Name: differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic beta-cell precursors in a 2d culture system
Uploaded: 2021-12-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי מענק מקרן המחקר הלאומית של קטאר (QNRF) (מענק מס'. NPRP10-1221-160041).

המחקר אושר על ידי ועדת האתיקה של המחקר המוסדי המתאים ובוצע על פי הסטנדרטים האתיים שנקבעו בהצהרת הלסינקי משנת 1964 ותיקוניה המאוחרים יותר או סטנדרטים אתיים דומים. הפרוטוקול אושר על ידי מועצת הביקורת המוסדית (IRB) של HMC (מס' 16260/16) ומכון המחקר הביו-רפואי של קטאר (QBRI) (מס' 2016-003). עבודה זו ממוטבת עבור hE...

<ol>
	<li>Rickels, M. R., Robertson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+islet+transplantation+in+humans:+Recent+progress+and+future+directions.">Pancreatic islet transplantation in humans: Recent progress and future directions.</a> Endocrine Reviews. 40 (2), 631-668 (2019).</li><li>Latres, E., Finan, D. A., Greenstein, J. L., Kowalski, A., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Navigating+two+roads+to+glucose+normalization+in+diabetes:+Automated+insulin+delivery+devices+and+cell+therapy.">Navigating two roads to glucose normalization in diabetes: Automated insulin delivery devices and cell therapy.</a> Cell Metabolism. 29 (3), 545-563 (2019).</li><li>Vaithilingam, V., Tuch, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+and+encapsulation:+An+update+on+recent+developments.">Islet transplantation and encapsulation: An update on recent developments.</a> Review of Diabetic Studies. 8 (1), 51-67 (2011).</li><li>Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+different+types+of+diabetes+using+human+pluripotent+stem+cells.">Modeling different types of diabetes using human pluripotent stem cells.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 78 (6), 2459-2483 (2021).</li><li>Memon, B., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+diabetes:+Beta+cells+versus+pancreatic+progenitors.">Stem cell therapy for diabetes: Beta cells versus pancreatic progenitors.</a> Cells. 9 (2), 283 (2020).</li><li>Balboa, D., Iworima, D. G., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pluripotent+stem+cells+to+model+islet+defects+in+diabetes.">Human pluripotent stem cells to model islet defects in diabetes.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 12, 642152 (2021).</li><li>Gaertner, B., Carrano, A. C., Sander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell+models:+Lessons+for+pancreatic+development+and+disease.">Human stem cell models: Lessons for pancreatic development and disease.</a> Genes &amp; Development. 33 (21-22), 1475-1490 (2019).</li><li>Abdelalim, E. M., Bonnefond, A., Bennaceur-Griscelli, A., Froguel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cells+as+a+potential+tool+for+disease+modelling+and+cell+therapy+in+diabetes.">Pluripotent stem cells as a potential tool for disease modelling and cell therapy in diabetes.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 10 (3), 327-337 (2014).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+diabetes+with+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+pluripotent+stem+cells.">Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 32 (11), 1121-1133 (2014).</li><li>Pagliuca, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+functional+human+pancreatic+beta+cells+in+vitro.">Generation of functional human pancreatic beta cells in vitro.</a> Cell. 159 (2), 428-439 (2014).</li><li>Nair, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulating+endocrine+cell+clustering+in+culture+promotes+maturation+of+human+stem-cell-derived+&#946;+cells.">Recapitulating endocrine cell clustering in culture promotes maturation of human stem-cell-derived &#946; cells.</a> Nature Cell Biology. 21 (2), 263-274 (2019).</li><li>Russ, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+induction+of+human+pancreatic+progenitors+produces+functional+beta-like+cells+in+vitro.">Controlled induction of human pancreatic progenitors produces functional beta-like cells in vitro.</a> EMBO Journal. 34 (13), 1759-1772 (2015).</li><li>Veres, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Charting+cellular+identity+during+human+in+vitro+&#946;-cell+differentiation.">Charting cellular identity during human in vitro &#946;-cell differentiation.</a> Nature. 569 (7756), 368-373 (2019).</li><li>Hrvatin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiated+human+stem+cells+resemble+fetal,+not+adult,+&#946;+cells.">Differentiated human stem cells resemble fetal, not adult, &#946; cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (8), 3038-3043 (2014).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors+into+functional+islets+capable+of+treating+pre-existing+diabetes+in+mice.">Maturation of human embryonic stem cell-derived pancreatic progenitors into functional islets capable of treating pre-existing diabetes in mice.</a> Diabetes. 61 (8), 2016-2029 (2012).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+human+embryonic+stem+cell-derived+NKX6.1-expressing+pancreatic+progenitor+cells+accelerates+the+maturation+of+insulin-secreting+cells+in+vivo.">Enrichment of human embryonic stem cell-derived NKX6.1-expressing pancreatic progenitor cells accelerates the maturation of insulin-secreting cells in vivo.</a> Stem Cells Journal. 31 (11), 2432-2442 (2013).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+human+embryonic+stem+cell-derived+NKX6.1-expressing+pancreatic+progenitor+cells+accelerates+the+maturation+of+insulin-secreting+cells+in+vivo.">Enrichment of human embryonic stem cell-derived NKX6.1-expressing pancreatic progenitor cells accelerates the maturation of insulin-secreting cells in vivo.</a> Stem Cells Journal. 31 (11), 2432-2442 (2013).</li><li>Bruin, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polyhormonal+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+embryonic+stem+cells.">Characterization of polyhormonal insulin-producing cells derived in vitro from human embryonic stem cells.</a> Stem Cell Research. 12 (1), 194-208 (2014).</li><li>Toyoda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+aggregation+optimizes+the+differentiation+of+human+ESCs+and+iPSCs+into+pancreatic+bud-like+progenitor+cells.">Cell aggregation optimizes the differentiation of human ESCs and iPSCs into pancreatic bud-like progenitor cells.</a> Stem Cell Research. 14 (2), 185-197 (2015).</li><li>Memon, B., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+pancreatic+progenitors+co-expressing+PDX1+and+NKX6.1.">Highly efficient differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic progenitors co-expressing PDX1 and NKX6.1.</a> Methods in Molecular Biology. , (2020).</li><li>Memon, B., Karam, M., Al-Khawaga, S., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+pancreatic+progenitors+co-expressing+PDX1+and+NKX6.1.">Enhanced differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic progenitors co-expressing PDX1 and NKX6.1.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 15 (2018).</li><li>Aigha, I. I., Memon, B., Elsayed, A. K., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+two+distinct+NKX6.1+populations+of+pancreatic+progenitors.">Differentiation of human pluripotent stem cells into two distinct NKX6.1 populations of pancreatic progenitors.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 83 (2018).</li><li>Ali, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinocytes+derived+from+patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells+recapitulate+the+genetic+signature+of+psoriasis+disease.">Keratinocytes derived from patient-specific induced pluripotent stem cells recapitulate the genetic signature of psoriasis disease.</a> Stem Cells and Development. 29 (7), 383-400 (2020).</li><li>Elsayed, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+human+induced+pluripotent+stem+cell+line+(QBRIi009-A)+from+a+patient+with+a+heterozygous+deletion+of+FOXA2.">Generation of a human induced pluripotent stem cell line (QBRIi009-A) from a patient with a heterozygous deletion of FOXA2.</a> Stem Cell Research. 42, 101705 (2020).</li><li>Davenport, C., Diekmann, U., Budde, I., Detering, N., Naujok, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+patterning+of+definitive+endoderm+generated+from+human+embryonic+stem+cells+depends+on+the+differential+signaling+of+retinoic+acid,+Wnt-,+and+BMP-signaling.">Anterior-posterior patterning of definitive endoderm generated from human embryonic stem cells depends on the differential signaling of retinoic acid, Wnt-, and BMP-signaling.</a> Stem Cells. 34 (11), 2635-2647 (2016).</li><li>Schroeder, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+selection+of+Sox17-expressing+endoderm+cells+generated+from+murine+embryonic+stem+cells.">Induction and selection of Sox17-expressing endoderm cells generated from murine embryonic stem cells.</a> Cells Tissues Organs. 195 (6), 507-523 (2012).</li><li>Nostro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+NKX6-1++pancreatic+progenitors+from+multiple+human+pluripotent+stem+cell+lines.">Efficient generation of NKX6-1+ pancreatic progenitors from multiple human pluripotent stem cell lines.</a> Stem Cell Reports. 4 (4), 591-604 (2015).</li><li>Elsayed, A. K., Younis, I., Ali, G., Hussain, K., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+development+of+pancreatic+beta+cells+derived+from+human+iPSCs+with+FOXA2+deficiency.">Aberrant development of pancreatic beta cells derived from human iPSCs with FOXA2 deficiency.</a> Cell Death &amp; Disease. 12 (1), 103 (2021).</li><li>Mfopou, J. K., Chen, B., Mateizel, I., Sermon, K., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noggin,+retinoids,+and+fibroblast+growth+factor+regulate+hepatic+or+pancreatic+fate+of+human+embryonic+stem+cells.">Noggin, retinoids, and fibroblast growth factor regulate hepatic or pancreatic fate of human embryonic stem cells.</a> Gastroenterology. 138 (7), 1-14 (2010).</li><li>Mfopou, J. K., De Groote, V., Xu, X., Heimberg, H., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+and+other+soluble+factors+from+differentiating+embryoid+bodies+inhibit+pancreas+development.">Sonic hedgehog and other soluble factors from differentiating embryoid bodies inhibit pancreas development.</a> Stem Cells. 25 (5), 1156-1165 (2007).</li><li>Gattazzo, F., Urciuolo, A., Bonaldo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix:+A+dynamic+microenvironment+for+stem+cell+niche.">Extracellular matrix: A dynamic microenvironment for stem cell niche.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1840 (8), 2506-2519 (2014).</li><li>Watt, F. M., Huck, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+extracellular+matrix+in+regulating+stem+cell+fate.">Role of the extracellular matrix in regulating stem cell fate.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 14 (8), 467-473 (2013).</li><li>Shih, H. P., Panlasigui, D., Cirulli, V., Sander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECM+signaling+regulates+collective+cellular+dynamics+to+control+pancreas+branching+morphogenesis.">ECM signaling regulates collective cellular dynamics to control pancreas branching morphogenesis.</a> Cell Reports. 14 (2), 169-179 (2016).</li><li>Raza, A., Ki, C. S., Lin, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+matrix+properties+on+growth+and+morphogenesis+of+human+pancreatic+ductal+epithelial+cells+in+3D.">The influence of matrix properties on growth and morphogenesis of human pancreatic ductal epithelial cells in 3D.</a> Biomaterials. 34 (21), 5117-5127 (2013).</li><li>Lin, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+and+laminin+promote+differentiation+of+human+mesenchymal+stem+cells+into+insulin+producing+cells+through+activating+Akt+and+ERK.">Fibronectin and laminin promote differentiation of human mesenchymal stem cells into insulin producing cells through activating Akt and ERK.</a> Journal of Biomedical Science. 17, 56 (2010).</li><li>Boretti, M. I., Gooch, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+extracellular+matrix+and+3D+morphogenesis+on+islet+hormone+gene+expression+by+Ngn3-infected+mouse+pancreatic+ductal+epithelial+cells.">Effect of extracellular matrix and 3D morphogenesis on islet hormone gene expression by Ngn3-infected mouse pancreatic ductal epithelial cells.</a> Tissue Engineering Part A. 14 (12), 1927-1937 (2008).</li><li>Boretti, M. I., Gooch, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+cell+clustering+enhances+islet+beta+cell+formation+from+human+cultures+enriched+for+pancreatic+ductal+epithelial+cells.">Induced cell clustering enhances islet beta cell formation from human cultures enriched for pancreatic ductal epithelial cells.</a> Tissue Engineering. 12 (4), 939-948 (2006).</li><li>Beattie, G. M., Rubin, J. S., Mally, M. I., Otonkoski, T., Hayek, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+proliferation+and+differentiation+of+human+fetal+pancreatic+islet+cells+by+extracellular+matrix,+hepatocyte+growth+factor,+and+cell-cell+contact.">Regulation of proliferation and differentiation of human fetal pancreatic islet cells by extracellular matrix, hepatocyte growth factor, and cell-cell contact.</a> Diabetes. 45 (9), 1223-1228 (1996).</li><li>Gage, B. K., Webber, T. D., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+cell+seeding+density+influences+pancreatic+endocrine+development+during+in+vitro+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells.">Initial cell seeding density influences pancreatic endocrine development during in vitro differentiation of human embryonic stem cells.</a> PLoS One. 8 (12), 82076 (2013).</li></ol>

עבודה זו מתארת פרוטוקול משופר ליצירת אבות לבלב מ- hPSCs עם ביטוי משותף גבוה של PDX1 ו- NKX6.1. דיסוציאציה וציפוי מחדש של האנדודרם שמקורו ב-hPSC בחצי צפיפות על מטריצה טרייה הביאו ל-PDX1 ו-NKX6.1 גבוהים יותר באבות לבלב שמקורם ב-hPSC.
למרות שקוקטייל גורם הגדילה עבור כל שלב דומה מאוד ל- P1-ND<sup class="xref...

סוכרת היא הפרעה מטבולית מורכבת המשפיעה על מיליוני אנשים ברחבי העולם. תוספת של אינסולין נחשבת לאפשרות הטיפול היחידה בסוכרת. מקרים מתקדמים יותר מטופלים באמצעות טיפול בהחלפת תאי בטא, המושג באמצעות השתלת לבלב שלם או איים 1,2. מספר סוגיות מקיפות את הטיפול בהשתלה, כגון הגבלה בזמינות ובאיכות הרקמה, פולשנות של הליכי השתלה בנוסף לצורך המתמשך בתרופות מדכאות חיסון. זה מחייב את הצורך בגילוי אפשרויות חדשניות ואלטרנטיביות לטיפול בתחליפי תאי בטא 2,3. תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSCs) התגלו לאחרונה ככלי מבטיח להבנת הביולוגיה של הלבלב האנושי וכמקור לא ממצה ואולי מותאם אישית יותר לטיפול בהשתלות 4,5,6,7. hPSCs, כולל תאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) ותאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי האדם (hiPSCs), הם בעלי יכולת התחדשות עצמית גבוהה ומעוררים כל סוג רקמה של גוף האדם. hESCs מופקים ממסת התא הפנימית של העובר, ו- hiPSCs מתוכנתים מחדש מכל תא סומטי 4,8.
פרוטוקולי התמיינות מכוונים ממוטבים ליצירת תאי בטא בלבלב מ-hPSCs המכוונים ברצף hPSCs דרך שלבי התפתחות הלבלב. פרוטוקולים אלה מייצרים אורגנואידים של איון שמקורם ב-hPSC. בעוד שהם השתפרו מאוד בהגדלת חלקם של תאי בטא בלבלב בהם, היעילות של פרוטוקולים משתנה מאוד. זה לא עולה ליותר מ ~ 40% של NKX6.1+/אינסולין+ או C-פפטיד + תאים 5,9,10,11,12,13. עם זאת, תאי הבטא שנוצרו אינם זהים לחלוטין לתאי הבטא האנושיים הבוגרים מבחינת פרופילי השעתוק וחילוף החומרים שלהם ותגובתם לגלוקוז 4,5,14. תאי הבטא שמקורם ב-hPSC חסרים ביטוי גנטי של סמני תאי בטא מרכזיים כגון PCSK2, PAX6, UCN3, MAFA, G6PC2 ו-KCNK3 בהשוואה לאיים5 של בני אדם בוגרים. בנוסף, תאי הבטא שמקורם ב-hPSC הפחיתו את איתות הסידן בתגובה לגלוקוז. הם מזוהמים בתאים הפוליהורמונליים שנוצרו במשותף שאינם מפרישים כמויות מתאימות של אינסולין בתגובה להעלאת רמות הגלוקוז5. מצד שני, אבות לבלב שמקורם ב-hPSC, שהם מבשרי איונים, יכולים להיווצר בצורה יעילה יותר במבחנה בהשוואה לתאי בטא, וכאשר הם מושתלים ב-vivo, הם יכולים להבשיל לתאי בטא מתפקדים המפרישים אינסולין15,16. ניסויים קליניים מתמקדים כיום בהוכחת בטיחותם ויעילותם בעת השתלה בנבדקי T1D.
יש לציין כי ביטוי של גורמי השעתוק PDX1 (הומיאובוקס של הלבלב ותריסריון 1) ו- NKX6.1 (NKX6 Homeobox 1) בתוך אותו תא אב בלבלב הוא חיוני למחויבות כלפי שושלת תאי בטא5. אבות לבלב שאינם מצליחים לבטא את NKX6.1 מולידים תאים אנדוקריניים פוליהורמונליים או תאי בטא לא מתפקדים17,18. לכן, ביטוי משותף גבוה של PDX1 ו- NKX6.1 בשלב האב של הלבלב חיוני ליצירת מספר רב של תאי בטא פונקציונליים. מחקרים הראו כי גוף עוברי או תרבית תלת-ממדית משפרים את PDX1 ו-NKX6.1 אצל אבות לבלב שבהם התאים המתמיינים מצטברים, ונעים בין 40%-80% מאוכלוסיית PDX1+/NKX6.1+12,19. עם זאת, בהשוואה לתרביות השעיה, תרביות התמיינות דו-ממדיות הן חסכוניות יותר, ישימות ונוחות יותר ליישום בקווי תאיםמרובים 5. לאחרונה הראינו שתרביות בידול חד-שכבתי מניבות יותר מ-90% מ-PDX1+/NKX6.1+ המבטא במשותף20,21,22 אבות לבלב שמקורם ב-hPSC. השיטה המדווחת העניקה יכולת שכפול גבוהה לאבות הלבלב שנוצרו ומנעה מפרטי גורל חלופיים כגון שושלת הכבד21. לכן, כאן, פרוטוקול זה מדגים שיטה יעילה ביותר להתמיינות של hPSCs למבשרי תאי בטא בלבלב המבטאים במשותף PDX1 ו- NKX6.1. שיטה זו משתמשת בטכניקה של ניתוק אנדודרם שמקורו ב-hPSC ומניפולציה של צפיפות התא, ולאחר מכן איתות FGF ורטינואידי מורחב, כמו גם עיכוב קיפוד כדי לקדם ביטוי משותף של PDX1 ו-NKX6.1 (איור 1). שיטה זו יכולה להקל על דור מדרגי של מבשרי תאי בטא בלבלב שמקורם ב-hPSC לטיפול בהשתלות ומידול מחלות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL, conical, centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20X TBS Tween 20</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>28360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well culture plates, flat bottom with lid</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL, conical, centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6- well culture plates, multidish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>140685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>0-7920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activin A</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>338-AC</td>
			<td>Reconstituted in 4 mM HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti NKX6.1 antibody, mouse monoclonal</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>F55A12-C</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:2000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PDX1 antibody, guinea pig polyclonal</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab47308</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:1000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 minus Vit A</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin, heat shock fraction, fatty acid free</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR 99021</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>4423</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>41965047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H + L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 568</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG (H + L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td></td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS 1X</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>PHG0313</td>
			<td>Reconstituted in 0.1% BSA in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF10</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>345-FG</td>
			<td>Reconstituted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G8644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33258</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>23491-45-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX73</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut DMEM/F-12 (1X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12660-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut SR serum replacement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10828-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid (vitamin C)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A92902</td>
			<td>Reconstituted in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>Aliquot the thawed stock and freeze at -20C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCDB131</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10372019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-SOX17</td>
			<td>ORIGENE</td>
			<td>CF500096</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:2000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR Plus</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>85850</td>
			<td>Mix the basal media with supplement. Aliquot and store at -20 &#176;C for longer time or at 4 &#176;C for instant use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene filter units, 0.2 &#181;m PES</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>566-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>72340</td>
			<td>Reconstituted in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOGGIN</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>6057-NG</td>
			<td>Reconstituted in 0.1% BSA in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde solution 4% in PBS</td>
			<td>ChemCruz</td>
			<td>sc-281692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable vacuum aspirator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-FOXA2</td>
			<td>Cell signaling technology</td>
			<td>3143</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:500 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rock inhibitor (Y-27632)</td>
			<td>ReproCell</td>
			<td>04-0012-02</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round Bottom Polystyrene FACS Tubes with Caps, STERILE</td>
			<td>Stellar Scientific</td>
			<td>FSC-9010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SANT-1</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4572</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemFlex</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A3349401</td>
			<td>Mix the basal media with supplement. Aliquot and store at -20 &#176;C for longer time or at 4 &#176;C for instant use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TALI Cellular Analysis Slide</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tali image-based cytometer automated cell counter</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE 100 mL</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12563011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15575-038</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic beta-cell precursors in a 2d culture system

תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSCs) הם כלי מצוין לחקר התפתחות מוקדמת של הלבלב ולחקר התורמים הגנטיים לסוכרת. תאים מפרישי אינסולין שמקורם ב-hPSC יכולים להיווצר לצורך טיפול בתאים ומידול מחלות, עם יעילות מוגבלת ותכונות תפקודיות. אבות לבלב שמקורם ב-hPSC שהם מבשרי תאי בטא ותאים אנדוקריניים אחרים, כאשר מבטאים במשותף את שני גורמי השעתוק PDX1 ו-NKX6.1, מציינים את אבות האב לתאי בטא מתפקדים המפרישים אינסולין הן במבחנה והן ב-in vivo. אבות לבלב שמקורם ב-hPSC משמשים כיום לטיפול בתאים בחולי סוכרת מסוג 1 כחלק מניסויים קליניים. עם זאת, ההליכים הנוכחיים אינם מייצרים שיעור גבוה של NKX6.1 ואבות לבלב, מה שמוביל לייצור משותף של תאים אנדוקריניים לא מתפקדים ומעט תאים מגיבים לגלוקוז ומפרישי אינסולין. עבודה זו פיתחה אפוא פרוטוקול משופר ליצירת אבות לבלב שמקורם ב-hPSC, אשר ממקסמים את הביטוי המשותף של PDX1 ו-NKX6.1 במונו-שכבה דו-ממדית. הגורמים כגון צפיפות תאים, זמינות של מטריצה טרייה ודיסוציאציה של תאים אנדודרמליים שמקורם ב-hPSC מווסתים שהגדילו את רמות PDX1 ו-NKX6.1 באבות הלבלב שנוצרו וצמצמו את המחויבות לשושלת הכבד החלופית. המחקר מדגיש כי מניפולציה של הסביבה הפיזית של התא במהלך התמיינות במבחנה יכולה להשפיע על מפרט השושלת ועל ביטוי הגנים. לכן, הפרוטוקול הממוטב הנוכחי מאפשר את הדור הניתן להרחבה של PDX1 ו- NKX6.1 המבטאים צאצאים משותפים לטיפול בתאים ומידול מחלות.

התוצאות מראות כי פרוטוקול P2-D ממוטב (איורים 1A) שיפר את יעילות ההתמיינות של אבות הלבלב על-ידי ויסות הביטוי המשותף PDX1 ו-NKX6.1 (איור 2A,B ואיור 3A). בפרט, התוצאות הראו כי דיסוציאציה של תאים אנדודרמליים וציפוי מחדש שלהם על מטריצת ממברנה טרייה ?...

Watch this Scientific Journal Video about Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System at JoVE.com

Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה משופרת להגברת הביטוי המשותף של פקטורי שעתוק PDX1 ו-NKX6.1 באבות לבלב שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSCs) בחד-שכבתיים מישוריים. זה מושג על ידי חידוש המטריצה הטרייה, מניפולציה של צפיפות התא, וניתוק התאים האנדודרמליים.

התמיינות של תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים למבשרי תאי בטא בלבלב במערכת תרבית דו-ממדית

Human pluripotent stem cells (hPSCs) are an excellent tool for studying early pancreatic development and investigating the genetic contributors to ...

פרוטוקול ממוטב זה שיפר את ייצורם של מבשרי תאי בטא בלבלב מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים, אשר יכולים לשמש לטיפול בתאים לסוכרת ולחקר מנגנונים מולקולריים המדגישים את הביוגנזה של סוכרת. זוהי טכניקה אפשרית מכיוון שהיא משמשת לתרבויות חד-שכבתיות דו-ממדיות. הוא קל ליישום, והוא עקבי על פני קווי בקרה מרובים ותאי גזע פלוריפוטנטיים שמקורם בחולה.מבשרי תאי בטא אלה כאשר הם מושתלים בחולה סוכרת יכולים להבשיל לתאי בטא המפרישים אינסולין, ועלולים להפוך היפרגליקמיה. לכן, האחוזים המוגדלים של אבות הלבלב שנוצרו באמצעות הפרוטוקול שלנו יכולים לשמש לטיפול תאי בסוכרת. פרוטוקול משופר זה יכול לשמש לחקר התפתחות מוקדמת של הלבלב האנושי אצל אנשים בריאים, כמו גם בחולי סוכרת, דבר המאתגר בשל מחסור בדגימות רקמות.כאשר תאי הגזע הפלוריפוטנטיים האנושיים או מושבות hPSC הגיעו למפגש של 70% עד 80%, שטפו אותם פעמיים עם PBS חם בתוך מכסה המנוע של תרבית הרקמה. לאחר מכן שאפו את המאגר באמצעות שואב אבק נייד. לאחר מכן, הוסיפו למושבות מדיום בידול שלב ראשון המכיל CHIR-99021, ודגרו את הצלחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.למחרת, החלף את המדיה המבוזבזת במדיום בידול שלב ראשון ללא CHIR-99021. לאחר שאיפת המדיום המושקע ושטיפת תאי האנדודרם הסופיים פעמיים עם PBS חם, סובבו את הצלחת כדי להסיר כל פסולת תאים. לאחר מכן לתקן את התאים על ידי הוספת 4% paraformaldehyde, ומניחים את הצלחת על שייקר דו מימדי.לאחר הקיבוע, שטפו את התאים בתמיסת מלח אטומה TRIS המכילה 0.5% Tween, והניחו את הצלחת על השייקר. לאחר מכן יש לחדור לתאים הקבועים על ידי הוספת כמות נדיבה של PBS המכיל 0.5% טריטון X-100 ולהניח את הצלחת בחזרה על השייקר. לאחר מכן, מוסיפים חיץ חוסם טרי מוכן לתאים המחלחלים, ודוגרים את הצלחת במשך שעה אחת על השייקר.לאחר מכן מוסיפים נוגדנים ראשוניים מדוללים לתאים החסומים, ומניחים את הצלחת על השייקר בארבע מעלות צלזיוס עם טלטול עדין. למחרת לאחר שאיפת תמיסת הנוגדנים העיקרית, יש לשטוף את הבארות שלוש פעמים עם TBST במשך 10 דקות כל אחת על השייקר. לאחר מכן, מוסיפים את הנוגדנים המשניים.מכסים את הצלחת ברדיד אלומיניום להגנה מפני אור, ומניחים את הצלחת על השייקר בטמפרטורת החדר למשך שעה. לאחר מכן לשאוף את פתרון הנוגדנים המשני, ולשטוף את הבארות המוכתמות עם TBST על השייקר במשך 10 דקות, שמירה על הצלחת מכוסה בנייר כסף. לאחר מכן, כדי להכתים את הגרעינים, מוסיפים תמיסת Hoechst לבארות ומניחים את הצלחת על השייקר.לאחר שתיים-שלוש דקות, שאפו את תמיסת Hoechst ושטפו את הבארות פעמיים עם PBS. לבסוף, הוסף PBS לתאים המוכתמים, וצלם אותם באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך בחושך. ביום הראשון של השלב השני, יש לנתק את התאים האנדודרמליים שמקורם ב-hPSC על ידי שטיפתם תחילה ב-PBS חם, ולאחר מכן הוספת מיליליטר אחד של תמיסת אנזים חמה לכל באר של צלחת של שש בארות.מניחים את הצלחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני למשך שלוש עד חמש דקות או עד שהתאים מתחילים להתנתק זה מזה. נתקו את היריעות המנותקות או את המונו-שכבות של התאים בבארות, ואספו את התאים המנותקים יחד בצינור פוליפרופילן של 15 מיליליטר באמצעות חצי מדיה בשלב הבסיס. לאחר מכן סובבו את התאים כלפי מטה, השליכו את הסופר-נטנט והניחו מחדש את הכדור באמצעות מיליליטר אחד של PBS סטרילי.לאחר ספירת התאים באמצעות מונה אוטומטי, סובבו את התאים שוב, והשליכו את הסופרנטנט. לאחר מכן יש להשעות את הכדור בנפח המתאים של מדיום ההתמיינות שלב ב' המכיל מעכב סלע. צלחת את התאים המחודשים על אחד עד 50 לוחות מצופים מטריקס ממברנה לדגור אותם ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני.לאחר 24 שעות, החליפו את המדיה במדיום התמיינות שלב שני ללא מעכב הסלע. בסוף השלב הרביעי, לנתק תאים כפי שהוכח קודם לכן, ולאסוף אותם בצינור 15 מיליליטר. לאחר מכן סובבו את התאים, השליכו את הסופרנטנט, שטפו את התאים עם PBS, ונתקו אותם לתאים בודדים.לאחר ספירת התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי, סובבו את התאים שוב והחזירו את הכדור ב-200 מיקרוליטרים של PBS מקורר. לאחר מכן, הוסף שני מיליליטר של 80% אתנול מקורר טיפה חכם עם הצינור על מערבולת להגדיר מהירות נמוכה עד בינונית. סגרו את המכסה בחוזקה, והניחו את הצינור מוטה מעט על השייקר בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה.למחרת, סובבו את התאים ושטפו את הכדור עם PBS כדי לנתק כל גושים של תאים קבועים. לאחר מכן לחסום את התאים הקבועים למשך שעה לפחות בטמפרטורת החדר או ארבע מעלות צלזיוס בלילה על השייקר. לאחר מכן, כדי להכתים את סמני אב הלבלב, להפיץ 200, 000 תאים לכל מצב כולל בקרות איזוטיפ מתאימות, בקרות נוגדנים לא מוכתמות ומשניות בצלחת תחתית 96 ובכן V.לאחר מכן סובבו את הצלחת לזמן קצר, והפכו את הצלחת בתנועה מהירה כדי להשליך את הסופר-נטנט מבלי לאבד את הכדורים. לאחר מכן, דגירה של התאים בנוגדנים ראשוניים למשך שעתיים לפחות בטמפרטורת החדר על שייקר עם טלטול עדין. לאחר מכן לשטוף את התאים המוכתמים שלוש פעמים עם TBST על ידי pipetting למעלה ולמטה בבארות.צנטריפוגה של התאים שוב, להשליך את supernatant, ולהוסיף נוגדנים משניים לתאים. לאחר דגירה של 30 דקות בטמפרטורת החדר, שטפו את התאים המוכתמים פעמיים עם TBST. לאחר מכן סובבו את הצלחת, אספו את התאים המוכתמים ב-100 מיקרוליטרים של PBS בצינורות פקס מוגנים באור, והפעילו את הדגימות על מכונת ציטומטריה של זרימה.בהשוואה לשיטה הלא ממוטבת, הפרוטוקול הממוטב שיפר את יעילות בידול אבות הלבלב על ידי ויסות הביטוי המשותף של PDX 1 ו- NKX 6.1. בפרט, ההתנתקות של תאים אנדודרמליים וציפוי מחדש שלהם על מטריצת ממברנה טרייה, יחד עם משך זמן ארוך יותר של שלב שלישי, שיפרו את ביטוי NKX 6.1 באבות לבלב שמקורם ב- hPSC בהשוואה לפרוטוקול הלא מנותק. אבות לבלב שנוצרו באמצעות הפרוטוקול הממוטב גם הגדילו את מספר התאים החיוביים של SOX9 בהשוואה לשיטה הלא מנותקת.יתר על כן, השיטה הממוטבת יצרה גם שיעור גבוה יותר של תאים חיוביים מתרבים מסוג NKX 6.1 שביטאו במשותף את סמן ההתרבות Ki67. על מנת לשפר את היעילות, חיוני לנתק את האנדודרם שמקורו בהמוגלובין מסוכרר ולאחר מכן להאריך את משך הטיפול בשלב השלישי עם איתות עמילואיד FGF ועיכוב קיפוד. ייצור מדרגי של אבות לבלב באמצעות פרוטוקול משופר זה הקל על מחקרים על שיפור היעילות וההבשלה של תאי בטא פלוריפוטנטיים אנושיים שמקורם בתאי לבלב ואיפשר מידול של סוגים שונים של סוכרת.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

Culturing האדם pluripotent ואת עצבי תאי גזע מערכת תרבית תאים סגורות למחקר בסיסי פרה

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

ייצור בקנה מידה גדולה של cardiomyocytes מתאי גזע פלוריפוטנטיים אדם באמצעות פרוטוקול בידול מולקולה קטן המבוססת לשחזור ביותר

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

ביים הבידול של אבות Hematopoietic פרימיטיבי, מהווים הסופית מתאי גזע Pluripotent אנושי

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

בידול יעיל של pluripotent בתאי גזע כדי NKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; אבות הלבלב

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

במבחנה בידול של האדם pluripotent בתאי גזע לתאי Trophoblastic

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

במבחנה הבידול של גזע Mesenchymal אנושי לתוך תאים דמויי Cardiomyocyte תפקודית

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

יעיל הבידול של תאים האדם Pluriפוטנטי לתוך תאי הכבד

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

בדור חוץ גופית של Somite נגזרים מן האדם המושרה בתאי גזע Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Directed Differentiation of Hemogenic Endothelial Cells from Human Pluripotent Stem Cells

התמיינות מכוונת של תאי אנדותל המוגניים מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים

Blood vessels are ubiquitously distributed within all tissues of the body and perform diverse functions. Thus, derivation of mature vascular endothelial ...

Isolation of Rat Adipose Tissue Mesenchymal Stem Cells for Differentiation into Insulin-producing Cells

בידוד של תאי גזע מזנכימליים של רקמת שומן חולדה לצורך התמיינות לתאים המייצרים אינסולין

Mesenchymal stem cells (MSCs)-especially those isolated from adipose tissue (Ad-MSCs)-have gained special attention as a renewable, abundant source of ...