Name: differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic beta-cell precursors in a 2d culture system
Uploaded: 2021-12-16T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System at JoVE.com

Bu çalışma, Katar Ulusal Araştırma Fonu'ndan (QNRF) bir hibe ile finanse edilmiştir (Hibe No. NPRP10-1221-160041).

Çalışma, uygun kurumsal araştırma etik komitesi tarafından onaylanmış ve 1964 Helsinki Deklarasyonu'nda ve daha sonraki değişikliklerinde veya karşılaştırılabilir etik standartlarda belirtilen etik standartlara uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Protokol, HMC Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB) (no. 16260/16) ve Katar Biyomedikal Araştırma Enstitüsü (QBRI) (no. 2016-003) tarafından onaylanmıştır. Bu çalışma H1, H9 ve HUES8 gibi hESC'ler için optimize edilmiştir. Hamad Medical Corporation (HMC) ...

<ol>
	<li>Rickels, M. R., Robertson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+islet+transplantation+in+humans:+Recent+progress+and+future+directions.">Pancreatic islet transplantation in humans: Recent progress and future directions.</a> Endocrine Reviews. 40 (2), 631-668 (2019).</li><li>Latres, E., Finan, D. A., Greenstein, J. L., Kowalski, A., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Navigating+two+roads+to+glucose+normalization+in+diabetes:+Automated+insulin+delivery+devices+and+cell+therapy.">Navigating two roads to glucose normalization in diabetes: Automated insulin delivery devices and cell therapy.</a> Cell Metabolism. 29 (3), 545-563 (2019).</li><li>Vaithilingam, V., Tuch, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+and+encapsulation:+An+update+on+recent+developments.">Islet transplantation and encapsulation: An update on recent developments.</a> Review of Diabetic Studies. 8 (1), 51-67 (2011).</li><li>Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+different+types+of+diabetes+using+human+pluripotent+stem+cells.">Modeling different types of diabetes using human pluripotent stem cells.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 78 (6), 2459-2483 (2021).</li><li>Memon, B., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+diabetes:+Beta+cells+versus+pancreatic+progenitors.">Stem cell therapy for diabetes: Beta cells versus pancreatic progenitors.</a> Cells. 9 (2), 283 (2020).</li><li>Balboa, D., Iworima, D. G., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pluripotent+stem+cells+to+model+islet+defects+in+diabetes.">Human pluripotent stem cells to model islet defects in diabetes.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 12, 642152 (2021).</li><li>Gaertner, B., Carrano, A. C., Sander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell+models:+Lessons+for+pancreatic+development+and+disease.">Human stem cell models: Lessons for pancreatic development and disease.</a> Genes &amp; Development. 33 (21-22), 1475-1490 (2019).</li><li>Abdelalim, E. M., Bonnefond, A., Bennaceur-Griscelli, A., Froguel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cells+as+a+potential+tool+for+disease+modelling+and+cell+therapy+in+diabetes.">Pluripotent stem cells as a potential tool for disease modelling and cell therapy in diabetes.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 10 (3), 327-337 (2014).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+diabetes+with+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+pluripotent+stem+cells.">Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 32 (11), 1121-1133 (2014).</li><li>Pagliuca, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+functional+human+pancreatic+beta+cells+in+vitro.">Generation of functional human pancreatic beta cells in vitro.</a> Cell. 159 (2), 428-439 (2014).</li><li>Nair, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recapitulating+endocrine+cell+clustering+in+culture+promotes+maturation+of+human+stem-cell-derived+&#946;+cells.">Recapitulating endocrine cell clustering in culture promotes maturation of human stem-cell-derived &#946; cells.</a> Nature Cell Biology. 21 (2), 263-274 (2019).</li><li>Russ, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+induction+of+human+pancreatic+progenitors+produces+functional+beta-like+cells+in+vitro.">Controlled induction of human pancreatic progenitors produces functional beta-like cells in vitro.</a> EMBO Journal. 34 (13), 1759-1772 (2015).</li><li>Veres, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Charting+cellular+identity+during+human+in+vitro+&#946;-cell+differentiation.">Charting cellular identity during human in vitro &#946;-cell differentiation.</a> Nature. 569 (7756), 368-373 (2019).</li><li>Hrvatin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiated+human+stem+cells+resemble+fetal,+not+adult,+&#946;+cells.">Differentiated human stem cells resemble fetal, not adult, &#946; cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (8), 3038-3043 (2014).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors+into+functional+islets+capable+of+treating+pre-existing+diabetes+in+mice.">Maturation of human embryonic stem cell-derived pancreatic progenitors into functional islets capable of treating pre-existing diabetes in mice.</a> Diabetes. 61 (8), 2016-2029 (2012).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+human+embryonic+stem+cell-derived+NKX6.1-expressing+pancreatic+progenitor+cells+accelerates+the+maturation+of+insulin-secreting+cells+in+vivo.">Enrichment of human embryonic stem cell-derived NKX6.1-expressing pancreatic progenitor cells accelerates the maturation of insulin-secreting cells in vivo.</a> Stem Cells Journal. 31 (11), 2432-2442 (2013).</li><li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+human+embryonic+stem+cell-derived+NKX6.1-expressing+pancreatic+progenitor+cells+accelerates+the+maturation+of+insulin-secreting+cells+in+vivo.">Enrichment of human embryonic stem cell-derived NKX6.1-expressing pancreatic progenitor cells accelerates the maturation of insulin-secreting cells in vivo.</a> Stem Cells Journal. 31 (11), 2432-2442 (2013).</li><li>Bruin, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polyhormonal+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+embryonic+stem+cells.">Characterization of polyhormonal insulin-producing cells derived in vitro from human embryonic stem cells.</a> Stem Cell Research. 12 (1), 194-208 (2014).</li><li>Toyoda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+aggregation+optimizes+the+differentiation+of+human+ESCs+and+iPSCs+into+pancreatic+bud-like+progenitor+cells.">Cell aggregation optimizes the differentiation of human ESCs and iPSCs into pancreatic bud-like progenitor cells.</a> Stem Cell Research. 14 (2), 185-197 (2015).</li><li>Memon, B., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+pancreatic+progenitors+co-expressing+PDX1+and+NKX6.1.">Highly efficient differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic progenitors co-expressing PDX1 and NKX6.1.</a> Methods in Molecular Biology. , (2020).</li><li>Memon, B., Karam, M., Al-Khawaga, S., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+pancreatic+progenitors+co-expressing+PDX1+and+NKX6.1.">Enhanced differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic progenitors co-expressing PDX1 and NKX6.1.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 15 (2018).</li><li>Aigha, I. I., Memon, B., Elsayed, A. K., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+two+distinct+NKX6.1+populations+of+pancreatic+progenitors.">Differentiation of human pluripotent stem cells into two distinct NKX6.1 populations of pancreatic progenitors.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 83 (2018).</li><li>Ali, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinocytes+derived+from+patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells+recapitulate+the+genetic+signature+of+psoriasis+disease.">Keratinocytes derived from patient-specific induced pluripotent stem cells recapitulate the genetic signature of psoriasis disease.</a> Stem Cells and Development. 29 (7), 383-400 (2020).</li><li>Elsayed, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+human+induced+pluripotent+stem+cell+line+(QBRIi009-A)+from+a+patient+with+a+heterozygous+deletion+of+FOXA2.">Generation of a human induced pluripotent stem cell line (QBRIi009-A) from a patient with a heterozygous deletion of FOXA2.</a> Stem Cell Research. 42, 101705 (2020).</li><li>Davenport, C., Diekmann, U., Budde, I., Detering, N., Naujok, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior-posterior+patterning+of+definitive+endoderm+generated+from+human+embryonic+stem+cells+depends+on+the+differential+signaling+of+retinoic+acid,+Wnt-,+and+BMP-signaling.">Anterior-posterior patterning of definitive endoderm generated from human embryonic stem cells depends on the differential signaling of retinoic acid, Wnt-, and BMP-signaling.</a> Stem Cells. 34 (11), 2635-2647 (2016).</li><li>Schroeder, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+selection+of+Sox17-expressing+endoderm+cells+generated+from+murine+embryonic+stem+cells.">Induction and selection of Sox17-expressing endoderm cells generated from murine embryonic stem cells.</a> Cells Tissues Organs. 195 (6), 507-523 (2012).</li><li>Nostro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+NKX6-1++pancreatic+progenitors+from+multiple+human+pluripotent+stem+cell+lines.">Efficient generation of NKX6-1+ pancreatic progenitors from multiple human pluripotent stem cell lines.</a> Stem Cell Reports. 4 (4), 591-604 (2015).</li><li>Elsayed, A. K., Younis, I., Ali, G., Hussain, K., Abdelalim, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+development+of+pancreatic+beta+cells+derived+from+human+iPSCs+with+FOXA2+deficiency.">Aberrant development of pancreatic beta cells derived from human iPSCs with FOXA2 deficiency.</a> Cell Death &amp; Disease. 12 (1), 103 (2021).</li><li>Mfopou, J. K., Chen, B., Mateizel, I., Sermon, K., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noggin,+retinoids,+and+fibroblast+growth+factor+regulate+hepatic+or+pancreatic+fate+of+human+embryonic+stem+cells.">Noggin, retinoids, and fibroblast growth factor regulate hepatic or pancreatic fate of human embryonic stem cells.</a> Gastroenterology. 138 (7), 1-14 (2010).</li><li>Mfopou, J. K., De Groote, V., Xu, X., Heimberg, H., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+and+other+soluble+factors+from+differentiating+embryoid+bodies+inhibit+pancreas+development.">Sonic hedgehog and other soluble factors from differentiating embryoid bodies inhibit pancreas development.</a> Stem Cells. 25 (5), 1156-1165 (2007).</li><li>Gattazzo, F., Urciuolo, A., Bonaldo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix:+A+dynamic+microenvironment+for+stem+cell+niche.">Extracellular matrix: A dynamic microenvironment for stem cell niche.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1840 (8), 2506-2519 (2014).</li><li>Watt, F. M., Huck, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+extracellular+matrix+in+regulating+stem+cell+fate.">Role of the extracellular matrix in regulating stem cell fate.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 14 (8), 467-473 (2013).</li><li>Shih, H. P., Panlasigui, D., Cirulli, V., Sander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECM+signaling+regulates+collective+cellular+dynamics+to+control+pancreas+branching+morphogenesis.">ECM signaling regulates collective cellular dynamics to control pancreas branching morphogenesis.</a> Cell Reports. 14 (2), 169-179 (2016).</li><li>Raza, A., Ki, C. S., Lin, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+matrix+properties+on+growth+and+morphogenesis+of+human+pancreatic+ductal+epithelial+cells+in+3D.">The influence of matrix properties on growth and morphogenesis of human pancreatic ductal epithelial cells in 3D.</a> Biomaterials. 34 (21), 5117-5127 (2013).</li><li>Lin, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+and+laminin+promote+differentiation+of+human+mesenchymal+stem+cells+into+insulin+producing+cells+through+activating+Akt+and+ERK.">Fibronectin and laminin promote differentiation of human mesenchymal stem cells into insulin producing cells through activating Akt and ERK.</a> Journal of Biomedical Science. 17, 56 (2010).</li><li>Boretti, M. I., Gooch, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+extracellular+matrix+and+3D+morphogenesis+on+islet+hormone+gene+expression+by+Ngn3-infected+mouse+pancreatic+ductal+epithelial+cells.">Effect of extracellular matrix and 3D morphogenesis on islet hormone gene expression by Ngn3-infected mouse pancreatic ductal epithelial cells.</a> Tissue Engineering Part A. 14 (12), 1927-1937 (2008).</li><li>Boretti, M. I., Gooch, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+cell+clustering+enhances+islet+beta+cell+formation+from+human+cultures+enriched+for+pancreatic+ductal+epithelial+cells.">Induced cell clustering enhances islet beta cell formation from human cultures enriched for pancreatic ductal epithelial cells.</a> Tissue Engineering. 12 (4), 939-948 (2006).</li><li>Beattie, G. M., Rubin, J. S., Mally, M. I., Otonkoski, T., Hayek, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+proliferation+and+differentiation+of+human+fetal+pancreatic+islet+cells+by+extracellular+matrix,+hepatocyte+growth+factor,+and+cell-cell+contact.">Regulation of proliferation and differentiation of human fetal pancreatic islet cells by extracellular matrix, hepatocyte growth factor, and cell-cell contact.</a> Diabetes. 45 (9), 1223-1228 (1996).</li><li>Gage, B. K., Webber, T. D., Kieffer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+cell+seeding+density+influences+pancreatic+endocrine+development+during+in+vitro+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells.">Initial cell seeding density influences pancreatic endocrine development during in vitro differentiation of human embryonic stem cells.</a> PLoS One. 8 (12), 82076 (2013).</li></ol>

Bu çalışma, PDX1 ve NKX6.1'in yüksek bir eş ekspresyonuna sahip hPSC'lerden pankreas progenitörleri üretmek için geliştirilmiş bir protokolü açıklamaktadır. hPSC türevi endodermin taze matriks üzerinde yarı yoğunlukta ayrışması ve yeniden kaplanması, hPSC türevi pankreas progenitörlerinde daha yüksek PDX1 ve NKX6.1 ile sonuçlandı.
Her aşama için büyüme faktörü kokteyli P1-ND 27'ye oldukça benzer olmasına rağmen, FGF ve retinoid sinyalleme ve BMP ve kirpi inh...

Diyabet, dünya çapında milyonlarca insanı etkileyen karmaşık bir metabolik bozukluktur. İnsülin takviyesi diyabet için tek tedavi seçeneği olarak kabul edilir. Daha ileri vakalar, tüm kadavra pankreasının veya adacıkların transplantasyonu yoluyla elde edilen beta hücre replasman tedavisi ile tedavi edilir 1,2. Transplantasyon tedavisini, dokunun mevcudiyeti ve kalitesi ile sınırlama, transplantasyon prosedürlerinin invazivliği ve immünsüpresanlara olan sürekli ihtiyaç gibi çeşitli konuları çevrelemektedir. Bu, beta hücre replasman tedavisi için yeni ve alternatif seçeneklerin araştırılması ihtiyacını doğurmaktadır 2,3. İnsan pluripotent kök hücreleri (hPSC'ler) son zamanlarda insan pankreas biyolojisini anlamak için umut verici bir araç ve transplantasyon tedavisi için kapsamlı olmayan ve potansiyel olarak daha kişiselleştirilmiş bir kaynak olarak ortaya çıkmıştır 4,5,6,7. İnsan embriyonik kök hücreleri (hESC'ler) ve insan kaynaklı pluripotent kök hücreler (hiPSC'ler) dahil olmak üzere hPSC'ler, yüksek bir kendini yenileme kapasitesine sahiptir ve insan vücudunun herhangi bir doku tipine yol açar. hESC'ler embriyonun iç hücre kütlesinden türetilir ve hiPSC'ler herhangi bir somatik hücre 4,8'den yeniden programlanır.
Yönlendirilmiş farklılaşma protokolleri, hPSC'leri pankreas gelişim aşamaları boyunca invitro olarak sıralı olarak yönlendiren hPSC'lerden pankreas beta hücreleri üretmek için optimize edilmiştir. Bu protokoller hPSC türevi adacık organoidleri üretir. Oradaki pankreas beta hücrelerinin oranını arttırmada büyük ölçüde iyileşmiş olsalar da, protokollerin etkinliği oldukça değişkendir. NKX6.1 + / INSÜLİN + veya C-PEPTIDE + hücrelerinin ~% 40'ından fazlasına artmaz 5,9,10,11,12,13. Bununla birlikte, üretilen beta hücreleri, transkripsiyonel ve metabolik profilleri ve glikoza tepkileri açısından yetişkin insan beta hücreleri ile tamamen aynı değildir 4,5,14. hPSC türevi beta hücreleri, yetişkin insan adacıkları5'e kıyasla PCSK2, PAX6, UCN3, MAFA, G6PC2 ve KCNK3 gibi anahtar beta hücre belirteçlerinin gen ekspresyonundan yoksundur. Ek olarak, hPSC kaynaklı beta hücreleri, glikoza yanıt olarak kalsiyum sinyalini azaltmıştır. Artan glikoz seviyelerine yanıt olarak uygun miktarda insülin salgılamayan birlikte üretilen polihormonal hücrelerle kontamine olurlar5. Öte yandan, adacık öncüleri olan hPSC türevi pankreas progenitörleri, beta hücrelerine kıyasla in vitro olarak daha verimli bir şekilde üretilebilir ve in vivo olarak nakledildiğinde, işlevsel, insülin salgılayan beta hücrelerine olgunlaşabilir15,16. Klinik çalışmalar şu anda T1D deneklerinde transplantasyon üzerine güvenliklerini ve etkinliklerini göstermeye odaklanmıştır.
Özellikle, aynı pankreas progenitör hücresi içinde PDX1 (Pankreatik ve Duodenal Homeobox 1) ve NKX6.1 (NKX6 Homeobox 1) transkripsiyon faktörlerinin ekspresyonu, beta hücre soyu5'e bağlılık için çok önemlidir. NKX6.1'i eksprese edemeyen pankreas progenitörleri, polihormonal endokrin hücrelere veya fonksiyonel olmayan beta hücrelerine yol açar17,18. Bu nedenle, pankreas progenitör aşamasında PDX1 ve NKX6.1'in yüksek bir birlikte ekspresyonu, sonuçta çok sayıda fonksiyonel beta hücresi üretmek için gereklidir. Çalışmalar, bir embriyoid cismin veya 3D kültürünün, farklılaşan hücrelerin toplandığı pankreas progenitörlerinde PDX1 ve NKX6.1'i geliştirdiğini, PDX1 + / NKX6.1+ popülasyonunun% 40-80'i arasında değiştiğini göstermiştir. Bununla birlikte, süspansiyon kültürleriyle karşılaştırıldığında, 2B farklılaşma kültürleri daha uygun maliyetli, uygulanabilir ve çoklu hücre hatlarında uygulama için uygundur5. Son zamanlarda, tek katmanlı farklılaşma kültürlerinin PDX1 + / NKX6.1 + 'nın %90'ından fazlasını verdiğini ve hPSC türevi pankreas progenitörlerinin20,21,22 ile birlikte eksprese edildiğini gösterdik. Bildirilen yöntem, üretilen pankreas progenitörlerine yüksek bir çoğaltma kapasitesi verdi ve hepatik soy21 gibi alternatif kader spesifikasyonlarını önledi. Bu nedenle, burada, bu protokol, hPSC'lerin PDX1 ve NKX6.1'i birlikte eksprese eden pankreas beta hücre öncüllerine farklılaşması için oldukça etkili bir yöntem göstermektedir. Bu yöntem, hPSC kaynaklı endodermi ayrıştırma ve hücre yoğunluğunu manipüle etme tekniğini, ardından genişletilmiş bir FGF ve Retinoid sinyallemesinin yanı sıra PDX1 ve NKX6.1 eş ekspresyonunu teşvik etmek için Kirpi inhibisyonunu kullanır (Şekil 1). Bu yöntem, transplantasyon tedavisi ve hastalık modellemesi için hPSC türevi pankreas beta hücre öncüllerinin ölçeklenebilir bir şekilde üretilmesini kolaylaştırabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL, conical, centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20X TBS Tween 20</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>28360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well culture plates, flat bottom with lid</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL, conical, centrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6- well culture plates, multidish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>140685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>0-7920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activin A</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>338-AC</td>
			<td>Reconstituted in 4 mM HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti NKX6.1 antibody, mouse monoclonal</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>F55A12-C</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:2000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PDX1 antibody, guinea pig polyclonal</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab47308</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:1000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 minus Vit A</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin, heat shock fraction, fatty acid free</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR 99021</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>4423</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>41965047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H + L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 568</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG (H + L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td></td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS 1X</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>PHG0313</td>
			<td>Reconstituted in 0.1% BSA in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF10</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>345-FG</td>
			<td>Reconstituted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G8644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33258</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>23491-45-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX73</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut DMEM/F-12 (1X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12660-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut SR serum replacement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10828-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid (vitamin C)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A92902</td>
			<td>Reconstituted in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>Aliquot the thawed stock and freeze at -20C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCDB131</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10372019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-SOX17</td>
			<td>ORIGENE</td>
			<td>CF500096</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:2000 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR Plus</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>85850</td>
			<td>Mix the basal media with supplement. Aliquot and store at -20 &#176;C for longer time or at 4 &#176;C for instant use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene filter units, 0.2 &#181;m PES</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>566-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>72340</td>
			<td>Reconstituted in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOGGIN</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>6057-NG</td>
			<td>Reconstituted in 0.1% BSA in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde solution 4% in PBS</td>
			<td>ChemCruz</td>
			<td>sc-281692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable vacuum aspirator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-FOXA2</td>
			<td>Cell signaling technology</td>
			<td>3143</td>
			<td>Diluted to 1:100 for flow-cytometry and 1:500 for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rock inhibitor (Y-27632)</td>
			<td>ReproCell</td>
			<td>04-0012-02</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round Bottom Polystyrene FACS Tubes with Caps, STERILE</td>
			<td>Stellar Scientific</td>
			<td>FSC-9010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SANT-1</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4572</td>
			<td>Reconstituted in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemFlex</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A3349401</td>
			<td>Mix the basal media with supplement. Aliquot and store at -20 &#176;C for longer time or at 4 &#176;C for instant use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TALI Cellular Analysis Slide</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tali image-based cytometer automated cell counter</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE 100 mL</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12563011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15575-038</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

differentiation of human pluripotent stem cells into pancreatic beta-cell precursors in a 2d culture system

İnsan pluripotent kök hücreleri (hPSC'ler), erken pankreas gelişimini incelemek ve diyabete genetik katkıda bulunanları araştırmak için mükemmel bir araçtır. Bununla birlikte, hPSC türevi insülin salgılayan hücreler, hücre tedavisi ve hastalık modellemesi için sınırlı verimlilik ve fonksiyonel özelliklerle üretilebilir. Beta hücrelerinin ve diğer endokrin hücrelerin öncüsü olan hPSC türevli pankreas progenitörleri, iki transkripsiyon faktörü PDX1 ve NKX6.1'i birlikte eksprese ettiklerinde, hem in vitro hem de in vivo olarak işlevsel, insülin salgılayan beta hücrelerinin progenitörlerini belirtir. hPSC kaynaklı pankreas progenitörleri şu anda klinik çalışmaların bir parçası olarak tip 1 diyabet hastalarında hücre tedavisi için kullanılmaktadır. Bununla birlikte, mevcut prosedürler yüksek oranda NKX6.1 ve pankreas progenitörleri üretmemekte, bu da fonksiyonel olmayan endokrin hücrelerin ve az sayıda glikoza duyarlı, insülin salgılayan hücrelerin birlikte üretilmesine yol açmaktadır. Bu nedenle bu çalışma, PDX1 ve NKX6.1'in 2D tek katmanda birlikte ekspresyonunu en üst düzeye çıkaran hPSC türevi pankreas progenitörleri üretmek için gelişmiş bir protokol geliştirdi. Hücre yoğunluğu, taze matriksin mevcudiyeti ve hPSC kaynaklı endodermal hücrelerin ayrışması gibi faktörler, üretilen pankreas progenitörlerinde PDX1 ve NKX6.1 seviyelerini artıran ve alternatif hepatik soya olan bağlılığı en aza indiren modüle edilmiştir. Çalışma, in vitro farklılaşma sırasında hücrenin fiziksel ortamını manipüle etmenin soy spesifikasyonunu ve gen ekspresyonunu etkileyebileceğini vurgulamaktadır. Bu nedenle, mevcut optimize edilmiş protokol, hücre tedavisi ve hastalık modellemesi için PDX1 ve NKX6.1 birlikte eksprese eden progenitörlerin ölçeklenebilir üretimini kolaylaştırır.

Sonuçlar, optimize edilmiş P2-D protokolünün (Şekil 1A) PDX1 ve NKX6.1 birlikte ekspresyonunu yükselterek pankreas progenitör farklılaşma verimliliğini artırdığını göstermektedir (Şekil 2A, B ve Şekil 3A). Özellikle, sonuçlar, endodermal hücrelerin ayrışmasının ve taze membran matrisi üzerinde yeniden kaplanmasının, daha önce yayınlanmış bir çalışmadan modifiye edilmiş ayrışmam?...

Watch this Scientific Journal Video about Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System at JoVE.com

Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells Into Pancreatic Beta-Cell Precursors in a 2D Culture System

Mevcut protokol, düzlemsel tek katmanlı insan pluripotent kök hücrelerinden (hPSC'ler) türetilen pankreas progenitörlerinde PDX1 ve NKX6.1 transkripsiyon faktörlerinin birlikte ekspresyonunu arttırmak için geliştirilmiş bir yöntemi açıklamaktadır. Bu, taze matrisin yenilenmesi, hücre yoğunluğunun manipüle edilmesi ve endodermal hücrelerin ayrışmasıyla elde edilir.

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinin 2D Kültür Sisteminde Pankreatik Beta Hücre Öncüllerine Farklılaşması

Human pluripotent stem cells (hPSCs) are an excellent tool for studying early pancreatic development and investigating the genetic contributors to ...

Bu optimize edilmiş protokol, diyabet için hücre tedavisi için kullanılabilecek ve diyabet biyogenezinin altını çizen moleküler mekanizmaları araştıran insan pluripotent kök hücrelerinden pankreas beta hücresi öncüllerinin üretimini arttırdı. Bu, 2D tek katmanlı kültürler için kullanıldığı için uygulanabilir bir tekniktir. Uygulaması kolaydır ve çoklu kontrol ve hasta kaynaklı pluripotent kök hücre hatları arasında tutarlıdır.Diyabetik bir hastada nakledildiğinde bu beta hücre öncülleri, insülin salgılayan beta hücrelerine olgunlaşabilir ve potansiyel olarak hiperglisemiyi tersine çevirebilir. Bu nedenle, protokolümüz kullanılarak üretilen pankreas progenitörlerinin artan yüzdeleri, diyabet için hücre tedavisi için kullanılabilir. Bu gelişmiş protokol, sağlıklı bireylerde ve diyabetik hastalarda erken insan pankreas gelişimini incelemek için kullanılabilir, bu da doku örneklerinin yetersizliği nedeniyle zordur.İnsan pluripotent kök hücresi veya hPSC kolonileri% 70 ila% 80 birleşmeye ulaştığında, doku kültürü başlığı içinde ılık PBS ile iki kez yıkayın. Daha sonra portatif bir vakum aspiratörü kullanarak tamponu aspire edin. Daha sonra, kolonilere CHIR-99021 içeren birinci aşama farklılaşma ortamı ekleyin ve plakayı 24 saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.Ertesi gün, harcanan medyayı CHIR-99021 olmadan birinci aşama farklılaştırma ortamıyla değiştirin. Harcanan ortamı aspire ettikten ve kesin endoderm hücrelerini ılık PBS ile iki kez yıkadıktan sonra, herhangi bir hücre kalıntılarını çıkarmak için plakayı döndürün. Ardından% 4 paraformaldehit ekleyerek hücreleri sabitleyin ve plakayı iki boyutlu bir çalkalayıcıya yerleştirin.Fiksasyondan sonra, hücreleri% 0.5 Ara içeren TRIS tamponlu salin ile yıkayın ve plakayı çalkalayıcının üzerine yerleştirin. Daha sonra% 0.5 Triton X-100 içeren cömert miktarda PBS ekleyerek sabit hücreleri geçirgenleştirin ve plakayı çalkalayıcıya geri yerleştirin. Daha sonra, geçirgenleştirilmiş hücrelere taze hazırlanmış bloke edici tampon ekleyin ve plakayı çalkalayıcı üzerinde bir saat boyunca inkübe edin.Daha sonra bloke edilmiş hücrelere seyreltilmiş birincil antikorlar ekleyin ve plakayı çalkalayıcıya hafifçe sallayarak dört santigrat derecede yerleştirin. Ertesi gün, birincil antikor çözeltisini aspire ettikten sonra, kuyucukları çalkalayıcıda her biri 10 dakika boyunca TBST ile üç kez yıkayın. Ardından, ikincil antikorları ekleyin.Işıktan korumak için plakayı alüminyum folyo ile örtün ve plakayı çalkalayıcının üzerine bir saat boyunca oda sıcaklığında yerleştirin. Daha sonra ikincil antikor çözeltisini aspire edin ve lekeli kuyucukları çalkalayıcı üzerinde TBST ile 10 dakika boyunca yıkayın, plakayı folyo ile kaplı tutun. Daha sonra, çekirdekleri lekelemek için, kuyucuklara Hoechst çözeltisi ekleyin ve plakayı çalkalayıcıya yerleştirin.İki ila üç dakika sonra, Hoechst çözeltisini aspire edin ve kuyucukları PBS ile iki kez durulayın. Son olarak, lekeli hücrelere PBS ekleyin ve karanlıkta ters çevrilmiş bir floresan mikroskobu kullanarak bunları görüntüleyin. İkinci aşamanın birinci gününde, hPSC türevi endodermal hücreleri önce ılık PBS ile yıkayarak ve daha sonra altı kuyucuklu bir plakanın kuyucuğu başına bir mililitre sıcak enzim çözeltisi ekleyerek ayırın.Plakayı 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte üç ila beş dakika boyunca veya hücreler birbirinden ayrılmaya başlayana kadar yerleştirin. Ayrılmış tabakaları veya kuyucuklardaki hücrelerin tek katmanını ayırın ve ayrılmış hücreleri bazal aşama yarım ortam kullanarak 15 mililitrelik bir polipropilen tüp içinde bir araya getirin. Daha sonra hücreleri aşağı doğru döndürün, süpernatanı atın ve bir mililitre steril PBS kullanarak peleti yeniden askıya alın.Otomatik bir sayaç kullanarak hücreleri saydıktan sonra, hücreleri tekrar döndürün ve süpernatanı atın. Daha sonra peleti, bir Kaya inhibitörü içeren ikinci aşama farklılaşma ortamının uygun hacminde yeniden askıya alın. Askıya alınan hücreleri bir ila 50 membran matris kaplı plakalara yerleştirin ve bunları 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin.24 saat sonra, ortamı Rock inhibitörü olmadan ikinci aşama farklılaşma ortamı ile değiştirin. Dördüncü aşamanın sonunda, hücreleri daha önce gösterildiği gibi ayırın ve bunları 15 mililitrelik bir tüpte toplayın. Sonra hücreleri döndürün, süpernatanı atın, hücreleri PBS ile yıkayın ve bunları tek hücrelere ayırın.Otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücreleri saydıktan sonra, hücreleri tekrar döndürün ve peleti 200 mikrolitre soğutulmuş PBS'de yeniden askıya alın. Daha sonra, iki mililitre soğutulmuş% 80 etanol damlası ekleyin, tüp düşük ila orta hızda ayarlanmış bir vorteks üzerindeyken. Kapağı sıkıca kapatın ve tüpü çalkalayıcının üzerine hafifçe eğilmiş olarak gece boyunca dört santigrat derecede yerleştirin.Ertesi gün, hücreleri döndürün ve sabit hücre kümelerini ayırmak için peleti PBS ile yıkayın. Ardından, sabit hücreleri oda sıcaklığında en az bir saat veya çalkalayıcıda gece boyunca dört santigrat derece bloke edin. Daha sonra, pankreatik progenitör belirteçlerini boyamak için, 96 kuyucuklu V alt plakada uygun izotip kontrolleri, lekesiz ve ikincil antikor kontrolleri dahil olmak üzere durum başına 200.000 hücre dağıtın.Ardından plakayı kısaca döndürün ve topakları kaybetmeden süpernatantı atmak için plakayı hızlı bir hareketle çevirin. Daha sonra, hücreleri birincil antikorlarda oda sıcaklığında en az iki saat boyunca hafifçe sallanan bir çalkalayıcı üzerinde inkübe edin. Daha sonra lekeli hücreleri TBST ile üç kez kuyucuklarda yukarı ve aşağı pipetleyerek yıkayın.Hücreleri tekrar santrifüj edin, süpernatanı atın ve hücrelere ikincil antikorlar ekleyin. Oda sıcaklığında 30 dakikalık bir inkübasyondan sonra, lekeli hücreleri TBST ile iki kez yıkayın. Ardından plakayı döndürün, lekeli hücreleri ışık korumalı faks tüplerinde 100 mikrolitre PBS'de toplayın ve örnekleri bir akış sitometri makinesinde çalıştırın.Optimize edilmemiş yöntemle karşılaştırıldığında, optimize edilmiş protokol, PDX 1 ve NKX 6.1 birlikte ekspresyonunu düzenleyerek pankreas progenitör farklılaşma verimliliğini artırdı. Özellikle, endodermal hücrelerin ayrışması ve taze membran matriksi üzerine kaplanması, daha uzun bir evre üçüncü dönem ile birlikte, ayrışmamış protokole kıyasla hPSC türevi pankreas progenitörlerinde NKX 6.1 ekspresyonunu arttırmıştır. Optimize edilmiş protokol kullanılarak üretilen pankreas progenitörleri, ayrışmamış yönteme kıyasla SOX9 pozitif hücre sayısını da arttırdı.Ayrıca, optimize edilmiş yöntem, proliferasyon belirteci Ki67'yi birlikte ifade eden proliferatif NKX 6.1 pozitif hücrelerin daha yüksek bir oranını da üretti. Verimliliği arttırmak için, HbA1 türevi endodermi ayrıştırmak ve daha sonra FGF amiloid sinyalizasyonu ve Kirpi inhibisyonu ile üçüncü aşama tedavinin süresini uzatmak çok önemlidir. Bu gelişmiş protokolü kullanarak pankreas progenitörlerinin ölçeklenebilir üretimi, insan pluripotent kök hücre kaynaklı pankreas beta hücrelerinin verimliliğini ve olgunlaşmasını artırma çalışmalarını kolaylaştırmış ve farklı diyabet tiplerinin modellenmesine izin vermiştir.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

Temel ve Klinik öncesi Araştırma bir Kapalı Hücre Kültürü Sistemi İnsan Pluripotent ve Sinir Kök Hücre Kültürleme

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

Gelişim Biyolojisi

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

Oldukça Tekrarlanabilir Küçük Molekül Tabanlı Farklılaşma Protokolü kullanarak insan pluripotent kök hücreleri gelen kardiyomiyositlerde Büyük Ölçekli Üretim

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

İlkel ve kesin hematopoetik ataları insan Pluripotent kök hücrelerden farklılaşma yönetmen

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Pluripotent Verimli Farklılaşma NKX6-1 için Kök Hücreler<sup&gt; +</sup&gt; Pankreas Progenitörler

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

Insan pluripotent İn Vitro Farklılaşma Trofoblastik Hücreleri içine Kök Hücreler

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

Vitro İnsan Mezenkimal Kök hücre farklılaşma fonksiyonel Cardiomyocyte benzeri hücre içine

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Insan pluripotent kök hücrelerinin karaciğer hücrelerine verimli farklılaşma

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Somite türevleri indüklenen insan nesil Vitro Pluripotent kök hücreler

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Directed Differentiation of Hemogenic Endothelial Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Hemojenik Endotel Hücrelerinin İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Yönlendirilmiş Farklılaşması

Blood vessels are ubiquitously distributed within all tissues of the body and perform diverse functions. Thus, derivation of mature vascular endothelial ...

Isolation of Rat Adipose Tissue Mesenchymal Stem Cells for Differentiation into Insulin-producing Cells

Sıçan Yağ Dokusu Mezenkimal Kök Hücrelerinin İnsülin Üreten Hücrelere Farklılaşması İçin İzolasyonu

Mesenchymal stem cells (MSCs)-especially those isolated from adipose tissue (Ad-MSCs)-have gained special attention as a renewable, abundant source of ...