med blid omrystning. Den følgende dag efter aspirering af den primære antistofopløsning vaskes brøndene tre gange med TBST i 10 minutter hver på rysteren. Tilføj derefter de sekundære antistoffer.Dæk pladen med aluminiumsfolie for at beskytte mod lys, og læg pladen på rysteren ved stuetemperatur i en time. Derefter opsuges den sekundære antistofopløsning, og vask de farvede brønde med TBST på rysteren i 10 minutter, og hold pladen dækket med folie. For at plette kernerne tilsættes derefter Hoechst-opløsning til brøndene og placeres pladen på rysteren.Efter to til tre minutter opsuges Hoechst-opløsningen, og brøndene skylles to gange med PBS. Til sidst tilsættes PBS til de farvede celler, og billede dem ved hjælp af et omvendt fluorescensmikroskop i mørket. På dag et i fase to adskilles de hPSC-afledte endodermale celler ved først at vaske dem med varm PBS og derefter tilføje en milliliter varm enzymopløsning pr. Brønd af en seks brøndplade.Placer pladen ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid i tre til fem minutter, eller indtil cellerne begynder at løsne sig fra hinanden. Dissocier de løsrevne ark eller monolag af celler i brøndene, og saml de løsrevne celler sammen i et 15 milliliter polypropylenrør ved hjælp af basalstadiet halvt medium. Drej derefter cellerne ned, kassér supernatanten, og suspender pelleten igen ved hjælp af en milliliter steril PBS.Når du har talt cellerne ved hjælp af en automatiseret tæller, skal du dreje cellerne igen og kassere supernatanten. Derefter resuspenderes pelleten i det passende volumen af trin to differentieringsmedium indeholdende en stenhæmmer. Plade de resuransuspenderede celler på en til 50 membranmatrixbelagte plader og inkubere dem ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid.Efter 24 timer udskiftes mediet med trin to differentieringsmedium uden Rock-hæmmeren. I slutningen af fase fire skal du løsne celler som vist tidligere og samle dem i et 15 milliliter rør. Drej derefter cellerne, kassér supernatanten, vask cellerne med PBS, og dissocier dem til enkeltceller.Efter at have talt cellerne ved hjælp af en automatiseret celletæller, drejes cellerne igen og resuspenderer pelleten i 200 mikroliter kølet PBS. Derefter tilsættes to milliliter kølet 80% ethanol dråbevis med røret på en hvirvel, der er indstillet lavt til medium hastighed. Luk hætten tæt, og placer røret let vippet på rysteren ved fire grader Celsius natten over.Den næste dag skal du dreje cellerne og vaske pelleten med PBS for at adskille eventuelle klumper af faste celler. Bloker derefter de faste celler i mindst en time ved stuetemperatur eller fire grader Celsius natten over på rysteren. Dernæst skal du for at plette for pancreas stammarkører fordele 200.000 celler pr. tilstand inklusive passende isotypekontroller, ufarvede og sekundære antistofkontroller i en 96 brønd V bundplade.Drej derefter pladen kort, og vend pladen med en hurtig bevægelse for at kassere supernatanten uden at miste pellets. Derefter inkuberes cellerne i primære antistoffer i mindst to timer ved stuetemperatur på en ryster med blid omrystning. Vask derefter de farvede celler tre gange med TBST ved at pipettere op og ned i brøndene.Centrifuger cellerne igen, kassér supernatanten, og tilsæt sekundære antistoffer til cellerne. Efter en 30 minutters inkubation ved stuetemperatur vaskes de farvede celler to gange med TBST. Drej derefter pladen, saml de farvede celler i 100 mikroliter PBS i lysbeskyttede faxrør, og kør prøverne på en flowcytometrimaskine.Sammenlignet med den ikke-optimerede metode forbedrede den optimerede protokol effektiviteten af pancreasprogenitordifferentiering ved at opregulere PDX 1 og NKX 6.1 co-ekspression. Især disassociation af endodermale celler og deres replating på frisk membranmatrix sammen med en længere varighed af trin tre forbedrede NKX 6.1-ekspression i hPSC-afledte pancreasprogenitorer sammenlignet med den ikke-dissocierede protokol. Pankreatiske forfædre genereret ved hjælp af den optimerede protokol øgede også antallet af SOX9-positive celler sammenlignet med den ikke-dissocierede metode.Desuden genererede den optimerede metode også en højere andel af proliferative NKX 6.1 positive celler, der co-udtrykte proliferationsmarkøren Ki67. For at øge effektiviteten er det afgørende at adskille den HbA1-afledte endoderm og derefter forlænge varigheden af fase tre-behandling med FGF-amyloidsignalering og pindsvinehæmning. Skalerbar generation af forfædre til bugspytkirtlen ved hjælp af denne forbedrede protokol har lettet undersøgelser af forbedring af effektiviteten og modningen af humane pluripotente stamcelleafledte betaceller i bugspytkirtlen og tilladt modellering af forskellige typer diabetes.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

Dyrkning Menneskelig pluripotente og neurale stamceller i en Lukket Cell Culture System for Basic og Prækliniske Research

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

Storstilet produktion af cardiomyocytter fra menneskelige pluripotente stamceller Ved hjælp af en meget reproducerbar lille molekyle-Based Differentiering Protocol

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

Instrueret differentiering af Primitive og endelige hæmatopoietisk ophav fra humane pluripotente stamceller

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Effektiv Differentiering af pluripotente stamceller til NKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; Pankreatisk progenitorer

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In vitro differentiering af humane pluripotente stamceller til trofoblastceller

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiering af humane mesenkymale stamceller i funktionel Cardiomyocyte-lignende celler

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Effektiv differentiering af humane pluripotente stamceller i leverceller

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

I Vitro Generation af Somite derivater fra menneskelige induceret celler pluripotente stamceller

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Directed Differentiation of Hemogenic Endothelial Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Rettet differentiering af hæmogene endotelceller fra humane pluripotente stamceller

Blood vessels are ubiquitously distributed within all tissues of the body and perform diverse functions. Thus, derivation of mature vascular endothelial ...

Isolation of Rat Adipose Tissue Mesenchymal Stem Cells for Differentiation into Insulin-producing Cells

Isolering af rottefedtvæv Mesenkymale stamceller til differentiering i insulinproducerende celler

Mesenchymal stem cells (MSCs)-especially those isolated from adipose tissue (Ad-MSCs)-have gained special attention as a renewable, abundant source of ...