Name: differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic beta-cell precursors in a 2d culture system
Uploaded: 2021-12-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System at JoVE.com

Este trabalho foi financiado por uma doação do Qatar National Research Fund (QNRF) (Grant No. NPRP10-1221-160041).

O estudo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa institucional apropriado e realizado de acordo com os padrões éticos estabelecidos na Declaração de Helsinque de 1964 e suas alterações posteriores ou padrões éticos comparáveis. O protocolo foi aprovado pelo Conselho de Revisão Institucional (IRB) do HMC (nº 16260/16) e pelo Qatar Biomedical Research Institute (QBRI) (nº 2016-003). Este trabalho é otimizado para hESCs como H1, H9 e HUES8. Amostras de sangue foram obtidas de indivíduos saudáveis do h...

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	<li>Rickels, M. R., Robertson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+islet+transplantation+in+humans:+Recent+progress+and+future+directions.">Pancreatic islet transplantation in humans: Recent progress and future directions.</a> Endocrine Reviews. 40 (2), 631-668 (2019).</li><li>Latres, E., Finan, D. A., Greenstein, J. L., Kowalski, A., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Navigating+two+roads+to+glucose+normalization+in+diabetes:+Automated+insulin+delivery+devices+and+cell+therapy.">Navigating two roads to glucose normalization in diabetes: Automated insulin delivery devices and cell therapy.</a> Cell Metabolism. 29 (3), 545-563 (2019).</li><li>Vaithilingam, V., Tuch, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+and+encapsulation:+An+update+on+recent+developments.">Islet transplantation and encapsulation: An update on recent developments.</a> Review of Diabetic Studies. 8 (1), 51-67 (2011).</li><li>Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+different+types+of+diabetes+using+human+pluripotent+stem+cells.">Modeling different types of diabetes using human pluripotent stem cells.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 78 (6), 2459-2483 (2021).</li><li>Memon, B., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+diabetes:+Beta+cells+versus+pancreatic+progenitors.">Stem cell therapy for diabetes: Beta cells versus pancreatic progenitors.</a> Cells. 9 (2), 283 (2020).</li><li>Balboa, D., Iworima, D. G., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pluripotent+stem+cells+to+model+islet+defects+in+diabetes.">Human pluripotent stem cells to model islet defects in diabetes.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 12, 642152 (2021).</li><li>Gaertner, B., Carrano, A. C., Sander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell+models:+Lessons+for+pancreatic+development+and+disease.">Human stem cell models: Lessons for pancreatic development and disease.</a> Genes &amp; Development. 33 (21-22), 1475-1490 (2019).</li><li>Abdelalim, E. M., Bonnefond, A., Bennaceur-Griscelli, A., Froguel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cells+as+a+potential+tool+for+disease+modelling+and+cell+therapy+in+diabetes.">Pluripotent stem cells as a potential tool for disease modelling and cell therapy in diabetes.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 10 (3), 327-337 (2014).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+diabetes+with+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+pluripotent+stem+cells.">Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 32 (11), 1121-1133 (2014).</li><li>Pagliuca, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+functional+human+pancreatic+beta+cells+in+vitro.">Generation of functional human pancreatic beta cells in vitro.</a> Cell. 159 (2), 428-439 (2014).</li><li>Nair, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulating+endocrine+cell+clustering+in+culture+promotes+maturation+of+human+stem-cell-derived+&#946;+cells.">Recapitulating endocrine cell clustering in culture promotes maturation of human stem-cell-derived &#946; cells.</a> Nature Cell Biology. 21 (2), 263-274 (2019).</li><li>Russ, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+induction+of+human+pancreatic+progenitors+produces+functional+beta-like+cells+in+vitro.">Controlled induction of human pancreatic progenitors produces functional beta-like cells in vitro.</a> EMBO Journal. 34 (13), 1759-1772 (2015).</li><li>Veres, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Charting+cellular+identity+during+human+in+vitro+&#946;-cell+differentiation.">Charting cellular identity during human in vitro &#946;-cell differentiation.</a> Nature. 569 (7756), 368-373 (2019).</li><li>Hrvatin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiated+human+stem+cells+resemble+fetal,+not+adult,+&#946;+cells.">Differentiated human stem cells resemble fetal, not adult, &#946; cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (8), 3038-3043 (2014).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors+into+functional+islets+capable+of+treating+pre-existing+diabetes+in+mice.">Maturation of human embryonic stem cell-derived pancreatic progenitors into functional islets capable of treating pre-existing diabetes in mice.</a> Diabetes. 61 (8), 2016-2029 (2012).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+human+embryonic+stem+cell-derived+NKX6.1-expressing+pancreatic+progenitor+cells+accelerates+the+maturation+of+insulin-secreting+cells+in+vivo.">Enrichment of human embryonic stem cell-derived NKX6.1-expressing pancreatic progenitor cells accelerates the maturation of insulin-secreting cells in vivo.</a> Stem Cells Journal. 31 (11), 2432-2442 (2013).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+human+embryonic+stem+cell-derived+NKX6.1-expressing+pancreatic+progenitor+cells+accelerates+the+maturation+of+insulin-secreting+cells+in+vivo.">Enrichment of human embryonic stem cell-derived NKX6.1-expressing pancreatic progenitor cells accelerates the maturation of insulin-secreting cells in vivo.</a> Stem Cells Journal. 31 (11), 2432-2442 (2013).</li><li>Bruin, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polyhormonal+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+embryonic+stem+cells.">Characterization of polyhormonal insulin-producing cells derived in vitro from human embryonic stem cells.</a> Stem Cell Research. 12 (1), 194-208 (2014).</li><li>Toyoda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+aggregation+optimizes+the+differentiation+of+human+ESCs+and+iPSCs+into+pancreatic+bud-like+progenitor+cells.">Cell aggregation optimizes the differentiation of human ESCs and iPSCs into pancreatic bud-like progenitor cells.</a> Stem Cell Research. 14 (2), 185-197 (2015).</li><li>Memon, B., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+pancreatic+progenitors+co-expressing+PDX1+and+NKX6.1.">Highly efficient differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic progenitors co-expressing PDX1 and NKX6.1.</a> Methods in Molecular Biology. , (2020).</li><li>Memon, B., Karam, M., Al-Khawaga, S., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+pancreatic+progenitors+co-expressing+PDX1+and+NKX6.1.">Enhanced differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic progenitors co-expressing PDX1 and NKX6.1.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 15 (2018).</li><li>Aigha, I. I., Memon, B., Elsayed, A. K., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+two+distinct+NKX6.1+populations+of+pancreatic+progenitors.">Differentiation of human pluripotent stem cells into two distinct NKX6.1 populations of pancreatic progenitors.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 83 (2018).</li><li>Ali, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinocytes+derived+from+patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells+recapitulate+the+genetic+signature+of+psoriasis+disease.">Keratinocytes derived from patient-specific induced pluripotent stem cells recapitulate the genetic signature of psoriasis disease.</a> Stem Cells and Development. 29 (7), 383-400 (2020).</li><li>Elsayed, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+human+induced+pluripotent+stem+cell+line+(QBRIi009-A)+from+a+patient+with+a+heterozygous+deletion+of+FOXA2.">Generation of a human induced pluripotent stem cell line (QBRIi009-A) from a patient with a heterozygous deletion of FOXA2.</a> Stem Cell Research. 42, 101705 (2020).</li><li>Davenport, C., Diekmann, U., Budde, I., Detering, N., Naujok, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+patterning+of+definitive+endoderm+generated+from+human+embryonic+stem+cells+depends+on+the+differential+signaling+of+retinoic+acid,+Wnt-,+and+BMP-signaling.">Anterior-posterior patterning of definitive endoderm generated from human embryonic stem cells depends on the differential signaling of retinoic acid, Wnt-, and BMP-signaling.</a> Stem Cells. 34 (11), 2635-2647 (2016).</li><li>Schroeder, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+selection+of+Sox17-expressing+endoderm+cells+generated+from+murine+embryonic+stem+cells.">Induction and selection of Sox17-expressing endoderm cells generated from murine embryonic stem cells.</a> Cells Tissues Organs. 195 (6), 507-523 (2012).</li><li>Nostro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+NKX6-1++pancreatic+progenitors+from+multiple+human+pluripotent+stem+cell+lines.">Efficient generation of NKX6-1+ pancreatic progenitors from multiple human pluripotent stem cell lines.</a> Stem Cell Reports. 4 (4), 591-604 (2015).</li><li>Elsayed, A. K., Younis, I., Ali, G., Hussain, K., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+development+of+pancreatic+beta+cells+derived+from+human+iPSCs+with+FOXA2+deficiency.">Aberrant development of pancreatic beta cells derived from human iPSCs with FOXA2 deficiency.</a> Cell Death &amp; Disease. 12 (1), 103 (2021).</li><li>Mfopou, J. K., Chen, B., Mateizel, I., Sermon, K., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noggin,+retinoids,+and+fibroblast+growth+factor+regulate+hepatic+or+pancreatic+fate+of+human+embryonic+stem+cells.">Noggin, retinoids, and fibroblast growth factor regulate hepatic or pancreatic fate of human embryonic stem cells.</a> Gastroenterology. 138 (7), 1-14 (2010).</li><li>Mfopou, J. K., De Groote, V., Xu, X., Heimberg, H., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+and+other+soluble+factors+from+differentiating+embryoid+bodies+inhibit+pancreas+development.">Sonic hedgehog and other soluble factors from differentiating embryoid bodies inhibit pancreas development.</a> Stem Cells. 25 (5), 1156-1165 (2007).</li><li>Gattazzo, F., Urciuolo, A., Bonaldo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix:+A+dynamic+microenvironment+for+stem+cell+niche.">Extracellular matrix: A dynamic microenvironment for stem cell niche.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1840 (8), 2506-2519 (2014).</li><li>Watt, F. M., Huck, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+extracellular+matrix+in+regulating+stem+cell+fate.">Role of the extracellular matrix in regulating stem cell fate.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 14 (8), 467-473 (2013).</li><li>Shih, H. P., Panlasigui, D., Cirulli, V., Sander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECM+signaling+regulates+collective+cellular+dynamics+to+control+pancreas+branching+morphogenesis.">ECM signaling regulates collective cellular dynamics to control pancreas branching morphogenesis.</a> Cell Reports. 14 (2), 169-179 (2016).</li><li>Raza, A., Ki, C. S., Lin, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+matrix+properties+on+growth+and+morphogenesis+of+human+pancreatic+ductal+epithelial+cells+in+3D.">The influence of matrix properties on growth and morphogenesis of human pancreatic ductal epithelial cells in 3D.</a> Biomaterials. 34 (21), 5117-5127 (2013).</li><li>Lin, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+and+laminin+promote+differentiation+of+human+mesenchymal+stem+cells+into+insulin+producing+cells+through+activating+Akt+and+ERK.">Fibronectin and laminin promote differentiation of human mesenchymal stem cells into insulin producing cells through activating Akt and ERK.</a> Journal of Biomedical Science. 17, 56 (2010).</li><li>Boretti, M. I., Gooch, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+extracellular+matrix+and+3D+morphogenesis+on+islet+hormone+gene+expression+by+Ngn3-infected+mouse+pancreatic+ductal+epithelial+cells.">Effect of extracellular matrix and 3D morphogenesis on islet hormone gene expression by Ngn3-infected mouse pancreatic ductal epithelial cells.</a> Tissue Engineering Part A. 14 (12), 1927-1937 (2008).</li><li>Boretti, M. I., Gooch, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+cell+clustering+enhances+islet+beta+cell+formation+from+human+cultures+enriched+for+pancreatic+ductal+epithelial+cells.">Induced cell clustering enhances islet beta cell formation from human cultures enriched for pancreatic ductal epithelial cells.</a> Tissue Engineering. 12 (4), 939-948 (2006).</li><li>Beattie, G. M., Rubin, J. S., Mally, M. I., Otonkoski, T., Hayek, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+proliferation+and+differentiation+of+human+fetal+pancreatic+islet+cells+by+extracellular+matrix,+hepatocyte+growth+factor,+and+cell-cell+contact.">Regulation of proliferation and differentiation of human fetal pancreatic islet cells by extracellular matrix, hepatocyte growth factor, and cell-cell contact.</a> Diabetes. 45 (9), 1223-1228 (1996).</li><li>Gage, B. K., Webber, T. D., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+cell+seeding+density+influences+pancreatic+endocrine+development+during+in+vitro+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells.">Initial cell seeding density influences pancreatic endocrine development during in vitro differentiation of human embryonic stem cells.</a> PLoS One. 8 (12), 82076 (2013).</li></ol>

Este trabalho descreve um protocolo aprimorado para a geração de progenitores pancreáticos a partir de hPSCs com alta co-expressão de PDX1 e NKX6.1. A dissociação e o replating da endoderma derivada de hPSC à meia densidade em matriz fresca resultaram em PDX1 e NKX6.1 mais elevados em progenitores pancreáticos derivados de hPSC.
Embora o coquetel do fator de crescimento para cada estágio seja altamente semelhante ao P1-ND 27, foi demonstrado que um tratamento mais prolongado do Estág...

O diabetes é um distúrbio metabólico complexo que afeta milhões de pessoas em todo o mundo. A suplementação de insulina é considerada a única opção de tratamento para diabetes. Casos mais avançados são tratados com terapia de reposição de células beta, obtida por meio de transplante de pâncreas cadavérico inteiro ou ilhotas 1,2. Diversas questões envolvem a terapia de transplante, como a limitação com a disponibilidade e qualidade do tecido, a invasividade dos procedimentos de transplante, além da necessidade contínua de imunossupressores. Isso requer a necessidade de descobrir opções novas e alternativas para a terapia de reposição de células beta 2,3. As células-tronco pluripotentes humanas (hPSCs) emergiram recentemente como uma ferramenta promissora para a compreensão da biologia do pâncreas humano e como uma fonte não exaustiva e potencialmente mais personalizada para a terapia de transplante 4,5,6,7. As hPSCs, incluindo as células estaminais embrionárias humanas (hESCs) e as células estaminais pluripotentes induzidas pelo homem (hiPSCs), têm uma elevada capacidade de auto-renovação e dão origem a qualquer tipo de tecido do corpo humano. As hESCs são derivadas da massa celular interna do embrião e as hiPSCs são reprogramadas a partir de qualquer célula somática 4,8.
Os protocolos de diferenciação dirigida são otimizados para gerar células beta pancreáticas a partir de hPSCs que direcionam sequencialmente as hPSCs através dos estágios de desenvolvimento pancreático invitro. Esses protocolos geram organoides de ilhotas derivados de hPSC. Embora tenham melhorado muito no aumento da proporção de células beta pancreáticas, a eficiência dos protocolos é altamente variável. Não aumenta para mais de ~40% das células NKX6.1+/INSULIN+ ou C-PEPTIDE+ 5,9,10,11,12,13. No entanto, as células beta geradas não são inteiramente idênticas às células beta humanas adultas em termos de seus perfis transcricionais e metabólicos e sua resposta à glicose 4,5,14. As células beta derivadas de hPSC não têm expressão gênica de marcadores de células beta chave, como PCSK2, PAX6, UCN3, MAFA, G6PC2 e KCNK3 em comparação com ilhotas humanas adultas5. Além disso, as células beta derivadas de hPSC diminuíram a sinalização de cálcio em resposta à glicose. Eles estão contaminados com as células poli-hormonais cogeradas que não secretam quantidades adequadas de insulina em resposta ao aumento dos níveis de glicose5. Por outro lado, os progenitores pancreáticos derivados de hPSC, que são precursores de ilhotas, poderiam ser gerados de forma mais eficiente in vitro em comparação com as células beta e, quando transplantados in vivo, poderiam amadurecer em células beta funcionais e secretoras de insulina15,16. Os ensaios clínicos estão atualmente focados em demonstrar sua segurança e eficácia após o transplante em indivíduos com DM1.
Notavelmente, a expressão dos fatores de transcrição PDX1 (Pancreatic and Duodenal Homeobox 1) e NKX6.1 (NKX6 Homeobox 1) dentro da mesma célula progenitora pancreática é crucial para o comprometimento com uma linhagem de células beta5. Progenitores pancreáticos que não expressam NKX6.1 dão origem a células endócrinas poli-hormonais ou células beta não funcionais17,18. Portanto, uma alta co-expressão de PDX1 e NKX6.1 no estágio progenitor pancreático é essencial para gerar um grande número de células beta funcionais. Estudos têm demonstrado que um corpo embrionário ou cultura 3D aumenta PDX1 e NKX6.1 em progenitores pancreáticos onde as células diferenciadoras são agregadas, variando entre 40%-80% da população PDX1+/NKX6.1+12,19. No entanto, em comparação com as culturas de suspensão, as culturas de diferenciação 2D são mais econômicas, viáveis e convenientes para aplicação em múltiplas linhagens celulares5. Recentemente, mostramos que as culturas de diferenciação de monocamadas produzem mais de até 90% de progenitores pancreáticos derivados de hPSC coexpressivos PDX1+/NKX6.1+20,21,22. O método relatado conferiu alta capacidade de replicação aos progenitores pancreáticos gerados e evitou especificações de destino alternativo, como a linhagem hepática21. Portanto, neste documento, este protocolo demonstra um método altamente eficiente para a diferenciação de hPSCs para precursores de células beta pancreáticas co-expressando PDX1 e NKX6.1. Este método utiliza a técnica de dissociação da endoderme derivada da hPSC e manipulação da densidade celular, seguida de uma sinalização estendida de FGF e Retinóide, bem como inibição de Hedgehog para promover a co-expressão de PDX1 e NKX6.1 (Figura 1). Este método pode facilitar uma geração escalável de precursores de células beta pancreáticas derivados de hPSC para terapia de transplante e modelagem de doenças.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL, conical, centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20X TBS Tween 20</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>28360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well culture plates, flat bottom with lid</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL, conical, centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6- well culture plates, multidish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>140685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>0-7920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activin A</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>338-AC</td>
			<td>Reconstituted in 4 mM HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti NKX6.1 antibody, mouse monoclonal</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>F55A12-C</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:2000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PDX1 antibody, guinea pig polyclonal</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab47308</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:1000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 minus Vit A</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin, heat shock fraction, fatty acid free</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR 99021</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>4423</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>41965047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H + L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 568</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG (H + L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td></td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS 1X</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>PHG0313</td>
			<td>Reconstituted in 0.1% BSA in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF10</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>345-FG</td>
			<td>Reconstituted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G8644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33258</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>23491-45-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX73</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut DMEM/F-12 (1X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12660-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut SR serum replacement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10828-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid (vitamin C)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A92902</td>
			<td>Reconstituted in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>Aliquot the thawed stock and freeze at -20C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCDB131</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10372019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-SOX17</td>
			<td>ORIGENE</td>
			<td>CF500096</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:2000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR Plus</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>85850</td>
			<td>Mix the basal media with supplement. Aliquot and store at -20 &#176;C for longer time or at 4 &#176;C for instant use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene filter units, 0.2 &#181;m PES</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>566-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>72340</td>
			<td>Reconstituted in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOGGIN</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>6057-NG</td>
			<td>Reconstituted in 0.1% BSA in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde solution 4% in PBS</td>
			<td>ChemCruz</td>
			<td>sc-281692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable vacuum aspirator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-FOXA2</td>
			<td>Cell signaling technology</td>
			<td>3143</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:500 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rock inhibitor (Y-27632)</td>
			<td>ReproCell</td>
			<td>04-0012-02</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round Bottom Polystyrene FACS Tubes with Caps, STERILE</td>
			<td>Stellar Scientific</td>
			<td>FSC-9010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SANT-1</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4572</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemFlex</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A3349401</td>
			<td>Mix the basal media with supplement. Aliquot and store at -20 &#176;C for longer time or at 4 &#176;C for instant use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TALI Cellular Analysis Slide</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tali image-based cytometer automated cell counter</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE 100 mL</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12563011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15575-038</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic beta-cell precursors in a 2d culture system

As células-tronco pluripotentes humanas (hPSCs) são uma excelente ferramenta para estudar o desenvolvimento pancreático precoce e investigar os contribuintes genéticos para o diabetes. As células secretoras de insulina derivadas de hPSC podem ser geradas para terapia celular e modelagem de doenças, no entanto, com eficiência e propriedades funcionais limitadas. Os progenitores pancreáticos derivados de hPSC que são precursores de células beta e outras células endócrinas, quando co-expressam os dois fatores de transcrição PDX1 e NKX6.1, especificam os progenitores para células beta funcionais e secretoras de insulina, tanto in vitro quanto in vivo. Progenitores pancreáticos derivados de hPSC são atualmente usados para terapia celular em pacientes com diabetes tipo 1 como parte de ensaios clínicos. No entanto, os procedimentos atuais não geram uma alta proporção de NKX6.1 e progenitores pancreáticos, levando à cogeração de células endócrinas não funcionais e poucas células secretoras de insulina responsivas à glicose. Este trabalho desenvolveu, assim, um protocolo aprimorado para a geração de progenitores pancreáticos derivados de hPSC que maximizam a co-expressão de PDX1 e NKX6.1 em uma monocamada 2D. Fatores como densidade celular, disponibilidade de matriz fresca e dissociação de células endodérmicas derivadas de hPSC são modulados que aumentaram os níveis de PDX1 e NKX6.1 nos progenitores pancreáticos gerados e minimizaram o comprometimento com a linhagem hepática alternada. O estudo destaca que a manipulação do ambiente físico da célula durante a diferenciação in vitro pode afetar a especificação da linhagem e a expressão gênica. Portanto, o protocolo otimizado atual facilita a geração escalável de progenitores co-expressores PDX1 e NKX6.1 para terapia celular e modelagem de doenças.

Os resultados mostram que o protocolo otimizado P2-D (Figuras 1A) aumentou a eficiência de diferenciação do progenitor pancreático ao regular positivamente a co-expressão de PDX1 e NKX6.1 (Figura 2A, B e Figura 3A). Em particular, os resultados mostraram que a dissociação das células endodérmicas e seu replating na matriz de membrana fresca, juntamente com uma duração mais longa do Estágio 3, aumentaram ...

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Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System

O presente protocolo descreve um método aprimorado para aumentar a co-expressão dos fatores de transcrição PDX1 e NKX6.1 em progenitores pancreáticos derivados de células-tronco pluripotentes humanas (hPSCs) em monocamadas planares. Isto é conseguido reabastecendo a matriz fresca, manipulando a densidade celular e dissociando as células endodérmicas.

Diferenciação de células-tronco pluripotentes humanas em precursores de células beta pancreáticas em um sistema de cultura 2D

Human pluripotent stem cells (hPSCs) are an excellent tool for studying early pancreatic development and investigating the genetic contributors to ...

Este protocolo otimizado melhorou a geração de precursores de células beta pancreáticas a partir de células-tronco pluripotentes humanas, que podem ser usadas para terapia celular para diabetes e investigando mecanismos moleculares que sublinham a biogênese do diabetes. Esta é uma técnica viável, pois é usada para culturas monocamadas 2D. É fácil de aplicar e é consistente em várias linhagens de células-tronco pluripotentes de controle e derivadas do paciente.Esses precursores de células beta, quando transplantados em um paciente diabético, podem amadurecer em células beta secretoras de insulina e podem potencialmente reverter a hiperglicemia. Portanto, o aumento das porcentagens de progenitores pancreáticos gerados usando nosso protocolo pode ser usado para terapia celular para diabetes. Este protocolo aprimorado pode ser usado para estudar o desenvolvimento pancreático humano precoce em indivíduos saudáveis, bem como em pacientes diabéticos, o que é um desafio devido à escassez de amostras de tecido.Quando as células-tronco pluripotentes humanas ou colônias de hPSC tiverem atingido 70 a 80% de confluência, lave-as duas vezes com PBS quente dentro do capuz de cultura de tecidos. Em seguida, aspirar o tampão usando um aspirador de vácuo portátil. Em seguida, adicione o meio de diferenciação do estágio um contendo CHIR-99021 às colônias e incube a placa a 37 graus Celsius por 24 horas.No dia seguinte, substitua a mídia gasta pelo meio de diferenciação do estágio um sem CHIR-99021. Depois de aspirar o meio gasto e lavar as células endodérmicas definitivas duas vezes com PBS quente, gire a placa para remover quaisquer detritos celulares. Em seguida, fixe as células adicionando 4% de paraformaldeído e coloque a placa em um agitador bidimensional.Após a fixação, lave as células com solução salina tamponada com TRIS contendo 0,5% de Tween e coloque a placa no agitador. Em seguida, permeabilize as células fixas adicionando uma quantidade generosa de PBS contendo 0,5% de Triton X-100 e coloque a placa de volta no agitador. Em seguida, adicione o tampão de bloqueio recém-preparado às células permeabilizadas e incube a placa por uma hora no agitador.Em seguida, adicione anticorpos primários diluídos às células bloqueadas e coloque a placa no agitador a quatro graus Celsius com agitação suave. No dia seguinte, após a aspiração da solução primária de anticorpos, lave os poços três vezes com TBST por 10 minutos cada um no agitador. Em seguida, adicione os anticorpos secundários.Cubra a placa com papel alumínio para proteger da luz e coloque a placa no agitador à temperatura ambiente durante uma hora. Em seguida, aspirar a solução de anticorpos secundários e lavar os poços corados com TBST no agitador por 10 minutos, mantendo a placa coberta com papel alumínio. Em seguida, para manchar os núcleos, adicione a solução Hoechst aos poços e coloque a placa no agitador.Após dois a três minutos, aspirar a solução Hoechst e enxaguar os poços duas vezes com PBS. Finalmente, adicione PBS às células coradas e visualize-as usando um microscópio de fluorescência invertida no escuro. No primeiro dia do estágio dois, dissociar as células endodérmicas derivadas de hPSC primeiro lavando-as com PBS quente e, em seguida, adicionando um mililitro de solução enzimática quente por poço de uma placa de seis poços.Coloque a placa a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por três a cinco minutos ou até que as células comecem a se separar umas das outras. Dissociar as folhas separadas ou a monocamada de células nos poços e coletar as células separadas juntas em um tubo de polipropileno de 15 mililitros usando meio de estágio basal. Em seguida, gire as células para baixo, descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet usando um mililitro de PBS estéril.Depois de contar as células usando um contador automatizado, gire as células novamente e descarte o sobrenadante. Em seguida, ressuscite o pellet no volume apropriado do meio de diferenciação do estágio dois contendo um inibidor de rocha. Chapear as células ressuspensas em uma a 50 placas revestidas de matriz de membrana e incubá-las a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono.Após 24 horas, substitua o meio pelo meio de diferenciação do estágio dois sem o inibidor de Rock. No final do estágio quatro, desprenda as células, como demonstrado anteriormente, e colete-as em um tubo de 15 mililitros. Em seguida, gire as células, descarte o sobrenadante, lave as células com PBS e dissocie-as em células únicas.Depois de contar as células usando um contador de células automatizado, gire as células novamente e ressuspenda a pelota em 200 microlitros de PBS resfriado. Em seguida, adicione dois mililitros de etanol refrigerado a 80% com o tubo em um vórtice definido de baixa a média velocidade. Feche a tampa com força e coloque o tubo ligeiramente inclinado sobre o agitador a quatro graus Celsius durante a noite.No dia seguinte, gire as células e lave o pellet com PBS para dissociar quaisquer aglomerados de células fixas. Em seguida, bloqueie as células fixas por pelo menos uma hora à temperatura ambiente ou quatro graus Celsius durante a noite no agitador. Em seguida, para corar os marcadores progenitores pancreáticos, distribua 200.000 células por condição, incluindo controles isotípicos apropriados, controles de anticorpos não corados e secundários em uma placa inferior de 96 poços V.Em seguida, gire a placa brevemente e vire a placa com um movimento rápido para descartar o sobrenadante sem perder os pellets. Em seguida, incube as células em anticorpos primários por pelo menos duas horas à temperatura ambiente em um agitador com agitação suave. Em seguida, lave as células coradas três vezes com TBST, pipetando para cima e para baixo nos poços.Centrifugar as células novamente, descartar o sobrenadante e adicionar anticorpos secundários às células. Após uma incubação de 30 minutos à temperatura ambiente, lave as células coradas duas vezes com TBST. Em seguida, gire a placa, colete as células coradas em 100 microlitros de PBS em tubos de fax protegidos contra luz e execute as amostras em uma máquina de citometria de fluxo.Em comparação com o método não otimizado, o protocolo otimizado aumentou a eficiência de diferenciação do progenitor pancreático regulando positivamente a co-expressão PDX 1 e NKX 6.1. Em particular, a dissociação das células endodérmicas e seu replating na matriz de membrana fresca, juntamente com uma duração mais longa do estágio três, aumentaram a expressão de NKX 6.1 em progenitores pancreáticos derivados de hPSC em comparação com o protocolo não dissociado. Os progenitores pancreáticos gerados usando o protocolo otimizado também aumentaram o número de células positivas para SOX9 em comparação com o método não dissociado.Além disso, o método otimizado também gerou uma maior proporção de células proliferativas positivas para NKX 6.1 que co-expressaram o marcador de proliferação Ki67. A fim de aumentar a eficiência, é crucial dissociar a endoderma derivada da HbA1 e, em seguida, estender a duração do tratamento do estágio três com sinalização amiloide FGF e inibição do ouriço. A geração escalável de progenitores pancreáticos usando este protocolo aprimorado facilitou estudos sobre a melhoria da eficiência e maturação de células beta pancreáticas derivadas de células-tronco pluripotentes humanas e permitiu a modelagem de diferentes tipos de diabetes.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

Cultura pluripotentes humanas e células-tronco neurais em um sistema de cultura celular fechado de Pesquisa Básica e pré-clínica

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

Biologia do Desenvolvimento

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

Produção em larga escala de cardiomiócitos a partir de células-tronco pluripotentes humanas utilizando um altamente reprodutível pequeno-Based Molecule Protocolo de Diferenciação

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

Dirigido a diferenciação de progenitores hematopoiéticos primitivo e definitiva de células pluripotentes humanas

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Diferenciação eficiente dos Pluripotent Stem Cells para NKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; Progenitores pancreáticas

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

Na diferenciação in vitro de pluripotentes humanas Células-tronco em células Trofoblásticas

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Diferenciação de células-tronco mesenquimais humanas em células casos funcionais

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Diferenciação eficiente de células-tronco pluripotentes humanas em células hepáticas

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Na geração de Vitro do Somite derivados de humanos induzida por células tronco pluripotentes

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Directed Differentiation of Hemogenic Endothelial Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Diferenciação Dirigida de Células Endoteliais Hemogênicas de Células-Tronco Pluripotentes Humanas

Blood vessels are ubiquitously distributed within all tissues of the body and perform diverse functions. Thus, derivation of mature vascular endothelial ...

Isolation of Rat Adipose Tissue Mesenchymal Stem Cells for Differentiation into Insulin-producing Cells

Isolamento de células-tronco mesenquimais de tecido adiposo de rato para diferenciação em células produtoras de insulina

Mesenchymal stem cells (MSCs)-especially those isolated from adipose tissue (Ad-MSCs)-have gained special attention as a renewable, abundant source of ...