Name: multi-faceted mass spectrometric investigation of neuropeptides in callinectes sapidus
Uploaded: 2022-05-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multi-Faceted Mass Spectrometric Investigation of Neuropeptides in Callinectes sapidus at JoVE.com

Denne forskning blev støttet af National Science Foundation (CHE-1710140 og CHE-2108223) og National Institutes of Health (NIH) gennem tilskud R01DK071801. A.P. blev delvist støttet af NIH Chemistry-Biology Interface Training Grant (T32 GM008505). N.V.Q. blev delvist støttet af National Institutes of Health under Ruth L. Kirschstein National Research Service Award fra National Heart Lung and Blood Institute til University of Wisconsin-Madison Cardiovascular Research Center (T32 HL007936). L.L. vil gerne anerkende NIH-tilskud R56 MH110215, S10RR029531 og S10OD025084 samt finansieringsstøtte fra et Vilas Distinguished Achievement Professorat og Charles Melbourne Johnson Professorat med finansiering fra Wisconsin Alumni Research Foundation og University of Wisconsin-Madison School of Pharmacy.

Al beskrevet vævsprøveudtagning blev udført i overensstemmelse med University of Wisconsin-Madison retningslinjer.
1. LC-ESI-MS-analyse af neuropeptider
<ol><li>Neuropeptidekstraktion og afsaltning<ol>
<li>Før vævsopkøb fremstilles forsuret methanol (acMeOH) (90:9:1 MeOH:vand:eddikesyre) som beskrevet i16.</li>
		<li>Saml hjernevæv frakrebsdyret 17 og brug tang til straks at placere et væv hver i et 0,6 ml rør indehold...

<ol>
	<li>H&#246;kfelt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptides+-+an+overview.">Neuropeptides - an overview.</a> Neuropharmacology. 39 (8), 1337-1356 (2000).</li><li>Radhakrishnan, V., Henry, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiology+of+neuropeptides+in+the+sensory+spinal+cord.">Electrophysiology of neuropeptides in the sensory spinal cord.</a> Progress in Brain Research. 104, 175-195 (1995).</li><li>N&#228;ssel, D. R., Ekstr&#246;m, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+neuropeptides+by+immunocytochemistry.">Detection of neuropeptides by immunocytochemistry.</a> Methods in Molecular Biology. 72, 71-101 (1997).</li><li>Martins, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Neuropeptide+Y+Receptors+Modulates+Retinal+Ganglion+Cell+Physiology+and+Exerts+Neuroprotective+Actions+In+Vitro.">Activation of Neuropeptide Y Receptors Modulates Retinal Ganglion Cell Physiology and Exerts Neuroprotective Actions In Vitro.</a> ASN Neuro. 7 (4), 1759091415598292 (2015).</li><li>Racaityte, K., Lutz, E. S. M., Unger, K. K., Lubda, D., Boos, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+neuropeptide+Y+and+its+metabolites+by+high-performance+liquid+chromatography-electrospray+ionization+mass+spectrometry+and+integrated+sample+clean-up+with+a+novel+restricted-access+sulphonic+acid+cation+exchanger.">Analysis of neuropeptide Y and its metabolites by high-performance liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry and integrated sample clean-up with a novel restricted-access sulphonic acid cation exchanger.</a> Journal of Chromatography. A. 890 (1), 135-144 (2000).</li><li>Salisbury, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+MALDI-TOF+mass+spectrometry+workflow+for+Drosophila+melanogaster+differential+neuropeptidomics.">A rapid MALDI-TOF mass spectrometry workflow for Drosophila melanogaster differential neuropeptidomics.</a> Molecular Brain. 6, 60 (2013).</li><li>Schmerberg, C. M., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function-driven+discovery+of+neuropeptides+with+mass+spectrometry-based+tools.">Function-driven discovery of neuropeptides with mass spectrometry-based tools.</a> Protein and Peptide Letters. 20 (6), 681-694 (2013).</li><li>Lee, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptidomics:+Mass+Spectrometry-Based+Identification+and+Quantitation+of+Neuropeptides.">Neuropeptidomics: Mass Spectrometry-Based Identification and Quantitation of Neuropeptides.</a> Genomics &amp; Informatics. 14 (1), 12-19 (2016).</li><li>Sauer, C. S., Phetsanthad, A., Riusech, O. L., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+mass+spectrometry+for+the+quantitative+analysis+of+neuropeptides.">Developing mass spectrometry for the quantitative analysis of neuropeptides.</a> Expert Review of Proteomics. 18 (7), 607-621 (2021).</li><li>Pratavieira, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALDI+Imaging+Analysis+of+Neuropeptides+in+Africanized+Honeybee+(+Apis+mellifera)+Brain:+Effect+of+Aggressiveness.">MALDI Imaging Analysis of Neuropeptides in Africanized Honeybee ( Apis mellifera) Brain: Effect of Aggressiveness.</a> Journal of Proteome Research. 17 (7), 2358-2369 (2018).</li><li>Buchberger, A. R., Vu, N. Q., Johnson, J., DeLaney, K., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+and+Effective+Sample+Preparation+Strategy+for+MALDI-MS+Imaging+of+Neuropeptide+Changes+in+the+Crustacean+Brain+Due+to+Hypoxia+and+Hypercapnia+Stress.">A Simple and Effective Sample Preparation Strategy for MALDI-MS Imaging of Neuropeptide Changes in the Crustacean Brain Due to Hypoxia and Hypercapnia Stress.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 31 (5), 1058-1065 (2020).</li><li>Vu, N. Q., DeLaney, K., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropeptidomics:+Improvements+in+Mass+Spectrometry+Imaging+Analysis+and+Recent+Advancements.">Neuropeptidomics: Improvements in Mass Spectrometry Imaging Analysis and Recent Advancements.</a> Current Protein &amp; Peptide Science. 22 (2), 158-169 (2021).</li><li>Li, L., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptides+in+the+brain:+mass+spectrometry-based+measurement+approaches+and+challenges.">Peptides in the brain: mass spectrometry-based measurement approaches and challenges.</a> Annual Review of Analytical Chemistry (Palo Alto, Calif). 1, 451-483 (2008).</li><li>Li, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequential+Precipitation+and+Delipidation+Enables+Efficient+Enrichment+of+Low-Molecular+Weight+Proteins+and+Peptides+from+Human+Plasma.">Sequential Precipitation and Delipidation Enables Efficient Enrichment of Low-Molecular Weight Proteins and Peptides from Human Plasma.</a> Journal of Proteome Research. 19 (8), 3340-3351 (2020).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PEAKS+DB:+de+novo+sequencing+assisted+database+search+for+sensitive+and+accurate+peptide+identification.">PEAKS DB: de novo sequencing assisted database search for sensitive and accurate peptide identification.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics : MCP. 11 (4), (2012).</li><li>Sturm, R. M., Greer, T., Woodards, N., Gemperline, E., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+evaluation+of+neuropeptidomic+profiles+upon+heat+stabilization+treatment+of+neuroendocrine+tissues+in+crustaceans.">Mass spectrometric evaluation of neuropeptidomic profiles upon heat stabilization treatment of neuroendocrine tissues in crustaceans.</a> Journal of Proteome Research. 12 (2), 743-752 (2013).</li><li>Gutierrez, G. J., Grashow, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+borealis+stomatogastric+nervous+system+dissection.">Cancer borealis stomatogastric nervous system dissection.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (25), e1207 (2009).</li><li>DeLaney, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PRESnovo:+Prescreening+Prior+to+de+novo+Sequencing+to+Improve+Accuracy+and+Sensitivity+of+Neuropeptide+Identification.">PRESnovo: Prescreening Prior to de novo Sequencing to Improve Accuracy and Sensitivity of Neuropeptide Identification.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 31 (7), 1358-1371 (2020).</li><li>Oleisky, E. R., Stanhope, M. E., Hull, J. J., Christie, A. E., Dickinson, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+neuropeptide+modulation+of+premotor+and+motor+neurons+in+the+lobster+cardiac+ganglion.">Differential neuropeptide modulation of premotor and motor neurons in the lobster cardiac ganglion.</a> Journal of Neurophysiology. 124 (4), 1241-1256 (2020).</li><li>Ma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+in+silico+transcriptome+mining+and+biological+mass+spectrometry+for+neuropeptide+discovery+in+the+Pacific+white+shrimp+Litopenaeus+vannamei.">Combining in silico transcriptome mining and biological mass spectrometry for neuropeptide discovery in the Pacific white shrimp Litopenaeus vannamei.</a> Peptides. 31 (1), 27-43 (2010).</li><li>Christie, A. E., Stemmler, E. A., Dickinson, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crustacean+neuropeptides.">Crustacean neuropeptides.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 67 (24), 4135-4169 (2010).</li><li>DeLaney, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+techniques,+applications+and+perspectives+in+neuropeptide+research.">New techniques, applications and perspectives in neuropeptide research.</a> The Journal of Experimental Biology. 221, (2018).</li><li>Habenstein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic,+peptidomic,+and+mass+spectrometry+imaging+analysis+of+the+brain+in+the+ant+Cataglyphis+nodus.">Transcriptomic, peptidomic, and mass spectrometry imaging analysis of the brain in the ant Cataglyphis nodus.</a> Journal of Neurochemistry. 158 (2), 391-412 (2021).</li><li>Maes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+sensitivity+of+the+nano+ultra-high+performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometric+analysis+of+low-concentrated+neuropeptides+by+reducing+aspecific+adsorption+and+optimizing+the+injection+solvent.">Improved sensitivity of the nano ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric analysis of low-concentrated neuropeptides by reducing aspecific adsorption and optimizing the injection solvent.</a> Journal of Chromatography. A. 1360, 217-228 (2014).</li><li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanosecond+photochemically+promoted+click+chemistry+for+enhanced+neuropeptide+visualization+and+rapid+protein+labeling.">Nanosecond photochemically promoted click chemistry for enhanced neuropeptide visualization and rapid protein labeling.</a> Nature Communications. 10 (1), 4697 (2019).</li><li>Corbi&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+the+Identification+of+Bioactive+Neuropeptides+in+Vertebrates.">Strategies for the Identification of Bioactive Neuropeptides in Vertebrates.</a> Frontiers in Neuroscience. 13, 948 (2019).</li><li>Chen, R., Ma, M., Hui, L., Zhang, J., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+neuropeptides+in+crustacean+hemolymph+via+MALDI+mass+spectrometry.">Measurement of neuropeptides in crustacean hemolymph via MALDI mass spectrometry.</a> Journal of American Society for Mass Spectrometry. 20 (4), 708-718 (2009).</li><li>Fridjonsdottir, E., Nilsson, A., Wadensten, H., Andr&#233;n, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+Tissue+Sample+Stabilization+and+Extraction+Strategies+for+Neuropeptidomics.">Brain Tissue Sample Stabilization and Extraction Strategies for Neuropeptidomics.</a> Peptidomics: Methods and Strategies. , 41-49 (2018).</li><li>Buchberger, A. R., DeLaney, K., Johnson, J., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+Spectrometry+Imaging:+A+Review+of+Emerging+Advancements+and+Future+Insights.">Mass Spectrometry Imaging: A Review of Emerging Advancements and Future Insights.</a> Analytical Chemistry. 90 (1), 240-265 (2018).</li><li>Phetsanthad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+mass+spectrometry+analysis+of+neuropeptides.">Recent advances in mass spectrometry analysis of neuropeptides.</a> Mass Spectrometry Reviews. , 21734 (2021).</li><li>P&#233;rez-Cova, M., Bedia, C., Stoll, D. R., Tauler, R., Jaumot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MSroi:+A+pre-processing+tool+for+mass+spectrometry-based+studies.">MSroi: A pre-processing tool for mass spectrometry-based studies.</a> Chemometrics and Intelligent Laboratory Systems. 215, 104333 (2021).</li><li>Christie, A. E., Chi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+the+neuropeptidomes+of+members+of+the+Astacidea+(Crustacea,+Decapoda)+using+publicly+accessible+transcriptome+shotgun+assembly+(TSA)+sequence+data.">Prediction of the neuropeptidomes of members of the Astacidea (Crustacea, Decapoda) using publicly accessible transcriptome shotgun assembly (TSA) sequence data.</a> General and Comparative Endocrinology. 224, 38-60 (2015).</li><li>Livnat, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+d-Amino+Acid-Containing+Neuropeptide+Discovery+Funnel.">A d-Amino Acid-Containing Neuropeptide Discovery Funnel.</a> Analytical Chemistry. 88 (23), 11868-11876 (2016).</li><li>Lehrer, R. I., Ganz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensins:+endogenous+antibiotic+peptides+from+human+leukocytes.">Defensins: endogenous antibiotic peptides from human leukocytes.</a> Ciba Foundation Symposium. 171, 276-290 (1992).</li></ol>

Den nøjagtige identifikation, kvantificering og lokalisering af neuropeptider og endogene peptider, der findes i nervesystemet, er afgørende for at forstå deres funktion23,24. Massespektrometri er en kraftfuld teknik, der kan gøre det muligt at opnå alt dette, selv i organismer uden et fuldt sekventeret genom. Denne protokols evne til at detektere, kvantificere og lokalisere neuropeptider fra væv indsamlet fra C. sapidus gennem en kombination af LC...

Nervesystemet er komplekst og kræver et netværk af neuroner til at transmittere signaler gennem en organisme. Nervesystemet koordinerer sensorisk information og biologisk respons. De indviklede og indviklede interaktioner involveret i signaloverførsel kræver mange forskellige signalmolekyler såsom neurotransmittere, steroider og neuropeptider. Da neuropeptider er de mest forskelligartede og potente signalmolekyler, der spiller nøgleroller i aktivering af fysiologiske reaktioner på stress og andre stimuli, er det af interesse at bestemme deres specifikke rolle i disse fysiologiske processer. Neuropeptidfunktion er relateret til deres aminosyrestruktur, som bestemmer mobilitet, receptorinteraktion og affinitet1. Teknikker som histokemi, hvilket er vigtigt, fordi neuropeptider kan syntetiseres, opbevares og frigives i forskellige områder af vævet, og elektrofysiologi er blevet anvendt til at undersøge neuropeptidstruktur og funktion 2,3,4, men disse metoder er begrænset af gennemstrømning og specificitet for at løse den enorme sekvensdiversitet af neuropeptider.
Massespektrometri (MS) muliggør analyse af neuropeptidstruktur og overflod med høj kapacitet. Dette kan udføres gennem forskellige MS-teknikker, oftest væskekromatografi-elektrosprayionisering MS (LC-ESI-MS)5 og matrixassisteret laserdesorption/ionisering MS (MALDI-MS)6. Ved hjælp af massemålinger med høj nøjagtighed og MS-fragmentering giver MS mulighed for at tildele aminosyresekvens og posttranslationel modifikation (PTM) status til neuropeptider fra komplekse blandinger uden forudgående viden for at hjælpe med at fastslå deres funktion 7,8. Ud over kvalitativ information muliggør MS kvantitativ information om neuropeptider gennem etiketfri kvantation (LFQ) eller etiketbaserede metoder såsom isotopisk eller isobarisk mærkning9. De vigtigste fordele ved LFQ inkluderer dens enkelhed, lave analyseomkostninger og reducerede prøveforberedelsestrin, som kan minimere prøvetab. Ulemperne ved LFQ omfatter imidlertid øgede instrumenttidsomkostninger, da det kræver flere tekniske replikater for at imødegå kvantitative fejl fra run-to-run-variabilitet. Dette fører også til en nedsat evne til nøjagtigt at kvantificere små variationer. Etiketbaserede metoder udsættes for mindre systematisk variation, da flere prøver kan mærkes forskelligt ved hjælp af en række stabile isotoper, kombineres til en prøve og analyseres gennem massespektrometri samtidigt. Dette øger også gennemstrømningen, selvom isotopetiketter kan være tidskrævende og dyre at syntetisere eller købe. Fuld scanningsmassespektre (MS1) spektral kompleksitet øges også, når multiplexering øges, hvilket reducerer antallet af unikke neuropeptider, der kan fragmenteres og derfor identificeres. Omvendt øger isobarisk mærkning ikke spektral kompleksitet på MS1-niveau, selvom det introducerer udfordringer for analytter med lav overflod såsom neuropeptider. Da isobarisk kvantificering udføres på fragmentionsmassespektre (MS2) niveau, kan neuropeptider med lav overflod muligvis ikke kvantificeres, da mere rigelige matrixkomponenter kan vælges til fragmentering, og de udvalgte muligvis ikke har høj nok overflod til at blive kvantificeret. Med isotopmærkning kan kvantation udføres på hvert identificeret peptid.
Ud over identifikation og kvantificering kan lokaliseringsoplysninger opnås af MS gennem MALDI-MS-billeddannelse (MALDI-MSI)10. Ved at rastere en laser hen over en prøveoverflade kan MS-spektre kompileres til et varmekortbillede for hver m/z-værdi . Kortlægning af forbigående neuropeptidsignalintensitet i forskellige regioner på tværs af forhold kan give værdifuld information til funktionsbestemmelse11. Lokalisering af neuropeptider er især vigtig, fordi neuropeptidfunktionen kan variere afhængigt af placering12.
Neuropeptider findes i lavere overflod in vivo end andre signalmolekyler, såsom neurotransmittere, og kræver derfor følsomme metoder tilpåvisning 13. Dette kan opnås ved fjernelse af matrixkomponenter med højere overflod, såsom lipider11,14. Yderligere overvejelser i forbindelse med analysen af neuropeptider skal foretages i forhold til almindelige proteomics-arbejdsgange, hovedsageligt fordi de fleste neuropeptidomiske analyser udelader enzymatisk fordøjelse. Dette begrænser softwaremulighederne for neuropeptiddataanalyse, da de fleste blev bygget med algoritmer baseret på proteomics-data og proteinmatch informeret af peptiddetektion. Imidlertid er mange software som PEAKS15 mere velegnet til neuropeptidanalyse på grund af deres de novo-sekventeringsfunktioner. Flere faktorer skal overvejes til analyse af neuropeptider startende fra ekstraktionsmetode til MS-dataanalyse.
De protokoller, der er beskrevet her, omfatter metoder til prøveforberedelse og dimethylisotopmærkning, dataindsamling og dataanalyse af neuropeptider af LC-ESI-MS, MALDI-MS og MALDI-MSI. Gennem repræsentative resultater fra flere eksperimenter demonstreres nytten og evnen af disse metoder til at identificere, kvantificere og lokalisere neuropeptider fra blå krabber, Callinectes sapidus. For bedre at forstå nervesystemet anvendes modelsystemer ofte. Mange organismer har ikke et fuldt sekventeret genom til rådighed, hvilket forhindrer omfattende neuropeptidopdagelse på peptidniveau. For at afbøde denne udfordring er en protokol til identifikation af nye neuropeptider og transkriptomminedrift til generering af databaser for organismer uden fuldstændig genominformation inkluderet. Alle protokoller, der præsenteres her, kan optimeres til neuropeptidprøver fra enhver art såvel som anvendes til analyse af eventuelle endogene peptider.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals, Reagents, and Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) matrix</td>
			<td>Supelco</td>
			<td>39319</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A38S-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile Optima LC/MS grade</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A955-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borane pyridine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>179752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bruker peptide calibration mix</td>
			<td>Bruker Daltonics</td>
			<td>NC9846988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary</td>
			<td>Polymicro</td>
			<td>1068150019</td>
			<td>to make nanoflow column (75 &#181;m inner diameter x 360 &#181;m outer diameter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat cup</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E6032</td>
			<td>any cup or mold should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Microcentrifuge Tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30108434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde - D2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>492620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid Optima LC/MS grade</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A117-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Difco</td>
			<td>214340</td>
			<td>place in 37 &#176;C water bath to melt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>15553953</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indium tin oxide (ITO)-coated glass slides</td>
			<td>Delta Technologies</td>
			<td>CB-90IN-S107</td>
			<td>25 mm x 75 mm x 0.8 mm (width x length x thickness)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC-MS vials</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>TFMSCERT5000-30LVW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol Optima LC/MS Grade</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A456-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7793</td>
			<td>Hydrophobic film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH-Indicator strips</td>
			<td>Supelco</td>
			<td>109450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red phosphorus clusters</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>343242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reversed phase C18 material</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186002350</td>
			<td>manually packed into nanoflow column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wite-out pen</td>
			<td>BIC</td>
			<td>150810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZipTip</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Z720070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments and Tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic matrix sprayer system- M5</td>
			<td>HTX Technologies, LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge - 5424 R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>05-401-205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat- HM 550</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>956564A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desiccant</td>
			<td>Drierite</td>
			<td>2088701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501764</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MALDI stainless steel target plate</td>
			<td>Bruker Daltonics</td>
			<td>8280781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet-Lite XLS</td>
			<td>Rainin</td>
			<td>17014391</td>
			<td>200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q Exactive Plus Hybrid Quadrupole-Orbitrap</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>IQLAAEGAAPFALGMBDK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RapifleX MALDI-TOF/TOF</td>
			<td>Bruker Daltonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpeedVac - SVC100</td>
			<td>Savant</td>
			<td>SVC-100D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic Cleaner</td>
			<td>Bransonic</td>
			<td>2510R-MTH</td>
			<td>for sonication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic homogenizer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB120110</td>
			<td>FB120 Sonic Dismembrator with CL-18 Probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaccum pump- Alcatel 2008 A</td>
			<td>Ideal Vacuum Products</td>
			<td>P10976</td>
			<td>ultimate pressure = 1 x 10-4 Torr</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mixer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>6775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath (37C) - Isotemp 110</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-460-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Analysis Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Expasy</td>
			<td>https://web.expasy.org/translate/</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexAnalysis</td>
			<td>Bruker Daltonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexControl</td>
			<td>Bruker Daltonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexImaging</td>
			<td>Bruker Daltonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEAKS Studio</td>
			<td>Bioinformatics Solutions, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCiLS Lab</td>
			<td>https://scils.de/</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SignalP 5.0</td>
			<td>https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?SignalP-5.0</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tBLASTn</td>
			<td>http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=tblastn&#38;BLAST_ 
			PROGRAMS=tblastn&#38;PAGE_ 
			TYPE=BlastSearch&#38;SHOW_ 
			DEFAULTS=on&#38;LINK_LOC 
			=blasthome</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multi-faceted mass spectrometric investigation of neuropeptides in callinectes sapidus

Neuropeptider er signalmolekyler, der regulerer næsten alle fysiologiske og adfærdsmæssige processer, såsom udvikling, reproduktion, fødeindtagelse og reaktion på eksterne stressorer. Alligevel forbliver de biokemiske mekanismer og det fulde supplement til neuropeptider og deres funktionelle roller dårligt forstået. Karakterisering af disse endogene peptider hindres af den enorme mangfoldighed inden for denne klasse af signalmolekyler. Derudover er neuropeptider bioaktive i koncentrationer 100x - 1000x lavere end neurotransmittere og er tilbøjelige til enzymatisk nedbrydning efter synaptisk frigivelse. Massespektrometri (MS) er et meget følsomt analytisk værktøj, der kan identificere, kvantificere og lokalisere analytter uden omfattende a priori viden. Det er velegnet til globalt profilering af neuropeptider og hjælp til opdagelsen af nye peptider. På grund af den lave overflod og høje kemiske mangfoldighed af denne klasse af peptider er flere prøveforberedelsesmetoder, MS-erhvervelsesparametre og dataanalysestrategier blevet tilpasset fra proteomics-teknikker for at muliggøre optimal neuropeptidkarakterisering. Her beskrives metoder til isolering af neuropeptider fra komplekse biologiske væv til sekvenskarakterisering, kvantitering og lokalisering ved hjælp af væskekromatografi (LC)-MS og matrixassisteret laserdesorption/ionisering (MALDI)-MS. En protokol til fremstilling af en neuropeptiddatabase fra den blå krabbe, Callinectes sapidus, en organisme uden omfattende genomisk information, er inkluderet. Disse arbejdsgange kan tilpasses til at studere andre klasser af endogene peptider i forskellige arter ved hjælp af en række instrumenter.

Arbejdsgangen for prøveforberedelse og MS-analyse er afbildet i figur 1. Efter dissektion af neuronalt væv udføres homogenisering, ekstraktion og afsaltning for at rense neuropeptidprøver. Hvis der ønskes isotopetiketbaseret kvantificering, mærkes prøverne derefter og afsaltes igen. Den resulterende prøve analyseres gennem LC-MS / MS til neuropeptididentifikation og kvantificering.
Neuropeptider identificeret gennem proteomics-softwaren skal have god pepti...

Watch this Scientific Journal Video about Multi-Faceted Mass Spectrometric Investigation of Neuropeptides in Callinectes sapidus at JoVE.com

Multi-Faceted Mass Spectrometric Investigation of Neuropeptides in Callinectes sapidus

Massespektrometrisk karakterisering af neuropeptider giver sekvens-, kvantations- og lokaliseringsinformation. Denne optimerede arbejdsgang er ikke kun nyttig til neuropeptidundersøgelser, men også andre endogene peptider. Protokollerne her beskriver prøveforberedelse, MS-erhvervelse, MS-analyse og databasegenerering af neuropeptider ved hjælp af LC-ESI-MS, MALDI-MS-spotting og MALDI-MS-billeddannelse.

Mangesidet massespektrometrisk undersøgelse af neuropeptider i Callinectes sapidus

Neuropeptides are signaling molecules that regulate almost all physiological and behavioral processes, such as development, reproduction, food intake, and ...

Analysen af endogene peptider, som er mindre end de fleste proteiner, men større end mange fordøjede peptider, er et under undersøgt felt. Denne protokol adresserer scap i massespektrometribaserede arbejdsgange. Massespektrometri er meget følsom, og den kan bruges til at målrette mod specifikke neuropeptider af interesse eller kan fange og detektere en række neuropeptider i en prøve.Kvantationen og lokaliseringen af neuropeptidekspression ved massespektrometri kan føre til udvikling af peptidterapi og opdagelse af neuropeptidbiomarkører for forskellige sygdomme. For at starte neuropeptidekstraktionen opsamles hjernevæv fra krebsdyret, og ved hjælp af tang placeres straks et væv hver i et 0,6 ml rør indeholdende 20 mikroliter forsuret methanol. Der tilsættes 150 mikroliter syrnet methanol til prøven.Indstil den samlede Sonic-patienttid til 24 sekunder, pulstid til otte sekunder. Pause tid til 15 sekunder en amplitude til 50% på en ultralyd homogenisator og homogenisere prøverne på is. Centrifugering af prøven ved fire grader Celsius ved 20.000 GS i 20 minutter.Med en pipette overføres supernatanten til et rør og tørres i en vakuumkoncentrator ved ca. 35 grader Celsius. Til afsaltning rekonstitueres den ekstraherede vævsprøve i 20 mikroliter 0,1 % myresyre. Vortex opløsningen og sonikatet i et stuetemperatur vandbad i et minut.Påfør 0,5 mikroliter prøve på en pH-strimmel for at bekræfte, at pH er mindre end fire. Centrifuge ved fire grader Celsius og 20.000 GS i 30 sekunder. Forbered befugtning af ligevægtsvask i illusionsløsninger.Få en 10 mikroliter afsaltningsspids med C18 harpiks. Placer afsaltningsspidsen på en 20 mikroliter pipette, der er indstillet til 15 mikroliter. Aspirer spidsen tre gange med befugtningsopløsning og tre gange med equi-samarbejdsløsning.Aspirat i prøven 10 gange efterfulgt af vask tre gange i vaskeopløsning, hvor hver vask kasseres. Elute ved at aspirere 10 gange i hver af illusionsløsningerne for at øge acetonitril. Tør de hentydede neuropeptider i en vakuumkoncentrator.Rekonstituer de tørrede afsaltede neuropeptider i fem mikroliter 0,1 % myresyre. Vortex opløsningen og sonikere den i et stuetemperatur vandbad i et minut. Kort centrifuge ved 2000 GS. Til spotting af neuropeptider og crustavæv pipetteres en tre mikroliter dråbe prøve på en hydrofob film.Pipette tre mikroliter DHB-matrix direkte på prøvedråben. Bland opløsningerne ved at pipettere op og ned. Pipette en mikroliter af prøve- og matrixblandingen i en brønd i MALDI-målpladen i rustfrit stål, og brug pipettespidsen til at sprede hver blanding ud til kanterne af prøvebrønden.Spot en mikroliter af en-til-en kaliber og matrixblanding i en brønd nær prøven. Indsæt målplade indeholdende tørrede prøvepletter i MALDI tandem time-of-flight instrumentet. Med DHB-matrixen indstilles lasereffekten til 95 % Vælg automatisk optimal detektorforstærkning og smart komplet prøvebærerbevægelsestilstand.Erhverv MS Spectra i området fra 200 til 3.200 M over Z og tilføj flere spektre fra hvert sted sammen for at øge forholdet mellem neuropeptidsignal og støj. Fyld en halv kryostatkop med gelatine og lad den størkne ved stuetemperatur. Hold rester af flydende gelatine varm i et 37 grader Celsius vandbad.Saml ønsket neuronalt væv fra dyret og brug tang til straks at dyppe vævet i et 0,6 ml rør indeholdende deioniseret vand i et sekund. Læg vævet oven på den faste gelatine og fyld resten af kryostatkoppen med flydende gelatine. Brug tang til at placere vævet.Placer kryostatkoppen på en plan overflade og frys med tøris. Til sektioneringsforberedelse adskilles gelatineindlejret prøve fra kryostatformen ved at skære formen væk. Monter det indlejrede væv på en kryostatpatron ved at pipettere en dråbe deioniseret vand på en milliliter på chucken og straks trykke det indlejrede væv på dråben.Når den er frosset pipette, mere deioniseret vand omkring vævet for yderligere at fastgøre det til chucken. Sektion vævet i en omtrentlig tykkelse af en celle. Tommelfinger monter hver sektion på et Indium tinoxidbelagt glasglas ved at placere den ene side af diaset nær sektionen og placere en finger på den anden side af diaset for langsomt at opvarme glasset og lade sektionen klæbe til diaset.Eksporter De Novo kun peptider. CSV fra toppe med en gennemsnitlig lokal konfidensscore på mere end eller lig med 75. Søg på peptidlisten efter kendte sekvensmotiver, der indikerer neuropeptider, der tilhører specifikke neuropeptidfamilier.Vælg en kendt pre-pro hormon aminosyre sekvens af interesse og brug TB blast N til at søge forespørgsel pre-pro hormon sekvens mod en database. Vælg målorganismen, og skift forvent tærskelalgoritmeparametre til 1000 for at inkludere justeringer med lav score. Kør blast-programmet, og kontroller derefter resultaterne for høje homologiscorer mellem forespørgsels- og emnesekvenser, der producerer betydelige justeringer.Gem FASTA-filen, der indeholder nukleotidsekvens. Oversæt pre-pro hormonnukleotidsekvens til pre-pro hormonpeptidsekvenser ved hjælp af Expasy translate-værktøjet. For callinectes sapidus vælg hvirvelløse mitokondrier til genetisk kode og kør værktøjet.Kontroller for signalpeptidsekvens og pro-hormonspaltningssteder i peptidsekvenserne ved hjælp af signal P.Dette er et fragmenteringsspektrum af et neuropeptid identificeret med 100% sekvensdækning i en lav fragmentmassefejl med en maksimal grænse på 0,02 Dalton. Her er et spektrum af et neuropeptid også identificeret med 100% sekvensdækning, men med et lavt antal fragmentioner er identifikationens tillid derfor lav. Disse er de ekstraherede ionkromatogrammer for et enkelt neuropeptid, der blev identificeret i to separate og på hinanden følgende kørsler.Selvom opbevaringstiden afviger en smule, kan denne stadig bruges til etiketfri kvantificering, fordi tidsforskydningen er mindre end et minut. Dette er et eksempel på et fuldt scanningsmassespektrum indeholdende et neuropeptid, der var Dimethylmærket, hvilket resulterede i et 4.025 Dalton masseskift mellem de lette og tunge former af neuropeptidet. Fragmentionmassespektret for et De Novo-sekventeret peptid demonstrerer god fragmenteringsdækning, hvor B- og eller Y-fragmention blev observeret for hver aminosyre med en lav massefejl på 0,02 Dalton.Dette indikerer, at et endogent peptid tilhørende krebsdyr rymi-neuropeptidfamilien blev observeret. Eksempler på gode pletter, der berører alle kanter af brøndgraveringen, vises til venstre. Og eksempler på dårlige pletter vises til højre.Efter MALDI MS-billeddannelse af neuropeptider fra callinectes sapidusvæv blev der opnået ionfordelingsbilleder af forskellige M over Z-værdier svarende til forskellige neuropeptider. Ekstraktionsopløsningsmiddeloptimering til en bestemt analytype er afgørende. Sørg også for fuldstændig homogenisering og juster metoden efter behov.Intet vil blive opdaget nedstrøms, hvis det ikke ekstraheres. Denne teknik kan give en grundlæggende liste over vigtige neuropeptider, der kan undersøges yderligere som potentielle biomarkører, samt give umålrettet lokaliseringsinformation uden behov for antistoffer.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Multi-Faceted Mass Spectrometric Investigation of Neuropeptides in Callinectes sapidus

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Målrettede Metabolomics fra biologiske kilder Brug Ultraperformance væskekromatografi-højopløsningsmassespektrometri (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight (MALDI-TOF) Mass Spectrometric Analysis of Intact Proteins Larger than 100 kDa

Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight MALDI-TOF Mass Spectrometric Analysis of Intact Proteins Larger than 100 kDa

Matrix-assisteret laser desorption / Ionisering Time of Flight (MALDI-TOF) massespektrometrisk analyse af intakte proteiner Større end 100 kDa

Effectively determining masses of proteins is critical to many biological studies (e.g. for structural biology investigations). Accurate mass ...

Mass Spectrometric Approaches to Study Protein Structure and Interactions in Lyophilized Powders

Massespektrometrisk Approaches at studere proteiners struktur og interaktioner i lyofiliserede pulvere

Amide hydrogen/deuterium exchange (ssHDX-MS) and side-chain photolytic labeling (ssPL-MS) followed by mass spectrometric analysis can be valuable for ...

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical Methylation and Physical Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance Techniques

Sekventering af Plant Wall Heteroxylans Brug Enzymatisk, Chemical (Methylering) og fysiske (massespektrometri Nuclear Magnetic Resonance) Teknikker

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

HKUST-1 as a Heterogeneous Catalyst for the Synthesis of Vanillin

HKUST-1 som en heterogen katalysator til syntese af vanillin

Vanillin (4-hydoxy-3-methoxybenzaldehyde) is the main component of the extract of vanilla bean. The natural vanilla scent is a mixture of approximately ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

Real-time ånde analyse ved hjælp af sekundære Nanoelectrospray ionisering koblet til høj opløsning massespektrometri

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

Syntese og massespektrometri analyse af Oligo-peptoids

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

A Two-Step Pyrolysis-Gas Chromatography Method with Mass Spectrometric Detection for Identification of Tattoo Ink Ingredients and Counterfeit Products

En to-trins pyrolyse-gaskromatografi metode med massespektrometrisk detektion til identifikation af tatovering blæk ingredienser og forfalskede produkter

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. ...

In situ FTIR Spectroscopy as a Tool for Investigation of Gas/Solid Interaction: Water-Enhanced CO2 Adsorption in UiO-66 Metal-Organic Framework

In situ FTIR Spectroscopy as a Tool for Investigation of Gas/Solid Interaction: Water-Enhanced CO2 Adsorption in UiO-66 Metal-Organic Framework

In situ FTIR Spektroskopi som et værktøj til undersøgelse af gas / solid interaktion: Vand-Forbedret CO2 Adsorption i UiO-66 Metal-Organisk ramme

In situ infrared spectroscopy is an inexpensive, highly sensitive, and selective valuable tool to investigate the interaction of polycrystalline solids ...

Cell-Lineage Guided Mass Spectrometry Proteomics in the Developing (Frog) Embryo

Cell-Lineage Guided Mass Spectrometry Proteomics in the Developing Frog Embryo

Celle-afstamning guidet massespektrometri proteomics i udviklingen (frø) embryo

Characterization of molecular events as cells give rise to tissues and organs raises a potential to better understand normal development and design ...